專利名稱：透明質酸納米硒及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種透明質酸納米硒及其制備方法和用途，特指具有抗腫瘤作用的透明質酸納米硒，屬納米醫藥材料技術領域。
背景技術：
硒是生物體中谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)、磷脂氫谷胱甘肽過氧化物酶(PHGPx)、5_脫碘酶(ID)活性中心關鍵的組成元素，參與體內過氧物及碘的代謝，調節生物體內碘的水平及自由基水平。硒作為一種人體必需微量元素，具有清除自由基、防癌、抗衰老、保護肝臟、抗輻射、免疫調節、抗腫瘤等多方面活性，因此，硒在保健食品和醫藥領域中占有重要地位。然而，硒的營養劑量和毒性劑量之間范圍較窄，因此開發高效低毒的硒制劑成為現代研究的熱點課題之一。研究證實與無機硒和有機硒相比，納米硒不僅更易被人體吸收和利用，而且生物毒性更低、安全性更高，具有更高的生物活性。透明質酸是糖胺聚糖的一種，由β -N-乙酰氨基葡糖和D-葡糖醛酸單糖的重復結構組成的線性多糖，是構成細胞外基質和細胞間質的主要成分，在維持細胞外基質的結構和調節細胞內活動等方面有著重要的作用。作為蛋白聚糖的核心，透明質酸的作用主要有保護和潤滑關節、促進血管生成及促進傷口愈合等，透明質酸在人體軟組織中的生物相容性好。鑒于其黏彈性和生物相容性，透明質酸可作為一種載體與其他藥物反應形成結合物，具有控釋和靶向作用。中國專利申請號201110084034. X公開了 “一種硫酸軟骨素納米硒及其制備方法”，該發明以硫酸軟骨素為載體，制備出粒徑在30-200 nm的納米硒顆粒；申請號201110151696.4公開了 “一種納米硒顆粒及其制備方法”，采用血紅蛋白、亞硒酸鈉、輔酶QlO和玉米粉混合,反應得到粒徑在50-100 nm的納米硒顆粒,納米硒顆粒中的硒的質量百分含量為1%-10%;專利“液相維生素C復合的納米單質硒及其制備與保存方法”(公開號為CN 100998603A)提供了一種不需要任何模板劑，僅需維生素C還原亞硒酸鈉得到的液相維生素C復合的納米單質硒，粒徑26-93 nm，產物可以在2_10°C下在水溶液中以溶膠形態保存；周艷暉等以蔗糖作為表面修飾劑制備納米硒溶膠，納米硒在溶膠中的粒徑分布在47-177 nm (暨南大學學報(自然科學版)，2010，31 (I) : 72-74) 0然而上述專利和文獻的制備方法仍存在一些不足，如粒徑范圍寬、分散性不良或穩定性差等。有關采用透明質酸為載體制備納米硒的方法至今未見國內外報道，也未見相應專利公開。
發明內容
基于以上背景技術中存在的不足，本發明的目的在于提供一種透明質酸納米硒的制備方法，制備出粒徑小、粒徑范圍窄，分散性好和穩定性好的球形透明質酸納米硒，用于人們抗腫瘤的輔助治療或營養保健。針對上述發明目的，本發明采用如下技術方案一種透明質酸納米硒，是以透明質酸為載體，亞硒酸鈉為原料，在室溫條件下采用抗壞血酸為還原劑制備的紅色納米硒。
—種透明質酸納米硒，以透明質酸為載體，抗壞血酸為還原劑，形成球狀粒徑在50-70nm的紅色納米硒，其中硒的質量分數在O. 659Γ2. 2%。上述一種透明質酸納米硒的制備方法，包括以下步驟
取O. 19Tl% (質量比)的透明質酸溶液和O. lmol/1亞硒酸鈉溶液混合，在室溫下磁力攪拌12 h，按亞硒酸鈉和抗壞血酸的摩爾比值為1:2 1:6緩慢滴加一定體積O. I mol/1抗壞血酸溶液繼續攪拌，溶液顏色由無色變為紅色，直至顏色不再發生改變；在去離子水中透析48 h，真空冷凍干燥即得紅色透明質酸納米硒粉末。其中透明質酸溶液和亞硒酸鈉溶液的體積比為100 :1。上述一種透明質酸納米硒的用途，用于治療抗腫瘤藥物。采用本發明的方法可以制備出粒徑小、粒徑范圍窄，分散性好的球形透明質酸納米硒，在室溫下一個月仍可以保持穩定，該反應條件溫和，操作簡單，是一種綠色環保的合成方法。
圖I為透明質酸納米硒的掃描電鏡分析結果；
圖2和圖3所示為透明質酸納米硒溶液在透射電鏡下的分析結果。
具體實施例方式 為了更清楚地說明本發明內容，用具體實施例說明如下，具體實施例不限定本發明內容范圍。用電感耦合等離子發射光譜儀(ICP)測得透明質酸納米硒中硒元素的含量。透明質酸納米硒的制備 實施例I
取100 ml 1%的透明質酸溶液(分子量為1.06X 106 Da)和I ml O. I mol/1的亞硒酸鈉溶液，在室溫下磁力攪拌12 h，緩慢滴加緩慢滴加12 ml O. lmol/1抗壞血酸溶液繼續攪 拌，溶液顏色由無色變為紅色，直至顏色不再發生改變。在去離子水中透析48 h，真空冷凍干燥得到紅色透明質酸納米硒粉末I. 0590 g。由電感耦合等離子發射光譜儀(ICP)測得透明質酸納米硒中硒元素的含量為I. 4%。
實施例2
取100 ml O. 25%的透明質酸溶液(分子量為I. 06 X IO6 Da)和I ml O. I mol/1的亞硒酸鈉溶液，在室溫下磁力攪拌12 h，緩慢滴加緩慢滴加4 ml O. lmol/1抗壞血酸溶液繼續攪拌，溶液顏色由無色變為紅色，直至顏色不再發生改變。在去離子水中透析48 h，真空冷凍干燥得到紅色透明質酸納米硒粉末O. 2510 g。由電感耦合等離子發射光譜儀(ICP)測得透明質酸納米硒中硒元素的含量為2. 2%。
實施例3
取100 ml O. 1%的透明質酸溶液(分子量為1.06X 106 Da)和I ml O. I mol/1的亞硒酸鈉溶液，在室溫下磁力攪拌12 h，緩慢滴加2 ml O. lmol/1抗壞血酸溶液繼續攪拌，溶液顏色由無色變為紅色，直至顏色不再發生改變。在去離子水中透析48 h，真空冷凍干燥得到紅色透明質酸納米硒粉末O. 1013 g。由電感耦合等離子發射光譜儀(ICP)測得透明質酸納米硒中硒元素的含量為O. 65%。
對于所制備的透明質酸納米硒，對其結構和抗腫瘤活性做進一步的介紹。I.透明質酸納米硒的形態和粒徑
圖I為透明質酸納米硒的掃描電鏡分析結果，可以看出，采用透明質酸為載體，抗壞血酸為還原劑的方法產生了大量的透明質酸納米硒顆粒，粒徑小，分散性好。如圖2和圖3所示為透明質酸納米硒溶液在透射電鏡下的分析結果，可見透明質酸納米硒成規則的球形，粒徑大小為50-70nm。·
透明質酸納米硒抗腫瘤活性試驗
I材料與試劑 1.1動物
ICR小鼠，雌性，體重20±2g，清潔級，購于揚州大學比較醫學中心，合格證編號SCXK (蘇)2007-0001。實驗前飼養3d，飼養溫度為24 ± I °C，濕度為55 - 60%。I. 2藥品與試劑
透明質酸納米硒實驗室自制(采用實施例2中制備的透明質酸納米硒，經ICP-AES測定，硒元素的含量為2. 2%)
5-氟尿嘧啶天津金耀氨基酸有限公司國藥準字H12020959 生理鹽水湖南科倫制藥有限公司，國藥準字H51021158 超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒南京建成生物工程研究所 1.3統計方法
數據用SPSS16. O統計軟件進行處理。結果用± s表示，多組間差異采用單因素方差分析(One-way AN0VA)。P < O. 05 有統計學意義。2實驗方法
2. I小鼠H印G-2肝癌腹水瘤模型的建立
取體重20土2g的昆明小鼠2 3只，腹腔接種O. 2 ml HepG-2腹水瘤瘤株，定期每7 9天傳一代。取腹腔傳代7天且生長良好的!fepG-2腹水瘤小鼠，脫頸椎處死，75 %乙醇消毒動物皮膚，在無菌條件下，剪開小鼠腹腔，吸取生長良好的腹水，觀察腹水顏色(腹水為乳白色無絮狀沉淀物者為佳，血性腹水則不可用)并用臺盼藍染色法觀察活細胞數(活細胞數>98 %);腹水用生理鹽水稀釋，吹打混勻，細胞計數板計數，調整細胞數為2 X IO7個活細胞/mL ;取40只小鼠，右側腋下接種H印G-2腫瘤細胞，建立小鼠H印G-2肝癌腹水瘤模型。2. 2 分組
取10只未造模的小鼠，為空白對照組，40只H印G-2腫瘤小鼠隨機分組，每組10只，共
4組!fepG-2腫瘤模型對照組、5-氟尿嘧啶陽性對照組、透明質酸納米硒高劑量組、透明質酸納米硒低劑量組。2.3給藥劑量設計
表I為各給藥組的給藥劑量，各組給藥10天。
表I給藥劑量
權利要求
1.一種透明質酸納米硒，其特征在于以透明質酸為載體，抗壞血酸為還原劑，形成球狀粒徑在50-70nm的紅色納米硒，其中硒的質量分數在O. 659Γ2. 2%。
2.根據權利要求I所述的一種透明質酸納米硒的制備方法，其特征在于按照以下步驟進行取質量濃度O. 1°/Γ %的透明質酸溶液和O. lmol/1亞硒酸鈉溶液混合，在室溫下磁力攪拌12 h，按亞硒酸鈉和抗壞血酸的摩爾比值為1:2 1:6緩慢滴加一定體積O. I mol/1抗壞血酸溶液繼續攪拌，溶液顏色由無色變為紅色，直至顏色不再發生改變；在去離子水中透析48 h，真空冷凍干燥即得紅色透明質酸納米硒粉末。
3.根據權利要求2所述的一種透明質酸納米硒的制備方法，其特征在于其中透明質酸溶液和亞硒酸鈉溶液的體積比為100 :1。
4.權利要求I所述的一種透明質酸納米硒的用途，用于治療抗腫瘤藥物。
全文摘要
本發明公開了透明質酸納米硒及其制備方法和用途，屬納米醫藥材料技術領域。該發明以透明質酸為載體，亞硒酸鈉為原料，在室溫條件下采用抗壞血酸為還原劑制備得到紅色球形的透明質酸納米硒，粒徑50-70nm。采用本發明方法制備的透明質酸納米硒具有粒徑小、粒徑范圍窄，分散性好等優點，在室溫下一個月仍可以保持穩定，且反應條件溫和，操作簡單，是一種綠色環保的合成方法，克服了現有制備方法存在的一些不足，如粒徑范圍寬、分散性不良或穩定性差等。該透明質酸納米硒對植入小鼠體內的HepG-2肝癌腹水瘤細胞的生長有顯著抑制作用，可作為抗腫瘤輔助藥物或提高機體免疫功能的保健品。
文檔編號A61K33/04GK102921015SQ20121040798
公開日2013年2月13日 申請日期2012年10月24日 優先權日2012年10月24日
發明者仰榴青, 任月娜, 吳向陽, 趙婷, 茆廣華, 鄒燁, 鄭大恒, 馮偉偉, 朱洋 申請人:江蘇大學