一種抗卵巢功能衰退的中藥組合物及其應用的制作方法

專利名稱：一種抗卵巢功能衰退的中藥組合物及其應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于中藥領域，涉及一種抗卵巢功能衰退的中藥組合物及其應用。
背景技術：
卵巢功能衰退可引發不孕不育、生殖系統、心血管系統、骨質疏松等系列疾病，卵巢過早衰退(Prematureovarian failure, P0F,即卵巢早衰)致使患者生活質量下降。此夕卜，隨著社會經濟的發展，越來越多的職業女性選擇延遲生育時間，但女性的最佳生殖時間窗同樣受到卵巢功能的嚴重限制。因此探討卵巢功能衰退衰老機制、預測卵巢功能衰退的指標以及防治卵巢功能過早衰退的措施是當今生殖健康領域的研究熱點和難點。流行病學研究顯示卵巢早衰的發生率為1%，然而這1%的婦女如何最終達到卵巢衰竭的狀態，POF初始階段的狀態如何，目前仍有很多未知。有研究發現，隨年齡增加，卵泡 密度逐漸下降，35歲以上婦女卵泡密度明顯降低，是35歲以下者卵泡密度的1/4，40歲以上婦女卵泡密度急劇降低，部分婦女卵泡密度降至O。Nikolaou估計在一般人群中至少有10%的婦女經歷著過早的卵巢功能衰退，那根據POF的1%發生率，至少有9%的婦女處于卵巢功能衰退的早期狀態，有專家對此狀態命名為卵巢早老化(prematureovarian aging, POA),并對兩者病因學進行比較研究，結果支持了 POA是POF —種早期階段表現的觀點。有研究提示治療高促性腺激素閉經的效果與病程以及促卵泡生成素(FSH)水平有關。激素替代治療(Hormone replacement therapy,HRT)是目前現代醫學治療卵巢衰老相關癥狀和疾病的重要方法，但現有研究明顯表明其具有多種副作用和遠期致癌性，使其臨床應用受到明顯的限制。對應此狀態，在中國遵循傳統中醫理論，主張“補腎益陰、疏肝養血”而延緩卵巢衰老，采用中藥方劑治療，存在活性明確，毒副作用小的特色。

發明內容
本發明的目的是針對現有技術的缺陷，提供一種抗卵巢功能衰退的中藥組合物及其應用。本發明的另一目的是提供一種抗卵巢功能衰退的中成藥及其制備方法。本發明的目的可通過如下技術方案實現一種抗卵巢功能衰退的中藥組合物，主要由菟絲子30-70%，枸杞子10-50%，桑椹4-20%,生地黃10-20%和紅花1-10%組成，優選為由菟絲子30-55%，枸杞子17_38%，桑椹8-18%,生地黃13-19%和紅花3-6%組成。所述的抗卵巢功能衰退的中藥組合物在制備抗卵巢功能衰退藥物中的應用。所述的卵巢功能衰退癥狀為多囊卵巢綜合征、功能性月經不調、卵巢早衰或絕經期綜合征。一種抗卵巢功能衰退的中成藥的制備方法，包括如下步驟a.先將菟絲子、枸杞子、桑椹、紅花、生地黃五種原料分別干燥粉碎，目數不少于20目；
b.將粉碎后的粉狀原料按所規定的重量百分比稱重后，加入相當于原料5-200倍質量的大極性提取液，再一同攪拌混合均勻，使原料中的活性成分溶解到提取液中，濾去殘渣后得到本發明中成藥的粗品；其中所述的原料的重量百分比組成為菟絲子30-70%，枸杞子10-50%，桑椹4-20%，生地黃10-20%和紅花1_10%，優選為菟絲子30_55%，枸杞子17-38%,桑椹8-18%，生地黃13-19%和紅花3-6% ；c.將得到的粗品進行干燥、粉碎、制劑即得本發明的中成藥。其中，所述菟絲子、枸杞子、桑椹、紅花、生地黃原料粉碎的目數為20-80目。所述大極性提取液優選水，甲醇，乙醇，或是它們的任意混合液；所述大極性提取液進一步優選濃度60-80%，PH值為5. 6-6. 3的乙醇溶液。
所述的抗卵巢功能衰退的中成藥的制備方法，優選所述菟絲子、枸杞子、桑椹、紅花、生地黃按量混合并與大極性提取液攪拌均勻后的混合物，在靜止狀態下用超聲振蕩法、加熱回流提取法或逆流提取法，使混合物中的原料的活性成分更多的溶解到大極性提取液中。所述的抗卵巢功能衰退的中成藥的制備方法，進一步優選所述菟絲子、枸杞子、桑椹、紅花、生地黃原料按量混合并與大極性提取液攪拌均勻后的混合物從管中緩慢通過，管周壁設置的超聲波發生器對其進行超聲振蕩處理，處理時間10-30分鐘，使混合物中各原料的活性成分充分溶解到大極性提取液中。所述的抗卵巢功能衰退的中成藥的制備方法，所述粗品的干燥工序優選采用高溫干燥、噴霧干燥或冷凍干燥；所述粗品的干燥工序進一步優選采用_20°C下的低溫真空干燥，以保持生物活性。按照上述方法制備的抗卵巢功能衰退的中成藥。所述的抗卵巢功能衰退的中成藥在制備抗卵巢功能衰退藥物中的應用,所述的卵巢功能衰退癥狀優選多囊卵巢綜合征、功能性月經不調、卵巢早衰或絕經期綜合征。卵巢功能衰退在中醫理論上認為病機以腎氣不足，腎精虧耗為基礎，氣血虛弱，瘀血阻滯為主要環節，最終導致卵巢老化及衰老，出現多臟受累，臟腑、氣血、經絡、胞宮功能失常，其中尤與腎和瘀這兩者最為關鍵。對于卵巢衰老或卵巢早衰，中醫均歸屬腎虛精虧之證。遵循中醫理論配伍組成方劑，在方中枸杞子為君，補益腎陰，滋養精血，起主要治療作用。古本草記載枸杞子功效，“補益精氣，強盛陰道”(《本草經集注》)；“凡真陰不足之證，悉宜用之”(《藥品化義》)；“滋腎”(《本草綱目》)；“補腎填精”(《本草匯言》)。生地黃、桑椹為臣。關于生地黃，雖性寒能清熱涼血，但亦擅長滋陰補血。《名醫別錄》記載“補五臟內傷不足，通血脈，益氣力，利耳目”；《日華子本草》記載“助心膽氣，安魂定魄”；《本草經疏》記載“補腎家之要藥，益血陰之上品”；《本草從新》記載“養陰退陽，涼血生血。調經安胎”。關于桑椹，《滇南本草》記載“益腎臟而固精，久服黑發明目”;《隨息居飲食譜》記載“滋肝腎，充血液”。本方用生地黃、桑椹協助枸杞子滋腎養血，增強補益作用，同時又發揮生地黃退虛熱、安心神之長。紅花為佐。古本草記載紅花“惟入血分，專治女科”(《本草蒙荃》);謂其能“生新破瘀，，(《藥性考》)，“逐腹中惡血而補血虛之虛”(《醫切集覽》)，是“行血，和血，調血之藥也”(《本草匯言》)。而《藥品化義》在分析紅花用量時指出“若多用三四錢，使血走散。若只用二三分，令血調和，此其滋養而生血也”。本方選用少量紅花活血和血，既能祛瘀生新而增強枸杞子、生地黃、桑椹等生精養血作用，又能協同生地黃活血消癥通血脈，解決女性常見的子宮肌瘤、多囊卵巢、乳房結節等腫塊。菟絲子同為佐藥。《神農本草經》謂其“補不足，益氣力，久服明目，輕身延年”;《本草匯言》又曰“補腎養肝，溫脾助胃之藥也”；《扁鵑心書》則用以“補腎氣，壯陽道，助精神”。本方遵循張景岳“善補陰者，必于陽中求陰”之法，于大隊補益陰血藥中佐以藥性微溫的菟絲子，使“陰得陽升，而源泉不竭”，進一步增強補養陰精的作用。綜上所述，五藥合用，全方共奏補腎抗衰、益精滋陰、養血調經之效，以達延緩卵巢衰老目的。本發明是由菟絲子、枸杞子、桑椹、紅花、生地黃五種藥材組方而成，目前未見此組方治療卵巢功能衰退的報道，僅見申請號為CN201010175581.4，公開號為CN101829303A的中國專利文獻“延年益壽酒”公開了一種延年益壽酒，其特征是在每1000-5000ml的25° -60°純糧白酒中浸泡有下列藥物原料人參3-25g，淫羊藿3-20g，酸棗仁3-20g，鹿·茸3-20g,遠志2-20g,龜版3-25g，鱉甲3_30g，茯苓2~20g,砂仁2~20g,山萸肉3_30g，黃芪3-30g,巴戟天3-30g,山楂3-30g，熟地黃2_20g，菟絲子3_30g，川芎2~20g,當歸2~20g,女貞子3-30g，白芍藥5-20g，枸杞子3-30g，紅花l_10g，鎖陽3_30g，桑椹3_30g，靈芝草3-30g,肉蓯蓉3-30g,三七3-10g,石斛2_30g，何首烏3_25g，龍眼肉3_50g，杜仲2~20g,夜交藤2-30g，大棗20-500g，天麻2-20g，甘草2_20g，菊花3_30g。“延年益壽酒”是由菟絲子、枸杞子、桑椹、紅花、熟地黃組方而成，且其功效為健康長壽，對老年人性功能減退者有防治作用，對各種疼痛、勞損、久治不愈的慢性病有扶正而愈的作用，而本發明選用生地黃，《本草綱目》載地黃生則大寒，而涼血，血熱者需用之，熟則微溫，而補腎，血衰者需用之。男子多陰虛，宜用熟地黃，女子多血熱，宜用生地黃。故本發明主要針對女性卵巢作用，故選用生地黃。有益效果近年來，隨著生活水平的不斷提高，人們對自身的健康越來越重視，適當服用一些保健食品防治疾病與保持健康已逐漸成為世界各國民眾的重要手段。抗卵巢功能衰退保健品市場是一個新興市場，我國約有上億人患有不同程度的卵巢功能衰退，平均每人每年用藥20元，抗卵巢功能衰退保健藥物每年銷售額就有20億元。因此，具抗卵巢功能衰退作用的本方其市場潛力十分巨大，并具有很大的市場優勢。特別由于本方是在本公司所有的原專利“提高女性卵巢功能的中成藥及其制作方法以及在制藥中的應用”(專利號ZL03152889. 9)加味后重新配比制備而成，新配方對離體卵巢顆粒細胞增殖及雌孕激素分泌能力與原方相當；對離體卵巢顆粒細胞抗凋亡活性優于原方，并具顯著性差異；且能降低多囊卵巢綜合征模型鼠FSH、LH、T水平，能對環磷酰胺所致卵巢早衰大鼠有性激素調節作用，因此，新配方可在制備抗卵巢功能衰退藥物中應用，特別是在制備抗卵巢功能衰退癥狀為卵巢早衰、更年期綜合征或卵巢抵抗綜合征的藥物中應用。本發明活性優于原方，且為新配方提供了臨床新用途，擴大了其應用范圍。


圖I不同配方對離體卵巢顆粒細胞凋亡的影響
具體實施例方式以下將結合具體實施例對本發明做進一步闡述，這些實例僅用于說明目的，而不用于限制本發明范圍。本發明的實驗動物，購自中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心(生產許可證號SCXK (軍)2007-004 )。實施例I取100千克菟絲子、50千克枸杞子、40千克桑椹、30千克生地黃和8千克紅花，分別經粉碎機粉碎得到他們的粉狀物，目數控制在80目。將上述粉狀菟絲子、枸杞子、桑椹、生地黃和紅花與20000千克的濃度為70%、pH值為6的乙醇溶液混合，并在攪拌器內攪拌均勻，然后經管道緩慢流入容器，在該管道的管壁上設有超聲波發生器，他對管道內緩慢流動的混合物進行超聲振蕩破碎處理，處理時間為30分鐘，使原始細胞中的活性成分充分溶 解到乙醇溶液中。將超聲處理后的混合物溶液進行過濾，去除殘渣，得到約20000千克的本發明中成藥的粗品溶液。將上述粗品溶液至于乙醇回收器和真空干燥箱中濃縮后取出，得到約25千克的本發明中成藥的干浸膏，最后將該干浸膏經制劑加工處理即得到片劑、膠囊劑、顆粒劑、沖劑或散劑的中成藥。實施例2取200千克菟絲子、100千克枸杞子、80千克桑椹、70千克生地黃和20千克紅花，分別經粉碎機粉碎得到他們的粉狀物，目數控制在20目。將上述粉狀菟絲子、枸杞子、桑椹、生地黃和紅花與5000千克的濃度為75%、pH值為6. 3的乙醇溶液混合，并在攪拌器內攪拌均勻，然后經加熱回流12小時，使原始細胞中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。濾除殘渣，得到約4500千克的本發明中成藥的粗品溶液。將上述粗品溶液至于真空干燥器中，在_20°C條件下進行低溫真空干燥，干燥48小時后取出，得到約56. 4千克的本發明中成藥的干浸膏，最后將該干浸膏經制劑加工處理即得到片劑、膠囊劑、顆粒劑、沖劑或散劑的中成藥。實施例3取400千克菟絲子、200千克枸杞子、150千克桑椹、120千克生地黃和31千克紅花，分別經粉碎機粉碎得到他們的粉狀物，目數控制在20目。將上述粉狀菟絲子、枸杞子、桑椹、生地黃和紅花與10000千克的濃度為80%、pH值為5. 8的乙醇溶液混合，并在攪拌器內攪拌均勻，然后經加熱回流12小時，使原始細胞中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。濾除殘渣，得到約9000千克的本發明中成藥的粗品溶液。將上述粗品溶液至于真空干燥器中，在-20°C條件下進行低溫真空干燥，干燥48小時后取出，得到約100千克的本發明中成藥的干浸膏，最后將該干浸膏經制劑加工處理即得到片劑、膠囊劑、顆粒劑、沖劑或散劑的中成藥。實施例4取300千克菟絲子、100千克枸杞子、50千克桑椹、100千克生地黃和32千克紅花，分別經粉碎機粉碎得到他們的粉狀物，目數控制在20目。將上述粉狀菟絲子、枸杞子、桑椹、生地黃和紅花與6000千克的濃度為75%、pH值為6. O的乙醇溶液混合，并在攪拌器內攪拌均勻，然后經加熱回流12小時，使原始細胞中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。濾除殘渣，得到約5000千克的本發明中成藥的粗品溶液。將上述粗品溶液至于真空干燥器中，在_20°C條件下進行低溫真空干燥，干燥48小時后取出，得到約60千克的本發明中成藥的干浸膏，最后將該干浸膏經制劑加工處理即得到片劑、膠囊劑、顆粒劑、沖劑或散劑的中成藥。實施例5取150千克菟絲子、180千克枸杞子、50千克桑椹、90千克生地黃和16千克紅花，分別經粉碎機粉碎得到他們的粉狀物，目數控制在20目。將上述粉狀菟絲子、枸杞子、桑椹、生地黃和紅花與5000千克的濃度為75%、pH值為6. 3的乙醇溶液混合，并在攪拌器內攪拌均勻，然后經加熱回流12小時，使原始細胞中的活性成分充分溶解到乙醇溶液中。濾除殘渣，得到約5000千克的本發明中成藥的粗品溶液。將上述粗品溶液至于真空干燥器中，在_20°C條件下進行低溫真空干燥，干燥48小時后取出，得到約58千克的本發明中成藥的干浸膏，最后將該干浸膏經制劑加工處理即得到片劑、膠囊劑、顆粒劑、沖劑或散劑的中成藥。
實施例6不同配方對離體卵巢顆粒細胞活性的影響樣品制備樣品I :本產品(按實施例I方法制備)；樣品2 (按照本公司所有的原專利“提高女性卵巢功能的中成藥及其制作方法以及在制藥中的應用”(專利號ZL03152889. 9)組方提取樣品):將枸杞子60g，地黃IOg和紅花30g粉碎，加濃度為75%，PH值為5. 6-6. 3的乙醇溶液，回流提取12小時，過濾得提取液，提取液濃縮并干燥得干浸膏；動物實驗方法取22-27日齡雌性大鼠，常規飼養48h后頸椎脫白法處死，無菌摘取大鼠的雙側卵巢，將卵巢破碎使顆粒細胞釋放，用2mL含青霉素和鏈霉素的DMEM-F12培養液中稀釋，并輕輕吹打，使其分散成單個細胞。離心過濾收集顆粒細胞。(I)MTT法將一定濃度細胞懸液接種于24孔板，每孔80 μ 1，每孔再加120 μ I培養液調整細胞密度至200 μ I/孔，每組設6個平行孔。將其置于5%C02培養箱中培養24h。取CO2培養箱內培養了 24h的顆粒細胞懸液，每孔先后加入造模濃度氯化鎘和Img · mL-1不同樣品，平行設定正常對照組(生理鹽水)和模型組(氯化鎘和生理鹽水)。常規培養20h后于每孔中加入MTT溶液(5mg · πιΓ1) 20 μ L繼續培養4h，每孔加入80 μ L的三聯液，過夜培養，選擇570nm波長，在酶聯免疫檢測儀上測定各孔吸光度，結果見表I。(2)放射免疫法將一定濃度細胞懸液接種于24孔板，每孔80 μ 1，每孔再加120 μ I培養液調整細胞密度至200 μ I/孔，每組設6個平行孔。將其置于5%C02培養箱中培養24h。取CO2培養箱內培養了 24h的顆粒細胞懸液，每孔先后加入造模濃度氯化鎘和Img · mL-1不同樣品，平行設定正常對照組(生理鹽水)和模型組(氯化鎘和生理鹽水)。將其置于5%C02培養箱中培養24h。離心取其細胞上清液，用放免試劑盒測定E2、P的含量，結果見表I。(3)流式細胞術同法取得卵巢顆粒細胞后，將一定濃度細胞培養于培養瓶中，先后加入造模濃度氯化鎘和Img *mL_1不同樣品與培養瓶中，平行設定正常對照組(生理鹽水)和模型組(氯化鎘和生理鹽水)，24小時后消化取得細胞懸液進行流式細胞儀檢測(見圖1)，分析給藥與卵巢顆粒細胞的凋亡關系。MTT法和放射免疫法結果顯示模型組與正常對照組在細胞增殖活性及雌孕激素分泌能力上均有顯著性差異(P〈o. 01)，可見造模成功。而相同劑量下，陽性藥(戊酸雌二醇)、樣品I、樣品2在細胞增殖活性及雌孕激素分泌能力上無顯著性差異，但在細胞增殖活性上均與模型組有顯著性差異(均P〈o. 01)。表I不同提取方法對離體卵巢顆粒細胞活性的影響(i 土 SU n=6)
權利要求
1.一種抗卵巢功能衰退的中藥組合物，其特征在于由英絲子30-70%,枸杞子10-50%,桑椹4-20%，生地黃10-20%和紅花1-10%組成，優選為由菟絲子30-55%，枸杞子17_38%，桑椹8-18%，生地黃13-19%和紅花3-6%組成。
2.權利要求I所述的抗卵巢功能衰退的中藥組合物在制備抗卵巢功能衰退藥物中的應用，所述的卵巢功能衰退癥狀優選多囊卵巢綜合征、功能性月經不調、卵巢早衰或絕經期綜合征。
3.一種抗卵巢功能衰退的中成藥的制備方法，其特征在于包括如下步驟 a.先將菟絲子、枸杞子、桑椹、紅花、生地黃五種原料分別干燥粉碎，目數不少于20目； b.將粉碎后的粉狀原料按重量百分比稱重后，加入5-200倍量的大極性提取液，再一同攪拌混合均勻，使原料中的活性成分溶解到提取液中，濾去殘渣后得到本發明中成藥的粗品；其中所述的原料的重量百分比組成為菟絲子30-70%，枸杞子10-50%，桑椹4-20%， 生地黃10-20%和紅花1-10%，優選為菟絲子30-55%，枸杞子17-38%，桑椹8_18%，生地黃13-19% 和紅花 3-6% ； c.將得到的粗品進行干燥、粉碎、制劑即得本發明的中成藥。
4.根據權利要求3所述的抗卵巢功能衰退的中成藥的制備方法，其特征在于所述菟絲子、枸杞子、桑椹、紅花、生地黃原料粉碎的目數為20-80目。
5.根據權利要求3所述的抗卵巢功能衰退的中成藥的制備方法，其特征在于所述大極性提取液或是水，或是甲醇，或是乙醇，或是它們的任意混合液；所述大極性提取液優選濃度60-80%, PH值為5. 6-6. 3的乙醇溶液。
6.根據權利要求3所述的抗卵巢功能衰退的中成藥的制備方法，其特征在于所述菟絲子、枸杞子、桑椹、紅花、生地黃按量混合并與大極性提取液攪拌均勻后的混合物，在靜止狀態下用超聲振蕩法、加熱回流提取法或逆流提取法，使混合物中的原料的活性成分更多的溶解到大極性提取液中。
7.根據權利要求3所述的抗卵巢功能衰退的中成藥的制備方法，其特征在于所述菟絲子、枸杞子、桑椹、紅花、生地黃原料按量混合并與大極性提取液攪拌均勻后的混合物從管中緩慢通過，管周壁設置的超聲波發生器對其進行超聲振蕩處理，處理時間10-30分鐘，使混合物中各原料的活性成分充分溶解到大極性提取液中。
8.根據權利要求3所述的抗卵巢功能衰退的中成藥的制備方法，其特征在于所述粗品的干燥采用高溫干燥、噴霧干燥或冷凍干燥；所述粗品的干燥工序優選采用_20°C下的低溫真空干燥，以保持生物活性。
9.按照根據權利要求3 8中任一項所述的方法制備的抗卵巢功能衰退的中成藥。
10.權利要求9所述的抗卵巢功能衰退的中成藥在制備抗卵巢功能衰退藥物中的應用，所述的卵巢功能衰退癥狀優選多囊卵巢綜合征、功能性月經不調、卵巢早衰或絕經期綜合征。
全文摘要
本發明屬于中藥領域，公開了一種抗卵巢功能衰退的中藥組合物及其應用。一種抗卵巢功能衰退的中藥組合物，主要由菟絲子30-70%，枸杞子10-50%，桑椹4-20%，生地黃10-20%和紅花1-10%組成。由該組合物制備的抗卵巢功能衰退的中成藥可在制備抗卵巢功能衰退藥物中的應用，所述的卵巢功能衰退癥狀優選多囊卵巢綜合征、功能性月經不調、卵巢早衰或絕經期綜合征。結果顯示本發明抗卵巢功能衰退中成藥對離體卵巢顆粒細胞具有顯著的增殖作用，能顯著提高離體卵巢顆粒細胞的雌孕激素分泌水平，能顯著增加離體卵巢顆粒細胞的抗凋亡作用，能降低多囊卵巢綜合征模型鼠FSH、LH、T水平，能對環磷酰胺所致卵巢早衰大鼠有性激素調節作用。
文檔編號A61P15/12GK102846849SQ201210388218
公開日2013年1月2日 申請日期2012年10月15日 優先權日2012年10月15日
發明者呂曄, 馬紅, 韋敏 申請人:南京美福天然藥物科技有限公司