專利名稱：山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物及其制備方法和用途。
背景技術：
目前流行性感冒病毒日益嚴重，并且流行性感冒病毒與呼吸道疾病及引起的全身性疾病密切相關，我國是流感高發國家之一，不但人口眾多，而且生活習慣也有利于流感病毒的轉播，每年人平均發病次數達到O. 3 O. 7次不等，重點人群達到2 4次。流感對人類存在嚴重威脅，尤其是新發品種流感病毒，其不但引起繼發性其它微生物感染，而且會直接導致器官破壞和變態反應致人死亡。但目前并沒有有效的治療流行性感冒病毒及其疾病 (流感)的方法和治療手段，如針對臨床癥狀進行炎癥反應治療，治標不治本。目前最常見的預防和治療流行性感冒病毒的方法是使用流感病毒疫苗接種，非特異性抗病毒中藥或西藥磷酸奧司他韋(達菲)_神經氨酸酶抑制劑。然而流感病毒疫苗預防接種弊端在于接種人群有選擇性，不是人人可以接種。此外，流感病毒疫苗保護率不高，保護時間也較短(3 6個月)。目前大多數非特異性抗病毒中藥雖然宣稱有抗病毒作用，但是并非針對流感病毒，且抗病毒作用機理不清楚。在我們以往研究的許多種治療外感風寒，西醫所認為的感冒的中藥組方并沒有直接抗流感病毒的作用。簡單的說，不是所有的治療感冒的中藥組方都有明確的抑制流感病毒的作用。西藥“磷酸奧司他韋(達菲，(3R，4R，5S)-4-乙酰胺-5-氨基-3(1-丙氧乙酯)-1_環己烯-I羧酸乙酯磷酸鹽)”是神經氨酸酶抑制劑，對流感病毒進入細胞有特異性抑制作用，但是不僅價格昂貴，而且有一些患者服用后出現嘔吐、惡心、失眠、頭痛、腹痛、腹瀉、頭暈、疲勞、鼻塞、咽痛和咳嗽等副反應。達菲是在體內被位于肝臟和腸道的酯酶轉化為活性代謝產物而起著抑制神經氨酸酶作用，如果患者肝臟和腸道器官功能不正常也將影響其藥效。此外，腎功能不全患者也要慎用。因此，針對性抑制流感病毒復制、抑制流感病毒神經氨酸酶水解細胞表面唾液酸， 從而導致流感病毒不能與細胞表面受體結合而進入細胞內，以及減少流感病毒在細胞內的產生將是治療流感病毒性感冒的病因。
發明內容
本發明的目的是提供一種山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，抑制流感病毒神經氨酸酶水解細胞表面唾液酸，導致流感病毒不能與細胞表面受體結合而進入細胞內，從而能有效的抑制流感病毒復制，更重要地是克服藥物的副反應弊端。本發明的另一目的是提供了一種山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物的制備方法。本發明的另一目的是提供了山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物制備預防和治療流感及其并發癥疾病的藥物的用途；本發明的另一目的是提供了含有山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物的藥物組合物。本發明的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，通過將山香圓醇滲漉提取得到，醇滲漉提取方法是取山香圓葉粗粉，用30 90%乙醇作為提取劑，浸潰12 72小時后，以I 8ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4 15倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用25 90%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。優選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用40 80%乙醇作為提取劑， 浸潰24 48小時后，以I 7ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4 13倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用 30 85%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮,干燥,得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。更優選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用45 75%乙醇作為提取劑， 浸潰24 36小時后，以I 6m/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4 11倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用 35 80%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮,干燥,得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。更優選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用50 70%乙醇作為提取劑， 浸潰36小時后，以I 5ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4 10倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用40 80 %乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮,干燥,得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。優選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用55 70%乙醇作為提取劑，浸潰24小時后，以2 5ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材5 8倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用45 80% 乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。更優選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用60 70%乙醇作為提取劑， 浸潰12小時后，以3 5ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4 6倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用50 75%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。更優選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用65%乙醇作為提取劑，浸潰 36小時后，以4ml/分鐘速度進行滲漉，收集藥材7 10倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用50 70%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。更優選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用70%乙醇作為提取劑，浸潰 72小時后，以4 5ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用50%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。優選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中總黃酮含量50%以上。優選的，述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中還包含黃酮類化學成分及其醫學上可以接受的酚酸類成分。優選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中黃酮類化學成分含女貞苷、 野漆樹苷、金絲桃苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素及其苷或苷元中的一種或多種。優選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達4. 5%U. 2%、2· 5%以上。優選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷總量達23%以上。本發明還提供了山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物用于制備預防和治療流感及其并發癥疾病的藥物的用途，用于抑制流感病毒、抑制流感病毒FM1、抑制神經氨酸酶，其并發癥是指腎功能衰竭或是指脾損傷或/和肺損傷。本發明還提供了一種山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物制劑，該制劑以所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物為主要活性成分。本發明的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物能夠提取出有效的抑制神經氨酸酶成分，山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物隨著使用劑量大小變化，其抑制神經氨酸酶活性的能力，即神經氨酸酶抑制率的高低也相應發生變化，并且成正相關，山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物能夠通過抑制流感病毒表面神經氨酸酶，進而抑制流感病毒進入細胞里面、抑制已經進入細胞里面的流感病毒復制、增殖，從而減少了流感病毒對細胞的感染、生長，以及預防和治療流感及其并發癥。
具體實施例方式本發明的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其是通過將山香圓醇滲漉提取得到， 醇滲漉提取方法如下取山香圓葉粗粉，用30 90%乙醇作為提取劑，浸潰12 72小時后，以I 8ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4 15倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用25 90%乙醇洗脫， 收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。優選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中總黃酮含量50%以上。優選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中還包含黃酮類化學成分及其醫學上可以接受的酚酸類成分，其中黃酮類化學成分含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素及其苷或苷元中的一種或多種。其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達4. 5%U. 2%、2· 5%以上。更優選的，其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷總量達23%以上。實施例I制備方法取山香圓葉粗粉，用50%乙醇作為提取劑，浸潰24小時后，以7ml/kg/ 分鐘的速度進行滲漉，收集藥材11倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用15%的乙醇洗脫除去雜質，再用6倍量柱體積的50%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量53.6%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達15%、5%、3%。實施例2制備方法取山香圓葉粗粉，用60%乙醇作為提取劑，浸潰48小時后，以6ml/kg/ 分鐘的速度進行滲漉，收集藥材9倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用18%的乙醇洗脫除去雜質，再用5倍量柱體積的55%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量57.3%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達13%、6%、5%。實施例3制備方法取山香圓葉粗粉，用65%乙醇作為提取劑，浸潰40小時后，以5ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材8倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%的乙醇洗脫除去雜質，再用5倍量柱體積的60%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量63.7%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達10%、8%、7%。實施例4制備方法取山香圓葉粗粉，用70%乙醇作為提取劑，浸潰72小時后，以4ml/kg/ 分鐘的速度進行滲漉，收集藥材7倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%的乙醇洗脫除去雜質，再用5倍量柱體積的50%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量82.5%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達7 %、3 %、7 %。實施例5制備方法取山香圓葉粗粉，用75%乙醇作為提取劑，浸潰36小時后，以2ml/kg/ 分鐘的速度進行滲漉，收集藥材6倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%的乙醇洗脫除去雜質，再用6倍量柱體積的50%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量74.6%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達6 %、6 %、11 %。實施例6制備方法取山香圓葉粗粉，用80%乙醇作為提取劑，浸潰24小時后，以3ml/kg/ 分鐘的速度進行滲漉，收集藥材5倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%的乙醇洗脫除去雜質，再用5倍量柱體積的40%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量65. 8.6%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達16%、7%、4%。實施例7制備方法取山香圓葉粗粉，用85%乙醇作為提取劑，浸潰72小時后，以lml/kg/ 分鐘的速度進行滲漉，收集藥材10倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用17%的乙醇洗脫除去雜質，再用4倍量柱體積的30%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量58.7%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達18%、6%、8%。實驗數據I、提取工藝優化研究山香圓葉主要含黃酮類、有機酸等化合物，黃酮類化合物以乙醇提取效果較佳，因此，我們以乙醇濃度(A)、收集乙醇量(B)、滲漉速度(C)、浸潰時間(D)四項作為考察因素， 每一因素設三個水平，按L9(34)正交表進行正交實驗設計(表I、表2)對提取工藝進行優化研究，考察指標為總黃酮提取率。表I因素水平表Kl200.93182.04193.9197.06K2196.87206.54195.82191.49K3197.06206.28205.14206.31R4.0624.511.2414.8權利要求
1.山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物用于制備預防和治療流感并發癥疾病的藥物的用途，其中所述并發癥是指脾損傷或/和肺損傷，所述提取物通過將山香圓醇滲漉提取得到， 醇滲漉提取方法是取山香圓葉粗粉，用30 90%乙醇作為提取劑，浸潰12 72小時后， 以I 8ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4 9倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用25 90%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
2.如權利要求I所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用40 80%乙醇作為提取劑，浸潰24 48小時后，以I 7ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4 9倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質,再用30 85%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮,干燥,得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
3.如權利要求2所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用45 75%乙醇作為提取劑，浸潰24 36小時后，以I 6m/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4 8 倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質,再用35 80%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮,干燥,得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
4.如權利要求3所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用50 70%乙醇作為提取劑，浸潰36小時后，以I 5ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4 8倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質,再用40 80%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
5.如權利要求3所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用55 70%乙醇作為提取劑，浸潰24小時后，以2 5ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材5 8倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質,再用45 80%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮,干燥,得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
6.如權利要求I所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用60 70%乙醇作為提取劑，浸潰12小時后，以3 5ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4 6倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質,再用50 75%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
7.如權利要求4所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用65%乙醇作為提取劑，浸潰36小時后，以4ml/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材7 8倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用50 70%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
8.如權利要求I所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用70%乙醇作為提取劑，浸潰72小時后，以4 5ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質，再用50% 乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
9.如權利要求I 8任一項所述的用途,其中總黃酮含量50%以上。
10.如權利要求I 8任一項所述的用途，其中還包含黃酮類化學成分及其醫學上可以接受的酚酸類成分。
11.如權利要求10所述的用途，其中黃酮類化學成分含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷、 槲皮素、木犀草素、芹菜素及其苷或苷元中的一種或多種。
12.如權利要求11所述的用途，其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達4.5 %、I.2%,2. 5% 以上。
13.如權利要求12所述的用途，其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷總量達23%以上。
全文摘要
本發明涉及一種山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，通過將山香圓醇滲漉提取得到，醇滲漉提取方法是取山香圓葉粗粉，用30～90％乙醇作為提取劑，浸漬12～72小時后，以1～8ml/kg/分鐘的速度進行滲漉，收集藥材4～15倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20％以下的乙醇洗脫除去雜質，再用25～90％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量50％以上，黃酮類主要化學成分為女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素及其苷或苷元中的一種或多種；該提取物可作神經氨酸酶抑制劑用在預防和治療流感，制成藥學上可以接受的劑型。
文檔編號A61P31/16GK102579522SQ20121006859
公開日2012年7月18日 申請日期2010年4月13日 優先權日2010年4月13日
發明者劉地發, 呂武清, 唐春山, 張華敏, 李志勇, 楊小玲, 王燕平, 程帆, 謝寧 申請人:江西山香藥業有限公司