專利名稱：一種用于治療HBV的siRNA的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用于治療HBV的siRNA，屬基因工程領域。
背景技術：
目前，全世界約有4. 2億HBV攜帶者，HBV感染是嚴重影響人類健康的疾病之一。 慢性HBV感染與肝纖維化、肝癌的發生密切相關。但是，大部分的慢性HBV患者并沒有在常規的治療方式下獲得預期的結果。盡管干擾素能夠抑制HBV的復制，但是HBV能夠通過抑制干擾素的分泌和功能，從而對抗機體的抗病毒機制，而最終導致機體處于免疫耐受狀態。比如，在慢性感染的病人的外周血和肝浸潤細胞中，調節性T細胞的比例有明顯增加。另外， HBsAg, HBeAg以及其他的病毒因子能夠直接抑制TLR介導的固有免疫應答。HBV聚合酶能夠阻斷RIG-I和TLR3介導的IFN-β分泌。目前，RNAi技術已經廣泛應用于抗HBV研究。無論是細胞水平，還是HBV動物模型，siRNA分子均取得明顯的抗HBV效果。RNAi干擾藥物必將成為今后研究的重點。能否設計一種分子，既能特異性的沉默HBV相關基因，同時能夠誘導IFN的產生， 從而能夠改善HBV導致的免疫耐受狀態。HBx特異的3p-siRNA的出現，使得這樣的假想成為可能，為HBV的治療提供了很好的指導意義。
發明內容
針對上述現有技術，針對HBV治療現狀的不足，本發明提供了一種用于治療HBV的 SiRNA0本發明是通過以下技術方案實現的一種用于治療HBV的siRNA，其序列如SEQ ID NO. 1所示SEQ ID NO. 1 :G⑶CUUACAUAAGAGGACU。或如SEQ ID NO. 2 所示SEQ ID NO. 2 :GGAC⑶CCUUUGUUUACGU。或如SEQ ID NO. 3 所示SEQ ID NO. 3 CCGACCUUGAGGCAUACUU。本發明的用于治療HBV的siRNA，是通過以下方法制備得到的LsiRNA 的設計(1)首先分析所研究的HBV亞型為ayw型，其序列如SEQ ID N0. 4所示。(2)針對HBV χ基因的序列，設計針對HBV χ基因的特異性沉默RNA，用siRNA設計軟件，設定相關參數包括siRNA的長度為19個堿基序列；GC比例在35-50之間。將潛在的序列利用BLAST進行基因數據庫的比較，排除和其他編碼序列同源的序列。(3)化學合成siRNA由廣州銳博公司直接合成，其靶點和3p_siRNA相同，序列見表 1，以及序列表 SEQ ID NO. I-SEQ ID NO. 3。表1化學合成siRNA序列
權利要求
1. 一種用于治療HBV的siRNA，其特征在于其序列如SEQ ID NO. 2所示=SEQ ID NO. 2 GGAC⑶CCUUUGUUUAC⑶。
全文摘要
本發明公開了一種用于治療HBV的siRNA，其序列如SEQ ID NO.2所示。可人工合成，也可通過體內轉錄合成。將本發明的siRNA轉染HepG2.2.15細胞24h和48h后，發現均能夠下調HBx基因的表達，細胞內以及上清中HBsAg和HBeAg的含量也明顯下降，并且3p-siRNA的作用效果比化學合成的更加顯著。可以作為抗HBV的藥物應用。
文檔編號A61P31/20GK102533767SQ20121002261
公開日2012年7月4日 申請日期2010年9月16日 優先權日2010年9月16日
發明者張建, 張彩, 田志剛, 韓秋菊 申請人:山東大學