專利名稱：膠核脂質體凍干粉及其制備方法
技術領域：
本發明屬于藥物制劑學領域，更具體地說，本發明涉及一種膠核脂質體及其制備方法。
背景技術：
脂質體(liposomes)是一種由排列有序的脂質雙分子層組成的單層或多層微囊。 脂質體屬于膠體系統，具有類似細胞的結構，與細胞膜親和力強，可以增加被包封藥物透過細胞膜的能力。脂質體生物相容性好，可實現藥物體內靶向遞送，具有延長藥物作用時間、 增加藥物的體內外穩定性、降低藥物毒性，增強藥理作用等諸多優點。目前，脂質體按照結構分為三類①單室脂質體(single unilamellar vesicles, SUV):按照粒徑大小又分為小單室脂質體(小于200nm)和大單室脂質體(粒徑在200 IOOOnm)ο ②多室脂質體的粒徑(multilamellar vesicles, MLV):粒徑在 Ιμπι 至 5μπι 之間。③多囊脂質體的粒徑(multivesicular liposomes, MVL)粒徑在5 μ m以上。理想的脂質體需要達到以下要求(1)脂質體形態圓整且不聚集，可以通過制備方法有效控制粒徑范圍，實現藥物的緩控釋作用和靶向遞送的目的；(2)脂質體穩定性高， 可以長期放置；(3)脂質體具有較高的包封率和載藥量，尤其對于熱穩定性差藥物或水溶性生物大分子藥物；(4)脂質體容易實現滅菌或無菌操作。多室脂質體和多囊脂質體由于粒徑大且粒徑分布不均勻，很少作為藥物微粒載體應用。目前，作為藥物載體的脂質體以單室脂質體結構最為常用。但液體核心結構的單室脂質體容易聚集，穩定性差，且容納藥物的能力有限，對于水溶性藥物，尤其是熱穩定性差或生物大分子藥物，傳統的單室脂質體存在載藥量低、包封率低和突釋效應明顯等缺點。脂質體的制備方法有多種，如機械分散法、薄膜分散法、逆相蒸發法、復乳法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、表面活性劑處理法、鈣融合法、載體沉積法等。載體沉積法又稱為前體脂質體法，系將極細的水溶性支持劑(氯化鈉、甘露醇、山梨醇、果糖、乳糖、葡萄糖)的微粉或藥粉分散于脂質體膜材的有機溶媒中，采用改進的旋轉蒸發器在減壓和攪拌的條件下回收有機溶媒，將脂質吸附于水溶性載體上，即得粉體狀態的前體脂質體。載體沉積法應用氯化鈉、甘露醇等水溶性小分子化合物為核心骨架，但這些化合物需要預先微粉化處理，再利用脂質體膜材包裹這些微粉化的核心骨架。即使如此， 在減壓回收有機溶媒操作過程中，避免不了作為脂質體核心骨架的微粉粒子之間的不規則聚集，因此前體脂質體遇水轉變為脂質體微粒時，粒徑分布范圍大，且形態極不圓整，可以形成包括單室脂質體、多室脂質體和多囊脂質體各種結構形式。此外，由于脂質體內部的小分子水溶性載體溶解后產生高滲透壓，因此應用氯化鈉、甘露醇等水溶性小分子化合物為核心骨架的前體脂質體存在水溶性藥物快速滲漏、突釋效應明顯等問題。冷凍干燥方法容易實現無菌化操作，得到的脂質體凍干粉穩定性好，但已有報道的冷凍干燥方法制備的脂質體凍干粉遇水形成脂質體溶液時，粒徑通常增大數倍，形態不圓整且容易聚集，無法有效控制粒徑范圍，存在安全性問題。
發明專利“一種制備脂質體的新方法”(申請號03111470. 9)公開了一種制備脂質體的新方法，其權利要求項1為“一種制備脂質體的新方法，其特征在于a.制備一單相溶液，其溶質為(1)用于形成脂質體的脂質、待包封的物質，或( 用于形成脂質體的脂質、待包封的物質和水溶性載體，所述水溶性載體為蔗糖、乳糖或甘露醇；其溶劑由叔丁醇和水組成，叔丁醇和水的體積比大于1: 3。b.冷凍單相溶液除去溶媒，得到凍干產物，將得到的凍干產物水化得到脂質體”。發明專利“一種制備脂質體的新方法”(申請號03111470. 9)雖然利用了叔丁醇為溶液的冷凍干燥工藝，但明確強調(1)水溶性載體為蔗糖、乳糖或甘露醇；( 冷凍干燥前必須得到單相溶液體系。該發明專利制備得到的脂質體凍干粉溶解于水中形成的脂質體粒徑雖然小，但結構依然是傳統的單室脂質體，因為蔗糖、乳糖或甘露醇等小分子水溶性物質容易透過脂質膜溶解到溶出介質中。此外該發明制備的脂質體由于內部的小分子水溶性載體溶解后產生高滲透壓，因此存在水溶性藥物快速滲漏的問題，并且該發明藥物包封率較低(實施例5為21%，實施例6為40%)，無法滿足中國藥典2010版對于脂質體包封率(大于 85%)的要求。雖然脂質體制備方法很多，但由于脂質體的表面電荷、雙層膜流動性等特點，導致包載水溶性藥物的脂質體存在諸多問題(1)脂質體粒徑無法有效控制，脂質體微粒易聚集；(2)藥物載藥量低、包封率低，容易滲漏，突釋效應明顯；(3)脂質體制備方法操作復雜， 需要加熱、除鹽、高壓均質等劇烈操作步驟，無法適用于熱穩定性差藥物；(4)無法有效的包載生物大分子藥物；(5)無法實現無菌操作。
發明內容
本發明要解決的技術問題是針對現有的脂質體結構的不足之處，提供一種高分子親水膠體為核心的脂質體一膠核脂質體，膠核脂質體具有高分子親水膠體為核心和脂質雙分子層為殼膜的結構，水溶性藥物分散于高分子親水膠體核心中，膠核脂質體的凍干粉溶解于水中形成的脂質體粒徑小，分散均勻且不聚集、穩定性高、藥物包封率高。此外，發明人探索出一種膠核脂質體的制備方法。明膠等高分子親水膠體溶液對于水溶性藥物具有較好的吸納能力，但很難長期保存；W/0型微乳溶液分散度大，但內水相載藥量低；固體分散體具有很好的固態分散體系，但需要大量的載體，且存在老化現象；冷凍干燥工藝得到的膠核脂質體穩定性最高，但冷凍干燥后的膠核脂質體凍干品溶解于水后形成的膠核脂質體粒徑增大且容易聚集。發明人經過大量實驗，創新性地將“膠體技術”、 “乳劑技術”、“微乳技術”、“固體分散體技術”、“冷凍干燥工藝”有機融合成一體，集成了膠體和乳劑的高載藥量、微乳和固體分散體技術的高分散性、冷凍干燥工藝的高穩定性等特點， 探索出膠核脂質體的制備方法，克服傳統脂質體包載水溶性藥物存在的載藥量低、藥物包封率低、突釋效應明顯等問題，并且提高了冷凍干燥效率，縮短了冷凍干燥周期。本發明的膠核脂質體制備方法的關鍵技術組合為①制備高分子親水膠體溶液的水相，用于容納水溶性藥物；②制備含脂質材料、乳化劑和凍干支持劑的叔丁醇油相；③水相轉入油相中形成W/0型乳劑(由于高分子親水膠體溶液作為內水相，因此不可能與叔丁醇的外油相形成單相溶液體系)；④超聲分散W/0型乳劑形成W/0型微乳溶液；⑤超低溫速凍處理，使W/0型微乳溶液形成叔丁醇為分散基質的固體分散體；⑥固體分散體冷凍干燥形成凍干粉。以水蛭素為例，實驗組按照質量配比計算，將1份高分子親水膠體材料溶解在10 份水中，加入5份水蛭素，混勻形成水相；將5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氫化蓖麻油和100 份泊洛沙姆溶解在200份叔丁醇中，形成油相；將含有水溶性藥物的水相分散到油相中，混勻，連續超聲(60kHZ)處理aiiin形成W/0型乳液，采用液氮超低溫速凍成固體，冷凍干燥周期為25h，形成水蛭素膠核脂質體凍干粉。發明人設置了對照試驗進行觀察，對照試驗組如下
對照試驗組1(不加高分子親水膠體材料):按照質量配比計算，將5份水蛭素溶解在10 份水中形成水相；將5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氫化蓖麻油和100份泊洛沙姆溶解在200 份叔丁醇中，形成油相；將含有水溶性藥物的水相分散到油相中，混勻，連續超聲(60kHZ) 處理aiiin形成W/0型乳液，采用液氮超低溫速凍成固體，冷凍干燥周期為25h，形成水蛭素膠核脂質體凍干粉。對照試驗組2 (不經超聲處理):按照質量配比計算，將1份高分子親水膠體材料溶解在10份水中，加入5份水蛭素，混勻形成水相；將5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氫化蓖麻油和100份泊洛沙姆溶解在200份叔丁醇中，形成油相；將含有水溶性藥物的水相分散到油相中，混勻，采用液氮超低溫速凍成固體，冷凍干燥周期為25h，形成水蛭素膠核脂質體凍干粉。對照試驗組3 (不經過超低溫速凍處理):按照質量配比計算，將1份高分子親水膠體材料溶解在10份水中，加入5份水蛭素，混勻形成水相；將5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氫化蓖麻油和100份泊洛沙姆溶解在200份叔丁醇中，形成油相；將含有水溶性藥物的水相分散到油相中，混勻，連續超聲(60kHZ)處理aiiin形成W/0型乳液，放置于_20攝氏度冰箱中冷凍8小時形成固體，冷凍干燥周期為25h，形成水蛭素膠核脂質體凍干粉。結果發現，按照質量配比計算，將1份實驗組的水蛭素膠核脂質體凍干粉溶解于 50份水中，形成的膠核脂質體粒徑較小(<1 μ m)，微觀形態圓整，分散均勻，放置M小時沒有明顯變化。采用葡聚糖凝膠分離法結合HPLC測定包封率，實驗組的水蛭素膠核脂質體包封率達到98. 6%，并且放置30min后測定，水蛭素膠核脂質體沒有突釋效應。對照試驗組1 (不加高分子親水膠體材料)，按照質量配比計算，將1份的水蛭素脂質體凍干粉溶解于50份水中，形成的脂質體初始粒徑較小，但聚集速度快，容易形成大粒子(>2 μ m)，初始包封率達到88. 2%，但藥物滲漏嚴重，存在明顯突釋效應。對照試驗組2 (不經超聲處理)，按照質量配比計算，將1份的水蛭素脂質體凍干粉溶解于50份水中，形成的脂質體粒徑較大(>2 μ m)，形狀不圓整，且分布不均勻，脂質體包封率為85. 2%ο對照試驗組3 (不經過超低溫速凍處理)，按照質量配比計算，將1份的水蛭素脂質體凍干粉溶解于50份水中，形成的脂質體粒徑大(>2 μ m)，形狀不圓整，脂質體包封率為
82. 6%ο實驗結果表明，本發明的膠核脂質體制備方法的關鍵技術組合缺一不可。此外，發明人重復以上“實驗組”方法，但冷凍干燥周期縮短為16h，結果發現膠核脂質體凍干粉與實驗組的膠核脂質體凍干粉疏松度一致，凍干粉中殘余的微量水含量一致，膠核脂質體凍干粉溶解于水后膠核脂質體粒徑、微觀形態和包封率等結果與實驗組完
5全一致。表明本發明的膠核脂質體制備方法可以有效提高冷凍干燥效率，縮短了冷凍干燥周期。實驗中還發現，傳統脂質體需要大量磷脂材料才能包載一定的藥物，藥物磷脂的質量比例最低不少于1:5，而本發明的膠核脂質體中藥物磷脂的質量比例可以達到1:1甚至更低，節約了磷脂的用量，顯著提高脂質體的載藥能力。此外，本發明制備工藝簡便，不需要采用PH梯度或硫酸銨梯度法即可制備高包封率載藥脂質體，省去除鹽和高壓均質等復雜的操作過程，容易實現無菌化操作。因此，發明人通過大量實驗，得到一種穩定的載藥脂質體凍干粉，其組分包含高分子親水膠體材料、水溶性藥物、脂質材料、乳化劑和凍干支持劑，這些組分的選擇要求如下。高分子親水膠體材料的要求安全性高，體內可吸收或生物可降解，在水溶液中能夠形成穩定的膠體網絡骨架，可以吸納不同類型的藥物分子，保護藥物分子結構和立體構象在成乳和冷凍干燥過程中不受影響。水溶性藥物的要求量小效強，具有一定的水溶性，有確定的活性中心或特定的構象，但存在體內外的穩定性差、穿透生物膜能力差、體內缺乏靶向性、容易和制劑其他組分發生配伍反應、液體藥物需要轉變為固體狀態等問題，需要利用微粒載體保護結構、提高穿透生物膜能力、提高靶向性、與其他組分隔離、改善性狀等。脂質材料的要求同時具有親水鏈和疏水鏈，具有很好的生物相容性，臨界膠團濃度低，水溶液中能夠形成脂質體或脂質囊泡結構。乳化劑的要求具有很好的生物相容性，安全性高，與藥物之間無反應，有利于脂質體或脂質囊泡的成型。凍干支持劑的要求水中溶解度高，玻璃化轉變溫度(Tg)較低，凍干后含水量低 (<3%)，具有很好的溶出速率，形成的溶液澄清度好。滿足以上要求的各組分，可以通過“制備載藥膠體一形成W/0型乳劑一形成W/0型微乳一形成叔丁醇為基質的固體分散體一冷凍干燥”創新組合的制備工藝，得到脂質體凍干粉。該脂質體凍干粉在水性介質中溶解后形成含有高分子親水膠體為核心和脂質雙分子層為殼膜結構的膠核脂質體的溶液，水溶性藥物分散于高分子親水膠體核心中。該膠核脂質體集成了膠體和乳劑的高載藥量、微乳和固體分散體技術的高分散性、冷凍干燥工藝的高穩定性等特點，避免藥物受熱，實現了包載藥物的脂質體的高度分散和粒徑均勻性。由此，一種膠核脂質體凍干粉，該脂質體凍干粉中各組分質量配比為1份高分子親水膠體材料，0. 05-50份水溶性藥物，0. 5-50份脂質材料，2-100份乳化劑，10-1000份凍干支持劑，脂質體凍干粉中水分含量低于3%，臨用前按照質量配比計算，1份脂質體凍干粉溶解于5-100份的水性介質中形成含有高分子親水膠體為核心和脂質雙分子層為殼膜結構的脂質體的溶液，水溶性藥物分散于高分子親水膠體核心中。上述的脂質體凍干粉中各組分質量配比優選范圍為1份高分子親水膠體材料， 0. 5-10份水溶性藥物，1-10份脂質材料，10-60份乳化劑，100-400份凍干支持劑，脂質體凍干粉中水分含量低于3%，臨用前按照質量配比計算，1份脂質體凍干粉溶解于20-50份的水性介質中形成含有高分子親水膠體為核心和脂質雙分子層為殼膜結構的脂質體的溶液，水溶性藥物分散于高分子親水膠體核心中。上述的高分子親水膠體材料是指藥學公知的藥用高分子親水膠體材料，包括明膠、膠原、白蛋白、阿拉伯膠、西黃芪膠、瓜木耳膠、結冷膠、淀粉及其衍生物、環糊精及其衍生物、海藻糖、海藻酸及其鈉鹽、葡聚糖及其衍生物、殼聚糖及其衍生物、纖維素及其衍生物。上述的高分子親水膠體材料是指明膠、膠原或白蛋白。上述的水溶性藥物是指單獨應用、配合增溶劑應用或在特定pH值范圍內藥物溶解度大于0. 01mg/ml的生物大分子藥物、化學藥物或中藥有效提取物。上述的生物大分子藥物是指蛋白質、多肽、多糖、酶、輔酶、核酸結構的藥物及它們的生物降解或衍生產物，包括生長因子、激素、刺激因子、抗體、疫苗、干擾素、白介素、動植物來源的多糖。上述的水溶性藥物包括胰島素、水蛭素、血管內皮生長抑制因子、神經營養因子、 細胞生長因子、干擾素、熒光蛋白、奧沙利鉬，卡鉬，奈達鉬、阿柔比星、多柔比星、表柔比星、 米托蒽醌、博萊霉素、平陽霉素、絲裂霉素、厄洛替尼、吉非替尼、伊馬替尼、達沙替尼、阿立必利、阿扎司瓊、昂丹司瓊、氯磷酸、美司鈉、利妥昔單抗、替伊莫單抗、西妥昔單抗、貝伐單抗、阿那曲唑，氨魯米特，福美坦，依西美坦、替尼泊苷、依托泊苷，噴司他丁、伊立替康、白消安、氮芥、卡莫斯丁、羅莫司丁、高三尖杉酯堿、門冬酰胺酶、培門冬酶、阿糖胞苷、氟脲苷、吉西他濱、西地尼布、阿倫膦酸鈉、瑞舒伐他汀、抗凝血酶、卡莫氟、多西他賽、長春地辛、長春新堿、紫杉醇、索拉菲尼、地西他濱、丙卡巴胼、尼莫地平、硝苯地平、尼群地平、非洛地平、 雙氯滅痛、埃索美拉唑、萘普生、非諾貝特、鹽酸曲馬多、嗎啡、硝酸甘油、可樂定、單硝酸異山梨醇酯、鹽酸噻氯匹啶、乙酰唑胺、對乙酰氨基酚、氨茶堿、阿米替林、氨芐西林、羥氨芐青霉素、阿司匹林、貝克拉胺、咖啡因、西咪替丁、苯巴比妥、樟腦、氯霉素、氯非那敏、鹽酸氯丙嗪、氯貝特、氯唑西林、磷酸可待因、地西泮、右美沙芬、布洛芬、鹽酸苯海拉明、鹽酸多西環素、依普拉酮、芬氟拉明、檸檬酸亞鐵、富馬酸亞鐵、硫酸亞鐵、東莨菪堿、偽麻黃堿、小檗堿、黃連素、噴哚美辛、左旋多巴、碳酸鋰、鹽酸甲氯芬酯、甲喹酮、甲基安非太明、乙酰螺旋霉素、呋喃妥因、去甲替林、那可丁、鹽酸帕努拉明、非那西丁、保泰松、鹽酸苯福明、鹽酸苯丙胺醇、潑尼松龍、普魯卡因胺、溴丙胺太林、鹽酸右丙氧芬、普萘洛爾、硫酸奎尼爾、硫利達嗪、氟喹啉、利福霉素、葡萄糖酸鋅、磺胺托嘧啶、四環素、鏈霉素、慶大霉素、丁苯酞、 三氟美嗪、阿利馬嗪、維生素、核磁造影劑、同位素、Actos, Advair, AmbienCR, Arzerra, Aricept、Arimidex、Atryn> Avapro> Avastin、Brilinta、Bucindolol、Caduet> Campostar> Celevrex、CellCept、CoregCR、Coumadin、Combivir、Enzastaurin、EPO> Erbitux> Femara> Flomax、Gemzar、Gleevec、Herceptin、hGH、Iressa、Imitrex、Kalbitor、Keppra、Levaquin、 Lipitor> Mirapex、NovoSeven、Plavix、Prevacid、Prozac、Protonix、Remicade> Removab> Rituxan> Seroquel>Simponi、Stelara>Suboxone>Tarceva>Tamoxifen>Tarceva>Taxotere> Telaprevir、Tegreto1、Topamax、Tykerb、TPA、Valtrex、Xalatan、Xeloda、ZiageruZyprexa0上述的脂質材料是指藥學公知的磷脂和類脂材料，包括天然卵磷脂、氫化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物、飽和脂肪酸甘油酯、硬脂酸、棕櫚酸、甾體。上述的凍干支持劑包括藥學公知的冷凍干燥支持劑，包括甘露醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇、聚維酮和泊洛沙姆。上述的凍干支持劑是指聚乙二醇、泊洛沙姆，包括聚乙二醇1500、聚乙二醇 2000、聚乙二醇4000、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407。
按照質量百分比計算，上述的凍干支持劑泊洛沙姆占凍干支持劑總量的5%_100%。上述的乳化劑是指藥學公認的非離子型乳化劑，包括聚氧乙烯氫化蓖麻油、吐溫 80、司盤80、芐澤、賣澤。上述的乳化劑是指聚氧乙烯氫化蓖麻油、吐溫80。上述的膠核脂質體凍干粉中還包含0. 01-10份質量配比計算的藥學公認的助乳化劑，包括乙二醇、丙二醇、甘油、油酸、甘油酯。上述的脂質體凍干粉中的助乳化劑質量配比為0. 1-5份，助乳化劑為油酸、丙二上述的脂質體凍干粉中還包含0. 01-10份質量配比計算的藥學公認的抗氧化劑， 包括維生素E、維生素C、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、二丁基苯酚、叔丁基對羥基茴香醚。上述的脂質體凍干粉中的抗氧化劑的質量配比為0. 1-5份，所述的抗氧化劑是指
維生素E、維生素C、叔丁基對羥基茴香醚。上述的脂質體凍干粉中還包含0. 1-5份質量配比計算的藥學公認的穩定劑，包括人血清白蛋白、酒石酸、琥珀酸、膽酸、脫氧膽酸、富馬酸、枸櫞酸、棕櫚酸、人體必需氨基酸。上述的脂質體凍干粉中的穩定劑是指人血清白蛋白、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、枸櫞酸、棕櫚酸、精氨酸、甘氨酸。上述的水性介質是指應用無菌蒸餾水為基礎配制的溶液或輸液。上述脂質體凍干粉溶解于水性介質中形成的脂質體粒徑在微米或納米范圍內。上述脂質體凍干粉溶解于水性介質中形成的脂質體粒徑在100nm-650nm范圍內。上述的脂質體凍干粉溶解于水性介質中形成的脂質體粒徑在100 nm _450歷范圍內。上述的脂質體凍干粉是單獨使用或組合到制劑處方中應用，通過注射、口服、黏膜、皮膚、創面、腔道途徑給藥，發揮治療、診斷、預防、免疫、清洗、消毒、美容、保健的應用。上述的脂質體凍干粉通過選用不同類型的磷脂或類脂材料組合，制成PEG修飾的長循環膠核脂質體凍干粉、PH敏感膠核脂質體凍干粉、溫度敏感膠核脂質體凍干粉、表面帶正電荷的膠核脂質體凍干粉，以優化胃腸道內定位釋藥或體內血循環靶向釋藥作用。上述脂質體凍干粉的制備方法，按照質量配比計算，將1份高分子親水膠體材料溶解在10-200份水中，加入0. 05-50份水溶性藥物，混勻形成水相；將0. 5_50份脂質材料、 2-100份乳化劑和10-1000份凍干支持劑溶解在50-4000份叔丁醇中，形成油相；將水相分散到油相中形成W/0型乳液，超聲、高速攪拌或高壓均質處理形成W/0型微乳溶液，采用超低溫速凍工藝形成固體分散體，冷凍干燥除去叔丁醇，形成脂質體凍干粉，脂質體凍干粉中水分含量低于3%，臨用前按照質量配比計算，1份脂質體凍干粉溶解于5-100份的水性介質中，形成含有高分子親水膠體為核心和脂質雙分子層為殼膜結構的脂質體的溶液。上述的脂質體的制備方法中，按照質量配比計算，將1份高分子親水膠體材料溶解在50-200份水中，加入0. 5-10份水溶性藥物，混勻形成水相；將1-10份脂質材料、10-60 份乳化劑和100-400份凍干支持劑溶解在500-2000份叔丁醇中，形成油相；將水相分散到油相中形成W/0型乳液，超聲處理形成W/0型微乳溶液，采用超低溫速凍工藝形成固體分散體，冷凍干燥除去叔丁醇，形成脂質體凍干粉，脂質體凍干粉中水分含量低于3%，臨用前按照質量配比計算，1份脂質體凍干粉溶解于5-100份的水性介質中，形成含有高分子親水膠體為核心和脂質雙分子層為殼膜結構的脂質體的溶液。上述的水相或油相中還可以加入0. 01-10份質量配比計算的藥學公知的助乳化劑，用于減少乳化劑用量，所述助乳化劑包括乙二醇、丙二醇、甘油、油酸、甘油酯。上述的助乳化劑質量配比范圍為0. 1-5份，所述助乳化劑是指丙二醇、油酸。上述的水相或油相中還可以加入0. 01-10份質量配比計算的藥學公知的pH調節劑，用于提高藥物在水相中的溶解度，所述PH調節劑包括有機酸、有機堿、無機酸、無機堿、 強酸弱堿鹽、強堿弱酸鹽、多元酸的鹽。上述的水相或油相中還可以加入0. 01-10份質量配比計算的藥學公知的抗氧化劑，用于增加載藥脂質體在儲存過程中的穩定性，所述的抗氧化劑包括維生素E、維生素C、 亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、二丁基苯酚、叔丁基對羥基茴香醚。上述的脂質體凍干粉中的抗氧化劑的質量配比為0. 1-5份，所述的抗氧化劑是指維生素E、維生素C、叔丁基對羥基茴香醚。上述的水相中還可以加入0. 1-5份質量配比計算的藥學公知的穩定劑，用于增加藥物在制備和儲存過程中的穩定性，所述的穩定劑包括人血清白蛋白、酒石酸、琥珀酸、膽酸、脫氧膽酸、富馬酸、枸櫞酸、棕櫚酸、人體必需氨基酸。上述的脂質體凍干粉中的穩定劑是指人血清白蛋白、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、枸櫞酸、棕櫚酸、精氨酸、甘氨酸。通過調節叔丁醇和凍干支持劑的質量配比可以控制最終制備得到的脂質體的粒徑，叔丁醇和凍干支持劑的質量配比越高，制備得到的脂質體粒徑越小。上述的超低溫速凍是指在_35°C以下的環境中迅速冷凍的工藝，包括在液氮、二氧化碳干冰、超低溫乙醇或超低溫冰箱的環境中迅速冷凍的處理工藝。上述超聲的頻率范圍為2(Γ100 KHz，超聲模式為連續超聲模式或脈沖超聲模式， 超聲時間30s-3min。上述超聲的頻率范圍為5(Γ90 KHz，超聲模式為連續超聲模式或脈沖超聲模式，超聲時間30s-2min。上述的高分子親水膠體材料是指藥學公知的藥用高分子親水膠體材料，包括明膠、膠原、白蛋白、阿拉伯膠、西黃芪膠、瓜木耳膠、結冷膠、淀粉及其衍生物、環糊精及其衍生物、海藻糖、海藻酸及其鈉鹽、葡聚糖及其衍生物、殼聚糖及其衍生物、纖維素及其衍生物。上述的高分子親水膠體材料是指明膠、膠原或白蛋白。上述的水溶性藥物是指單獨應用、配合增溶劑應用或在特定pH值范圍內藥物溶解度大于0. 01mg/ml的化學藥物、生物大分子藥物或中藥有效提取物。上述的生物大分子藥物是指蛋白質、多肽、多糖、酶、輔酶、核酸結構的藥物及它們的生物降解或衍生產物，包括生長因子、激素、刺激因子、抗體、疫苗、干擾素、白介素、動植物來源的多糖。上述的水溶性藥物包括胰島素、水蛭素、血管內皮生長抑制因子、神經營養因子、 細胞生長因子、干擾素、熒光蛋白、奧沙利鉬，卡鉬，奈達鉬、阿柔比星、多柔比星、表柔比星、米托蒽醌、博萊霉素、平陽霉素、絲裂霉素、厄洛替尼、吉非替尼、伊馬替尼、達沙替尼、阿立必利、阿扎司瓊、昂丹司瓊、氯磷酸、美司鈉、利妥昔單抗、替伊莫單抗、西妥昔單抗、貝伐單抗、阿那曲唑，氨魯米特，福美坦，依西美坦、替尼泊苷、依托泊苷，噴司他丁、伊立替康、白消安、氮芥、卡莫斯丁、羅莫司丁、高三尖杉酯堿、門冬酰胺酶、培門冬酶、阿糖胞苷、氟脲苷、吉西他濱、西地尼布、阿倫膦酸鈉、瑞舒伐他汀、抗凝血酶、卡莫氟、多西他賽、長春地辛、長春新堿、紫杉醇、索拉菲尼、地西他濱、丙卡巴胼、尼莫地平、硝苯地平、尼群地平、非洛地平、 雙氯滅痛、埃索美拉唑、萘普生、非諾貝特、鹽酸曲馬多、嗎啡、硝酸甘油、可樂定、單硝酸異山梨醇酯、鹽酸噻氯匹啶、乙酰唑胺、對乙酰氨基酚、氨茶堿、阿米替林、氨芐西林、羥氨芐青霉素、阿司匹林、貝克拉胺、咖啡因、西咪替丁、苯巴比妥、樟腦、氯霉素、氯非那敏、鹽酸氯丙嗪、氯貝特、氯唑西林、磷酸可待因、地西泮、右美沙芬、布洛芬、鹽酸苯海拉明、鹽酸多西環素、依普拉酮、芬氟拉明、檸檬酸亞鐵、富馬酸亞鐵、硫酸亞鐵、東莨菪堿、偽麻黃堿、小檗堿、黃連素、吲哚美辛、左旋多巴、碳酸鋰、鹽酸甲氯芬酯、甲喹酮、甲基安非太明、乙酰螺旋霉素、呋喃妥因、去甲替林、那可丁、鹽酸帕努拉明、非那西丁、保泰松、鹽酸苯福明、鹽酸苯丙胺醇、潑尼松龍、普魯卡因胺、溴丙胺太林、鹽酸右丙氧芬、普萘洛爾、硫酸奎尼爾、硫利達嗪、氟喹啉、利福霉素、葡萄糖酸鋅、磺胺托嘧啶、四環素、鏈霉素、慶大霉素、丁苯酞、 三氟美嗪、阿利馬嗪、維生素、核磁造影劑、同位素、Actos, Advair, AmbienCR, Arzerra, Aricept、Arimidex、Atryn> Avapro> Avastin、Brilinta、Bucindolol、Caduet> Campostar> Celevrex、CellCept、CoregCR、Coumadin、Combivir、Enzastaurin、EPO> Erbitux> Femara> Flomax、Gemzar、Gleevec、Herceptin、hGH、Iressa、Imitrex、Kalbitor、Keppra、Levaquin、 Lipitor> Mirapex、NovoSeven、Plavix、Prevacid、Prozac、Protonix、Remicade> Removab> Rituxan> Seroquel>Simponi、Stelara>Suboxone>Tarceva>Tamoxifen>Tarceva>Taxotere> Telaprevir、Tegreto1、Topamax、Tykerb、TPA、Valtrex、Xalatan、XeIoda、ZiageruZyprexa0上述的脂質材料是指藥學公知的磷脂和類脂材料，包括天然卵磷脂、氫化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物、飽和脂肪酸甘油酯、硬脂酸、棕櫚酸、甾體。上述的脂質材料可以是不同類型的磷脂或類脂材料的組合，最終制成PEG修飾的長循環脂質體凍干粉、PH敏感脂質體凍干粉、溫度敏感脂質體凍干粉、表面帶正電荷的脂質體凍干粉，以優化胃腸道內定位釋藥或體內血循環靶向釋藥作用。上述的凍干支持劑包括藥學公知的冷凍干燥支持劑，包括甘露醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇、聚維酮和泊洛沙姆。上述的凍干支持劑按照質量百分比計算，泊洛沙姆占凍干支持劑總量的5%_100%。上述的乳化劑是指藥學公認的非離子型乳化劑，包括聚氧乙烯氫化蓖麻油、吐溫 80、司盤80、芐澤、賣澤。上述的乳化劑是指聚氧乙烯氫化蓖麻油、吐溫80。上述的脂質體凍干粉臨用前加入水性介質，形成的脂質體粒徑在微米或納米范圍內。上述的脂質體凍干粉臨用前加入水性介質，形成的脂質體粒徑在100nm-650nm范圍內。上述的脂質體凍干粉臨用前加入水性介質，形成的脂質體粒徑在100nm-450nm范圍內。
上述的脂質體凍干粉是單獨使用或組合到制劑處方中應用，通過注射、口服、黏膜、皮膚、創面、腔道途徑給藥，發揮治療、診斷、預防、免疫、清洗、消毒、美容、保健的應用。本發明的膠核脂質體及其制備方法，具有下述優點(1)該脂質體具有高分子親水膠體為核心和脂質雙分子層為殼膜的結構，水溶性藥物分散于高分子親水膠體核心中， 具有載藥量大、磷脂用量小、藥物穩定性強、藥物包封率高并具有長效釋藥作用特點；(2) 該脂質體制備工藝創新性地將“膠體技術”、“乳劑技術”、“微乳技術”、“固體分散體技術”、 “冷凍干燥工藝”有機融合成一體，集成了膠體和乳劑的高載藥量、微乳和固體分散體技術的高分散性、冷凍干燥工藝的高穩定性等特點，避免藥物受熱，實現了包載藥物的脂質體的高度分散和粒徑均勻性；(3)該脂質體制備工藝有效提高了傳統脂質體冷凍干燥制備工藝的效率，減少凍干操作時間。(4)該脂質體的藥物磷脂的質量比例可以達到1:1甚至更低， 節約了磷脂的用量，顯著提高脂質體的載藥能力；(5)該脂質體制備工藝簡便，不需要采用 PH梯度或硫酸銨梯度法即可制備高包封率脂質體，省去透析除鹽等復雜的操作過程，容易實現無菌化操作；(6)可以通過調節叔丁醇和泊洛沙姆的用量控制膠核脂質體粒徑；(7)該脂質體的粒徑在納米范圍內，并可以有效控制粒徑，有利于藥物穿透皮膚、黏膜或體內生物膜屏障，適用范圍廣，可應用于多種劑型，滿足注射、口服、黏膜、皮膚、創面、腔道的局部或全身治療的需要。(8)該脂質體可作為緩控釋給藥體系或靶向遞送給藥系統，也可以用于掩蓋苦味或臭味、與其他組分隔離、減少藥物刺激作用、液體藥物轉換為固體形式等制劑目的。注玻璃化轉變溫度(Tg)指的是當溶液濃度達到最大凍結濃縮狀態發生玻璃化轉變時的溫度。“玻璃化”是指物質以非晶態形式存在的一種黏度極大且流動性差的狀態。
圖1 本發明的脂質體結構示意圖(A 膠核脂質體；B 長循環的膠核脂質體) 圖2 本發明的脂質體制備流程示意3 阿霉素脂質體體外釋藥曲線圖4 阿霉素溫度敏感膠核脂質體體外釋藥曲線
具體實施方式
現結合下列實例來進一步描述本發明。實施例1 水蛭素膠核脂質體
大部分蛋白和多肽類藥物水溶性好，但不耐熱，體內易降解。本實施例以水蛭素為對象，制備水蛭素膠核脂質體，水蛭素膠核脂質體組成如表1。表1水蛭素膠核脂質體組分配比
權利要求
1.一種膠核脂質體凍干粉，其特征在于該脂質體凍干粉中各組分質量配比為1份高分子親水膠體材料，0. 05-50份水溶性藥物，0. 5-50份脂質材料，2-100份乳化劑，10-1000 份凍干支持劑，脂質體凍干粉中水分含量低于3%。
2.如權利要求1所述的膠核脂質體凍干粉，其特征在于所述的高分子親水膠體材料是指藥學公知的藥用高分子親水膠體材料，包括明膠、膠原、白蛋白、阿拉伯膠、西黃芪膠、 瓜木耳膠、結冷膠、淀粉及其衍生物、環糊精及其衍生物、海藻糖、海藻酸及其鈉鹽、葡聚糖及其衍生物、殼聚糖及其衍生物、纖維素及其衍生物。
3.如權利要求1所述的膠核脂質體凍干粉，其特征在于所述的水溶性藥物是指單獨應用、配合增溶劑應用或在特定PH值范圍內藥物溶解度大于0.01mg/ml的生物大分子藥物、化學藥物或中藥有效提取物。
4.如權利要求1所述的膠核脂質體凍干粉，其特征在于所述的脂質材料是指藥學公知的磷脂和類脂材料，包括天然卵磷脂、氫化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物、飽和脂肪酸甘油酯、硬脂酸、棕櫚酸、甾體。
5.如權利要求1所述的膠核脂質體凍干粉，其特征在于所述的凍干支持劑包括藥學公知的冷凍干燥支持劑，包括甘露醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇、聚維酮和泊洛沙姆。
6.如權利要求5所述的膠核脂質體凍干粉，其特征在于所述的凍干支持劑按照質量百分比計算，泊洛沙姆占凍干支持劑總量的5%-100%。
7.如權利要求1所述的膠核脂質體凍干粉，其特征在于所述的乳化劑是指藥學公認的非離子型乳化劑，包括聚氧乙烯氫化蓖麻油、吐溫80、司盤80、芐澤、賣澤。
8.如權利要求1所述的膠核脂質體凍干粉，其特征在于所述的脂質體凍干粉中還包含0. 01-10份質量配比計算的藥學公認的助乳化劑，包括乙二醇、丙二醇、甘油、油酸、甘油
9.如權利要求1所述的膠核脂質體凍干粉，其特征在于所述的脂質體凍干粉中還包含0. 01-10份質量配比計算的藥學公認的抗氧化劑，包括維生素E、維生素C、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、二丁基苯酚、叔丁基對羥基茴香醚。
10.一種如權利要求1、所述的膠核脂質體凍干粉的制備方法，其特征在于按照質量配比計算，將1份高分子親水膠體材料溶解在10-200份水中，加入0. 05-50份水溶性藥物，混勻形成水相；將0. 5-50份脂質材料、2-100份乳化劑和10-1000份凍干支持劑溶解在 50-4000份叔丁醇中，形成油相；將水相分散到油相中形成W/0型乳液，超聲、高速攪拌或高壓均質處理形成W/0型微乳溶液，采用超低溫速凍工藝形成固體分散體，冷凍干燥除去叔丁醇，形成脂質體凍干粉，該脂質體凍干粉中水分含量低于3%，臨用前按照質量配比計算，1 份脂質體凍干粉溶解于5-100份的水性介質中，形成含有高分子親水膠體為核心和脂質雙分子層為殼膜結構的脂質體的溶液。
全文摘要
本發明涉及一種膠核脂質體及其制備方法，該脂質體具有高分子親水膠體為核心和脂質雙分子層為殼膜的結構，水溶性藥物分散于親水膠體核心中，該脂質體采用微乳技術、超低溫速凍技術等多種技術結合冷凍干燥工藝制備，該脂質體粒徑大小可以控制，無需高壓均質操作，該脂質體載藥量大、磷脂用量小、藥物包封率高，并且該脂質體粒徑小且不聚集，藥物釋放緩慢。該脂質體適用包載水溶性藥物，尤其適用于熱穩定性差的藥物和蛋白、多肽、多糖等大分子藥物，可作為緩控釋給藥體系或靶向遞送給藥系統，也可以用于掩蓋苦味或臭味、與其他組分隔離、減少藥物刺激作用、液體藥物轉換為固體形式等制劑目的，應用于注射、口服、黏膜、皮膚、創面、腔道的局部或全身治療的多種劑型。
文檔編號A61K47/38GK102552182SQ201210022488
公開日2012年7月11日 申請日期2012年2月2日 優先權日2012年2月2日
發明者不公告發明人 申請人:魯翠濤