專利名稱：5-羥色胺2受體拮抗劑或轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑治療脂肪肝或高脂血癥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及5-羥色胺2受體拮抗劑或轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑治療脂肪肝或高脂血癥的用途。
背景技術(shù)：
非酒精性脂肪肝(Nonalcoholicfatty liver disease,NAFLD),即通常所說的脂肪肝，是一種病變主體發(fā)生在肝小葉，以肝細(xì)胞脂肪變性和脂肪堆積為病理特征但無過量飲酒史的臨床綜合征，主要與肥胖、高脂血癥有關(guān)。根據(jù)其疾病發(fā)展的不同階段主要分為單純脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纖維化和脂肪性肝硬化四個(gè)病理過程。肥胖者多數(shù)具有NAFLD，肥胖及其所引起的疾病已成為現(xiàn)代人健康及死亡的第一殺手。飲食無節(jié)制，經(jīng)常攝入高脂肪、高蛋白食物而致熱量過剩導(dǎo)致肥胖，進(jìn)而導(dǎo)致脂肪肝的形成。NAFLD時(shí)肝細(xì)胞 中總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、游離脂肪酸(FFA)含量明顯增加，低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL)的合成與排泄出現(xiàn)不均衡，可能導(dǎo)致血液中TG、TC、LDL、VLDL, FFA濃度升高、HDL濃度下降，即出現(xiàn)血脂紊亂，其中TC、TG、LDL濃度升高及HDL濃度下降是血脂紊亂的主要表現(xiàn)。這將使得發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓等心腦血管疾病、2型糖尿病等疾病的概率大增。NAFLD治療藥物大致分類為增加胰島素敏感性及減輕IR藥物，代表藥物有噻唑烷二酮類藥物和雙胍類藥物等；抗氧化劑，代表藥物有維生素E、維生素C和水飛薊素等；降低血脂的藥物，代表藥物有普伐他汀、辛伐他汀、普羅布考及氯貝特等。5-HT2受體又可分為5_HT2A，2B，2C受體三個(gè)亞型，外周和中樞均有分布的是5_HT2A，2B受體，5-HT2C受體僅存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)。肝臟上分布有5-HT2A，2B受體。已知5-HT2A受體具有收縮血管、促血小板聚集、加快心率和介導(dǎo)神經(jīng)內(nèi)分泌的功能，血漿5-HT濃度升高與高血壓、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化及心血管事件有關(guān)，5-HT2A受體的活化還能刺激某些激素分泌(如促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)酮、腎素等);5-HT2B受體的激活能夠使基底平滑肌收縮，5-HT2B受體的活化也參與某些心血管疾病的發(fā)展變化。5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體(serotonin transporter,SERT)在5-HT的降解及再攝取中起著重要作用，在數(shù)量和作用時(shí)間上對(duì)5-HT能神經(jīng)傳遞進(jìn)行精細(xì)的調(diào)控。SERT屬于Na+/Cl_依賴性神經(jīng)地址轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因家族，包括單胺類(NE、DA、5_HT)、抑制性氨基酸(gamma aminobutyric acid, GABA)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，通過吸收胞外釋放的神經(jīng)遞質(zhì)從而阻止神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)細(xì)胞外受體的作用。SERT主要分布于5-HT神經(jīng)細(xì)胞處，除此之外，也分布于各類非神經(jīng)細(xì)胞處，包括肺血管內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞等。SERT在5-HT能系統(tǒng)中的功能是運(yùn)輸5-HT到大腦、血液和外周器官的同源和異源受體，若其發(fā)生改變，則5-HT和5-HT受體的合成、清除以及功能都將受到很大的影響，肝臟是外周5-HT清除的主要器官。目前，5-HT2受體與SERT在NAFLD中發(fā)揮著什么樣的作用尚不清
λ·Μ
/E. ο5-HT2受體拮抗劑有很多，如麥角二乙胺(lysergide，LSD)、溴麥角二乙胺(bromolysergide, BOL)、美舍吉特(methysergide)、賽庚唳(cyproheptadine,也是一種抗組胺藥)、苯噻唆(pizotifen)、節(jié)甲色胺(benanserin)、凱他舍林(ketanserin)和多種吩噻嗪類藥物等[劉善慧，劉炳學(xué)，房澤岱主編；徐叔云，馬傳庚主審.英漢藥理學(xué)辭典.北京中國醫(yī)藥科技出版社.1993.第519頁.]。而選擇性阻斷5-HT2受體的拮抗劑有酮舍林(ketanserine)、辛那舍林(cinaserine)、米胺舍林(mianserine)、利坦舍林(ritanserine)和米氮平(mirtazapine)等。米氮平屬于NA能和特異性5-HT能抗抑郁藥，可阻斷5-HT2和5-HT3受體，能選擇性興奮5-HT1受體。目前，米氮平臨床主要用于抑郁癥、焦慮軀體化癥狀、伴有睡眠障礙的抑郁癥、伴有 自殺意念的抑郁、老年期抑郁癥、共病軀體疾病患者、廣泛性焦慮和驚恐障礙、創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙和精神分裂癥等[左津淮.米氮平的臨床作用[J]·天津藥學(xué)，2004，16 (6) :53-6.]。選擇性δ-ΗΤ 再攝取抑制劑(selective serotonin reuptake inhibitor, SSRI)主要是對(duì)5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生抑制作用，能有效地通過與5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體結(jié)合而抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)突觸前膜從突觸間隙攝取5-HT，增加間隙中可供實(shí)際利用的5-HT，從而治療抑郁。上市的主要有氟西汀(Fluoxetine)、帕羅西汀(Paroxetine)、西酞普蘭(Citalopram)、舍曲林(Sertraline)、氟伏沙明(Fluvoxamine)、草酸S-西酞普蘭(Escitalopram oxalate)等，廣泛應(yīng)用于臨床抑郁癥的治療[張石革.選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑應(yīng)用與評(píng)價(jià).中國醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析.2007,7(3)，172-1751.]。另外，米氮平也具有5-HT再攝取抑制劑活性。目前尚無有關(guān)5-HT2受體拮抗劑和選擇性5-HT再攝取抑制劑用于治療非酒精性脂肪肝合并高脂血癥等方面的研究報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
我們的研究首次發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞5-HT2A，2B受體、SERT在NAFLD形成中起明顯作用，用5-HT2A；2B受體阻斷劑或SERT抑制可有效治療因高脂飼料導(dǎo)致的大鼠NAFLD及血脂紊亂。我們選取了米氮平、酮舍林作為非選擇性及選擇性5-HT2受體拮抗劑代表藥物，米氮平、氟西汀作為非選擇性及選擇性5-HT再攝取抑制劑代表藥物，發(fā)現(xiàn)米氮平、酮舍林和氟西汀對(duì)高脂飼料引起的大鼠NAFLD有明顯治療作用、也能明顯減輕血脂紊亂狀態(tài)，同時(shí)對(duì)肝細(xì)胞5-HT2A，2B受體、SERT基因表達(dá)有明顯影響；用脂肪酸建立原代培養(yǎng)肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型，米氮平、酮舍林和氟西汀對(duì)肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型有明顯的降低細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量的作用。下面是本發(fā)明的部分試驗(yàn)過程及結(jié)果I. 5-HT2受體拮抗劑(如酮舍林)、轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑(如氟西汀)及兼有兩種作用的藥物(如米氮平)治療高脂飼料引起的脂肪肝及高血脂研究結(jié)果I. I實(shí)驗(yàn)方法40只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為5組對(duì)照組(control group);高脂飼料組(high fat-diet，HFD，高脂飼料配方2%膽固醇+25%豬油+5%蔗糖+68%基礎(chǔ)飼料)；高脂飼料+米氮平給藥組(the high fat-diet+mirtazapine, MIR);高脂飼料+酮舍林給藥組(the high fat-diet+ketanserin, KET);高脂飼料 + 氟西汀給藥組(the highfat-diet+fluoxetine, FLX),每組動(dòng)物各8只。動(dòng)物單獨(dú)籠養(yǎng)于普通鼠籠或刺激籠中(鼠籠大小與普通鼠籠相同)。各組間性別、體重?zé)o差別。保持室溫、光照控制保證12h明、暗條件，普通水喂養(yǎng)。高脂飼料喂養(yǎng)組首先用高脂飼料喂養(yǎng)4周，然后各給藥組在高脂飼料喂養(yǎng)的同時(shí)再經(jīng)口給藥各種藥物。連續(xù)給藥四周后取血、處死動(dòng)物、取相應(yīng)臟器并進(jìn)行指標(biāo)測(cè)量。I. 2給藥劑量米氮平給藥劑量10. Omg/kg.天,酮舍林給藥劑量6mg/kg.天,氟西汀給藥劑量
6.Omg/kg.天。給藥體積1. 0ml/100g，所有藥物均用O. 5% CMC-Na溶液配成所需濃度的混懸液，對(duì)照組及高脂飼料喂養(yǎng)組給以相同體積的O. 5% CMC-Na溶液。I. 3觀察指標(biāo) 大鼠體重和進(jìn)食量；肝指數(shù)(HI)及內(nèi)臟肥胖指數(shù)(VOI)測(cè)定(計(jì)算公式分別為HI (g/g) =肝臟重量(g)/體重(g)*100% ;V0I(g/g)=內(nèi)臟脂肪重量(g)/體重(g)*100% )；肝臟指標(biāo)TC含量、TG含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力、丙二醒(malonaldehyde, MDA)含量；肝組織相關(guān)因子基因表達(dá)逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)檢測(cè)肝臟X受體a (LXRa )、過氧化物酶體增生物激活受體a (PPARa)及y (PPAR Y )、5-HT2A受體(5_HT2AR)、5_HT2B受體(5-HT2BR)和5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體(SERT)mRNA表達(dá)。其中，LXRa、PPARa、PPARy為核受體，與肝脂質(zhì)沉積密切相關(guān)。引物L(fēng)XR a 上游引物 5’GTACAACCCTGGGAGTGAGA 3’下游引物 5’ TAGCATCCGTGGGAACAT 3’PPARa 上游引物 5’ GTTCGCAGCTGTTTTGTGGG 3’下游引物 5’ CTTCAGTCTTGGCTCGCCTC 3’PPAR Y 上游引物 5’GACCACTCCCATTCCTTT 3’下游引物 5’GCTCTACTTTGATCGCACT 3’5-HT2AR 上游引物 5，GGATTTACCTGGATGTGC 3'下游引物 5’TGGATGGACCGTTGGAAG 3’5-HT2BR 上游引物 5’CAGCAGCAGAGGAAATGA 3’下游引物 5’ ATCCAGGGAAATGGCACA 3’SERT上游引物 5’CCCAACTGGCAGAAACTC 3’下游引物 5’ AAGATGATGGCAAAGAACG 3’內(nèi)參GAPDH 上游引物 5’TATCGGACGCCTGGTTAC 3’下游引物 5’TGCTGACAATCTTGAGGGA 3’ ；肝組織病理切片觀察；血清TC、TG、LDL、HDL、游離脂肪酸(FFA)、MDA濃度及SOD活力。I. 4研究結(jié)果所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測(cè)都用組間Student-t檢測(cè)，p〈0. 05表示有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，p〈0. 01表示有非常明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。下列所有表中數(shù)據(jù)用均值土標(biāo)準(zhǔn)差(歹± SD)表示，Ν=8 ;*ρ〈0· 05，#ρ〈0· 01與對(duì)照組比較；$Ρ<0. 05，$$ρ〈0· 01與模型組比較。I. 4. I體重和進(jìn)食量結(jié)果
由圖I和圖2可見MIR、KET、FLX治療，對(duì)HFD喂養(yǎng)大鼠的體重、進(jìn)食量無明顯影響(p>0. 05，與HFD模型組比較)。I. 4. 2肝指數(shù)HI和內(nèi)臟肥胖指數(shù)VOI由圖3和圖4可見，MIR、KET、FLX治療，對(duì)HFD喂養(yǎng)大鼠的肝脂數(shù)、內(nèi)臟肥胖指數(shù)沒有明顯影響(P>0. 05,與HFD模型組比較)。I. 4. 3肝組織脂質(zhì)及氧化應(yīng)激指標(biāo)表I藥物對(duì)“高脂飼料致大鼠NAFLD”肝脂質(zhì)及氧化應(yīng)激的影響試驗(yàn)結(jié)果(SD，N=8)
權(quán)利要求
1.5-肌2受體拮抗劑或選擇性5-HT再攝取抑制劑用于制備治療非酒精性脂肪肝或非酒精性脂肪肝合并有高脂血癥的藥物的用途。
2.權(quán)利要求I的用途，其中5-HT2受體拮抗劑是米氮平或酮舍林。
3.權(quán)利要求I的用途，其中5-HT再攝取抑制劑是氟西汀或米氮平。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及5-羥色胺2受體拮抗劑或轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑治療脂肪肝或高脂血癥的用途。藥理試驗(yàn)證明，5-羥色胺2受體拮抗劑或轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑可有效治療因高脂飼料導(dǎo)致的大鼠非酒精性脂肪肝及血脂紊亂，有望將5-羥色胺2受體拮抗劑或轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑臨床用于治療脂肪肝或高脂血癥。
文檔編號(hào)A61P3/06GK102657868SQ20121017569
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月30日
發(fā)明者傅繼華, 孫星, 李強(qiáng), 胡夢(mèng)云, 莫凌峰, 袁曉玲, 韓雪, 高思遠(yuǎn) 申請(qǐng)人:中國藥科大學(xué)