冬凌草莖水提物的納米結構及應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及冬凌草莖用蒸餾水80oC提取制備水提物、涉及該水提物濃縮得到的固體在水溶液中的納米結構、進一步涉及納米結構對抗血栓活性的影響。
【專利說明】冬凌草莖水提物的納米結構及應用
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發明領域
[0002]本發明涉及冬凌草莖用蒸餾水80 °C提取制備水提物、涉及該水提物濃縮得到的固體在水溶液中的納米結構、進一步涉及納米結構對抗血栓活性的影響。本發明屬于生物醫藥領域。
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【背景技術】
[0004]冬凌草(DLC),是唇形科香茶菜屬植物碎米極Rabdosia rubescens (Hems1.)Hara的全草。冬凌草為多年生草本植物，廣泛分布于我國黃河長江流域，主產于河南濟源太行山、王屋山區一帶。因具有清熱解毒、清咽利喉和消腫止痛功能，民間常年將冬凌草葉當作茶葉煮水飲用。在過去的30多年里，冬凌草的化學成分及藥理作用研究主要集中在葉的脂溶性部分，代表性成分為冬凌草甲素和冬凌草乙素。通過長期研究積累，發明人披露了冬凌草莖水提物的6種酚酸和4種二萜。它們是丹參素，丹酚酸 B, 5-(2-carboxyvinyl)-2, 3 -dihydro-7-hydroxy-2-(3, 4- dihy- droxyphenyl)benzofuran-3-carboxylic acid l-carboxy-2- (3, 4-dihydroxyphenyl)- ethyl ester 及異構體，丹酌=酸 B 脫二氫物及異構體，amethystonoic acid, oridonin, rabdoternin D和ponicidin。這些酚酸和二萜在冬凌草莖水提物中的相對含量接近73%。不過，到目前為止還沒有任何與冬凌草莖水提物納米結構的報道。
[0005]通過長期研究積累，發明人認識到這些酚酸和二萜在水溶液中可以通過J1-Ji相互作用，氫鍵相互作用和疏水 性相互作用發生共組裝，形成納米結構。恰恰是這些酚酸和二萜在水溶液中共組裝形成的納米結構，使得冬凌草莖水提物顯示重要的生物活性。根據這些認識，發明人提出了本發明。
【發明內容】
[0006]本發明的第一個內容是提供冬凌草莖水提物。
[0007]本發明所要解的第二個內容是測定冬凌草莖水提物的納米結構。
[0008]本發明的第三個內容是闡明冬凌草莖水提物的納米結構與抗血栓活性的關系。
[0009]
【專利附圖】
【附圖說明】
[0010]圖1在濃度為24.00 mg/ml的超純水溶液中冬凌草莖的水提物以直徑為38.9-227.8 nm的納米球存在.圖2在濃度為6.00 mg/ml的超純水溶液中冬凌草莖的水提物以直徑為4.5-63.6 nm的納米球存在.圖3在濃度為1.0O mg/ml的超純水溶液中冬凌草莖的水提物以直徑為32.9-180.8nm的納米球存在.圖4在濃度為0.17 mg/ml的超純水溶液中冬凌草莖的水提物以直徑為45.7-234.3nm的納米球存在.【具體實施方式】
[0011]為了進一步闡述本發明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發明進行具體描述，不應當理解為對本發明的限制。
[0012]實施例1冬凌草莖水提物的制備
44 g干冬凌草莖自來水洗凈、涼干、切成大約I cm長的莖段、加500 ml雙蒸水于60 -100 °C，優選80 °C攪拌提取10 - 60分鐘，優選30分鐘。過濾得到的清液于40 °C減壓濃縮，得到3 g冬凌草莖水提物，為淡黃色固體，研成粉末，供后面的研究使用。
[0013]實施例2冬凌草莖水提物的納米結構
為了描述冬 凌草莖水提物的納米結構，本發明將冬凌草莖水提物的淡黃色固體配成濃度為40 mg/ml, 6 mg/ml, I mg/ml和0.17 mg/ml的超純水溶液，然后將溶液滴在銅網上，35 ° C揮發24 h至干溶后按標準操作(20 eV能量窗口，6000 - 400，000倍)在透射電鏡(JSM- 6360 LV, JEOL, Tokyo, Japan)下觀察納米形態。測定的透射電鏡照片顯示在圖1 - 4中。
[0014]圖1說明在濃度為40 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草莖的水提物以直徑為38.9-227.8 nm的納米球存在。
[0015]圖2說明在濃度為6 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草莖的水提物以直徑為
4.5-63.6 nm的納米球存在。
[0016]圖3說明在濃度為1.00 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草莖的水提物以直徑為32.9-180.8 nm的納米球存在。
[0017]圖4說明在濃度為0.17 mg/ml的超純水溶液中，冬凌草莖的水提物以直徑為
45.7-234.3 nm的納米球存在。
[0018]圖2-4說明當濃度從6.00 mg/ml降至1.00 mg/ml再降至0.17 mg/ml時，冬凌草莖的水提物形成的納米球的直徑逐步增大。這種現象揭示，我們可以通過控制冬凌草莖的水提物的濃度來控制冬凌草莖的水提物形成的納米球的直徑。圖1-2說明當濃度從40mg/ml降至6.00 mg/ml時,冬凌草莖的水提物形成的納米球的直徑減小。這種現象同樣揭示，我們可以通過控制冬凌草莖的水提物的濃度來控制冬凌草莖的水提物形成的納米球的直徑。
[0019]實施例3冬凌草莖水提物的抗血栓活性評價
用前將冬凌草莖水提物配成三種濃度的生理鹽水溶液，用于體內的劑量為0.8 mg/kg,
5.0 mg/kg, 30.0 mg/kg 和 120.0 mg/kg。陽性藥 Asprin 配成 10 g/L 生理鹽水溶液，即55.5 mM (毫摩爾，是濃度單位)的溶液，用于體內的劑量為30 mg/kg。空白對照為生理鹽水，抗凝劑為肝素鈉0.42 mg/ml生理鹽水溶液。將體重大約為250 g SD雄性大鼠隨機分組，η = 10，大鼠灌胃的體積為3 ml/kg,灌胃30分鐘后用烏拉坦(20 g/100 ml, 7ml/kg)麻醉，分離右頸動脈和左頸靜脈，將一根含有6 cm事先已精密稱重的絲線的聚乙烯管充滿肝素鈉生理鹽水溶液，一端插入左頸靜脈，一端插入右頸動脈。血流從右側動脈經聚乙烯管流入左側靜脈，15分鐘后取出絲線并記錄血栓濕重，結果如表1所示。表1的數據說明，當劑量從30.0 mg/kg降至5.0 mg/kg再降至0.8 mg/kg時,冬凌草莖水提物抑制大鼠血栓形成的活性逐步降低。而當劑量從30.0 mg/kg升降至120.0 mg/kg時,冬凌草莖水提物抑制大鼠血栓形成的活性也降低。冬凌草莖的水提物在劑量為120.0 mg/kg時抑制大鼠血栓形成的活性與劑量為0.8 mg/kg時抑制大鼠血栓形成的活性相當。
[0020]表1 口服冬凌草莖水提物對SD雄性大鼠血栓形成的影響
If 品 ΨΙΜ.?, it-S 重(nieai1: mg)
主理坌水 0.6 ml: R 大 E36 J0 = 2.51
3 司匹忭 30.0 nit；ts24.S7 =2,62
120.0?ngto32,55 r2.2~ ?
50.026.54 = 2.50 *
冬次萆莖水提鈞'^,
5.0rat/kg30.24 =: 2.30 "
0.S mg/kg33.51 χ 2.22 ?
η = 10; a)與生理鹽水組，5.0 mg/kg冬凌 草莖水提物組，0.8 mg/kg冬凌草莖水提物組及120.0 mg/kg冬凌草莖水提物組比p〈0.01; b)與生理鹽水組比p〈0.01,與0.8 mg/kg冬凌草莖水提物組及120.0 mg/kg冬凌草莖水提物組比p〈0.05; c)與生理鹽水組比p〈0.05，與120.0 mg/kg冬凌草莖水提物組比P > 0.05.實施例4冬凌草莖水提物的納米結構與抗血栓活性的關系
實施例2揭示，當濃度從6.00 mg/ml降至1.00 mg/ml再降至0.17 mg/ml時,冬凌草莖的水提物形成的納米球的直徑逐步增大。當濃度從40 mg/ml降至6.00 mg/ml時,冬凌草莖的水提物形成的納米球的直徑反而減小。濃度為40.00 mg/ml時冬凌草莖的水提物形成的納米球的直徑與濃度為0.17 mg/ml時形成的納米球的直徑非常接近。按照每只大鼠的血量為 20 ml 估算,給藥劑量為 120.0 mg/kg, 30.0 mg/kg, 5.0 mg/kg 和 0.8 mg/kg 時的血藥濃度分別為40.00 mg/ml, 6.00 mg/ml, 1.00 mg/ml和0.17 mg/ml。這種估算說明，冬凌草莖的水提物形成的納米球的直徑在70 nm以下時，抗血栓活性最好。冬凌草莖的水提物形成的納米球的直徑在大于200 nm時，抗血栓活性變差。因為冬凌草莖的水提物形成的納米球的直徑緊密依賴于濃度，所以我們可以通過濃度-粒徑-活性三者的關系來謀取理想的療效。這就是冬凌草莖水提物的納米結構的應用價值。
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【權利要求】
1.冬凌草莖水提物的制備工藝，該工藝包括將干冬凌草莖用自來水洗凈之后切碎，按1:24的比例加水于60 - 100 °C，優選80 °C攪拌提取10 - 60分鐘，優選30分鐘，過濾得到的清液于40 °C減壓濃縮，得到冬凌草莖水提物干粉，為淡黃色固體。
2.冬凌草莖水提物在水溶液中的納米結構。
3.冬凌草莖水 提物在水溶液中的納米結構對抗血栓活性的影響。
【文檔編號】A61P7/02GK103536651SQ201210236258
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2012年7月10日 優先權日:2012年7月10日
【發明者】彭師奇, 趙明, 姚興河, 彭莉 申請人:彭莉