專利名稱：一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法
技術領域：
本發明涉及一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法。
背景技術：
沙棘(Hippophaerhamnoides L.)為胡頹子科(Elaeagnaceae)沙棘屬 (Hippophae Linn.)多年生落葉灌木或小喬木。原產我國及歐洲，分布于歐亞大陸的溫帶、 寒溫帶及亞熱帶高山區，以前蘇聯、蒙古、中國分布最多。種類主要有肋果沙棘、西藏沙棘、 蒙古沙棘、柳葉沙棘等，大果沙棘是近年來我國從俄羅斯引進的并通過雜交選育的新品種， 主要集中在黑龍江種植，其主要特點是果實大、營養豐富、黃酮含量較高。沙棘作為一種古老的野生植物，自古以來就被人類所利用。沙棘的各部分器官都具有很高的營養和藥用價值，素有“神果奇樹”之稱，尤其是其藥用價值，國內外的許多專家研究發現，沙棘含有上百種生物活性物質，其中有維生素類、糖類、氨基酸類、不飽和脂肪酸、多酚類、黃酮類、S0D、5-羥色胺以及各種微量元素等。其中，黃酮是沙棘中一種重要的生物活性物質，沙棘果實中黃酮含量為309 945mg/100g，而葉中黃酮的含量高于果實，為 310 1238mg/100g，均高于其他植物和果實。研究實驗表明，黃酮的功效是多方面的它是一種很強的抗氧劑，可有效清除體內的氧自由基，可以抑制油脂性過氧化物的全階段溢出，這種阻止氧化的能力是維生素E的十倍以上，這種抗氧化作用可以阻止細胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發生；黃酮可以改善血液循環，可以降低膽固醇，可大大降低了心腦血管疾病的發病率，也可改善心腦血管疾病的癥狀；黃酮化合物在動物實驗中被證明可以降低26%的血糖和39%的三元脂肪酸丙酯，這種降低血糖的功效是很神奇的，但更重要的是它對穩定膠原質的作用，因此它對糖尿病引起的視網膜病及毛細血管脆化有很好的作用； 黃酮可以抑制炎性生物酶的滲出，可以增進傷口愈合和止痛，還可以用于各類敏感癥的治療。而沙棘黃酮也同樣具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、降血脂、抗輻射、抗炎生肌、提高免疫等多項生理功能，現已在功能食品、保健品以及心腦血管疾病、抗癌藥物等方面廣泛應用。現在國內對沙棘開發利用方面還普遍存在比較多的問題，如生產工藝復雜、成本過高，綜合利用不夠，產品附加值較低，雖然已開發出黃酮產品，但較多為黃酮粗提物，黃酮純度較低，難以發揮其功效，滿足不了國內外市場的需求，限制了在保健食品和天然藥物方面的應用。所以，如何采用一種工藝簡單、成本低廉的方法純化出生物活性好、純度高的沙棘酮是當今急需解決的問題。目前，對已采用的沙棘黃酮的分離純化方法主要有幾種，如中國專利申請CN 102058634A公開內容所示將沙棘原料脫脂，稀堿提取，過濾，濾液調節pH，離心分離，沉淀物進行醇溶超聲波提取，離心分離，回收乙醇，加純水稀釋并加澄清劑處理，離心分離，清液樹脂吸附，水洗，乙醇脫洗，洗脫液濃縮，干燥，獲得產品。該工藝采用堿法和超聲波法提取沙棘黃酮，再通過樹脂吸附法純化，雖然這一套完整的工程在現有技術中是沒有記載的，但酸堿法可能影響黃酮的活性，而且樹脂法純化采用的比較多，效果和安全性方面會影響其應用。再例如中國專利申請CN 102058634A公開內容所示以沙棘葉或果實經提取、水解和除雜后所得的粗提物為原料，經聚酰胺柱層析，水及低濃度極性有機溶劑洗去雜質，并用極性有機溶劑洗脫沙棘黃酮，洗脫液回收溶劑后真空干燥得到純度達50 100%的沙棘黃酮。該方法技術合理，但使用的有機溶劑影響黃酮安全使用，而且黃酮產量較低，難以規模化生產。再例如中國專利申請CN1485324公開內容所示一種以膜分離技術制取沙棘黃酮的方法，它以沙棘果、沙棘果肉、沙棘果皮渣或沙棘葉為原料，干燥、粉碎處理后，對以沙棘果、沙棘果肉、沙棘果皮渣為原料的細粉先進行超臨界CO2萃取其脂溶性成份，除油后的細粉加乙醇回流提取，得沙棘黃酮粗提液；對以沙棘葉為原料的細粉加水回流提取，得沙棘黃酮粗提液；然后將沙棘黃酮粗提液先用1500-2000dalton的膜進行過濾，其濾液再經 200dalton的膜過濾，得沙棘黃酮濕粉；最后將沙棘黃酮濕粉負壓干燥，得到沙棘黃酮粉。 該發明具有膜過濾裝置簡單、占地小、投資少、自動化程度高的特點。但工藝復雜，且膜非常容易被污染而導致成本過高，難以實現工業化生產。
發明內容
從上述技術背景可知，現有的沙棘黃酮的分離純化方法存在很多缺陷。本發明的目的是提供一種迄今未見報道的以大果沙棘果渣為主要原料的并具有生產工藝簡單、低成本、可工業化生產的大果沙棘果渣黃酮的分離純化方法。本發明的一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法具體步驟如下I、一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法，其特征是該方法包括下列步驟(I)原料脫脂稱取40 60目的大果沙棘果渣粉末置于索式提取器中，用低沸點石油醚在70°C 下回流2h，回收溶劑。 (2)大果沙棘黃酮分離提取脫脂后的大果沙棘粉中加入10 15倍體積的70% 95%乙醇水溶液，在超聲功率200 300w、頻率40KHZ、溫度50°C條件下提取三次，加硅藻土助濾，合并提取液，得澄清沙棘黃酮提取液。(3)大果沙棘黃酮純化向提取液中加入5 10mg/mL的硫酸鋅/乙酸鋅進行絡合反應，攪拌速度為100 200r/min,邊攪拌邊用4%的NaOH溶液調溶液pH值至6. 5 8. 5,4000r/min離心，收集沉淀。將沉淀分散于30 50%的乙醇水溶液中，向溶液中加入4. O 6. 0% EDTA,于40 60°C水浴中振蕩反應至沉淀完全溶解，將溶液冷卻至室溫，過濾，將溶液減壓濃縮至干。將干物質用20 30倍乙醇溶解，過濾，將濾液濃縮干燥，既可得總黃酮含量20% 60%的棕黃色大果沙棘黃酮粉末。本發明和現有的技術相比具有以下優點一、本發明采用大果沙棘果渣為原料，首先利用超聲波提取技術將沙棘黃酮提取分離出來，然后利用黃酮與金屬鹽之間的絡合和解絡合作用原理，除去雜質得到純度較高的大果沙棘黃酮，該純化技術國內外未見相關資料報道。其分離純化方法簡單，生產成本低，符合中藥產業現代化的要求。該方法適用于產業化生產，其純化工藝具有較強的實用價值。二、本發明能利用沙棘果加工副產物一大果沙棘果渣分離純化出黃酮成分，充分利用了沙棘資源，且分離純化過程的有機溶劑可全部回收利用，充分保護了環境，降低了成本。三、本發明分離純化的大果沙棘果洛黃酮,其黃酮純度可達50%以上，純化效率較聞。四、本發明所純化出的黃酮安全無污染，具有較高的生物活性和多種生理功能，直接作為保健食品、藥品的原料和營養強化劑。五、本發明方法所使用的材料來源廣泛，所用溶液可二次利用，節約了能源，降低了環境污染。是一種簡單方便、低成本、高效的大果沙棘黃酮分離純化方法。
具體實施例方式實施例I(I)原料脫脂稱取120g40目顆粒大小的大果沙棘果渣粉末置于索式提取器中，用低沸點石油醚在70°C下回流2h，脫去沙棘果渣中的油脂，并回收溶劑。(2)大果沙棘黃酮分離提取取脫脂后的大果沙棘粉100g，加入I. 5L 85%乙醇水溶液，在超聲功率300w、頻率 40KHZ、溫度50°C條件下超聲30min，提取三次，加硅藻土助濾，合并提取液得澄清的沙棘黃酮提取液2. 5L。(3)大果沙棘黃酮純化向提取液中加入12. 5g硫酸鋅進行絡合反應，攪拌速度為150r/min，邊攪拌邊用 4%的NaOH溶液調溶液pH值至8. 5，4000r/min離心lOmin，收集沉淀。將沉淀分散于30% 的乙醇水溶液中，向溶液中加入4. 0% EDTA，于50°C水浴中振蕩反應至沉淀完全溶解，將溶液冷卻至室溫，過濾，將溶液減壓濃縮至干。將干物質用20倍乙醇溶解，過濾，將濾液濃縮干燥，既得棕色大果沙棘黃酮粉末，其沙棘總黃酮含量大于52. 5%。實施例2(I)原料脫脂稱取IOOg 40目顆粒大小的大果沙棘果渣粉末置于索式提取器中，用低沸點石油醚在70°C下回流2h，脫去沙棘果渣中的油脂，并回收溶劑。(2)大果沙棘黃酮分離提取取脫脂后的大果沙棘粉80g，加入1.2L 85%乙醇水溶液，在超聲功率300w、頻率 40KHZ、溫度50°C條件下超聲30min，提取三次，加硅藻土助濾，合并提取液得澄清的沙棘黃酮提取液2. 0L。(3)大果沙棘黃酮純化向提取液中加入10. Og乙酸鋅進行絡合反應，攪拌速度為150r/min，邊攪拌邊用 4%的NaOH溶液調溶液pH值至7. 5，4000r/min離心，收集沉淀。將沉淀分散于30 %的乙醇水溶液中，向溶液中加入4. 0% EDTA，于50°C水浴中振蕩反應至沉淀完全溶解，將溶液冷卻至室溫，過濾，將溶液減壓濃縮至干。將干物質用20倍乙醇溶解，過濾，將濾液濃縮干燥，既得棕色大果沙棘黃酮粉末，其沙棘總黃酮含量大于50. 2%。
權利要求
1.一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法，其特征是該方法包括下列步驟(1)原料脫脂大果沙棘果渣粉用石油醚在70°c下脫脂2h，回收溶劑。(2)大果沙棘黃酮分離提取大果沙棘粉中加入10 15倍體積的乙醇水溶液，在50°C下超聲提取三次，過濾后得到沙棘黃酮提取液。(3)大果沙棘黃酮純化將提取液中加入5 10mg/mL的鋅鹽進行絡合反應，攪拌速度為100 200r/min，邊攪拌邊用NaOH溶液調溶液pH值至6. 5 8. 5，離心，收集沉淀。將沉淀分散于30 50%的乙醇水溶液中，加入解絡劑EDTA，于40 60°C水浴中振蕩反應至沉淀完全溶解，將溶液冷卻至室溫，過濾，將溶液減壓濃縮至干。將干物質用乙醇溶解，過濾，將濾液濃縮干燥，得到棕黃色黃酮粉末，即可。
2.根據權利要求I所述的一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法，其特征是在所述的原料脫脂步驟中，大果沙棘黃酮粉末顆粒大小為40 60目。
3.根據權利要求I所述的一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法，其特征是在所述的大果沙棘黃酮分離提取步驟中，乙醇濃度為70% 95%，過濾時候加入助濾劑娃藻土。
4.根據權利要求I所述的一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法，其特征是在所述的大果沙棘黃銅純化步驟中，加入黃酮提取液中的鋅鹽為硫酸鋅或乙酸鋅，加入解絡劑EDTA的量為沙棘黃酮提取液的4. O 6. 0%，乙醇用量為干物質的20 30倍。
全文摘要
一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法，本發明涉及一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法。本發明解決了現有沙棘黃酮的分離純化方法存在方法繁瑣、工藝復雜、分離純化成本過高、黃酮活性容易遭到破壞以及黃酮純度較低的問題。本發明一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法按照如下步驟進行1.原料脫脂；2.超聲波提取，離心；3.提取液加入金屬鹽使黃酮與金屬絡合反應，攪拌，調溶液pH，收集沉淀；4.加入解絡劑溶解沉淀，減壓濃縮至干，再用乙醇溶解過濾，將濾液濃縮，干燥后即得到分離純化后的沙棘黃酮粉末。本發明的一種從大果沙棘果渣中分離純化沙棘黃酮的方法能保證純化后的大果沙棘黃酮純度充分提高，保留天然黃酮原有的生物活性，安全無毒，并具有生產成本低、工藝簡易的優點，適合沙棘黃酮的大規模化生產。
文檔編號A61P29/00GK102579516SQ201210057588
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月7日 優先權日2012年3月7日
發明者余世鋒, 常影, 焦巖 申請人:齊齊哈爾大學