專利名稱：一種具有pH敏感性的包載鹽酸阿霉素的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米緩釋微粒的制備方法
技術領域：
本發明屬于藥劑學釋領域的一種具有PH敏感性的納米緩釋微粒的制備技術。
背景技術：
鹽酸阿霉素是一種廣譜抗癌藥物，其作用機理是通過抑制癌細胞遺傳物質核酸的合成，對多種腫瘤細胞均有殺滅作用。鹽酸阿霉素具有較強的心臟毒性和腎毒性，限制了其在癌癥治療領域的應用。鹽酸阿霉素是細胞色素P450 (CYP)以及P糖蛋白(P-gp)的雙重底物，而CYP和P-gp廣泛存在于小腸上皮細胞表面，使得口服給藥的鹽酸阿霉素無法通過腸道吸收進入血液循環，所以臨床上鹽酸阿霉素的給藥方式通常為靜脈注射或滴注，耗時長，患者依從度差。為了降低鹽酸阿霉素的細胞毒性并通過改變其施藥方式來增強使用的方便性，大量的研究集中于尋找一種具有良好生物相容性且具有透過腸粘膜的鹽酸阿霉素載體。現有的研究發明中，曾有報道采用脂質體作為鹽酸阿霉素載體，提高鹽酸阿霉素的口 服生物利用度。結果表明，通過脂質體包載鹽酸阿霉素可以增強其透過腸粘膜的能力，且具有良好的藥物緩釋作用，能夠顯著地降低鹽酸阿霉素的心臟毒性和腎毒性。但是，所制備的鹽酸阿霉素脂質體穩定性較差，口服過程中脂質體會被胃酸破壞導致鹽酸阿霉素的有效給藥量降低。也有報道采用聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)共聚物作為鹽酸阿霉素的載體，所制備的載藥納米粒均一性好，能夠在胃酸環境下穩定存在，能夠顯著提高鹽酸阿霉素的口服生物利用度。但是，PLGA作為一種人工合成的高分子聚合物與天然生物材料相比，其生物降解時間較長，藥物釋放周期過長，限制了其作為鹽酸阿霉素口服載體的臨床應用。殼聚糖作為一種天然陽離子生物多糖，具有資源量大、生物可降解、穩定性好、生物親和性好、安全無毒性等優點，是開發生物醫用材料的良好資源。殼聚糖具有打開細胞緊密連接的作用可以通過細胞外途徑增強藥物的口服生物利用度。羧甲基殼聚糖作為殼聚糖的水溶性衍生物，在具有殼聚糖良好生物相容性的同時還能夠通過其分子骨架上的大量羧甲基基團，螯合細胞間隙處的鈣離子，從而加速細胞緊密連接的打開。采用殼聚糖和羧甲基殼聚糖作為鹽酸阿霉素的口服載體，具有胃酸條件下穩定、中性條件和弱堿性條件下解體釋藥的特點，能夠有效降低鹽酸阿霉素的細胞毒性并提高其口服生物利用度，對鹽酸阿霉素的使用安全性和方便性上具有顯著地提升。
發明內容
本發明的目的是提供一種具有pH敏感性的包載鹽酸阿霉素的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米緩釋微粒制備方法；是在發明人已有的技術發明專利基礎上的延伸(申請號201110325859. 6)。提供制備以殼聚糖羧甲基殼聚糖納米微粒作為鹽酸阿霉素載體的制備方法，以拓展已有技術的應用范圍。該發明采用具有pH響應性的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米微粒作為鹽酸阿霉素的載體，其制備可以是按照申請人前一個技術發明專利(申請號201110325859.6)的技術方法.主要技術內容如下步驟一將殼聚糖溶解于稀醋酸溶液中，再將鹽酸阿霉素溶液加入該溶液中，攪拌30分鐘，控制轉速、殼聚糖濃度。步驟二 將三聚磷酸鈉溶液滴加入殼聚糖/鹽酸阿霉素混合液中進行離子交聯反應，控制殼聚糖濃度、三聚磷酸鈉濃度以及三聚磷酸鈉的滴加速度；步驟三向步驟二中發生離子交聯的殼聚糖溶液中，加入羧甲基殼聚糖溶液，控制轉速、羧甲基殼聚糖的濃度和滴加速度。調節溶液的酸堿度至PH 4-6，最后將其分離純化，干燥得到具有PH敏感性的包載鹽酸阿霉素的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米緩釋微粒。本發明具有操作方便、制備技術工藝簡便和制造成本低廉等優點。所形成的包載鹽酸阿霉素的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米緩釋微粒呈規則球形。本發明的重要意義在于形成的核殼結構的載藥納米微粒對鹽酸阿霉素的包載量高；具有藥物緩釋作用且其緩釋能力具 有PH敏感性；有利于響應體內微環境變化。在醫藥、醫用材料等許多方面具有良好的研究和開發應用前景，因此，該發明技術具有很好的經濟開發潛力。以下結合附表、附圖和實施例對本發明做出進一步說明。
圖I為包載鹽酸阿霉素的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米微粒的結構示意圖。圖2為包載鹽酸阿霉素的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米微粒體外模擬胃腸道釋藥曲線。
具體實施例方式本發明采用殼聚糖、羧甲基殼聚糖和三聚磷酸鈉為原料，通過離子交聯、聚合物凝聚法目標產物。具體實施方案為步驟一將殼聚糖溶解于稀酸溶液中，其中稀酸溶劑濃度為1% (v/v)，殼聚糖濃度為0.3% (w/v);向殼聚糖稀酸溶液中加入濃度為4mg/mL的鹽酸阿霉素溶液。步驟二 將三聚磷酸鈉溶液滴加入殼聚糖溶液中進行離子交聯反應，其中三聚磷酸鈉與殼聚糖游離氨基的摩爾為0. 1-0.4 I ;滴加在20分鐘內完成，室溫下攪拌，攪拌速度是100轉/分鐘，反應時間是30分鐘。步驟三將羧甲基殼聚糖溶解于去離子水中，溶液濃度分別控制在0. 3% -0. 5%(w/v);將羧甲基殼聚糖溶液滴入第一步所得到的三聚磷酸鈉-殼聚糖混合溶液中，其添加量為羧甲基殼聚糖與殼聚糖的質量比為1-1.6 1，滴加在30分鐘內完成，調節酸堿度至PH4-6，室溫下攪拌，攪拌速度為200轉/分鐘，反應時間為5小時；12000轉/分鐘離心I小時分離產物，干燥得到固體產品，即具有PH響應性的載有鹽酸阿霉素的殼聚糖羧甲基殼聚糖的納米微粒。本發明中的殼聚糖的分子量范圍7. 5_1200kDa，脫乙酰度大于90%;所指的稀酸溶劑可以是濃度為1% (v/v)的醋酸或者濃度為1% (v/v)的鹽酸；所指的羧甲基殼聚糖可以是0-羧甲基殼聚糖，也可以是N，0-羧甲基殼聚糖，羧甲基取代度范圍是大于80%。所得產物的結構示意圖如圖I所示。將產物進行粒徑以及Zeta電位分析，結果表明所制備的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米微粒的粒徑分布較窄，平均粒徑在270-450nm(表I) ；Zeta電位為-27. 6—43. 4mv (表 I)。實施例I取分子量為1200kDa的殼聚糖30mg，溶于IOmL 1% (v/v)鹽酸溶液中，在攪拌條件下滴入IOmL 4mg/mL鹽酸阿霉素溶液，3ml 0. 2% (w/v)三聚磷酸鈉溶液，20分鐘滴完，室溫下100轉/分 鐘攪拌40分鐘，在攪拌條件下滴加IOmL含有0. 5% (w/v)的N，0_羧甲基殼聚糖溶液，30分鐘滴完，用氫氧化鈉調節酸堿度至pH 4，室溫下攪拌，200轉/分攪拌5小時，12000轉/分離心I小時，去除上清，冷凍干燥即得具有pH敏感性的包載鹽酸阿霉素的納米載體。實施例權利要求
1.一種具有PH敏感性的包載鹽酸阿霉素的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米緩釋微粒的制備方法，其特征是將鹽酸阿霉素溶液(4mg/mL)與殼聚糖溶液(0.3%，w/v)混合，在攪拌條件下將三聚磷酸鈉加入殼聚糖溶液中，然后向交聯殼聚糖溶液中滴入羧甲基殼聚糖水溶液， 調節溶液酸堿度，室溫下攪拌，得到穩定的包載鹽酸阿霉素的納米分散體系，分離并干燥， 即得到本發明的產品。
2.根據權利要求I所述的一種具有PH敏感性的鹽酸阿霉素納米緩釋微粒的制備方法， 其特征是所述的殼聚糖的分子量范圍7. 5-1200kDa ;脫乙酰度大于90%。
3.根據權利要求I所述的具有pH敏感性的鹽酸阿霉素納米緩釋微粒的制備方法，其特征是所述的羧甲基殼聚糖可以選用O-羧甲基殼聚糖或N，O-羧甲基殼聚糖，其添加量為羧甲基殼聚糖與殼聚糖的質量比為1-1.6 I。
4.根據權利要求I所述的具有PH敏感性的鹽酸阿霉素納米緩釋微粒的制備方法，其特征是所述的交聯劑為三聚磷酸鈉，其添加量為三聚磷酸鈉與殼聚糖游離氨基的摩爾比為O.1-0. 4:1。
5.根據權利要求I所述的具有PH敏感性的包載鹽酸阿霉素的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米緩釋微粒的制備方法，其特征是所述的調節酸堿度至PH 4-6。
全文摘要
本發明公開了一種藥劑學領域的具有pH敏感性的納米緩釋微粒的制備技術，即一種具有pH敏感性的包載鹽酸阿霉素的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米緩釋微粒的制備方法，采用殼聚糖和羧甲基殼聚糖為原料，通過離子交聯、聚合物凝聚兩步法合成目標產物，首先將殼聚糖溶液與鹽酸阿霉素溶液混合，然后向混合溶液中滴加三聚磷酸鈉溶液，得到離子交聯的混合液，最后向離子交聯后的混合液中滴入羧甲基殼聚糖進行聚合物凝聚得到具有pH敏感性的包載鹽酸阿霉素的殼聚糖羧甲基殼聚糖納米緩釋微粒，產品的平均粒徑在270-450nm；Zeta電位為-27.6--43.4mv。可用于鹽酸阿霉素的口服給藥，具有良好的研究和開發利用前景。
文檔編號A61P35/00GK102688195SQ20121019267
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月6日 優先權日2012年6月6日
發明者馮超, 孔明, 程曉杰, 陳西廣 申請人:中國海洋大學