專利名稱：一種準噶爾烏頭總生物堿的提取方法
技術領域：
本發明涉及一種準噶爾烏頭總生物堿的提取方法，屬于醫藥領域。
背景技術：
準噶爾烏頭(AconUm/ soongaricum Stapf.)為毛茛科烏頭屬植物,分布于新疆天山山脈海拔1700 2500 m的山坡草地、灌叢和林櫞。在西北地區準噶爾烏頭被當作中藥川烏和草烏的替代品而使用，同時也是哈薩克民族醫學的傳統藥材，主要用于止痛、除濕、 祛風寒。其塊根還被收載于前蘇聯的國家藥典中，酊劑外用可作為神經痛、牙痛、關節炎及其它各種疼痛時的鎮痛劑。對于烏頭類藥材，大量的臨床使用經驗、科學研究和實驗數據表明，烏頭類藥材之所以具有止痛、除濕、祛風寒等臨床療效是因為藥材中含有大量的生物堿類化學成分的原因，生物堿成分是烏頭類藥材的活性有效成分。因此，對烏頭類藥材的新藥研發都是針對其中所含生物堿成分而展開的，從藥材中提取出的生物堿成分的純度將直接影響臨床治療疾病的效果，有效成分含量越高、雜質越少、療效越高，反之亦然。通過薄層色譜(TLC)和高效液相色譜(HPLC)可以判斷準噶爾烏頭根、莖和葉各部位所含主要生物堿的種類。其中，TLC實驗結果表明，準噶爾烏頭藥材的根、莖、葉主要含有生物堿成分，具體所含物質類別和名稱見附圖
I和圖2所示(圖I展開劑為石油醚一丙酮一氨水10:10:0. 4、圖2展開劑為氯仿一甲醇一氨水22. 5:1:0. 4)。在TLC上(見附圖I和圖
2)從左至右依次點樣順序為準噶爾烏頭根、莖、葉提取部位，以及12-表-歐烏堿、宋果靈、 尼奧靈、準噶爾堿和歐烏堿等8個樣品點，分別使用石油醚-丙酮-氨水和氯仿-甲醇-氨水溶劑配比體系進行展開。可以看出，準噶爾烏頭中所含成分均為生物堿類物質(碘化鉍鉀試劑顯色，其為生物堿的特征顯色劑，顯示紅色斑點者為生物堿成分)。因此，TLC結果可以確定在準噶爾烏頭的根中含有12-表-歐烏堿、宋果靈、尼奧靈、準噶爾堿和歐烏堿五種成分；莖中含有12-表-歐烏堿、尼奧靈、準噶爾堿和歐烏堿；葉中含有準噶爾堿和歐烏堿。另外，也通過HPLC方法對準噶爾烏頭進行了分析，同樣確定出準噶爾烏頭根中的生物堿包括準噶爾堿、歐烏堿、尼奧靈、12-表-歐烏堿、14-乙酰尼奧靈、宋果靈、6-0-去甲基尼奧靈。空白溶液的HPLC色譜圖見附圖3，混合對照品的HPLC色譜圖見附圖4。其中，色譜條件為日立液相色譜系統(日本)是由單泵(L-2130)和一個二極管陣列檢測器 (L-2455)以及D-2000組成的工作站；采用Inertsil NH2柱(150 X 4. 6mm，5Mm);檢測波長為270 nm;流速1.0 ml/min;進樣量10 ML ;柱溫30°C;流動相為正己烷和無水乙醇(92:8)。 可見準噶爾烏頭中主要含有以上七種生物堿成分(見附圖5 圖9)。對于中藥和天然植物藥的新藥研發，我們國家制定了《藥品注冊管理辦法》，在附件一中明確將中藥分為九類。其中，對于有效部位入藥的要求描述為“未在國內上市銷售的中藥、天然藥物中提取的有效部位制成的制劑是指從中藥、天然藥物中提取的一類或數類成份制成的制劑，其有效部位的含量應占提取物的50%以上”，可見，要開發一種天然植物藥的有效部位，必須使其含量占到提取物的50%以上，這樣的有效部位才符合國家的新藥注冊標準。之前，已經有對準噶爾烏頭乙醇提取物中生物堿的含量進行了檢測，采用紫外光譜對經過酸性染料絡合的生物堿進行分析，檢測出準噶爾烏頭根、莖、葉乙醇提取物中生物堿含量，結果如表I所示。結果表明，準噶爾烏頭中所含生物堿含量很低，必須要經過多種手段純化處理，減少雜質，濃縮生物堿，才能提高含量，使其達到管理辦法的要求。
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權利要求
1.一種準噶爾烏頭總生物堿的提取方法，其特征在于，包括以下步驟(O藥材準備將準噶爾烏頭干燥根粉碎，過10 40目篩；(2)提取在準噶爾烏頭藥材粉末中加入3 6倍體積量的70% 100%的低級醇溶液， 在60°C 100°C溫度回流提取8h 12h，冷卻后過濾得到提取液，提取液用無機堿溶液調 pH值至9 10 ;其中，所述低級醇溶液用稀鹽酸調pH值為2 3 ;所述低級醇溶液為乙醇溶液或甲醇溶液；所述無機堿溶液為氨水或氫氧化鈉溶液；(3)萃取將步驟(2)得到的提取液用等體積的萃取劑萃取3次，合并3次的萃取液，減壓回收溶劑至干，得到固體物質組分A即準噶爾烏頭總生物堿；其中，所述萃取劑為乙酸乙酯和/或氯仿。
2.根據權利要求I所述的提取方法，其特征在于，所述準噶爾烏頭總生物堿通過大孔吸附樹脂純化組分A用40% 70%的乙醇溶液溶解，將乙醇溶解液加入大孔吸附樹脂色譜柱中，先用純水洗脫，然后用20% 50%的乙醇溶液洗脫，最后用60% 100%的乙醇溶液洗脫，收集60% 100%乙醇溶液洗脫液，減壓回收溶劑至干，得到進一步純化的準噶爾烏頭總生物堿組分B。
3.根據權利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述準噶爾烏頭總生物堿通過聚酰胺純化組分B用有機溶劑溶解，將溶解液加入到聚酰胺色譜柱上，先用石油醚和丙酮混合溶劑I進行洗脫，然后用石油醚和丙酮混合溶劑II進行洗脫，收集石油醚和丙酮混合溶劑 II洗脫液，減壓回收溶劑至干，得到進一步純化的準噶爾烏頭總生物堿組分C ;其中，石油醚和丙酮混合溶劑I中石油醚和丙酮體積比為8 15:1，石油醚和丙酮混合溶劑II中石油醚和丙酮體積比為2 6:1。
4.根據權利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述準噶爾烏頭總生物堿通過陽離子交換樹脂純化用稀鹽酸調節70% 100%的低級醇溶液pH值至2 3，將其加入組分C 中，至整個溶液PH值為2，將所得溶液加入到陽離子交換樹脂色譜柱中，先用去離子水沖洗該色譜柱至中性，然后用濃度為5% 40%的無機堿溶液洗脫，再將樹脂從色譜柱中取出， 用70% 100%的低級醇溶液在60V 100°C回流提取4h 10h，收集提取液，減壓回收溶劑至干，得到進一步純化的準噶爾烏頭總生物堿組分D。
5.根據權利要求2所述的提取方法，其特征在于所述填料大孔吸附樹脂的體積應為溶解組分A的40% 70%乙醇溶液體積的4 8倍；所述純水用量為2 6倍色譜柱體積； 所用20% 50%的乙醇溶液用量為2 5倍色譜柱體積；所用60% 100%的乙醇溶液用量為2 6倍色譜柱體積。
6.根據權利要求3所述的提取方法，其特征在于所述有機溶劑選自乙酸乙酯、氯仿和丙酮中的一種或多種；所述填料聚酰胺的體積應為有機溶劑體積的4 10倍，石油醚和丙酮混合溶劑I用量為I 5倍量色譜柱體積；所述石油醚和丙酮混合溶劑II用量為4 8 倍量色譜柱體積。
7.根據權利要求4所述的提取方法，其特征在于所述陽離子交換樹脂為強酸型聚苯乙烯陽離子交換樹脂；所述無機堿溶液為氨水和氫氧化鈉溶液；所述陽離子交換樹脂質量為組分C質量的5 10倍；所述無機堿溶液體積為樹脂體積的I 4倍；所述70% 100% 的低級醇溶液體積為樹脂體積的I 5倍。
8.根據權利要求2所述的提取方法，其特征在于，包括以下步驟(O藥材準備將準噶爾烏頭干燥根粉碎，過20目篩；(2)提取在準噶爾烏頭藥材粉末中加入5倍體積量的濃度為95%的乙醇溶液，在70°C 溫度下回流提取8 h，期間每隔30min攪拌均勻一次，冷卻后過濾得到提取液，提取液用氨水調PH值至9 10 ;其中，所述乙醇溶液用稀鹽酸調pH值為2 3 ;(3)萃取將步驟(2)得到的提取液用等體積的乙酸乙酯萃取3次，合并3次的乙酸乙酯萃取液，減壓回收溶劑至干，得到固體物質組分A即準噶爾烏頭總生物堿；(4)大孔吸附樹脂純化組分A用50%的乙醇溶液溶解，將乙醇溶解液加入大孔吸附樹脂色譜柱中，先用純水洗脫，然后用50%的乙醇溶液洗脫，最后用75%的乙醇溶液洗脫， 收集75%乙醇溶液洗脫液，減壓回收溶劑，得到固體狀物質即為生物堿組分B;其中，所述填料大孔吸附樹脂的體積應為溶解組分A的50%乙醇溶液體積的6倍；所述純水量用量為 3倍色譜柱體積；所用50%的乙醇洗脫用量為3倍色譜柱體積；所用75%的乙醇洗脫用量為4倍色譜柱體積。
9.根據權利要求6所述的提取方法，其特征在于所述有機溶劑為乙酸乙酯；所述填料聚酰胺的體積應為乙酸乙酯體積的8倍，石油醚和丙酮混合溶劑I用量為2倍量色譜柱體積，其中石油醚和丙酮體積比為10:1 ;所述石油醚和丙酮混合溶劑用量II為5倍量色譜柱體積的，其中石油醚和丙酮體積比為4:1。
10.根據權利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述準噶爾烏頭總生物堿通過陽離子交換樹脂純化用稀鹽酸調節95%的乙醇溶液pH值至2 3，將其加入組分C中，使整個溶液PH為2，將所得溶液加入到強酸型聚苯乙烯陽離子交換樹脂中，先用去離子水沖洗該色譜柱至中性，然后用濃度為10 %的氨水洗脫，再將樹脂從色譜柱中取出，用80 %的乙醇溶液在80°C回流提取5 h，收集乙醇提取液，減壓回收溶劑，得到固體物質即本發明的準噶爾烏頭總生物堿；其中，所述樹脂質量為組分C質量的9倍；所述氨水體積為樹脂體積的I 倍；所述80%的乙醇溶液體積為樹脂體積的3倍。
全文摘要
本發明公開了一種準噶爾烏頭總生物堿的提取方法，包括以下步驟藥材準備、提取、萃取、大孔吸附樹脂純化、聚酰胺純化和陽離子交換樹脂。本發明提供了一套優化組合的生物堿制備方法，將準噶爾烏頭提取物中生物堿的含量從0.167％～0.24％大大提升了，專屬性強，發明所建立起來的制備方法可以獲得純度較高、雜質較少、符合國家《藥品注冊管理辦法》要求的準噶爾烏頭生物堿有效部位。
文檔編號A61K125/00GK102579612SQ20121008402
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月27日 優先權日2012年3月27日
發明者劉悅, 張帆, 楊麗娟, 蔡冬梅 申請人:新疆醫科大學