使用生物標志的測定法和方法

專利名稱：使用生物標志的測定法和方法
技術領域：
本文所述的發明涉及用于檢測可預示哺乳動物細胞對Apo2L/TRAIL和/或死亡受體激動劑抗體的敏感性的生物標志的方法和測定法。
背景技術：
本技術領域中已鑒定了多種屬于腫瘤壞死因子(TNF)超家族的配體和受體。這樣的配體包括腫瘤壞死因子a (“TNF-a ”)、腫瘤壞死因子P (“TNF_P ”或“淋巴毒素-a ”)、淋巴毒素-P (“LT-P ”)，CD30配體，CD27配體，CD40配體，0X-40配體，4-1BB配體，LIGHT, Apo-I配體(也稱Fas配體或CD95配體)，Apo-2配體(也稱Apo2L或TRAIL)，Apo-3 配體(也稱 TWEAK)，APRIL, OPG 配體(也稱 RANK 配體，ODF，或 TRANCE)，和 TALL-I (也稱 BlyS，BAFF 或 THANK)(參考例如 Ashkenazi，Nature Review,2:420-430 (2002)；Ashkenazi 和Dixit, Science, 281:1305-1308 (1998) ；Ashkenazi Dixit, Curr. Opin. CellBiol. ,11:255-260 (2000) ；Golstein, Curr.Biol. ,7:750-753(1997)ffallach, CytokineReference, Academic Press, 2000, 377-411 頁:Locksley 等人，Cell, 104:487-501 (2001)；Gruss 和 Dower, Blood, 85: 3378-3404 (1995) ；Schmid 等人，Proc. Natl. Acad. Sci.,83:1881 (1986) ；Dealtry 等人，Eur. J. Immunol. , 17:689 (1987) ；Pitti 等人，J. Biol.Chem. ,271 :12687-12690(1996) ；ffiley 等人，Immunity,3:673-682 (1995) ；Browning 等人，Cell, 72:847-856 (1993) ;Armitage 等人 Nature，357:80-82 (1992);公開于 1997 年 I月 16 日的 W 97/01633 ;公開于 1997 年 7 月 17 日的 TO97/25428，Marsters 等人，Curr.Biol. ,8:525-528(1998) ；Chicheportiche 等人，Biol. Chem.，272:32401-32410 (1997)；Hahne 等人，J. Exp. Med.，188:1185-1190 (1998) ；1998 年7 月 2 日公開的 W098/28426 ；
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Degli-Esposti 等人，I. Exp. Med. ,186:1165-1170 (1997) ；Marsters 等人，Curr. Biol.,7:1003-1006(1997) ;Tsuda 等人，BBRC, 234:137-142 (1997) ；Nocentini 等人，Proc. Natl.Acad. Sci. , 94:6216-6221 (1997) ；vonBulow 等人，Science, 278:138-141 (1997))。上述的TNF受體家族成員大部分具有共同的細胞表面受體典型結構,包括胞外、跨膜和胞內區，而其它的成員則天然地作為缺少跨膜和胞內區的可溶性蛋白出現。典型的TNFR的胞外部分含有從NH2末端開始的多個富半胱氨酸域(CRD)的重復氨基酸序列模式。稱為Apo_2L或TRAIL的配體是在數年前作為TNF細胞因子家族的成員被鑒定的(參見例如，Wiley 等人，Immunity, 3:673-682 (1995) ；Pitti 等人，J. Biol. Chem.，271:12697-12690(1996) ；W0 97/01633 ；W0 97/25428 ; 1998 年 6 月 9 日授權的美國專利5，763，223 ;2001年9月4日授權的美國專利6，284，236)。全長天然序列的人Apo2L/TRAIL多肽是281個氨基酸長的II型跨膜蛋白。某些細胞通過酶切割這種多肽的胞外區(Mariani等人，J. Cell. Biol.，137:221-229 (1997))可以產生天然可溶形式的該多肽。對可溶形式的Apo2L/TRAIL的晶體學研究揭示了與TNF和其它相關蛋白的結構類似的同源三聚體結構的存在(Hymowitz 等人，Molec. Cell,4:563-571 (1999) ;Cha 等人，Immunity,11:253-261(1999) ；MongkoIsapaya 等人，Nature StructuralBiology,6:1048(1999)；Hymowitz 等人，Biochemistry, 39:633-644 (2000))。但是與其它 TNF 家族成員不同，Apo2L/TRAIL被發現具有獨特的結構特征，即三個半胱氨酸殘基(在同源三聚體中每個亞基的第230位)共同與一個鋅原子配位，且鋅結合對三聚體的穩定性和生物活性是重要的(Hymowitz 等人，同上；Bodmer 等人，J. Biol. Chem.，275:20632-20637 (2000))。文獻中已經報道，Apo2L/TRAIL可能在免疫系統調節，包括自身免疫疾病例如類風濕性關節炎中起作用[參見例如，Thomas等人，J. Immunol.，161:2195-2200 (1998)；Johnsen 等人，Cytokine, 11:664-672 (1999) ；Griffith 等人，J. Exp. Med.，189:1343-1353(1999) ;Song 等人，J. Exp. Med.，191:1095-1103 (2000)]。可溶性形式的Apo2L/TRAIL也被報道在多種癌細胞中，包括結腸、肺、乳腺、前列腺、膀胱、腎、卵巢和腦腫瘤，以及黑色素瘤、白血病和多發性骨髓瘤中誘導凋亡(參見例如，Wiley等人，同上；Pitti等人，同上;2000年2月29日授權的美國專利6，030，945 ；2004年 6 月 8 日授權的美國專利 6，746，668 ;Rieger 等人，FEBS Letters, 427:124-128 (1998)；Ashkenazi 等人，J. Clin. Invest. , 104:155-162 (1999) ；ffalczak 等人，Nature Med.,5:157-163 (1999) ；Keane 等人，Cancer Research,59:734-741 (1999) ；Mizutani 等人，Clin.Cancer Res. ，5:2605-2612(1999) ；Gazitt, Leukemia,13:1817-1824(1999) ；Yu等人，Cancer Res. , 60:2384-2389 (2000) ；Chinnaiyan 等人，Proc. Natl. Acad. Sci.,97:1754-1759 (2000) ) 0在鼠腫瘤模型中進行的體內研究進一步提示，Apo2L/TRAIL單獨地或與化學治療或放射治療組合使用時可產生顯著的抗腫瘤作用(參見例如，Ashkenazi等人，同上；ffalzcak 等人，同上；Gliniak 等人，Cancer Res. , 59:6153-6158 (1999)；Chinnaiyan 等人，同上；Roth 等人，Biochem. Biophys. Res. Comm.，265:1999 (1999) ；PCT 申請US/00/15512 ；PCT申請US/01/23691)。與多種腫瘤細胞相反，大多數正常的人細胞種類似乎對某些重組形式的Apo2L/TRAIL的凋亡誘導具有抗性(Ashkenazi等人，同上；Walzcak等人，同上)。Jo等人報道，一種帶多組氨酸標簽的可溶形式的Apo2L/TRAIL在體外誘導了正常的分離的人類而不是非人類肝細胞的凋亡(Jo等人，Nature Med.，6:564-567 (2000)；另參見 Nagata，Nature Med.，6:502-503 (2000))。人們認為特定的重組 Apo2L/TRAIL 制備物在生化性質或相對正常細胞對疾病細胞的生物活性方面可能有變化，這依賴于例如標簽分子的存在或缺失，鋅含量，和％三聚體含量(參見，Lawrence等人，NatureMed.,Letter to the Editor, 7:383-385 (2001) ;Qin等人，Nature Med. , Letterto the Editor,7:385-386(2001))。已經發現Apo2L/TRAIL與至少5種不同的受體結合。結合Apo2L/TRAIL的受體中的至少兩種含有功能性的胞質死亡域(death domain)。一種這樣的受體被稱為“DR4”(或者 TR4 或TRAIL-R1) (Pan 等人，Science, 276:111-113 (1997);另見 1998 年 7 月 30 日公開的W098/32856 ; 1999 年 7 月 29 日公開的 TO99/37684 ;2000 年 12 月 7 日公開的 WO 00/73349 ；2002年8月13日授權的US6, 433，147 ；2002年10月8日授權的US6, 461，823，和2002年I 月 29 日授權的 US6，342，383)。另一種這樣的Apo2L/TRAIL受體被稱為DR5 (其也被稱為Apo_2 ；TRAIL-R或 TRAIL-R2，TR6, Tango-63, hAP08, TRICK2 或 KILLER)(參見例如,Sheridan 等人，Science,277:818-821 (1997), Pan 等人，Science,277:815-818(1997)，1998 年 11 月19 日公開的 W098/51793 ；1998 年 9 月 24 日公開的 W098/41629 ；Screaton 等人，Curr.Biol. ,7:693-696(1997) ;Walczak 等人，EMBO I. ,16:5386-5387(1997) :Wu 等人，NatureGenetics, 17:141-143(1997) ;1998年8月 20 日公開的TO98/35986 ;1998年 10月 14 日公開的 EP870，827 ; 1998 年 10 月 22 日公開的 TO98/46643 ; 1999 年 I 月 21 日公開的 TO99/02653 ；
1999年 2 月 25 日公開的 W099/09165 ; 1999 年 3 月 11 日公開的 W099/11791 ;2002 年 8 月 13日公開的 US 2002/0072091 ；2001 年 12 月 7 日公開的 US 2002/0098550 ；2001 年 12 月 6 日授權的US6, 313，269 ;2001年8月2日公開的US 2001/0010924 ；2003年7月3日公開的US2003/01255540 ；2002 年 10 月 31 日公開的 US 2002/0160446, 2002 年 4 月 25 日公開的 US2002/0048785 ；2002 年 2 月授權的 US 6，342，369 ；2003 年 5 月 27 日授權的 US 6，569，642，
2000年 6 月 6 日授權的 US 6，072，047，2003 年 11 月 4 日授權的 US 6，642，358 ;2004 年 6月I日授權的IS 6，743，625)。和DR4類似，DR5被報道含有胞質死亡域，并能夠在結合配體時(或結合模擬該配體的活性的分子，例如激動劑抗體(agonist antibody)時)傳遞凋亡信號。Hymowitz 等人，Molecular Cell,4:563-571 (1999)描述了 Apo_2L/TRAIL 和 DR5 之間形成的復合物的晶體結構。在配體結合時，DR4和DR5都可獨立地通過稱為FADD/Mortl的含死亡域的銜接分子募集并活化凋亡起始因子(apoptosis initiator)胱天蛋白酶_8，從而引發凋亡[Kischkel 等人，Tmmunitv,12:611-620(2000) ；Sprick 等人，Tmmunitv,12:599-609(2000) :Bodmer 等人，Nature Cell Biol. ,2:241-243 (2000) ] 據報道Apo2L/TRAIL還結合被稱為DcRl，DcR2和OPG的受體，這些受體被認為起信號傳遞的抑制物而非轉導物(transducers )的作用(參見例如DCRl (也稱 TRID，LIT 或 TRAIL-R3)[Pan 等人，Science,276:111-113(1997) ；Sheridan 等人，Science,277:818-821 (1997) ；McFarlane 等人，T. Biol. Chem. ,272:25417-25420(1997)；Schneider 等人，FEBS Letters, 416:329-334 (1997) ;Degli_Esposti 等人，I. Exp. Med.,186:1165-1170(1997)；及 Mongkolsapaya 等人，T. Immunol. , 160:3-6(1998) ；DCR2 (又 稱 TRUNDD 或 TRAIL-R4) [Marsters 等人，Curr. Biol. ,7:1003-1006(1997) ；Pan 等人，FEBS Letters,424:41-45(1998) ；Degli-Esposti 等人，Immunity, 7:813-820 (1997) I,和OPG [Simonet等人，同hi。與DR4和DR5相反，DcRl和DcR2受體不傳遞凋亡信號。文獻中報道了某些結合DR4和/或DR5受體的抗體。例如，針對DR4受體且在某些哺乳動物細胞中具有激動或凋亡活性的抗DR4抗體在例如1999年7月29日公開的W99/37684 ；2000 年 7 月 12 日公開的 TO00/73349 ；2000 年 7 月 12 日公開的 W 03/066661中有記載。還參見例如 Griff ith 等人,T. TmMinoI. , 162:2597-2605 (1999) ； Chuntharapai等人，I. Immunol. ,166:4891-4898(2001) ;2002 年 12 月 2 日公開的 WO 02/097033 ；2003年5月22日公開的WO 03/042367 ；2003年5月8日公開的W003/038043 ；2003年5月8日公開的WO 03/037913。同樣，某些抗DR5抗體也已被描述，參見例如，1998年11月8日公開的 WO 98/51793 !Griffith 等人，I. Immunol. , 162:2597-2605 (1999) ;Ichikawa 等人，Nature Med. , 7:954-960 (2001) ;Hylander 等人,“An Antibody to DR5 (TRAIL-receptor2)Suppresses the Growth of Patient Derived Gastrointestinal Tumors Grown inSCIDmice，，,摘要，2d International Congress on Monoclonal Antibodies inCancers, 2002年8月29日至9月I日，Banff, Alberta,加拿大；2003年5月8日公開的WO 03/038043 ；2003年5月8日公開的WO 03/037913。另外，還描述了某些與DR4和DR5受體有交叉反應性的抗體(參見例如，2001年6月26日授權的美國專利6，252，050)。某些哺乳動物細胞的瘤性轉化在特定情況下與唾液酰Lewis A和唾液酰LewisX抗原的表達的特征性改變相關聯。相對高量的唾液酰Lewis A/X在例如某些人類結腸、胰腺和胃的腺癌中出現，而且使用針對這些抗原上的糖結構的抗體的測定法已經被用作胰腺和胃腸癌的檢測手段(參見例如，Ugorski等人，Acta Biochimica Polonica,49:2:303-311 (2002) )0這些糖類腫瘤標志的表達水平也已經和臨床結果、患者存活時間和轉移性疾病的指標相互關聯起來。唾液酰Lewis A和唾液酰Lewis X都已被證明與一類糖結合蛋白家族結合,這類蛋白稱為選擇素，與細胞從血流外滲有關。一些報道提出唾液酰Lewis A和X是E-選擇素的配體，而且可能負責人癌細胞對內皮的黏著。呈現于癌細胞表面的唾液酸化Lewis結構被糖蛋白和糖脂的糖鏈所攜帶，并與呈現于內皮細胞上的E-選擇素結合。因此，選擇素及其糖配體可能在轉移過程中的腫瘤細胞的選擇性歸巢(homing)中起重要作用。唾液酰Lewis A和X的生物合成被認為依賴于細胞類型特異性和發育階段特異性的酶將巖藻糖從鳥苷二磷酸-巖藻糖(GDP-Fuc)通過a (1,3)和a (1,4)鍵最終添加到唾液酸化的前體上，該步驟被a -I, 3/1，4-巖藻糖基轉移酶(a -I, 3/1，4Fuc_T，FUT)所催化。目前已經克隆和定性了數種巖藻糖基轉移酶基因。這些基因(FUT 3-7)和它們的酶產物(Fuc-TIII-VII)的表達似乎是組織特異性的。由這5種基因編碼的酶名為FUTIIL FUTIV，FUTV，FUTVI 和 FUTVII。編碼 FUTIII，FUTV 和 FUTVI 的三個基因位于染色體19pl3.3上鄰近的物理位置。生化和分子克隆研究提示，唾液酰Lewis A/X部分的譜系特異性(lineage-specific)的表達是由a-1，3_巖藻糖基轉移酶基因的譜系特異性的表達所決定的，這些基因的酶產物作用于組成性地表達的寡糖前體以產生定位于表面的(surface-localized)唾液酰Lewis A/X決定簇(determinants)。負責上皮組織中的 活性的人巖藻糖基轉移酶是FUT3和FUT6。FUT3[又稱Lewis a -(1，3/1，4)巖藻糖基轉移酶基因]和FUT6[血漿a-(l，3)巖藻糖基轉移酶基因]的轉錄物在正常和轉化的組織中都存在。巖藻糖基轉移酶轉錄物也在多種腺癌細胞系中普遍存在，其中在結腸癌中具有顯著的FUT3和6的高表達(參見例如Ugorski等人，Acta Biochimica Polonica,49:303-311 (2002) ；Nakamori 等人，Pis. 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Clin. Invest. , 1999,同上；ffalczak 等人，Nature Med. , 1999，同上)是抵抗的。因此，通過進行某種測定方法檢查哺乳動物組織或細胞樣品的特定生物標志的表達，就可以方便和高效地得到對于評估治療患者的合適或有效的療法有用的信息。例如，從檢測哺乳動物組織或細胞樣品中的FUT3或FUT6表達的測定所得的信息，可以為內科醫生提供有用的數據，這些數據可以用來為患有例如癌癥等疾病的病人確定最佳的治療方案(使用Apo2L/TRAIL或死亡受體激動劑抗體)。本發明提供預測哺乳動物組織或細胞樣品(例如癌細胞)對Apo2L/TRAIL或死亡受體激動劑抗體的敏感性的方法。在某些實施方案中，所述方法包括得到哺乳動物組織或細胞樣品并檢查該組織或細胞的巖藻糖基轉移酶3或巖藻糖基轉移酶6的表達。所述方法還 包括檢查該組織或細胞的其它生物標志例如唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的表達。這些方法可以以多種測定模式實施，包括檢測mRNA表達的測定，檢測酶活性存在的酶測定，免疫組化測定和本文中描述的其它測定。確定這樣的生物標志在所述組織或細胞中的表達可預示所述組織或細胞樣品是否將對凋亡誘導劑例如Apo2L/TRAIL及死亡受體抗體敏感。在可選的實施方案中，還可以檢查所述組織或細胞的DR4，DR5，DcRl或DcR2受體的表達。本發明的其它方法包括在哺乳動物組織或細胞樣品中誘導凋亡的方法，其包括下列步驟得到哺乳動物組織或細胞樣品，檢查該組織或細胞的一種或多種生物標志，例如巖藻糖基轉移酶3，巖藻糖基轉移酶6，唾液酰LewisA和/或唾液酰Lewis X抗原的表達，并且一旦確定了所述組織或細胞樣品表達所述一種或多種生物標志，則使組織或細胞樣品暴露于有效量的Apo2L/TRAIL或死亡受體激動劑抗體。檢查一種或多種生物標志的表達的方法中的步驟可以以多種測定模式進行，包括檢測mRNA表達的測定，檢測酶活性存在的酶測定，和免疫組化測定。在可選的實施方案中，所述方法還包括檢查組織或細胞樣品的DR4，DR5, DcRl,或DcR2受體的表達。任選地,所述組織或細胞樣品包括癌組織或細胞。本發明的其它方法包括治療哺乳動物中的疾病，例如免疫相關的疾病或癌癥的方法，包括下列步驟得到哺乳動物組織或細胞樣品，檢查該組織或細胞的一種或多種生物標志，例如巖藻糖基轉移酶3,巖藻糖基轉移酶6,唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的表達，并且一旦確定了所述組織或細胞樣品表達所述一種或多種生物標志，則對所述哺乳動物施用有效量的Apo2L/TRAIL或死亡受體激動劑抗體。檢查一種或多種生物標志的表達的方法中的步驟可以以多種測定模式進行，包括檢測mRNA表達的測定，檢測酶活性存在的酶測定，和免疫組化測定。在可選的實施方案中，所述方法還包括檢查組織或細胞樣品的DR4，DR5，DcRl，或DcR2受體的表達。任選地，這些方法包括治療哺乳動物中的癌癥。任選地，所述方法除了施用有效量的Apo2L/TRAIL和/或死亡受體激動劑抗體以外，還包括對所述哺乳動物施用化學治療劑或放射治療。進一步的實施方案由下面的權利要求更具體地公開 I.預測哺乳動物組織或細胞樣品對Apo2L/TRAIL的敏感性的方法，包括下列步驟得到哺乳動物組織或細胞樣品；檢查所述組織或細胞樣品以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達，其中，所述一種或多種生物標志的表達預示所述組織或細胞樣品對Apo2L/TRAIL的凋亡誘導活性敏感。2.權利要求I的方法,其中所述一種或多種生物標志的表達是通過檢測巖藻糖基轉移酶3或巖藻糖基轉移酶6的mRNA表達來檢查的。3.權利要求I的方法，其中所述一種或多種生物標志的表達是通過免疫組化檢測唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的表達來檢查的。4.權利要求I的方法，還包括檢查所述組織或細胞樣品中DR4、DR5、DcRl或DcR2受體的表達的步驟。5.權利要求I的方法，其中組織或細胞樣品包括癌組織或細胞。6.權利要求5的方法，其中所述癌細胞是結腸、結腸直腸、胃腸或胰腺的癌細胞或組織。7.在哺乳動物組織或細胞樣品中誘導凋亡的方法，包括下列步驟得到哺乳動物組織或細胞樣品；檢查所述組織或細胞樣品以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達,及檢測到所述一種或多種生物標志的表達后，使所述組織或細胞樣品暴露于有效量的 Apo2L/TRAIL。8.權利要求7的方法，其中所述一種或多種生物標志的表達是通過檢測巖藻糖基轉移酶3或巖藻糖基轉移酶6的mRNA表達來檢查的。9.權利要求7的方法，其中所述一種或多種生物標志的表達是通過免疫組化檢測唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的表達來檢查的。10.權利要求7的方法，還包括檢查所述組織或細胞樣品中DR4、DR5、DcRl或DcR2受體的表達的步驟。11.權利要求7的方法，其中組織或細胞樣品包括癌組織或細胞。12.權利要求11的方法，其中所述癌細胞是結腸、結腸直腸、胃腸或胰腺的癌細胞或組織。13.權利要求7的方法，其中所述細胞被暴露于有效量的Apo2L/TRAIL多肽，該Apo2L/TRAIL 多肽包括圖 I (SEQ ID NO: I)的氨基酸 114-281。14.治療哺乳動物中的疾病，例如免疫相關疾病或癌癥的方法，包括下列步驟得到所述哺乳動物的組織或細胞樣品；檢查所述組織或細胞樣品以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達,及檢測到所述一種或多種生物標志的表達后，對所述哺乳動物施用有效量的Apo2L/TRAIL。15.權利要求14的方法，其中所述一種或多種生物標志的表達是通過檢測巖藻糖基轉移酶3或巖藻糖基轉移酶6的mRNA表達來檢查的。16.權利要求14的方法，其中所述一種或多種生物標志的表達是通過免疫組化檢測唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的表達來檢查的。17.權利要求14的方法，還包括檢查所述組織或細胞樣品中DR4、DR5、DcRl或DcR2受體的表達的步驟。18.權利要求14的方法，其中組織或細胞樣品包括癌組織或細胞。19.權利要求18的方法，其中所述癌細胞或組織包含結腸、結腸直腸、胃腸或胰腺的癌細胞或組織。20.權利要求14的方法，其中對所述哺乳動物施用有效量的Apo2L/TRAIL多肽，該Apo2L/TRAIL 多肽包括圖 I (SEQ ID NO: I)的氨基酸 114-281。21.權利要求14的方法，其中還對所述哺乳動物施用化學治療劑或放射療法。22.權利要求14的方法，其中還對所述哺乳動物施用細胞因子、細胞毒劑或生長抑制劑。23.權利要求7的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽連接于聚乙二醇分子。24.權利要求14的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽連接于聚乙二醇分子。25.權利要求6的方法，其中所述癌細胞是結腸或結腸直腸癌細胞。26.權利要求I的方法，其中所述Apo2L/TRAIL是包含圖I (SEQ IDNO: I)的氨基酸41-281的多肽，或其生物活性片段。27.權利要求26的方法，其中所述Apo2L/TRAIL是包括圖I (SEQ IDNO: I)的氨基酸114-281的多肽。28.權利要求12的方法，其中所述癌細胞是結腸或結腸直腸癌細胞。29.權利要求20的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽由圖I (SEQ IDNO: I)的氨基酸114-281組成。30.預測哺乳動物的結腸或結腸直腸癌細胞對Apo2L/TRAIL的敏感性的方法，包括下列步驟得到哺乳動物結腸或結腸直腸癌細胞；
檢查所述癌細胞以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰LewisA和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達，其中所述一種或多種生物標志的表達預示所述癌細胞對Apo2L/TRAIL的凋亡誘導活性敏感。31.在哺乳動物結腸或結腸直腸癌細胞中誘導凋亡的方法，包括下列步驟得到哺乳動物結腸或結腸直腸癌細胞；檢查所述癌細胞以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰LewisA和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達，及在檢測所述一種或多種生物標志表達后，將所述癌細胞暴露于有效量的Apo2L/TRAIL多肽。
32.權利要求31的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽包括圖I (SEQ IDNO: I)的氨基酸41-281，或其具有凋亡活性的片段。33.權利要求32的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽連接于聚乙二醇分子。34.權利要求32的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽包括圖I (SEQ IDNO: I)的氨基酸 114-281。35.治療哺乳動物中結腸或結腸直腸的癌癥的方法，包括下列步驟得到所述哺乳動物結腸或結腸直腸癌細胞樣品；檢查所述癌細胞樣品以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達,及在檢測所述一種或多種生物標志表達后，對所述哺乳動物施用有效量的Apo2L/TRAIL。36.權利要求35的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽包括圖I (SEQ IDNO: I)的氨基酸41-281，或其具有凋亡活性的片段。37.權利要求36的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽連接于聚乙二醇分子。38.權利要求36的方法，其中所述Apo2L/TRAIL多肽包括圖I (SEQ IDNO: I)的氨基酸 114-281。


圖I顯示人Apo-2配體cDNA的核苷酸序列(SEQ ID NO: 2)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID NO: I).第447位核苷酸處的“N”表示該核苷酸堿基可以是“T”或“G”。圖2A和2B顯示全長人DR4cDNA的核苷酸序列(SEQ ID N0:4)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID N0:3)。Pan等人，Science, 276: 111 (1997)中也分別報道了人DR4的核苷酸
和氨基酸序列。圖3A顯示如1998年11月19日的WO 98/51793所公開的人DR5的411個氨基酸的序列(SEQ ID N0:5)。人DR5的轉錄剪接變體是本領域已知的。該DR5剪接變體編碼圖3B和3C所示的人DR5的440個氨基酸的序列(SEQID N0:6)，如1998年8月20日的WO98/35986所公開的。圖3D-l、3D-2和3D-3顯示全長人DcRIcDNA的核苷酸序列(SEQ IDN0:7)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID N0:8)。WO 98/58062中也分別描述了人DcRl (特別是其各個域)的核苷酸和氨基酸序列。
圖3E-1和3E-2顯示全長人DcR2cDNA的核苷酸序列(SEQ ID NO:9)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID N0:10)。WO 99/10484中也分別描述了人DcR2 (特別是其各個域)的
核苷酸和氨基酸序列。圖4顯示全長人(1，3/1，4)巖藻糖基轉移酶(FUT3)cDNA的核苷酸序列(SEQ IDNO:9)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID NO: 12)。這些序列對應于GenBank登錄號HSU27328，并在例如 Kukowska-LatalIo 等人，Genes Dev. 1990Aug ；4 (8) : 1288-303 中有記載。圖5顯示全長人a (1,3)巖藻糖基轉移酶(FUT6) cDNA的核苷酸序列(SEQIDNO:9)及其衍生的氨基酸序列(SEQ ID NO: 12)。這些序列對應于GenBank登錄號HSU27333，并在例如 Koszdin 和 Bowen, Biochem Biophys ResCommun. 1992Aug 31 ; 187 (I) : 152-7 中有記載。圖6提供分析28個結腸或結腸直腸癌細胞系對Apo2L (+0. 5%胎牛血清“FBS”或10%FBS)或DR5單克隆抗體“mab”(交聯的“XL”或非交聯的，+0. 5%胎牛血清“FBS”或10%FBS)的凋亡活性的敏感性或抗性，及其FUT 3、FUT 6、唾液酰Lewis A和唾液酰LewisX的表達，所得數據的匯總表。圖7提供不同的結腸或結腸直腸癌細胞系對DR5抗體的抗性及由定量PCR測量的FUT3的表達的比較。圖8提供不同的結腸或結腸直腸癌細胞系對DR5抗體(加上交聯物)的敏感性或抗性及由FACS確定的唾液酰Lewis X或A的表達的比較。圖9A顯示分析不同的結腸或結腸直腸癌細胞系的敏感性或抗性與FUT3表達之間的相關性的Spearman等級相關性檢驗。圖9B顯示分析不同的結腸或結腸直腸癌細胞系的敏感性(“sens”)或抗性(“res”)的Fisher’ s Exact檢驗結果，和FUT3和唾液酰Lewis A/X的表達與各細胞系對DR5抗體凋亡活性的敏感性之間的統計學顯著性。圖10比較不同的結腸或結腸直腸癌細胞系的DcRl或DcR2受體的表達(由定量PCR確定)及特定的細胞系對Apo2L或DR5抗體的狀態(敏感或抵抗)。圖11比較不同的結腸或結腸直腸癌細胞系的DcRl或DcR2受體的表達(由FACS確定)及特定的細胞系對Apo2L或DR5抗體的狀態(敏感或抵抗)。圖12A和12B顯示在4種結腸直腸細胞癌細胞系CaCo2，SW 1417，DLD_1，和Colo205中對唾液酰Lewis A和X的免疫組化染色，及其與唾液酰Lewis A和X的表達(如FACS測量的)的關聯和與對Apo2L的敏感性的關聯。圖13是顯示正常結腸粘膜、正常肝組織、原發性結腸癌和結腸癌轉移的組織樣品中的唾液酰Lewis A和X的表達的IHC實驗的總結。發明詳述本文所描述或引用的技術和程序是通常為本領域技術人員所充分理解，并使用常規的方法普遍采用的，例如被廣泛使用的、由Sambrook等人，Molecular Cloning:ALaboratory Manual 第二版(1989)Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold SpringHarbor，N. Y所描述的分子克隆方法。除了另有說明的以外，涉及使用可商購的試劑盒和試劑的程序通常按照制造商給定的規程和/或參數進行，視何者適用而定。在描述本發明的方法和測定法以前，應當理解本發明不應局限于所描述的具體的方法、操作規程、細胞系、動物屬或種，構建體和試劑，因為這些理所當然是可以變化的。還應當理解這里所用的術語只是為了描述具體的實施方案，并非意在限制本發明的范圍，該范圍僅由所附權利要求所限定。應當指出，本文中和所附的權利要求中使用的單數形式(“a”，“an”，“the”)包括復數的被指稱事物，除非上下文明確地另有指示。因此，例如，“遺傳改變”(“a geneticalteration”)包括多個這樣的改變，而“探針”(“a probe”)包括一個或多個探針及其為本領域技術人員所知的等同物，等等。本文中提到的所有出版物在此都通過引用并入本文，以公開并描述連同這些出版物被引用的方法和/或材料。本文所引用的出版物，被引用的是其在本發明的申請日之前的公開。這里的一切都不應被理解為承認本發明人無權基于更早的優先權日期或在先的發明日期使這些出版物日期提前。另外，真實的出版日期可能和所示的不同，需要獨立的核實。
定義本文的術語“Apo2L/TRAIL”、“Apo-2L”和“TRAIL”是用來指包括圖I所示的氨基酸序列中的氨基酸殘基114-281 (含)，95-281 (含)，殘基92-281 (含)，殘基91-281 (含)，殘基41-281 (含)，殘基15-281 (含)，或殘基1-281 (含)，及上述序列的生物活性片段，缺失、插入或替代性變體。在一個實施方案中，所述多肽序列包括圖I的殘基114 - 281，及任選地，由圖I的殘基114 - 281組成。任選地，所述多肽序列包括圖I的殘基92-281或殘基91-281。Apo-2L多肽可以由圖I所示的天然核苷酸序列編碼。任選地，編碼圖I中Proll9殘基的密碼子可以是“CCT”或“CCG”。在其它的實施方案中，所述片段或變體是生物活性的，且與任一上述的Apo2L/TRAIL序列具有至少約80%的氨基酸序列同一性，更優選至少約90%的同一性，更優選地，具有至少95%，96%，97%，98%，或99%的序列同一性。任選地，所述Apo2L/TRAIL多肽被在嚴緊條件下與圖I提供的編碼核苷酸序列雜交的核苷酸序列所編碼。該定義涵蓋Apo2L/TRAIL的替代性變體，其中它的至少一個天然氨基酸被替代為丙氨酸殘基。具體的Apo2L/TRAIL的替代性變體包括至少一個氨基酸被替代為丙氨酸殘基的變體。這些替代性變體包括例如標識為“D203A”、“D218A”和“D269A”的那些變體。該術語被用來標識第203、218和/或269位(使用圖I所示的編號)的天冬氨酸被替代為丙氨酸殘基的Apo2L/TRAIL變體。可選地，所述Apo2L/TRAIL變體可包含公開的PCT申請WO 01/00832的表I中所述的一種或多種丙氨酸替代。替代性變體包括2001年I月4日公開的WO 01/00832的表I指明的殘基替代。該定義還涵蓋從Apo2L/TRAIL源分離的，或通過重組或合成方法制備的天然序列的Apo2L/TRAIL。本發明的Apo2L/TRAIL包括PCT申請 TO97/01633 和 W097/25428 中公開的、稱為 Apo2L/TRAIL 或 TRAIL 的多肽。術語“Apo2L/TRAIL”或“Apo2L”用來泛指Apo2L/TRAIL的形式，包括該多肽的單體、二聚體或三聚體形式。Apo2L序列中提到的所有氨基酸殘基的編號都使用根據圖I的編號，除非另有特別說明。例如，“D203”或“Asp203”指圖I中提供的序列的第203位的天冬氨酸殘基。術語“Apo2L/TRAIL胞外域”或“Apo2L/TRAIL ECD”是指 Apo2L/TRAIL 的基本上沒有跨膜和胞質域的形式。通常，ECD將具有少于1%的所述跨膜和胞質域，且優選地，將具有少于0. 5%的所述域。應當理解，對本發明的多肽而言，任何被鑒定的跨膜域都是根據本領域中鑒定那種疏水域的常規標準鑒定的。跨膜域的確切邊界可以是變化的，但最有可能是在最初鑒定的域的任一末端處不多于約5個氨基酸的變化。在優選的實施方案中，ECD由所述多肽的可溶性胞外域序列組成，基本上沒有跨膜和胞質或胞內域(而且不是膜結合的)。具體的Apo-2L/TRAIL胞外域序列在PCT申請W097/01633和W097/25428中有描述。術語“Apo2L/TRAIL單體”或“Apo2L單體”指Apo2L的胞外域序列的共價鏈。術語“Apo2L/TRAIL 二聚體”或“Apo2L 二聚體”指通過二硫鍵共價鍵連接的2個Apo-2L單體。用于本文的該術語包括游離存在的Apo2L 二聚體和三聚體形式的Apo2L中的Apo2L 二聚體(即，與另一第三Apo2L單體聯合)。術語“Apo2L/TRAIL 聚集體(aggregate)” 用于指自聯合(self-associated)的較高級寡聚體形式的Apo2L/TRAIL，例如Apo2L/TRAIL三聚體，其形成例如六聚體和九聚體形式的Apo2L/TRAIL。使用本領域已知的方法和測定法(及使用可商購的材料),例如天然(native)大小排阻HPLC (“SEC”)、使用十二烷基硫酸鈉的變性大小排阻色譜(“SDS-SEC”)，反相HPLC和毛細管電泳，可以確定Apo2L/TRAIL單體、二聚體或三聚體(及其它聚集體)的存在和數量。“Apo-2配體受體”包括本領域稱為“DR4”和“DR5”的受體，其多核苷酸和多肽序列分別如圖2A-圖3E-2所示。Pan等人描述了被稱為“DR4”的TNF受體家族成員(Pan等人，Science, 276:111-113(1997);另參見 1998 年 7 月 30 日公開的 W098/32856 ;1999 年 7 月 29日公開的WO 99/37684 ;2000年12月7日公開的TO 00/73349 ;2002年8月13日授權的US6，433，147 ;2002 年 10 月 8 日授權的 US 6，461，823，2002 年 I 月 29 日授權的US6, 342，383)。Sheridan 等人，Science, 277:818-821 (1997)和 Pan 等人，Science,277:815-818 (1997)描述了另一種Apo2L/TRAIL的受體(1998年11月19日公開的W098/51793 ; 1998年9月24日公開的W098/41629)。該受體被稱為DR5(該受體又被稱為Apo_2 ；TRAIL-R,TR6,Tango-63,hAP08, TRICK2 或 KILLER ；Screaton 等人，Curr. Biol. ,7:693-696(1997) ;Walczak 等人，EMBO I. , 16:5386-5387 (1997) :Wu等人，Nature Genetics, 17:141-143(1997) ;1998年8 月20日公開的W098/35986 ; 1998年10月14日公開的EP870，827 ; 1998年10月22日公開的W098/46643 ; 1999 年 I 月 21 日公開的 TO99/02653 ; 1999 年 2 月 25 日公開的 TO99/09165 ；
1999年 3 月 11 日公開的 TO99/11791 ；2002 年 8 月 13 日公開的 US 2002/0072091 ；2002年 12 月 7 日公開的 US 2002/0098550 ;2001 年 12 月 6 日授權的 US 6，313，269 ;2001 年 8月2日公開的US 2001/0010924 ；2003年7月3日公開的US ；2002年10月31日公開的US 2002/0160446, 2002 年 4 月 25 日公開的 US2002/0048785 ；2003 年 5 月 27 日授權的 US6，569，642，2000 年 6 月 6 日授權的 US 6，072，047，2003 年 11 月 4 日授權的 US 6，642，358)。如上所述，其它Apo_2L受體包括DcRl,DcR2,和OPG (參見,Sheridan等人，同上；Marsters等人，同上jPSimonet等人，同上)。術語“Apo-2L受體”當用于本文時，包括天然序列的受體和受體變體。這些術語涵蓋在多種哺乳動物,包括人類中表達的Apo_2L受:體。Apo_2L受體可以如多種人類組織譜系中天然存在的那樣內源表達，或通過重組或合成方法表達。“天然序列的受體”包括與來自自然界的Apo-2L受體具有相同氨基酸序列的多肽。因此，天然序列的Apo-2L受體可具有來自任何哺乳動物的天然存在的Apo-2L受體的氨基酸序列。這樣的天然序列Apo-2L受體可以從自然界分離或者可以通過重組或合成手段生產。術語“天然序列Apo-2L受體”特別涵蓋該受體的天然存在的截短的或分泌形式(例如，含有例如胞外域序列的可溶形式)，天然存在的變體形式(例如以可選方式剪接的形式)和天然存在的等位變體。受體變體可包括天然序列Apo-2L受體的片段或缺失突變體。圖3A顯示人DR5的411個氨基酸的序列，如WO 98/51793于1998年11月19日所公開的。人DR5轉錄剪接變體是本領域已知的。該DR5剪接變體編碼圖3B和3C所示的人DR5的440個氨基酸的序列，如WO 98/35986于1998年8月20日所公開的。“死亡受體抗體”在本文中用來泛指針對腫瘤壞死因子受體超家族中的并含有可傳遞凋亡信號的死亡域(death domain)的受體的抗體,這樣的抗體包括DR5抗體和DR4抗體。“DR5受體抗體”，“DR5抗體”，或“抗-DR5抗體”用來廣義地指結合至少一種形式的DR5受體或其胞外域的抗體。可選地,該DR5抗體與異源序列或分子連接或融合。優選地，該異源序列允許或幫助所述抗體形成較高級或寡聚復合物。可選地，DR5抗體結合DR5受體，但不與任何其它Apo-2L受體(例如DR4，DcRl，或DcR2)結合或交叉反應。可選地，所 述抗體是DR5信號傳遞活性的激動劑。可選地，本發明的DR5抗體以約0. InM到約20mM的濃度范圍結合DR5受體，如BIAcore結合測定所測得的。可選地，本發明的DR5抗體顯示約0. 6nM到約18mM的Ic50值,如BIAcore結合測定所測得的。“DR4受體抗體”，“DR4抗體”，或“抗-DR4抗體”用來廣義地指結合至少一種形式的DR4受體或其胞外域的抗體。可選地,該DR4抗體與異源序列或分子融合或連接。優選地，該異源序列允許或幫助所述抗體形成較高級或寡聚復合物。可選地，DR4抗體結合DR4受體，但不與任何其它Apo-2L受體(例如DR5，DcRl，或DcR2)結合或交叉反應。可選地，所述抗體是DR4信號傳遞活性的激動劑。可選地，本發明的DR4抗體以約0. InM到約20mM的濃度范圍結合DR4受體，如BIAcore結合測定所測得的。可選地，本發明的DR4抗體顯示約0. 6nM到約18mM的Ic50值,如BIAcore結合測定所測得的。術語“激動劑”是在最廣義的意義上使用的，包括任何在體外、體內或原位部分地或完全地增強、刺激或活化Apo2L/TRAIL，DR4或DR5的一種或多種生物活性的分子。這樣的Apo2L/TRAIL與DR4或DR5結合的生物活性的例子包括凋亡和文獻中報道的其它活性。所述激動劑可以直接或間接的方式起作用。例如，激動劑可直接結合DR4或DR5，導致受體活化或信號轉導，結果起到在體外、原位或體內部分地或完全地增強、刺激或活化DR4或DR5的一種或多種生物活性的作用。所述激動劑也可以例如刺激另一種效應分子，然后該分子導致DR4或DR5活化或信號轉導，結果間接地起到在體外、原位或體內部分地或完全地增強、刺激或活化DR4或DR5的一種或多種生物活性的作用。本文認為激動劑可充當增強分子(enhancermolecule),間接地起增強或增加DR4或DR5活化或活性的作用。例如，所述激動劑可增強哺乳動物中內源Apo-2L的活性。這可以通過,例如,預先復合(pre-complexing)DR4或DR5，或通過穩定DR4或DR5受體與其各自配體的復合物(例如穩定Apo_2L和DR4或DR5形成的天然復合物)來實現。本申請中使用的術語“生物標記”泛指一種分子，包括基因、蛋白質、糖結構，或糖月旨，其在哺乳動物組織或細胞中的表達可以通過標準方法(或本文中公開的方法)測定，且該表達可預示哺乳動物組織或細胞對Apo2L/TRAIL或死亡受體抗體的敏感性。本發明所考慮的這樣的生物標志包括但不限于“(1，3/1，4)巖藻糖基轉移酶”或“FUT3”，“a (1,3)巖藻糖基轉移酶”或“FUT6”，“唾液酰Lewis A”，和“唾液酰Lewis X”。可選地，該生物標志測得的表達高于對照組織或細胞樣品中觀察到的表達。可選地，例如，通過PCR或FACS測定所測得的該生物標志在待測組織或細胞樣品中的表達，比在對照組織或樣品中觀察到的表達高至少50倍，或優選至少100倍。可選地，通過IHC測定所測得的該生物標志的表達，其著色強度(stainingintensity)得分將至少為2或更高。"(1,3/1,4)巖藻糖基轉移酶”或“FUT3”在本文中用來指這樣的分子其具有如本文所述的結構特征，且可選地催化巖藻糖殘基從供體底物GDP-巖藻糖轉移給受體底物，與GlcNAc形成a 3或a 4鍵連接(FUT III - VII及IX)。人FUT3的DNA序列和氨基酸序列在圖4中給出。這些序列對應于GenBank登錄號HSU27328,并在例如Kukowska-Latallo等人，Genes Dev. 1990 Aug ;4 (8) : 1288-303中有描述。FUT通常是存在于高爾基體空泡中的II型跨膜糖蛋白，典型地由N末端胞質尾部、跨膜區和高爾基體中朝向腔內的催化域組成。在跨膜區和催化域之間是稱為主干(stem)的區域(Paulson和Colley, J. Biol. Chem.,264:17615-17618(1989))。
“a (1,3)巖藻糖基轉移酶”或“FUT6”在本文中用來指這樣的分子，其在結構上與例如圖5給出的人FUT6的DNA序列及氨基酸序列相關。這些序列對應于GenBank登錄號 HSU27333,并在例如 Koszdin 和 Bowen, BiochemBiophys Res Commun. 1992Aug 31 ；187(1) :152-7中有描述。FUT 6通常在上皮細胞和肝、腎及胃腸組織中，特別是胃、空腸和結腸中表達(并且通常在脾、肺和子宮頸中表達最少)。通常在腦、腎上腺皮質或外周血淋巴細胞中檢測不到FUT 6。“唾液酰Lewis A” (sialyl Lewis A)在本文中用于指具有下述序列或結構的四糖碳水化合物結構或抗原，其可以為膜結合的，或者為可溶性形式，在例如血漿中循環NeuAc a 2—>3Gal ^ I—>3 [Fuc a I—>4] GlcNAc ^ I—>R
(NeuAc a 2—>3Gal ^ I—>3 (Fuc a I—>4) GlcNAc ^ I—>R)
OH
AcHN. OHF
\IOH
COO-I
Neu ca2-3Gaipi-3GlcNAd^ Fuca1-4“唾液酰Lewis X” (sialyl Lewis X)在本文中用于指具有下述序列或結構的四糖碳水化合物結構或抗原，其可以為膜結合的，或者為可溶性形式，在例如血清中循環NeuAc a 2—>3Gal P I—>4 [Fuc a I—>3] GlcNAc P I—>R(NeuAc a 2—>3Gal ^ I—>4 (Fuc a I—>3) GlcNAc ^ I—>R)
權利要求
1.預測哺乳動物組織或細胞樣品對Apo2L/TRAIL的敏感性的方法,包括下列步驟 得到哺乳動物組織或細胞樣品； 檢查所述組織或細胞樣品以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達，其中，所述一種或多種生物標志的表達預示所述組織或細胞樣品對Apo2L/TRAIL的凋亡誘導活性敏感。
2.在哺乳動物組織或細胞樣品中誘導凋亡的方法，包括下列步驟 得到哺乳動物組織或細胞樣品； 檢查所述組織或細胞樣品以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達,及 檢測所述一種或多種生物標志的表達后，使所述組織或細胞樣品暴露于有效量的Apo2L/TRAIL。
3.治療哺乳動物中的疾病，例如免疫相關疾病或癌癥的方法，包括下列步驟 得到所述哺乳動物的組織或細胞樣品； 檢查所述組織或細胞樣品以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達,及 檢測所述一種或多種生物標志的表達后，對所述哺乳動物施用有效量的Apo2L/TRAIL。
4.預測哺乳動物的結腸或結腸直腸癌細胞對Apo2L/TRAIL的敏感性的方法，包括下列步驟 得到哺乳動物結腸或結腸直腸癌細胞； 檢查所述癌細胞以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達，其中所述一種或多種生物標志的表達預示所述癌細胞對Apo2L/TRAIL的凋亡誘導活性敏感。
5.在哺乳動物結腸或結腸直腸癌細胞中誘導凋亡的方法，包括下列步驟 得到哺乳動物結腸或結腸直腸癌細胞； 檢查所述癌細胞以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達，及 在檢測所述一種或多種生物標志表達后，將所述癌細胞暴露于有效量的Apo2L/TRAIL多肽。
6.治療哺乳動物中結腸或結腸直腸的癌癥的方法，包括下列步驟 得到所述哺乳動物結腸或結腸直腸癌細胞樣品； 檢查所述癌細胞樣品以檢測選自巖藻糖基轉移酶3、巖藻糖基轉移酶6、唾液酰LewisA和/或唾液酰Lewis X抗原的一種或多種生物標志的表達，及 在檢測所述一種或多種生物標志表達后，對所述哺乳動物施用有效量的Apo2L/TRAIL。
全文摘要
本申請涉及使用生物標志的測定法和方法。提供了檢查哺乳動物組織或細胞樣品中一種或多種生物標志的方法和測定法。根據所公開的方法和測定法，檢測到一種或多種這樣的生物標志的表達預示或表明所述組織或細胞樣品將對凋亡誘導劑例如Apo2L/TRAIL和抗DR5激動劑抗體敏感。可被檢查的特定生物標志包括巖藻糖基轉移酶，特別是巖藻糖基轉移酶3(FUT3)和/或巖藻糖基轉移酶6(FUT6)，例如唾液酰Lewis A和/或唾液酰Lewis X抗原。還提供了試劑盒和制品。
文檔編號A61K38/19GK102978277SQ20121046161
公開日2013年3月20日 申請日期2005年8月3日 優先權日2004年8月6日
發明者克勞斯.W.瓦格納 申請人:健泰科生物技術公司