冬凌草葉水提物的納米結構及應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及冬凌草葉用蒸餾水80℃提取制備水提物、涉及該水提物濃縮得到的固體在水溶液中的納米結構、進一步涉及納米結構對抗骨質疏松活性的影響。
【專利說明】冬凌草葉水提物的納米結構及應用
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發明領域
[0002]本發明涉及冬凌草葉用蒸餾水80 °C提取制備水提物、涉及該水提物濃縮得到的固體在水溶液中的納米結構、進一步涉及納米結構對抗骨質疏松活性的影響。本發明屬于生物醫藥領域。
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【背景技術】
[0004]冬凌草(DLC),是唇形科香茶菜屬植物碎米極Rabdosia rubescens (Hems1.)Hara的全草。冬凌草為多年生草本植物，廣泛分布于我國黃河長江流域，主產于河南濟源太行山、王屋山區一帶。因具有清熱解毒、清咽利喉和消腫止痛功能，民間常年將冬凌草葉當作茶葉煮水飲用。在過去的30多年里，冬凌草的化學成分及藥理作用研究主要集中在葉的脂溶性部分，代表性成分為冬凌草甲素和冬凌草乙素。通過長期研究積累，發明人披露了冬凌草葉水提物的21種酚酸。它們是單咖啡酰酒石酸，丹參素，丹參素咖啡酰酒石酸，
2-綠原酸-3-對羥基桂皮酸酒石酸酯，單阿魏酰酒石酸，綠原酸，咖啡酰蘋果酸，二咖啡酰酒石酸，迷迭香酰丹參素酒石酸酯，yuannaneic acid E,紫草酸，咖啡酸，咖啡酰對羥基桂皮酰酒石酸，氫化紫草酸。2-丹參素-3-乙酰莽草酸酒石酸酯，丹參素咖啡酰酒石酸，2-(丙二酰奎尼酸單酯)-3-丹參素酒石酸奎尼酸單酯，水化丹酚酸B，丹參素酰丹參素酰迷迭香酸酯，丹酚酸B和迷迭香酸。這些酚酸在冬凌草葉水提物中的相對含量接近83%。應當指出的是，到目前為止還沒有任何與冬凌草葉水提物納米結構的報道。
[0005]通過長期研究積累，發明人認識到這些酚酸在水溶液中可以通過J1-Ji相互作用，氫鍵相互作用和疏水性相互作用發生共組裝，形成納米結構。恰恰是這些酚酸在水溶液中共組裝形成的納米結構，使得冬凌草葉水提物顯示重要的生物活性。根據這些認識，發明人提出了本發明。
【發明內容】
[0006]本發明的第一個內容是提供冬凌草葉水提物。
[0007]本發明的第二個內容是測定冬凌草葉水提物的納米結構。
[0008]本發明的第三個內容是闡明冬凌草葉水提物的納米結構與抗骨質疏松活性的關
系O
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【專利附圖】
【附圖說明】
[0010]圖1在濃度為78.75 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草葉的水提物以直徑為102.3nm的納米球的聚集體存在。[0011]圖2在濃度為15.75 mg/ml的超純水溶液中冬凌草莖的水提物以直徑為46.4-110.7 nm的納米球存在。
[0012]圖3在濃度為3.15 mg/ml的超純水溶液中冬凌草莖的水提物以直徑為58.8-147.1 nm的納米球存在。
[0013]圖4在濃度為0.63 mg/ml的超純水溶液中冬凌草葉的水提物以直徑為81.8-218.2 nm的納米球存在。
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【具體實施方式】
[0015]為了進一步闡述本發明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發明進行具體描述，不應當理解為對本發明的限制。
[0016]實施例1冬凌草葉水提物的制備
21 g干冬凌草葉自來水洗凈之后加500 ml雙蒸水于60 - 100 0C,優選80 °C攪拌提取10 - 60分鐘，優選30分鐘。過濾得到的清液于40 ° C減壓濃縮，得到6.3 g冬凌草葉水提物，為淡黃色固體，研成粉末，供后面的研究使用。
[0017]實施例2冬凌草葉水提物的納米結構
為了描述冬凌草葉水提物的納米結構，本發明將冬凌草葉水提物的淡黃色固體配成濃度為 78.75 mg/ml, 15.75 mg/ml, 3.15 mg/ml 和 0.63 mg/ml 的超純水溶液，然后將溶液滴在銅網上，35 ° C揮發24 h至干溶后按標準操作(20 eV能量窗口，6000 - 400, 000倍)在透射電鏡(JSM- 6360 LV, JE OL, Tokyo, Japan)下觀察納米形態。測定的透射電鏡照片顯示在圖1 - 4中。
[0018]圖1說明在濃度為78.75 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草葉的水提物以直徑為102.3 nm的納米球的聚集體存在。
[0019]圖2說明在濃度為15.75 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草葉的水提物以直徑為
46.4-110.7 nm的納米球存在。
[0020]圖3說明在濃度為3.15 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草葉的水提物以直徑為58.8-147.1 nm的納米球存在。
[0021]圖4說明在濃度為0.63 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草葉的水提物以直徑為81.8-218.2 nm的納米球存在。
[0022]圖2-4說明當濃度從15.75 mg/ml降至3.15 mg/ml再降至0.63 mg/ml時,冬凌草葉的水提物形成的納米球的直徑逐步增大。這種現象揭示，我們可以通過控制冬凌草葉的水提物的濃度來控制冬凌草葉的水提物形成的納米球的直徑。圖1-2說明當濃度從78.75mg/ml降至15.75 mg/ml時,不僅冬凌草葉的水提物形成的納米球的直徑減小,而且納米球的聚集體也不再存在。這種現象同樣揭示，我們可以通過控制冬凌草葉的水提物的濃度來控制冬凌草葉的水提物形成的納米球的直徑和聚集狀態。
[0023]實施例3冬凌草葉水提物的抗骨質疏松活性評價
5周齡ICR小鼠，體重25.7±2.1g, 48只隨機分組，即卵巢切除組+生理鹽水(稱生理鹽水組)、假手術組+生理鹽水(稱假手術組)、卵巢切除+17β-雌二醇(稱雌二醇組)、卵巢切除+冬凌草葉水提物(稱DLC組)。[0024]用2%戊巴比妥鈉按40 mg/kg劑量腹腔注射，麻醉小鼠，剪開小鼠腹腔，找到兩側的輸卵管，在兩側輸卵管的盲端找到卵巢，去除小鼠雙側卵巢，結扎輸卵管(手術過程中如果小鼠蘇醒過來，則用棉花蘸取適量無水乙醚置于小鼠的鼻子處使之麻醉)。結扎好后，滴加幾滴青霉素至小鼠腹腔，再將小鼠腹腔縫合好，于傷口外面涂上適量0.1%苯扎溴銨消毒液，以避免傷口感染。
[0025]術后5天開始口服給藥。卵巢切除組和假手術組小鼠每天口服0.2 ml生理鹽水。雌二醇組小鼠每天口服0.2 ml 17 β-雌二醇的生理鹽水溶液，劑量為30 μ g/kg。冬凌草葉水提物組小鼠每天口服0.2 ml冬凌草葉水提物的生理鹽水溶液，劑量為5 mg/kg,25 mg/kg, 125 mg/kg和625 mg/kg。給藥四周后用骨密度儀對小鼠股骨關節頭下方0.2 -
0.4 mm處進行定量斷斷層掃描，得到骨礦物質密度(表4及圖4)、稱體重、處死、分離小鼠的肺、肝、脾、子宮，得它們的凈重(表5)。取小鼠左側股骨、剔除干凈肌肉組織、用氯仿:甲醇(2:1)浸泡兩次(每次3小時)脫脂、置120 °(:烘箱中烘6小時稱干重、置800 °馬福爐煅燒8小時稱灰重、計算灰重與干重的比值(g/g)得骨礦含量(表1)。
[0026]表1 口服冬凌草葉水提物對小鼠骨密度的影響
【權利要求】
1.冬凌草葉水提物的制備工藝，該工藝包括將干冬凌草葉自來水洗凈之后按1:24的比例加水于60 - 100 0C,優選80 ° C攪拌提取10 - 60分鐘，優選30分鐘，過濾得到的清液于40 °C減壓濃縮，得到冬凌草葉水提物干粉，為淡黃色固體。
2.冬凌草葉水提物在水溶液中的納米結構。
3.冬凌草莖水提物在水溶液中的納米結構對抗骨質疏松活性的影響。
【文檔編號】A61P19/10GK103536652SQ201210236269
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2012年7月10日 優先權日:2012年7月10日
【發明者】彭師奇, 趙明, 姚興河, 彭莉 申請人:彭莉