專利名稱：一種楊梅葉提取物的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種楊梅葉提取物的制備方法，屬于植物提取技術領域。
背景技術：
楊梅(Myrica rubra)是楊梅科常綠喬木植物,主產于我國浙江、江蘇、福建、江西、湖南及廣東，資源十分豐富。楊梅為藥食兩用的芳香植物，在《本草綱目》中記載，楊梅的果實、核、根、樹皮均可入藥，有止血、療燙傷、治癰腫、止腹瀉等功效，民間有用楊梅葉治燙傷、臃腫、腹痛等疾病的習俗(中藥大辭典1979)。已有的研究結果表明，楊梅葉中存在較高含量的總黃酮，總黃酮主要為楊梅素、槲皮素等，具有收斂劑，興奮劑和催吐劑的作用，可治療腹瀉、黃膽肝炎、淋巴結核、慢性咽喉炎等疾病。從楊梅葉中提取出的黃酮醇甙、黃酮醇等黃酮類化合物均具有保肝降酶、調血脂、抗血小板活化因子、抗氧化、抗病毒、抑制惡性腫瘤細胞轉移和生長、以及增強機體免疫功能等多種藥理活性[夏其樂等，“食品科學”2004， 25(1) :55 57]。楊梅葉中分離得到的總黃酮具有降血糖、降血壓的作用[李國成等，“中草藥”2011，42 (5) :863 865]。鑒于楊梅葉具有上述等功效，近年來國內外對楊梅葉提取方法進行了大量的研究，取得了較大進展，具有代表性的是有機溶劑萃取法，將干楊梅葉粉碎用こ醇提取，提取液過濾，濾液過樹脂吸附柱，用低級醇洗脫，洗脫液濃縮，干燥得到楊梅葉提取物。這ー方法的提取溶劑使用不充分，造成提取溶劑使用量大，料液濃縮量大，導致溶劑殘留多，所得產品收率低，生產成本高，エ藝步驟較多也較為復雜，且安全性較差[胡靜麗等，“楊梅葉黃酮類化合物最佳提取エ藝研究”《食品科學》2003年第01期]，以干楊梅葉為原料，利用超聲波振動增加溶劑進入楊梅葉細胞的滲透性，獲得自身的巨大加速度和動能，產生空化氣泡，氣泡劇烈運動對細胞形成強大的剪切力，有效地破碎楊梅葉的細胞壁，加速胞內物質向介質釋放、擴散和溶解，將楊梅葉中的總黃酮提取出來。而申請人通過實驗發現楊梅葉在干燥過程中會喪失大量的生物活性物質，其有效成分的破壞程度也很大，對后續的總黃酮精制影響較大。另外，楊梅葉干燥后，細胞壁木質化，細胞液系統環境發生改變，水難以進入細胞內部，只能用有こ醇等機溶劑提取，其雜質多、提取率低，相應的生產成本也較高，不利于エ業化生產。又因楊梅葉質量受天氣、產地、采集時間、存期等因素影響，導致楊梅葉的有效成分含量不穩定，較難得到高質量的產品。因此，申請人從新鮮狀態的楊梅葉中制備提取物的想法應運而生，而國內外尚沒有文獻報道。
發明內容
本發明的目的在于提供一種楊梅葉提取物的制備方法，可最大限度保存楊梅葉中的天然生物活性物質，有利于提高產品得率以及后續的總黃酮高純度制備，且エ藝簡單、生產成本低。本發明中提取物的制備是通過下述步驟實現的(I)取新鮮狀態的楊梅葉洗浄，粉碎，得粉碎葉；
(2)將粉碎葉放入榨汁機中，加入粉碎葉3 8倍重量的水打漿，壓榨，得榨汁液及原料渣；(3)取榨汁液過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，先用水，后用含水こ醇洗脫，收集洗脫液經濃縮、干燥后得榨汁液粗提物；(4)取原料渣，加入原料渣2 6倍重量的水提取，將提取液過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，先用水，后用含水こ醇洗脫，收集洗脫液經濃縮、干燥后得原料渣粗提物；(5)將榨汁液粗提物和原料渣粗提物合并用90%以上こ醇提取精制得楊梅葉提取物。 所述步驟(I)中，新鮮狀態的楊梅葉是樹齡為5年以上，于3月至4月和6月至11月從樹上采摘下之后不超過48小時的鮮楊梅葉。所述步驟(3)和(4)中，含水こ醇為35% 75%こ醇，最佳70%こ醇。所述步驟(4)中，提取方法為在35°C 65°C下浸提2 4次，每次O. 5 2小時。本發明中，以新鮮狀態的楊梅葉為原料，進行壓榨處理，使楊梅葉的有效成分得以最大程度的保留。經研究顯示，新鮮狀態的楊梅葉體內生物活性成分為均態存在，細胞液系統穩定，而其細胞壁比較脆弱，此時進行勻漿壓榨，可使細胞壁破壞，活性成分被快速提取出來，經過壓榨所得的榨汁液直接提取分離，就可得到具有大部分生物活性成分的楊梅葉提取物。而壓榨后的原料渣中還有一小部分生物活性成分，申請人對原料渣部分用熱水再次進入細胞內部進行提取，在綜合利用鮮楊梅葉原料的同時又進一步提高了提取率和收率。結果證實，本發明所得到的楊梅葉總黃酮提取率超過4%，在楊梅葉提取物中，總黃酮達58%以上，該總黃酮的含量測定參見文獻《山西中醫》，2008，24 (2) 55 57。申請人:在楊梅葉的原料考察中，發現鮮楊梅葉中總黃酮的含量比干楊梅葉(烘干或曬干)高出許多。對干、鮮楊梅葉總黃酮的含量分析方法參見《分析化學》，1998年05期，“反相高效液相色譜分析楊梅葉中抗氧化成分黃酮類化合物”，具體數據見下表I :表I為干楊梅葉(烘干或曬干)、新鮮楊梅葉的總黃酮含量
—總麵
干楊梅葉(烘干)2. 13 2. 27 浙江— 干楊梅葉(曬干)2· 06 2. 19
慈溪--
—__鮮楊梅葉_ _2. 91 3. 01 _由上表I可以看出烘干或曬干的楊梅葉中總黃酮的含量與鮮楊梅葉相比，兩者差距十分明顯，因為楊梅葉在干燥過程中造成楊梅葉的生物活性成分的喪失，又因從樹上采、摘下之后超過48小時的鮮楊梅葉未經處理，其含有的總黃酮將會大量分解，導致提取物中含量顯著降低。為此，本發明中采用楊梅樹上采摘下的鮮楊梅葉立刻用于楊梅葉提取物的制備，以盡可能地減少總黃酮的降解，無疑提高了所得產品的收率和提取率，有利于后續エ序的提純。經檢索，在以前的エ業化生產中從未使用過新鮮狀態的楊梅葉作為原料，這是本發明的重大創新。楊梅葉常年緑色，全年均可采收。一般地，楊梅樹5月為花蕾期，12 2月為休眠期，以此階段采摘的鮮楊梅葉受生長周期的影響，總黃酮的含量最低。因此，依據本發明，為了不便最終提取物中總黃酮含量受到過大影響，所使用的鮮楊梅葉不在5月、12月、I月和2月這四個月份中進行采摘。 另外，在一年的其它時間中，雖然因生長周期影響，鮮楊梅葉中總黃酮含量也會有波動，但是對得到的楊梅葉提取物中的總黃酮的最低含量無太大影響。申請人:之所以沒有選用樹齡為5年以下的鮮楊梅葉，一方面因為楊梅樹定植后3 4年處于始果期，5年后進入盛果期，始果期的楊梅葉生物總量不多，會影響提取率和收率；另一方面，在始果期大量采摘楊梅葉不利于楊梅樹的生長。因而在本發明中，確立最佳采摘樹齡為5年以上。本發明通過對新鮮狀態的楊梅葉壓榨直接提取分離，既解決了在エ業化生產中難以大量得到高純度低成本提取楊梅葉總黃酮產品的問題，又實現了最大限度的從鮮楊梅葉中提取出有效物質總黃酮，有利于后續的高純度提取物制備。且エ藝流程簡單，無需大量有機溶劑進行提取，緑色、環保、生產成本低。
具體實施例方式下面的實施例，用于進ー步說明和描述本發明，但并不意味著本發明僅限于此。實施例一選取樹齡15年，于8月份從樹上采摘下之后不超過48小時、無黃萎、無腐壞的鮮楊梅葉100kg，用清水洗凈浙干后，用粉碎機粉碎至30 60目，使鮮楊梅葉細胞破壁，得破碎葉；將粉碎葉放入榨汁機中，再加入300kg的水后，榨汁機按每分鐘60轉的轉速攪拌打漿25分鐘，壓榨分離，得榨汁液及原料渣。榨汁液用濾紙抽濾后過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h，先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物14. 6kg，收率(原料折干計)4. 87%，總黃酮含量 61. 4%。實施例ニ 選取樹齡8年，于9月份從樹上采摘下之后不超過48小時、無黃萎、無腐壞的鮮楊梅葉100kg，用清水洗凈浙干后，用粉碎機粉碎至35 70目，使鮮楊梅葉細胞破壁，得破碎葉；將粉碎葉放入榨汁機中，再加入320kg的水后，榨汁機按每分鐘45轉的轉速攪拌打漿35分鐘，壓榨分離，得榨汁液及原料渣。榨汁液用濾紙抽濾后過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h，先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物10. 7kg，總黃酮含量59. 6%。取原料渣，加入原料渣3倍重量50°C的熱水，提取2次，每次I. 5小吋，過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h,先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物4. 6kg，總黃酮含量
52.7%。榨汁液和原料渣合并提取后的楊梅葉提取物的總收率(原料折干計)為5. I %。實施例三選取樹齡20年，于3月份從樹上采摘下之后不超過48小時、無黃萎、無腐壞的鮮楊梅葉100kg，用清水洗凈浙干后，用粉碎機粉碎至40 75目，使鮮楊梅葉細胞破壁，得破碎葉；將粉碎葉放入榨汁機中，再加入380kg的水后，榨汁機按每分鐘50轉的轉速攪拌打漿30分鐘，壓榨分離，得榨汁液及原料渣。榨汁液用濾紙抽濾后過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h，先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物11. 9kg，總黃酮含量60. 3 %。取原料渣，加入原料渣3倍重量60°C的熱水，提取3次，每次I小時，過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h ,先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物3. 8kg，總黃酮含量51. 7%。榨汁液和原料渣合并提取后的楊梅葉提取物的總收率(原料折干計)為5. 23%。實施例四選取樹齡25年，于4月份從樹上采摘下之后不超過48小時、無黃萎、無腐壞的鮮楊梅葉100kg，用清水洗凈浙干后，用粉碎機粉碎至30 65目，使鮮楊梅葉細胞破壁，得破碎葉；將粉碎葉放入榨汁機中，再加入430kg的水后，榨汁機按每分鐘55轉的轉速攪拌打漿35分鐘，壓榨分離，得榨汁液及原料渣。榨汁液用濾紙抽濾后過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h，先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物13. 3kg，總黃酮含量61. 3%。取原料渣，加入原料渣4倍重量60°C的熱水，提取4次，每次O. 5小吋，過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h,先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物3. 9kg，總黃酮含量
53.4%。榨汁液和原料渣合并提取后的楊梅葉提取物的總收率(原料折干計)為5. 73%。實施例五選取樹齡25年，于10月份從樹上采摘下之后不超過48小時、無黃萎、無腐壞的鮮楊梅葉100kg，用清水洗凈浙干后，用粉碎機粉碎至25 45目，使鮮楊梅葉細胞破壁，得破碎葉；將粉碎葉放入榨汁機中，再加入500kg的水后，榨汁機按每分鐘35轉的轉速攪拌打漿60分鐘，壓榨分離，得榨汁液及原料渣。榨汁液用濾紙抽濾后過AB-8大孔樹脂吸附，流速
O.5BV/h，先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物13. 9kg，總黃酮含量61.7%。取原料渣，加入原料渣5倍重量60°C的熱水，提取I次，提取時間為2小吋，過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，流速O. 5BV/h,先用水洗脫，后用醇度70%こ醇水溶液解吸，解吸液回收こ醇后真空濃縮，濃縮至10° Β ，噴霧干燥，獲得楊梅葉提取物3. 7kg，總黃酮含量 55. 4%o榨汁液和原料渣合并提取后的楊梅葉提取物的總收率(原料折干計)為5. 87%。
權利要求
1.一種楊梅葉提取物的制備方法，其特征在于依次包括下述步驟 (1)取新鮮狀態的楊梅葉洗凈，粉碎，得粉碎葉； (2)將粉碎葉放入榨汁機中，加入粉碎葉3 8倍重量的水打漿，壓榨，得榨汁液及原料渣； (3)取榨汁液過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，先用水，后用含水乙醇洗脫，收集洗脫液經濃縮、干燥后得榨汁液粗提物； (4)取原料渣，加入原料渣2 6倍重量的水提取，將提取液過濾，濾液過AB-8大孔樹脂吸附，先用水，后用含水乙醇洗脫，收集洗脫液經濃縮、干燥后得原料渣粗提物； (5)將榨汁液粗提物和原料渣粗提物合并用90%以上乙醇提取精制得楊梅葉提取物。
2.如權利要求I所述的一種楊梅葉提取物的制備方法，其特征在于， 所述步驟(I)中，新鮮狀態的楊梅葉是樹齡為5年以上，于3月至4月和6月至11月從樹上采摘下之后不超過48小時的鮮楊梅葉。
3.如權利要求I所述的一種楊梅葉提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)和(4)中，含水乙醇為35% 75%乙醇。
4.如權利要求I所述的一種楊梅葉提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中，提取方法為在35°C 65°C下浸提2 4次，每次0. 5 2小時。
全文摘要
本發明公開了一種楊梅葉提取物的制備方法，原料采用新鮮狀態的楊梅葉，經過洗凈、粉碎、加水打漿，壓榨后得榨汁液和原料渣，將榨汁液提取分離，得到榨汁液粗提物；然后繼而對原料渣提取分離，得到原料渣粗提物，再將榨汁液粗提物和原料渣粗提物合并用90％以上乙醇提取精制得楊梅葉提取物。本發明既解決了在工業化生產中難以大量得到高純度低成本提取楊梅葉總黃酮產品的問題，又實現了最大限度的從新鮮楊梅葉中提取出有效物質總黃酮，有利于后續的高純度提取物制備。且工藝流程簡單，無需大量有機溶劑進行提取，綠色、環保、生產成本低。
文檔編號A61P9/12GK102727540SQ201210234858
公開日2012年10月17日 申請日期2012年6月25日 優先權日2012年6月25日
發明者陸建益 申請人:陸建益