干組合物傷口敷料及粘合劑的制作方法

專利名稱：干組合物傷口敷料及粘合劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及包含可再吸收的或不可再吸收的材料和/或蛋白的傷口敷料、裝置、密封劑以及粘合劑，并且具體地，但并不排外地，涉及用于傷口組織治療、可植入裝置的涂層或粘附到組織上的可植入裝置的此類裝置以及試劑。
背景技術：
外科傷口閉合目前通過縫合和釘合實現，其通過將組織牽引在一起而促進愈合。然而，它們經常不能產生防止流血以及流體泄漏所必需的完全的密封。因此，存在對防止外科手術過程中及手術后的流血以及泄漏，包括經常沿釘合線和縫合線發生的泄漏的裝置和方法極大的、未滿足的醫學上的需要。這種裝置和方法需要作為縫合或釘合的輔助以實現在周圍血管重建、硬腦膜重建、胸部、心血管、肺部、神經和胃腸道手術過程中的止血或其他流體停滯。除外科手術之外，對出血/流血(hemorrhage或bleeding)的控制是急救和現場創傷護理的一個關鍵步驟。廣泛的產品已經被建議作為用于急救和現場創傷護理中的止血和流體郁積的解決方案。然而，現存的產品包含有限的或部分的解決方案，這些解決方案經常具有顯著的缺點。作為非最佳的止血產品的一個實例:目前沒有任何可商購的裝置包括已經能夠獨立地誘導用于活躍的內部流血的止血的交聯明膠網絡，即便加入凝血酶。完成了一項研究，比較了 FloSeal明 膠基質(生物外科手術公司，加利福尼亞州，弗里蒙特(BioSurgery, Fremont, CA))與浸泡在活性凝血酶溶液中的吸收性明膠海綿(GelFoam)明膠基質的止血能力。5分鐘之后，在超過2/3的患者中，增強的止血裝置皆不能夠阻止流動特征的出血。搏動性動脈出血比流動性出血活躍得多得多并且這些凝血酶-浸泡的基質將幾乎肯定地表現出問題(韋弗等人，《血管外科年報》(FA Weaver et al.(2002).Ann VascSurgl6(3):286-93))ο在任何情況下，在創傷和外科護理中仍然存在明顯的缺陷，原因在于沒有新穎的、有效止血的現場敷料或外科敷料，這些敷料可商購，可以控制出血和流體漏泄而無顯著的副作用。類似地，在外科護理中仍然存在明顯的缺陷，原因在于沒有可商購的、無毒的密封齊IJ，該密封劑能夠抵擋活躍地流血并且能夠密封傷口位置使得沒有血液體液漏泄出。發明概述存在對無毒的粘合劑材料的需要，并且具有該粘合劑材料將是有用的，該粘合劑材料可以廣泛地應用，包括但不限于外科的應用，出血的控制(hemorrhage)以及來自傷口的流血(bleeding)的控制。還存在對無毒的粘合劑材料的需要，并且具有該粘合劑材料將是有用的，該粘合劑材料可以用作止血繃帶的一部分。還存在對無毒的粘合劑材料的需要，并且具有該粘合劑材料將是有用的，該粘合劑材料可以用作外科用密封劑并且可以作為一種干組合物獲得。在至少一些實施例中，通過提供包含可交聯蛋白的粘合劑材料以及誘導該可交聯蛋白的交聯的無毒材料，本發明克服了背景技術的缺點。優選地，該可交聯蛋白包括明膠以及如在此所述的任何明膠變體或變體蛋白。任選地并且優選地，該無毒的材料包括可任選地包含微生物的轉谷氨酰胺酶(mTG)的轉谷氨酰胺酶(TG)。根據本發明的一些實施例，該粘合劑材料被提供到優選地適配用作止血繃帶的一種繃帶中。根據其他的實施例，將它作為優選地適配用作外科密封劑的一種密封劑來提供。當通過轉谷氨酰胺酶起作用時，明膠，蛋白膠原的一種變性形式，經受快速地交聯以形成一種活力凝膠(vibrant gel)。2007年12月17日提交的、與本申請共同擁有的PCT申請號并且具有至少一些與本申請共同的發明人的PCT/US07/25726，描述了基于這個機構的一種粘合劑材料的一些實施例。同樣地，如在PCT申請號PCT/US07/25726中深入討論的，多種纖維蛋白_凝血酶產品已經被建議用于類似在此建議的外科與內科適應癥(即，控制出血和密封泄漏)。然而，本發明描述的實施例避免了固有產品，像纖維蛋白與凝血酶(直接源于血液或模擬血液衍生的蛋白)的顯著缺點。此類缺點包括高費用、不足的穩定性、病毒風險以及不足的可獲得性。不同于凝結的 纖維蛋白網，該明膠-TG網具有一個另外的益處在于可以使用特定的蛋白酶將其特異性地溶解，否則無生理學反應(陳，《生物大分子》(T.Chen, Biomacromolecules.2003Nov_Dec; 4 (6): 1558-63))。因此，明膠-mTG止血敷料或密封劑在改進纖維蛋白-凝血酶止血敷料或密封劑的性能的同時，還可以將其如所希望的去除而無并發癥。在至少一些包含基于止血裝置的明膠-TG的實施例中，除用于控制外科手術過程中的活躍的動脈流血、血管內導管插入之后的流血或損傷或外科手術過程中的其他體液的漏泄之外，本發明具有作為用于創傷護理的現場止血敷料的巨大潛力。如在此提及的，術語“裝置”可以包含任何一種或多種適合于在醫療護理中，例如，在身體創傷、源自損傷和/或外科手術過程中的流血和/或體液漏泄的治療中使用的材料。例如，該裝置可以包括繃帶、貼劑、敷料、石膏、粘合劑或彈性傷口覆蓋物以及類似物中的一種或多種。如在此描述的，術語“貼劑”可任選地涉及任何類型的加強和/或固定裝置，以及任選地涉及用于傷口閉合和/或處理的裝置，而不限于的幾何學、形狀以及任何適合的面積。這些組合物、治療方法以及裝置克服了該背景技術的缺點，其中一些方面在下面進行描述但并不希望被限定到一個封閉的列表中。先前嘗試的解決方案使用許多改性和未改性的明膠網的形式以用于輕微的至適度的止血。然而，尚缺乏原位形成強交聯的明膠網(可以控制活躍的流血性動脈出血或其他顯著的體液泄露)的方法。在一些示范性實施例中，提供了一種方法和/或裝置，例如，像通過增加明膠基質的機械強度和/或通過使其適用于控制高壓動脈流血和/或其他體液漏泄，從而在體內形成強的明膠網，該方法和/或裝置可以包含明膠-TG交聯。根據一些示范性實施例，在此描述的這些方法和/或裝置可以包含明膠鏈與，例如，組織ECM (額外的細胞基質)的內源膠原的原位交聯,從而產生強的、用于流體的止血屏障。在一些示范性實施例中，例如，通過應用處于凍干形式的明膠和TG，在此描述的這些方法和/或裝置可以包含有效地影響止血和/或流體郁積，例如，其中該明膠和TG可以通過血液或其他體液復水。在此使用的，術語“凍干”可任選地涉及任何形式的干燥，包括但不限于真空干燥。任選地并且優選地，在低于該組合物的蛋白基質的溶膠凝膠轉變溫度轉變點(物理的凝膠化點)的溫度下進行干燥。在一些示范性實施例中，在此描述的這些方法和/或裝置可以包含處于凍干形式的明膠-TG混合物，其特征為，例如，具有增加的儲存期限。在一些示范性實施例中，在此描述的這些方法和/或裝置可以包含處于分層的、凍干形式的明膠和TG，從而，例如，提供更迅速的重建，依照一些實施例，該重建可能有助于高壓流體流動環境。在一些示范性實施例中，在此描述的這些方法和/或裝置可以包含基于明膠交聯技術的干組合物，該干組合物可以模仿天然的血凝串聯蛋白質鏈和/或可以用于進行止血、閉合和/或密封傷口和/或切口、加強釘合和/或縫合線、支撐天然組織、和/或用于任何其他適合的內科的和/或外科的應用。在一些示范性實施例中，該組合物可以包括具有酶交聯劑的明膠或膠原基質,優選例如整合到該基質中的微生物轉谷氨酰胺酶。在一些示范性實施例中，在此描述的這些方法和/或裝置可以包含干明膠-酶組合物，例如，其中該組合物可以形成一種貼劑。在一些示范性實施例中，在此描述的這些方法和/或裝置可以包含添加到該基本的明膠-TG混合物上的機械背襯層，例如像通過阻礙該流體和/或允許該明膠-TG更長時間地交聯和/或阻塞流體漏泄，從而增加該混合物的止血和/或流體控制能力。在一些示范性實施例中，在此描述的這些方法和/或裝置可以包含干明膠-酶組合物，例如，該組合物可以包含一種合并到該明膠基質中的可降解的和/或不可降解的裝置，以使得當該組合物與流體接觸時，該裝置可以粘附到組織的表面上。在一些示范性實施例中，在此描述的這些方法和/或裝置可以包含干明膠-酶組合物，該組合物可以包含一種可降解的和/或不可降解的裝置，其中該裝置可以是，例如，一種用于加強受損害組織的外科用網片。根據本發明的一些優選的實施例，在應用到傷口位置之前或在凍干之前，該明膠-mTG混合物可以是部分交聯的。在另一個實施例中，非交聯的明膠或mTG可以與部分交聯的明膠-mTG —起存在。在另一個實施例中，非交聯的明膠與mTG —起存在。雖然目前在外科手術場所使用多種可吸收的外科止血劑，沒有現存的可商購的產品強大到足以提供控制嚴重出血或其他生物流體的大量流動所必需的機械和生物學的支持。此外，沒有現存的可商購的產品可以提供足夠強地緊緊地將可植入的醫療裝置粘附在組織部位上的黏著強度。盡管明膠已經被用于多種傷口敷料，單獨的明膠網絡不提供用于控制活躍的流血所必需的機械特性。用于止血的明 膠敷料的實例披露于US專利申請書20110045034與20110021964中，其中該明膠敷料吸收流體并且添加一種生物活性成分(優選凝血酶)，從而進一步促進止血。如由這些參考文件所教授的，該明膠基質本身不足以控制敏銳地流血并且該生物活性成分對該明膠敷料不具有任何機械效應，以使得該明膠基質不對止血、密封和/或傷口閉合提供任何結構或機械支撐。
根據本發明的一些實施例，提供了一種治療傷口組織的方法，該方法包括向該組織施用一種包含膠原或膠原衍生物以及一種無毒的交聯劑的組合物。任選地，該無毒的交聯劑可以包括一種或多種酶和/或酶組合物。在一些示范性實施例中，該一種或多種酶可以包括轉谷氨酰胺酶或轉谷氨酰胺酶組合物。優選地，明膠與轉谷氨酰胺酶的重量比在從大約50:1至大約500:1的范圍內。更優選地，該轉谷氨酰胺酶組合物具有大約至少15U/mg的比活性水平(酶單位/蛋白含量)。最優選地，該轉谷氨酰胺酶具有至少大約25U/mg的比活性水平。任選地并且優選地，在明膠-轉谷氨酰胺酶組合物中的轉谷氨酰胺酶的活動水平是從明膠的大約25U/g至大約1000U/g。更優選地，該活性水平是從明膠的大約50U/g至大約 400U/g。任選地，該轉谷氨酰胺酶組合物可以包括除衍生自血液的因子XIII外的、衍生自植物、重組動物和/或微生物的轉谷氨酰胺酶。優選地，該組合物具有從大約5至大約8的范圍內的pH。任選地，該膠原和/或膠原-衍生物可以生產自動物來源、重組來源或其組合。優選地，該動物來源選自魚和哺乳動物組成的組。更優選地，該哺乳動物選自豬和牛組成的組。任選地，該膠原-衍生物是明膠。任選地，該明膠是A型(酸處理的)或B型(堿處理的)。更優選地，該明膠包含高分子量的明膠。任選地，傷口組織選自下組，該組由以下各項組成:外科手術切割的組織，外科手術修復的組織，以及受到創傷的組織。任選地，該方法可以進一步包括減輕流血和/或來自該組織的其他體液的漏泄。任選地，體液選自下組，其該組由以下各項組成:腦脊髓液、腸液、空氣、膽汁以及尿液。優選地，該方法進一步包括誘導止血或該組織中的其他漏泄體液的郁積。 任選地,該傷口流血或漏泄另一種體液并且治療該傷口組織包括向該傷口部位施用該組合物，從而促進明膠鏈與該組織細胞外基質的內源性膠原之間地就地交聯，以產生對流體漏泄或流血的屏障。任選地，該方法進一步包括形成一種粘合膠。任選地，應用該組合物包括:將該明膠與該轉谷氨酰胺酶進行混合以形成一種混合物；并且向該組織施用該混合物。根據本發明的其他實施例，提供了一種在哺乳動物的傷口中用于誘導止血的方法，該方法包括向該傷口施用一種包含明膠與轉谷氨酰胺酶的組合物。根據本發明的又另外的實施例，提供了一種用于在受損的血管部位誘導密封基質形成的方法，該方法包括向該傷口施用一種包含明膠與轉谷氨酰胺酶的組合物。根據本發明的又另外的實施例，提供了一種包含明膠與轉谷氨酰胺酶的組合的組合物，其中選擇一個該明膠的量與該轉谷氨酰胺酶的量的比率，從而誘導哺乳動物中的密封膠的形成。根據本發明的又另外的實 施例，提供了一種包含明膠與無毒的交聯劑的組合的組合物，其中選擇一個該明膠的量與該無毒的交聯劑的量的比率，使其足以減少哺乳動物傷口中的流血。優選地，該無毒的交聯劑包括轉谷氨酰胺酶。更優選地，明膠與轉谷氨酰胺酶的重量比在從大約50:1至大約500:1的范圍內。甚至更優選地，該轉谷氨酰胺酶組合物具有大約至少15U/mg的比活性水平(酶單位/蛋白含量)。最優選地，該轉谷氨酰胺酶具有至少大約25U/gm的比活性水平。任選地，在明膠-轉谷氨酰胺酶組合物中的轉谷氨酰胺酶的活動水平是從明膠的大約25U/g至大約1000U/g。優選地，該活性是從明膠的大約50U/g至大約400U/g。任選地，該轉谷氨酰胺酶包括除衍生自血液的因子XIII之外的、衍生自植物、重組體、動物或微生物的轉谷氨酰胺酶。優選地，該組合物進一步包括一種穩定劑或填充劑。還優選地，該組合物具有從大約5至大約8的范圍內的一個pH。任選地，明膠生產自動物來源、重組體來源或其組合。優選地，該動物來源選自魚和哺乳動物構成的組。更優選地，該哺乳動物選自豬和牛構成的組。最優選地，該明膠包括豬皮或豬骨或其組合。還最優選地，該明膠是A型(酸處理的)或B型(堿處理的)。還最優選地，該明膠包含高分子量的明膠。任選地，該明膠具有至少大約250的勃魯姆。優選地，該魚包括冷水種的魚。任選地，使用細菌、酵母、動物、昆蟲或植物系統或其他類型的細胞培養來生產重組明膠。任選地，將明膠進行純化以去除鹽。任選地，明膠具有調節了的、專門定制的或預定的特征的至少一個。根據本發明的又另外的實施例，提供了一種止血的或體液密封劑，該密封劑包含明膠與無毒的交聯劑的一個組合。任選`地，該無毒的交聯劑包括轉谷氨酰胺酶。優選地，該組合包括聚集的明膠與轉谷氨酰胺酶。如在此描述的一種方法或組合物，其中該轉谷氨酰胺酶可任選地萃取自茂原鏈輪絲菌、達西輪枝鏈霉菌(Streptoverticillium Baldaccii)、吸水鏈霉菌菌株或大腸桿菌的一種或多種。根據本發明的又另外的實施例，提供了一種誘導止血和/或密封傷口組織的方法，該方法包括向該組織施用一種包含交聯蛋白底物以及無毒的交聯劑的組合物。任選地，該無毒的交聯劑包括轉谷氨酰胺酶。任選地，該組合物進一步包括一種另外的止血劑。優選地，該另外的止血劑進一步包括白蛋白、膠原、纖維蛋白、凝血酶、殼聚糖、硫酸鐵、或其他金屬硫酸鹽類的一種或多種。根據本發明的其他實施例，提供了一種止血或密封敷料，該敷料包括:(i) 一個第一明膠層；(ii)鄰近該第一明膠層的一個轉谷氨酰胺酶層；以及(iii)鄰近該轉谷氨酰胺酶層的一個第二明膠層，其中該轉谷氨酰胺酶層與該第一明膠層和/或該第二明膠層是同延的或非同延的。根據本發明的其他實施例，提供了一種止血或密封敷料，該敷料包括:(i) 一個可再吸收的或不可再吸收的材料層；(ii)鄰近該材料層的一個第一明膠層；(iii)鄰近該第一明膠層的一個轉谷氨酰胺酶層；以及(iv)鄰近該轉谷氨酰胺酶層的一個第二明膠層，其中該轉谷氨酰胺酶層與該第一明膠層和/或該第二明膠層是同延的或非同延的。根據本發明的其他實施例，提供了一種止血或密封敷料，該敷料包括:(i) 一個明膠層；(ii)鄰近該明膠層的一個轉谷氨酰胺酶層；其中該轉谷氨酰胺酶層與該明膠層是同延的或非同延的。根據本發明的其他實施例，提供了一種止血或密封敷料，該敷料包括:(i) 一個可再吸收的或不可再吸收的材料層；(ii)鄰近該材料層的一個明膠層；(iii)鄰近該明膠層的一個轉谷氨酰胺酶層；其中該轉谷氨酰胺酶層與該明膠層是同延的或非同延的。根據本發明的其他實施例，提供了一種止血或密封敷料，該敷料包括:(i) 一個明膠層；(ii)鄰近該第一明膠層的一個可再吸收的或不可再吸收的材料層；(iii)鄰近該材料層的一個轉谷氨酰胺酶層；其中該轉谷氨酰胺酶層與該明膠層是同延的或非同延的。根據本發明的其他實施例，提供了一種止血或密封裝置，該裝置包括:(i) 一種可再吸收的或不可再吸收的基質；(ii)明膠；(iii)轉谷氨酰胺酶；其中該明膠與該轉谷氨酰胺酶被合并在該基質中。根據本發明的其他實施例，提供了一種止血或密封裝置，該裝置包括:(i) 一種可再吸收的明膠基質；(ii)轉谷氨酰胺酶；其中該轉谷氨酰胺酶被合并在該明膠基質中。根據本發明的其他實施例，提供了一種止血或密封裝置，該裝置包括:(i) 一種多孔的、可再吸收的或不可再吸收的基質；(ii)明膠；(iii)轉谷氨酰胺酶；其中該明膠與該轉谷氨酰胺酶被粘附到該基質上。根據一些示范性實 施例，在上文描述的該明膠層可任選地是泡沫的，例如，在干燥之前通過將該明膠溶液與壓縮空氣和/或其他氣體混合。在一些實施例中，該明膠泡沫可以處于5mg/cm3至100mg/cm3的密度范圍中并且優選地處于10mg/cm3至50mg/cm3的范圍中。任選地，該敷料或裝置進一步包括一種背襯材料。優選地，該背襯材料是可再吸收的。更優選地，該背襯材料是交聯的膠原或膠原-衍生物。根據本發明的其他實施例，提供了一種用于插入人類或低等哺乳動物體內的醫學裝置，該裝置包括如在此描述的止血或密封劑或組合物。優選地，該裝置包含一種血管導管。根據本發明的其他實施例，提供了一種用于人類或低等哺乳動物體內的受損組織的加強的外科手術粘合劑網片，該網片包括一種涂覆有如在此描述的止血或密封劑或組合物的可再吸收的或不可再吸收的可植入的網。根據本發明的一些實施例，提供了一種貼劑，該貼劑包括一種可植入的外科用網片、一種可交聯的蛋白基質以及一種與所述基質接觸的、用于交聯所述可交聯的蛋白的蛋白交聯酶，其中所述基質被合并在、分層到或環繞所述網片，其條件是所述酶不是凝血酶。任選地，所述可交聯蛋白包括明膠。任選地，所述可交聯蛋白基質是多孔的。任選地所述多孔的基質包括泡沫。任選地所述酶存在于與所述基質同延或非同延的一個層上。任選地所述酶被均勻地合并到整個基質中或存在于距離該基質表面至少0.5mm的深度處的基質中。任選地所述酶存在于所述基質的至少Imm的深度處。任選地所述酶存在于所述基質的高達20mm的深度處。根據本發明的至少一些實施例，提供了一種敷料，該敷料包括一個可交聯的蛋白層以及一種用于交聯所述可交聯的蛋白的交聯酶，其中所述酶存在于所述蛋白層的至少0.5mm的深度處并且其中所述酶是一種非血液衍生的酶。任選地所述酶存在于所述蛋白層的至少Imm的深度處。任選地所述酶存在于所述蛋白層的高達20_的深度處。任選地所述蛋白包括明膠，其中所述蛋白層可任選地是泡沫的或多孔的。任選地，該貼劑或敷料進一步包括一個加強背襯層。根據本發明的至少一些實施例，提供了一種貼劑，該貼劑包括一個明膠層以及一個加強背襯層，其中所述明膠層包括明膠以及一種整合到載體中的酶，該載體選自下組，該組由以下項構成=HPC (羥丙基纖維素)、HPMC (羥丙基甲基纖維素)、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、乙基纖維素、PVP (聚乙烯基吡咯烷酮)、PVA (聚乙烯醇)、PEG (聚乙二醇)、PEI (聚乙烯亞胺)、淀粉、微晶纖維素、氧化纖維素。任選地所述明膠包括發泡的明膠。任選地所述發泡的明膠包括干燥的或凍干的發泡的明膠溶液。任選地所述酶存在于一個酶層中并且其中所述明膠被放置在以下位置的一個或多個中:所述貼劑或敷料之內、所述酶層之上、所述酶層之中、所述加強的背襯層之上、所述加強的背襯層之中或所述酶層與所述加強的背襯層之間。任選地所述明膠是發泡的明膠并且其中在發泡之前，該明膠溶液的濃度在0.1%與30%w/w之間。任選地在發泡之前，該明膠溶液的濃度在1%與20%w/w之間。任選地在發泡之前，該明膠溶液的濃度在5%與15%w/w之間。任選地所述可交聯蛋白存在于一種蛋白基質中并且其中所述基質具有從5mg/cm3至100mg/cm3范圍內的密度。任選地所述密度在從10mg/cm3至50mg/cm3的范圍內。

任選地根據一種方法生產所述發泡的明膠，該方法選自下組，該組由以下項構成:分批混合的過程、連續混合的過程、化學發泡的過程或文氏管發泡(Venturi foaming)的過程。任選地所述蛋白包括明膠并且其中所述酶包括轉谷氨酰胺酶(TG)。任選地該明膠被合并到具有所述轉谷氨酰胺酶的一種明膠基質中，以使得以下一項或多項發生:在整個制備過程中保留大部分酶活性；酶均勻地分布在該明膠基質表面上；和/或將酶嵌入該明膠基質的深處(梯度或均勻分布)。根據在干燥所述基質之前或干燥所述基質之后的一種或多種混合，任選地所述轉谷氨酰胺酶被合并到所述明膠基質中，任選地其中所述基質被干燥至包含不超過10%的水分含量。任選地所述基質的密度在5mg/cm3-100mg/cm3的范圍內，或轉谷氨酰胺酶以從0.05mg至2mg轉谷氨酰胺酶/cm3明膠基質的濃度存在。任選地該貼劑或敷料進一步包括一個加強的背襯層并且其中存在一種外科用網片，其中所述外科用網片位于以下一個或多個位置處:該加強層與該明膠基質之間；該明膠基質的中部；或該明膠基質的上部；或其組合。任選地該可交聯蛋白包括多個部分，并且其中超過50%的所述部分是非交聯的。任選地該貼劑或敷料進一步包括一個加強背襯層，其中所述加強背襯層包含一種可再吸收的材料。任選地所述可再吸收的材料選自下組，該組由以下項構成:纖維素，氧化纖維素，蛋白質性質的物質，如纖維蛋白、角蛋白、膠原和/或明膠，或一類碳水化合物物質，如藻酸鹽、殼多糖、纖維素、蛋白聚糖(例如，聚-N-乙酰葡糖胺)、乙醇酸聚合物、乳酸聚合物或乙醇酸/乳酸共聚物。任選地所述貼劑可以閉合具有至少200mmHg的爆破壓力的組織傷口。任選地該貼劑或敷料特征是一種網片并且被適配成用于其中網片可以粘附到器官表面、組織表面或腔上的地方的外科用網片固定。任選地該貼劑或敷料被適配成用于腹股溝、股骨、臍或切口的腹疝修復，或其他類型的外科用網片重建。任選地該貼劑或敷料被適配成與減壓釘合或縫合方法一起使用。任選地該貼劑或敷料被適配成與釘合、粘合或縫合一起使用，從而補充網片粘附。任選地，該貼劑或敷料進一步包括一種與所述貼劑整合的醫學裝置。任選地該貼劑或敷料被適配成用于任何大膈疝修復、用于直腸固定術(直腸脫出的)網片固定、用于脫出的陰道穹窿的重建、或用于其他骨盆底網加強手術(婦科方法)。任選地所述網片包含合成網片、生物網片或合成-生物網片組合的任一種。任選地該貼劑或敷料進一步包括一種另外的試劑，該試劑選自下組，該組由以下項構成:抗生素、抗凝齊 、類固醇、心血管藥、局部麻醉齊U、抗增殖的/抗腫瘤藥、抗病毒劑、細胞因子、集落刺激因子；促紅細胞生成素；抗真菌劑；抗寄生蟲劑；抗炎劑；麻醉劑、如布比卡因；鎮痛藥；防腐劑；以及荷爾蒙。任選地該貼劑或敷料進一步包括一種另外的試劑，該試劑選自下組，該組由以下項構成:維生素以及其他營養補充物；糖蛋白；纖連蛋白；肽與蛋白；碳水化合物(單一的和/或復合的)；蛋白聚糖；抗血管生成素；抗原類；類脂或脂質體；以及寡核苷酸(正義和/或反義DNA和/或RNA)。任選地所述細胞因子選自下組，該組由以下項構成:α-或β-或Y-干擾素、α-或β -腫瘤壞死因子以及白細胞介素。

任選地所述抗病毒劑選自下組，該組由以下項構成:更昔洛韋、疊氮胸苷、阿曼替尼(amantidine)、阿糖腺苷、瑞巴瑞尼(ribaravin)、三氟尿苷、阿昔洛韋、雙脫氧尿苷以及針對病毒組分或基因產物的抗體。任選地所述抗腫瘤藥選自下組，該組由以下項構成:5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉酚和/或多西他賽。任選地所述心血管藥選自下組，該組由以下項構成:鈣通道阻滯劑、血管擴張劑和血管收縮劑；化學引誘物。任選地所述類固醇選自下組，該組由以下項構成:地塞米松、前列腺環素的抑制齊U、前列腺素、白細胞三烯類和/或抑制炎癥的激肽。任選地所述抗凝劑選自下組，該組由以下項構成:激活蛋白C、肝素、前列腺環素(PGI2)、前列腺素、白細胞三烯類、抗轉谷氨酰胺酶II1、ADPase以及纖維酶原激活物。任選地所述抗生素選自下組，該組由以下項構成:四環素、環丙沙星、阿莫西林以及甲硝唑。任選地該貼劑或敷料進一步包含一種創傷愈合劑。任選地該貼劑或敷料進一步包含一種止血劑。根據本發明的至少一些實施例，提供了一種生產貼劑或敷料的方法，該方法包括:生產一種可交聯的蛋白基質，該基質包含一種可交聯的蛋白；將一種酶的組合物沉淀到所述蛋白基質的至少0.5mm的深度處，其中所述酶的組合物包含一種能夠交聯所述可交聯蛋白的酶；由此生產該貼劑或敷料。任選地，所述可交聯蛋白包括處于明膠溶液形式的明膠，包括將所述明膠溶液在混合器中以一定的速率混合以形成一種發泡的溶液，干燥所述發泡的溶液以形成一種干溶液并且合并所述干溶液與所述酶。任選地，所述混合所述明膠溶液包括將所述明膠溶液在混合器中以一定的混合速率以及氣壓與壓縮的空氣混合，以便于發泡該溶液；其中所述方法進一步包括將該發泡的明膠溶液凍干以形成明膠溶液的凍干層。任選地所述速率是從100RPM至10，000RPM。任選地所述速率是從1000RPM至6000RPM。任選地所述速率是從0.1cm3/秒至10，000cm3/秒每發泡體積。任選地所述可交聯蛋白包括處于明膠溶液形式的明膠，包括將所述明膠溶液與一種化學發泡劑混合以便于發泡該溶液；其中所述方法進一步包括干燥該發泡的明膠溶液至干以獲得明膠溶液的干燥層。任選地所述化學發泡劑包括碳酸氫鈉并且其中該明膠溶液與該碳酸氫鈉的混合物具有低于7的pH。任選地，所述可交聯蛋白包括處于明膠溶液形式的明膠，包括通過具有多個小孔的試管以一定的速率及壓力對所述明膠溶液施加壓力以便于發泡該溶液；其中所述方法進一步包括干燥該發泡的明膠溶液以形成明膠溶液的干燥層。任選地該方法進一步包括產生一個明膠層:通過混合明膠溶液與所述酶以形成一種發泡的的明膠溶液，所述酶包括轉谷氨酰胺酶；其中所述方法進一步包括將該發泡的明膠溶液凍干以形成一種凍干的發泡的明膠溶液，并且將所述凍干的發泡的明膠溶液添加到所述貼劑或敷料中。任選地在所述混合之前或所述混合過程中，將所述轉谷氨酰胺酶添加到所述明膠溶液中。任選地在混合過程中通過連續流動將所述轉谷氨酰胺酶添加到所述明膠溶液中。任選地該方法進一步包括在進行凍干之前，冷卻所述發泡的明膠溶液。任選地該方法進一步包括發泡明膠溶液以形成一種發泡的明膠溶液；干燥該發泡的明膠溶液以形成所述干燥的發泡的明膠溶液；并且以溶液形式將所述轉谷氨酰胺酶添加到所述干燥的發泡的明膠溶液中以形成一種包含酶的泡沫。任選地所述轉谷氨酰胺酶到所述干燥的溶液包括以下的一個或多個:將一種酶溶液噴霧到干明膠基質表面上；通過注射針或注射針基質將一種酶溶液注射到該明膠基質中；將干明膠基質沉入到一種包含酶的溶劑混合物中；和/或將包含酶的溶劑混合物分配到干明膠基質上。任選地所述方法進一步包括干燥所述包含酶的泡沫。任選地所述干燥所述包含酶的泡沫包括以下一項或多項:空氣干燥、真空干燥、凍干和/或熱干燥。任選地所述酶包括轉谷氨酰胺酶并且所述轉谷氨酰胺酶包括任何類型的鈣依賴型的或不依賴型的轉谷氨酰胺酶(mTG)。任選地，所述轉谷氨酰胺酶包括微生物轉谷氨酰胺酶。任選地干燥發生在高達30C的溫度下。任選地所述干燥發生在高達20C的溫度下。任選地所述干燥發生在從OC至20C的多個溫度下。任選地該貼劑或敷料包含多個明膠層并且其中任選地所述明膠層的每一個具有不同的明膠濃度百分數。 任選地至少一個明膠層包含從大約l%w/w至大約15%w/w的明膠百分數。任選地至少一個明膠層包含從大約2.5%w/w至大約10%w/w的明膠百分數。任選地至少一個明膠層包含至少大約5%w/w的明膠百分數。任選地至少一個明膠層包含一種潤滑劑。任選地所述潤滑劑包括甘油。任選地所述甘油以從0.1%至10%的量存在。任選地所述甘油以從2%至6%的量存在。如在此描述的，貼劑或敷料用于治療慢性傷口的用途。任選地所述慢性傷口包括糖尿病患者的皮膚潰瘍根據本發明的至少一些實施例，提供了一種治療對其有需要的患者的慢性傷口的方法，該方法包括向所述慢性傷口上粘附根據以上權利要求的任一項所述的貼劑或敷料。任選地所述慢性傷口包括糖尿病患者的皮膚潰瘍。根據本發明的至少一些實施例，提供了一種止血敷料、組織粘合劑或傷口閉合組合物，該組合物包含一種可交聯的多孔蛋白基質以及一種誘導該可交聯蛋白交聯的、非血液衍生的酶，其中基質密度處于5mg/cm3-100mg/cm3的范圍內。任選地所述密度在40mg/cm3-70mg/cm3的一個范圍內。任選地該貼劑或敷料具有小于30%的總水分含量，小于20%的總水分含量或小于10%的總水分含量。任選地酶與基質的比率是從0.05mg/cm3酶/cm3至5mg/cm3酶/cm3基質。任選地所述比率是0.5mg/cm3酶/cm3至2.5mg/cm3酶/cm3基質。任選地該溶液包含一種乳液或懸浮液。任選地該貼劑或敷料進一步包括一個加強背襯層，其中所述加強背襯層包含一種非可再吸收的材料。

任選地所述非可再吸收的材料選自下組，該組由以下項構成:硅酮、膠乳、聚氨酯、聚丙烯、聚乙烯、硅橡膠、聚對苯二甲酸乙二酯(PET)、滌綸、針織滌綸、絨滌綸、聚乙二醇(polyglacin)、尼龍、聚氯乙烯合成硅橡膠、PMMA[聚-(甲基丙烯酸甲酯)、聚烯烴(polyofefin)、纖維素、聚乙烯基]醇(PVA)、聚(甲基丙烯酸羥基乙酯(PHEMA)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯腈)(PAN)、氟乙烯-共六-氟丙烯(FEP)、特氟隆(PTFE)、Co—Cr合金、其共聚物及其混合物。任選地提供所述可交聯蛋白作為一種進一步包含加強的背襯層的蛋白基質，其中所述加強的背襯層是機械改性的以便于增加蛋白基質與背襯層界面的表面積。任選地所述機械改性包括以下一項或多項:蝕刻、雕刻、切割、紋刻(engraved)或紋織(textured)。根據至少一些實施例，提供了一種生產根據以上權利要求的任一項所述的貼劑或敷料的方法，其中該酶溶液或包含酶的溶劑溶液包括合并了一種或多種揮發性溶劑的溶液或懸浮液中的酶。任選地該揮發性溶劑包括以下一項或多項:乙酸乙酯、苯、二氯甲烷、丙酮、乙腈、氯仿、揮發性液態硅酮(六甲基二硅氧烷(HMDS)、八甲基環四硅氧烷、十甲基環戊硅氧烷、八甲基三硅氧烷)、揮發性的烷類(正己烷、異辛烷、辛烷、新戊烷)、揮發性的碳氟化合物(五氟丙烷、全氟庚烷、全氟甲基環己烷)、醇類(1-丙醇、2-丙醇、乙醇)及其混合物。任選地在合并到該貼劑或敷料中之前，將該酶包入膠囊。任選地將該酶裝入一種材料的膠囊中，該材料選自下組，該組由以下項構成:PLA、PGA、PLGA、k_角叉藻聚糖、脂質體、明膠、膠原、纖維蛋白原、白蛋白、聚乙二醇、聚乙烯醇、纖維素醚。
任選地將該酶通過一種技術包入膠囊，該技術選自下組，該組由以下項構成:振動噴嘴及噴霧干燥、鍋包衣、空氣懸浮包衣、離心擠出(共擠出)、物理-化學法(離子型凝膠或凝聚(coaceravation))、化學法(界面縮聚、界面交聯、原位聚合以及基質聚合)。任選地在合并到該貼劑或敷料中之前，對該酶進行化學改性。任選地通過暴露于電子束輻射下對該貼劑或敷料進行滅菌以達到10-6的無菌保證水平。任選地該放射劑量在10kGy_50kGy的范圍內。任選地該放射劑量在20kGy_40kGy的范圍內。任選地該貼劑或敷料進一步包括一種輻射防護劑，該輻射防護劑選自下組，該組由以下項構成:抗壞血酸鹽、苯甲醇、苯甲酸芐酯、叔丁對甲氧酚(BHA)、三氯叔丁醇、半胱氨酸、甘露醇、尼泊金甲酯、煙酰胺、苯酚、丙二醇、沒食子酸丙酯、對羥基苯甲酸丙酯、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、水楊酸鈉、硫代硫酸鈉、生育酚、海藻糖。任選地該貼劑或敷料進一步包括一種緩沖劑，該緩沖劑任選地選自下組，該組包括:乙酸鈉、HEPES、檸檬酸鈉、苯甲酸鈉。任選地該貼劑或敷料進一步包括一種或多種增塑劑和/或柔性增強劑，該增塑劑和/或柔性增強劑任選地選自下組，該組由以下項構成:甘油、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚山梨酯20、聚山梨酯80 ；任選地該貼劑或敷料進一步包括一種或多種發泡穩定劑，該發泡穩定劑任選地選自下組，該組由以下項構成:離子表面活性劑(即SDS)、羥基丙基甲基纖維素、透明質酸、甘氨酸、右旋糖酐。任選地，多種分離的、包含酶的蛋白基質片段一起形成一個單個的貼劑或敷料。任選地每個片段的直徑在0.1cm至IOcm的范圍內。任選地每個片段的直徑在lcm_5cm的范圍內。應理解的是上述總體說明以及以下詳細說明都僅是示例性且說明性的，并且旨在為如提出權利要求的本發明提供進一步解釋。除非以其他方式定義，在本文中使用的所有技術和科學術語對于本發明所屬的本領域普通技術人員的共同理解具有相同的意思。在此提到的所有專利、專利申請以及公開物通過引用結合在此。在此使用的，被認為與明膠層“非同延的”轉谷氨酰胺酶層是其中該轉谷氨酰胺酶的空間邊界在二維上小于一個或兩個明膠層的空間邊界的轉谷氨酰胺酶層，以使得獨立地，該轉谷氨酰胺酶層與僅該止血敷料的第一明膠層的大約5%至大約95%的表面積是同延的和/或與僅該止血敷料的第二明膠層的大約5%至大約95%的表面層是同延的。例如，該轉谷氨酰胺酶層可以獨立地與該第一和第二明膠層的每一個的大約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、或90%的表面積同延。與一個明膠層“同延的”轉谷氨酰胺酶層提供該明膠層的完全覆蓋并且與該明膠層的表面積的100%是同延的。一個轉谷氨酰胺酶層可以與該第一明膠層是非同延的并且仍與該第二明膠層是同延的，反之亦然，例如，通過使用具有不同總面積或形狀的明膠層。在此使用的“患者”是指對醫療護理和/或治療有需要的人類或動物個體。在此使用的“傷口 ”是指患者的任何組織的任何損傷，該損傷導致從循環系統失血或從它的生理學途徑的任何其他體液的損失。該組織可以是內部組織，如器官或血管；或外部組織，如皮膚。血液或體液的流失可以在內部，如來自斷裂的器官；或在外部，如來自撕裂。傷口可在軟組織，如器官；或在硬組織，如骨。損傷可由任何劑或來源引起，包括外傷性創傷、感染或外科干預。損傷可危及生命或不危及生命。在此使用的“可再吸收的材料”是指一種自發地和/或通過哺乳動物的身體分解為多種組分的材料，該材料以這樣一種方式被消耗或消除而不會顯著干擾傷口愈合和/或組織再生，并且不引起任何顯著的代謝紊亂。在此使用的“穩定性”是指一種確定活性和/或功能的材料的那些特征的保留。在此使用的“粘結劑”是指改進該止血敷料的一層對一個或多個不同層的粘附和/或給定層的這些組分對該層的其他組分的粘附的一種化合物或多種化合物的混合物。在此使用的“增溶劑”是指改進在(優選地)水溶劑中的一種或多種蛋白的溶解的一種化合物或多種化合物的混合物。在此使用的“填充劑”是指對該止血敷料的一個或多個層提供膨脹(bulk)和/或多孔性的一種化合物或多種化合物的混合物。在此使用的“脫模劑”是指使止血敷料易于從制造模型上去除的一種化合物或多種化合物的混合物。在此使用的“發泡劑”是指當在適合的條件下進行水合時產生氣體的一種化合物或多種化合物的混合物。“TG”是指任何類型的轉谷氨酰胺酶；“mTG”還可以是指微生物的轉谷氨酰胺酶和/或指任何類型的轉谷氨酰胺酶，取決于上下文背景(在下面特定的實驗性實例中，該術語是指微生物的轉谷氨酰胺酶)。術語“哺乳動物”，特別是對于治療方法和/或一種裝置和/或組合物的使用或施用而言，除非另外說明，是指人類與低等哺乳動物兩者。在此使用的，“大約”意思是加上或減去該指示值的約百分之十。本發明的其他特征以及優點通過以下詳細描述以及權利要求將會變得清楚。附圖簡要說明本文僅為示例，而參考附圖對本發明進行描述。現在具體詳細參考附圖，要強調的是，所示細節僅是為示例，并且為示例性討論本發明優選的實施例的目的，并且為了提供本發明的原理和概念方面用被認為最有用和最容易被理解的描述而展示。在這方面，沒有試圖以比本發明基本理解所必需的更具體地顯示本發明的結構細節，隨同附圖的說明致使本發明的若干形式如何在實踐中體現對于本領域那些技術人員來說是清楚的。在附圖中:

圖1顯示了對于實例1-6中的這些組合物的爆破壓力測試的結果；實例#1的結果根據基本的爆破壓力測試，而實例#2-6的結果根據先進的BP測試。圖2顯示了一個示例性的英斯特朗爆破壓力測試系統的示意的框圖。圖3顯示了在實例#4中使用的穿孔機。圖4顯示了實例#4的流程圖。圖5顯示了實例# 6的流程圖。圖6顯示了如實例#8的構造的一個示例性的繃帶。圖7顯示了如實例#3的構造的一個示例性的繃帶。
依照一些示范性實施例，圖8示范了一個如在實例#22中使用的parietene網片。圖9展示了了依照一些示范性實施例，如在實例#22中使用的、粘附到一個移動鉗上的parietene網片。圖10是展示了存在于表#8中的結果的一個說明性的圖。圖11是展示了存在于表#8中的結果的一個說明性的圖。圖12是示出了來自實例1-18的爆破測試結果的一個說明性的圖。圖13示出了蝕刻在一個硅酮板中的圖案。發明詳細說明在至少一些實施例中，本發明是一種粘合劑材料，該材料包含可交聯的蛋白以及誘導該可交聯的蛋白的交聯的無毒材料。優選地，該可交聯的蛋白包括明膠以及如在此所述的任何明膠變體或變體蛋白。任選地并且優選地，該無毒的材料包含一種酶，更優選地，該無毒的材料包含轉谷氨酰胺酶(TG)，TG可以任選地包括任何類型的鈣依賴型的或不依賴型的轉谷氨酰胺酶(mT G)，mTG可以是例如優選地是一種微生物的轉谷氨酰胺酶。根據本發明的一些實施例，該粘合劑材料被提供到優選地適配為用作止血繃帶的一種繃帶中。下面在分段標題下更加詳細地描述了本發明的不同實施例，這些分段標題只是為了清楚起見提供的并且不意在以任何方式進行限制。明膠以及轉谷氨酰胺酶根據本發明的優選實施例，提供了一種用于止血和組織密封的組合物，其中該交聯的材料包括轉谷氨酰胺酶并且該可交聯的蛋白包括明膠。根據一個優選實施例，轉谷氨酰胺酶以至少大約15U/mg的比活性水平存在。可以通過本領域的普通技術人員已知并且可獲得的任何方法獲得適合的明膠和轉谷氨酰胺酶。明膠可任選地包括任何類型的明膠，其包括本領域已知的蛋白質，優選包括但不限于通過部分水解動物組織和/或得自動物組織的膠原得到的明膠，該動物組織包括但不限于動物皮膚、結締組織(包括但不限于韌帶、軟骨及類似物)、鹿角或角及類似物、和/或骨、和/或魚鱗和/或骨或其他成分；和/或用細菌、酵母菌、動物、昆蟲或植物系統生成的重組明膠或任何類型的細胞培養物。根據本發明的優選實施例，動物來源的明膠優選包括哺乳動物來源的明膠，更優選包括豬皮、豬骨和牛骨或碎牛皮或任何其他豬或牛來源中的一種或多種。更優選，這種明膠包括豬明膠，因為其具有更低的過敏反應率。動物來源的明膠可任選地為A型(酸處理)或B型(堿處理)，盡管優選A型。優選地，動物來源的明膠包括在第一提取過程中得到的明膠，其一般在更低的溫度(50°C -60°C，雖然該準確溫度范圍不必是限制)下進行。此方式下生成的明膠將在250-300勃魯姆(bloom)的范圍內，并具有至少約95kDa_100kDa的高分子量。優選地，應用275-300勃魯姆的明膠。這種明膠制造商的非限制性實例是PB明膠公司(PB Gelatins)(比利時的特森德爾洛集團(Tessenderlo Group, Belgium))。根據本發明的一些實施例，動物來源的明膠任選地包括魚明膠。任選地，可采用任何類型的魚，優選冷水品種魚如鯉魚、鱈魚或梭魚或金槍魚。這種明膠的pH(在10%的溶液下測量)優選在4-6的范圍內。
冷水魚明膠在10°C下于水中形成溶液，因此所有冷水魚明膠均被認為是O勃魯姆。對于本發明，優選使用高分子量冷水魚明膠，更優選包含至少大約95kDa-100kDa的分子量。這等同于250-300勃魯姆的動物明膠的分子量。這種明膠的制造商的非限制性實例是諾蘭德產品公司(Norland Products)(新澤西州的貝蕊市(Cranbury, NJ))。在本發明的一個優選實施例中，純化該明膠以去除鹽類。這可以根據先前描述的技術來完成。一種此類技術包括在水中形成20%w/v的明膠溶液并且在攪拌下將其加熱至60° C。然后將該混合物靜置過夜。將獲得的凝膠經反復地更換去離子水進行滲析以消除鹽類，攪拌并加熱至50° C以分解該物理網絡。過濾最終的溶液并進行冷凍干燥。(克雷斯森齊、弗蘭斯倉格力、泰格賴恩提，《生物大分子》(Crescenzi V, Francescangeli A, TaglientiA.(2002).Biomacromolecules.3:1384 - 1391))。可替代地，可以通過大小排阻層析柱對該明膠進行脫鹽。根據本發明一些實施例，使用一致重組明膠。重組明膠目前是由纖維根公司(FibroGen)(加利福尼亞州，圣弗朗西斯科)商業生產的。目前優選的方法是使用一致重組酵母系統(巴斯德畢赤酵母)來表達類型1、α I人類序列膠原的特異性片段。在本發明的一個任選而優選的實施例中，重組明膠是全合成的分子，不包含來自人類或任何動物的污染組分。通過“合成的”意思是明膠優選地根據一種方法生產，該方法選自:化學合成、無細胞蛋白合成、細胞組織培養、任何類型的細菌、昆蟲或酵母培養，或在植物中。合成明膠的使用消除了與衍生自組織的材料相關聯的許多變化因素與缺點，包括刺激性的、不想要的免疫反應。例如，魚明膠展示了高致敏性并且動物明膠展示了低-適度的致敏性，而重組明膠具有零致敏性。在人類安全性研究中，沒有發現與重組明膠相關的不利事件。

產生重組明膠的方法以及它們的使用益處充分地描述于US專利6，413，742以及6,992, 172中，如在此充分闡述的，通過引用將其結合在此。可以生產高度(99%)純化的重組明膠。重組明膠生產允許具有至少一個確定的并且預定的特征的明膠的任選生產，該特征包括但不限于確定的分子量、Pi (等電點)、有保證的批次到批次的再現性以及定制該分子以匹配特定施用的能力。定制一個分子以匹配特定施用的一個實例已經被先前描述了，其中產生一種高度親水的明膠(沃特森等人，《蛋白質工程》(Werten MWT, et al.(2001).ProteinEngineering.14(6):447_454))。任選地以及優選地根據本發明的明膠包括一種具有至少一個調節的、定制的或預定的特征的明膠。 被用在該止血敷料中的明膠可以是一種明膠絡合物或任何明膠，或其衍生物或代謝產物，或根據單個程序或多個程序生產的一種明膠。例如，該明膠可任選地包括明膠類型A或明膠類型B，或其組合。該轉谷氨酰胺酶可任選地包括衍生自任何植物、動物或微生物的轉谷氨酰胺酶(優選地除衍生自血液的因子XIII外)。優選地，使用衍生自茂原鏈輪絲菌的微生物轉谷氨酰胺酶。該轉谷氨酰胺酶可任選地處于一種組合物中，該組合物包括至少一種其他物質，例如像穩定劑或填充劑。此類材料的非限制性實例包括麥芽糊精、水解了的脫脂牛奶蛋白或任何其他蛋白物質、氯化鈉、紅花子油、磷酸三鈉、酪蛋白酸鈉或乳糖，或其組合。
盡管對于粗轉谷氨酰胺酶的活性的最適pH是6.0，在pH5.0至pH8.0的范圍內其功能也具有高活性。因此，根據本發明的用于止血的組合物優選地具有從大約5至大約8的范圍內的pH。轉谷氨酰胺酶特征是具有負溫度系數。在該轉谷氨酰胺酶活性的溫度范圍內，在較高的溫度下花費較短的時間，并且在較低的溫度下開始起作用的時間量較長。下表顯示了在不同溫度下的不同反應時間，比較如該反應在50°C、pH6.0下在10分鐘之內發生的相同的反應階段:表1-轉谷氨酰胺酶的反應溫度溫度5 15 20 0C 30 °C 40 °C時間(分鐘)240105 70 35 20可商購的轉谷氨酰胺酶產品的非限制性實例包括由味之素公司(Ajinomoto C0.)(日本川崎(Kawasaki, Japan))生產的那些。來自這個公司的這樣一種產品的一個優選實例是Activa TG-TI (在歐洲=Activa WM)-成分:mTG以及麥芽糊精；活性:81U/g_135U/g的Activa0來自這個公司的適合的產品的其他非限制性實例包括Activa TG-FP (成份:水解了的脫脂牛奶蛋白、mTG ;活性:34U/g-65U/g 的 Activa TG-FP) ；Activa TG-GS (成份:氯化鈉、明膠、磷酸三鈉、麥芽糊精、mTG以及紅花子油(加工助劑);活性:47U/g-82U/g的ActivaTG-GS) ；Active TG-RM (在歐洲:Activa EB)-成份:酪蛋白鈉、麥芽糊精以及mTG ;活性:34U/g-65U/g 的 Activa ；Activa MP(成份:mTG、乳糖以及麥芽糊精；活性:78U/g_126U/g 的ActivaX可商購的轉谷氨酰胺酶產品的其他非限制性實例包括由佚名生物產品公司(Yiming Biological Products C0.)(中國江蘇)生產的那些。來自這個公司的這樣一種產品的一個優選實例是TG-B (成分 :1% mTG,99%共-蛋白(co-protein);活性:80U/g_130U/g的TG-B)。來自這個公司的適合的產品的其他非限制性實例包括TG-A (成分:0.5%mTG、
99.5% 共-蛋白；活性:40U/g-65U/g 的 TG-A)。對于兩個實例，優選的轉谷氨酰胺酶產品是具有最高比活性以及最簡單的共-成分的那些，因為認為它們(不希望受單一假設的限制)具有施用時最好的反應性以及對不希望的副作用的較低的可能。在另一個實施例中，轉谷氨酰胺酶可任選地提取自天蓋輪枝鏈霉菌(Streptoverticillium Baldaccii)或吸水鏈霉菌菌株，從而生產較低溫度(分別是大約37°C以及37°C _45°C)下已經顯示出最佳功能的酶變種(尼格斯，“衍生自天蓋輪枝鏈霉菌(Streptoverticillium Baldaccii)的一種新穎的微生物轉谷氨酰胺酶”，博士學位論文，澳大利亞昆士蘭，格里菲斯大學，分子生物和生物醫學科學學院(NegusSS.A Novel Microbial Transglutaminase Derived From StreptoverticilliumBaldacci1.PhD Thesis.School of Biomolecular and Biomedical Science.GriffithUniversity, Queensland, Australia)以及崔等，“來自一種新分離的吸水鏈霉菌的轉谷氨酸胺酶的純化及表征”(Cui L et al.Purification and characterization oftransglutaminase from a newly isolated Streptomyces hygroscopicus.2007:105 (2).p.612-618.))。希望在較低溫度下的較高比活性以在環境條件下完成該明膠的更快且更強的交聯。
根據一些實施例，能以上述組合物的任何形式使用轉谷氨酰胺酶，優選地包括任何可商購的包含轉谷氨酰胺酶的混合物。在另一個實施例中，上述任何轉谷氨酰胺酶混合物可任選地通過凝膠過濾、陽離子交換層析、中空纖維過濾、或切向流過濾的裝置進行純化，從而去除它們的載體蛋白和/或碳水化合物。這些方法中的一些先前已經描述過(貝爾托尼、芭芭尼、朱斯蒂、席德利，“轉谷氨酰胺酶反應與明膠:透視在組織工程中的應用”《生物工程快報》(Bertoni F, BarbaniN，Giusti P，Ciardelli G.Transglutaminase reactivity with gelatine!perspectiveapplications in tissue engineering.Biotechnol Lett (2006)28:697 - 702))(布羅德里克等，“基于明膠的支架的酶穩定性”《生物醫學材料研究雜志》(BiOderick EPj etal.Enzymatic Stabilization of Gelatin-Based Scaffolds J Biomed Mater Res72B:37-42，2005))。用于過濾的過濾器的孔徑大小優選地是大約lOkDA。優選地，該轉谷氨酰胺酶以包括陽離子交換層析法、疏水層析法以及超濾法的一種方法進行純化，這些方法中更加全面地描述于2009年6月18日提交的，與本申請共同擁有的PCT申請號并且具有至少一些與本申請共同的發明人的PCT/IB2009/052605中。無論如何，優選地在使用和/或生產根據本發明的組合物之前使用轉谷氨酰胺酶反應性測定轉谷氨酰胺酶的活性。這樣一種測定可任選地包括但不限于天冬氨酸異羥肟酸方法、奈斯勒氏測定(Nessler’ s Assay)、比色測定或任何其他轉谷氨酰胺酶活性的測定(參見，例如，福柯、科爾，“轉谷氨酰胺酶:通過動力學和抑制劑研究確定的活性位點的機械特性”，《生物化學與生物物理學學報》(Folk JE, Cole Pff.Transglutaminase:mechanisticfeatures of the active site as determined by kinetic and inhibitor studies.Biochim Biophys Acta.1966; 122:244-64);或者如在貝爾托尼、色色尼、朱斯蒂、席德利，“轉谷氨酰胺酶反應與明膠:透視在組織工程中的應用”《生物工程快報》(Bertoni F，Barbani N, Giusti P,Ciardelli G.Transglutaminase reactivitywith gelatine:perspective applications in tissue engineering.BiotechnolLett (2006) 28:697-702)中所述的奈斯勒測定)。—般情況下，用于在該止血組合物中使用的明膠和/或轉谷氨酰胺酶的純度和/或質量將是相關領域的普通技術人員已知的適當的純度，從而導致該蛋白的效力以及穩定性。在該止血或密封產品中還可以包含一種或多種補充物，例如，藥物如生長因子、多克隆以及單克隆抗體以及其他化合物。此類補充物的說明性實例包括但不限于:抗生素，如四環素與環丙沙星、阿莫西林以及甲硝唑；抗凝劑，如激活蛋白C、肝素、前列腺環素(pgi2)、前列腺素、白細胞三烯類、抗轉谷氨酰胺酶II1、ADPase以及纖維酶原激活物；類固醇，如地塞米松、前列腺環素的抑制劑、前列腺素、白細胞三烯類和/或抑制炎癥的激肽；心血管藥，如鈣通道阻滯劑、血管擴張劑和血管收縮劑；化學引誘物；局部麻醉劑如布比卡因；以及抗增殖/抗腫瘤藥如5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉酚和/或多西他賽；抗病毒劑，如更昔洛韋(gangcyclovir)、疊氮胸苷、阿曼替尼、阿糖腺苷、瑞巴瑞尼、三氟尿苷、阿昔洛韋、雙脫氧尿苷以及針對病毒組分或基因產物的抗體；細胞因子，如α-或β_或Y-干擾素、α-或β-腫瘤壞死因子以及白細胞介素；集落刺激因子；促紅細胞生成素；抗真菌劑，如大扶康、ketaconizole以及制霉素；抗寄生蟲劑，如噴他脒；抗炎劑，如α -1-抗-胰蛋白酶以及α -1-抗胰凝乳蛋白酶；麻醉劑，如布比卡因；鎮痛藥；防腐劑；以及荷爾蒙。其他說明性的補充物包括但不限于:維生素以及其他營養補充物；糖蛋白；纖連蛋白；肽與蛋白；碳水化合物(單一的和/或復合的);蛋白聚糖；抗血管生成素；抗原類；類脂或脂質體；以及寡核苷酸(正義和/或反義DNA和/或RNA)。酶糖合可任選地將該酶整合到一種載體中，包括但不限于一種干載體(包括但不限于一種粉末或基質)或液體載體(包括但不限于任何類型的適合的溶劑)。關于該載體，可任選地將該酶整合到一種或多種載體材料中，包括但不限于任何類型的纖維素聚合物(包括但不限于一種或多種HPC (羥丙基纖維素)、HPMC (羥丙基甲基纖維素)、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素或乙基纖維素);PVP (聚乙烯基吡咯烷酮)、淀粉、微晶纖維素以及類似物。任選地該載體可以進一步包括一種填充劑。適合的填充劑的實例包括微晶纖維素、羧基甲基纖維素鈉、乙基纖維素、乙酸纖維素、淀粉、乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、磷酸二鈣、山梨醇、甘露醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、異麥芽酮糖醇、赤蘚糖醇以及氫化淀粉水解產物或其混合物。在一些示意性實施例中，例如，在該明膠基質干燥之前和/或之后，可任選地將該酶整合到一種載體(例如，HPMC)中，然后將其分層或嵌入該明膠基質之內和/或之上。該載體還可以任選地包括一種或多種溶劑，包括但不限于乙醇以及乙腈，任選地是處于組合形式。這些溶劑可任選地作為用于該酶的載體，然后可任選地將其滴加、噴霧或以其他方式與一種繃帶、貼劑或其他組合 物的一個或多個其他層合并(例如，通過滴加、噴霧或以其他方式與一個明膠層合并)。可任選應用的揮發性溶劑的其他實例包括但不限于以下一項或多項:乙酸乙酯、苯、二氯甲烷、丙酮、氯仿、揮發性液態硅酮(六甲基二硅氧烷(HMDS)、八甲基環四硅氧烷、十甲基環戊硅氧烷、八甲基三硅氧烷)、揮發性的烷類(正己烷、異辛烷、辛烷、新戊烷)、揮發性的碳氟化合物(五氟丙烷、全氟庚烷、全氟甲基環己烷)、醇類(包括但不限于一個或多個1-丙醇、2-丙醇、乙醇)及其混合物。在一些意性實施例中，可任選地將該酶作為一種粉末提供，然后將其與一種載體如乙醇合并(不論溶解或懸浮其中)，以用于噴霧、滴加等等。鉬合物制各在本發明的另一個實施例中，使明膠-mTG混合物中的明膠經受一種或多種干燥方法，這些包括在將它與mTG混合之前的凍干法的使用。這些干燥方法通過增加該干明膠基質的表面積增加了明膠的溶解度。不添加任何添加劑并且不改變明膠或明膠-mTG溶液在其下形成的環境條件，這些干燥方法可以增加明膠的溶解度。盡管如此，某些添加劑如增塑劑或穩定劑的添加，或某些環境因子如該明膠或明膠-mTG溶液的溫度、離子濃度以及滲透壓的操縱可以被用來進一步增強已經合并了使用凍干技術干燥的明膠的明膠-mTG混合物的特性，即降低它的熔點。預混合的、凍干的明膠-mTG在本發明的另一個實施例中，一旦已經在溶液中混合該明膠與mTG，即使該明膠-mTG混合物經受凍干。這導致混合均勻的、凍干的明膠-mTG混合物，其中處于干燥形式的明膠與處于處于干燥形式的mTG接觸。在這個實施例中，將該明膠與mTG從凍干狀態同時復水并且立即在該復水部位形成一種溶液。這個技術可優先地與已經具有比標準明膠低的熔點的明膠或明膠混合物一起使用，因為mTG的活性在較低的溫度(低于大約37°C)以指數方式下降。因此，可以在較低的溫度形成由熔點降低的明膠與mTG組成的溶液而無快速交聯并且不發生凝膠作用。然后可以將該溶液凍干，從而得到同質分布的明膠與mTG的干混合物。當與水溶劑接觸時，可以迅速將這樣一種混合物復水以形成一種凝膠。可優先地將這樣一種技術用于傷口敷料，其中體液在其37°C的自然溫度下可以復水該明膠與mTG。在本發明的另一個實施例中，上述用于增強包含明膠與mTG的產品的一種或多種技術一齊使用或連續使用。這可以優選地包括在將其干燥之前，在明膠或明膠-mTG溶液中一起使用兩種或多種增塑劑，在明膠或明膠-mTG溶液中使用一種或多種增塑劑。它還包括干燥該明膠或明膠-mTG，將該干燥的明膠或明膠-mTG溶解于溶液中，并且然后二次干燥該明膠或明膠-mTG。繃帶本發明的一個示例性實施例是針對，例如，用于治療患者的傷口組織的一種止血敷料，該止血敷料包括明膠以及轉谷氨酰胺酶，優選地分離直到要求它們的相互作用或希望該繃帶的活性時。該繃帶可任選地特征是一種非吸收性的背襯，如一種塑料背襯。任選地該繃帶還可以特征是一種可再吸收的材料層。本發明的另一個實施例是針對用于治療患者的傷口組織的一種止血敷料，該止血敷料任選地并且優選地包括:(i) 一個明膠層；(ii)鄰近所述明膠層的一個轉谷氨酰胺酶層；其中該轉谷氨酰胺酶層與該明膠層是同延的或非同延的。本發明的另一個實施 例是針對用于治療患者的傷口組織的一種止血敷料，該止血敷料任選地并且優選地包括:(i) 一個可再吸收的或不可再吸收的材料層；(ii)鄰近所述材料層的一個明膠層；(iii)鄰近所述明膠層的一個轉谷氨酰胺酶層；其中該轉谷氨酰胺酶層與該明膠層是同延的或非同延的。本發明的另一個實施例是針對用于治療患者的傷口組織的一種止血敷料，該止血敷料包括:(i) 一個第一明膠層；(ii)鄰近該第一明膠層的一個可再吸收的材料層；(iii)鄰近該可再吸收的材料層的一個轉谷氨酰胺酶層；以及(iv)鄰近該轉谷氨酰胺酶層的一個第二明膠層，其中該轉谷氨酰胺酶層與該第一和/或該第二明膠層是非同延的。根據一些實施例，本發明提供了一種止血敷料(例如，一種繃帶)，該止血敷料包括夾在一個第一與第二明膠層中間的一個轉谷氨酰胺酶層，其中該轉谷氨酰胺酶層與該第一和/或該第二明膠層是同延的或非同延的。這樣一種止血敷料用于傷口治療。根據本發明的其他實施例，提供了本發明的一種敷料，該敷料任選地并且優選地包括:(i) 一種可再吸收的或不可再吸收的基質；(ii)明膠；(iii) 一種轉谷氨酰胺酶；其中該明膠與該轉谷氨酰胺酶被合并在所述基質中。在另一個實施例中，該止血裝置包括:(i) 一種多孔的、可再吸收的或不可再吸收的基質；(ii)明膠；(iii) 一種轉谷氨酰胺酶；其中該明膠與該轉谷氨酰胺酶被粘附到所述
基質上。根據本發明的其他實施例，提供了本發明的一種敷料，該敷料任選地并且優選地包括:(i) 一種可再吸收的明膠基質；(ii) 一種轉谷氨酰胺酶；其中該轉谷氨酰胺酶被合并在所述明膠基質中。在不同的實施例中，該轉谷氨酰胺酶層能以任何不同的形狀與圖案進行配置。例如，并且不出于限制，該轉谷氨酰胺酶層可以被配置為包含轉谷氨酰胺酶的點陣列，或為包含轉谷氨酰胺酶的單個點。可替代地，該轉谷氨酰胺酶層可以被配置為包含轉谷氨酰胺酶的多個行。該止血敷料的每一層也可任選地包含一種或多種適合的填充劑、結合劑和/或增溶劑。此外，該止血敷料的每一個也可任選地進一步包括一個脫模層，該脫模層包含一種脫模劑和/或背襯材料。根據優選的實施例，該止血敷料的每一層可任選地包含一種或多種適合的填充齊U，如蔗糖。該止血敷料的每一層也可任選地包含一種或多種適合的結合劑，如蔗糖。該止血敷料的每一個也可任選地進一步包括一個脫模層，該脫模層包含一種脫模劑。一個不例性的脫模劑是蔗糖。該止血敷料的每一層也可任選地包含一種或多種適合的增溶劑，如蔗糖。該止血敷料的每一層也可任選地包含一種或多種適合的發泡劑，如朽1檬酸與碳酸氫鈉的混合物。

根據一些示范性實施例，在上文描述的該明膠層可任選地是泡沫的，例如，在干燥之前通過將該明膠溶液與壓縮空氣和/或其他氣體混合。在一些實施例中，該明膠泡沫可以處于5mg/cm3至100mg/cm3的密度范圍中并且優選地處于10mg/cm3至50mg/cm3的范圍中。該止血敷料的每一個也可任選地進一步包括一種背襯材料，當該敷料使用時，該背襯材料在該敷料的面向傷口側相對的側上。該背襯材料可以用生理學上可接受的粘合劑附著或可以是自身可粘附的(例如，通過具有一個表面靜電荷或機械附著)。該背襯材料可以是可再吸收的材料或不可再吸收的材料，如一種硅酮貼劑或塑料貼劑，和/或一種裝置，如血管導管和/或可任選地插入身體的其他類型的醫學裝置。貼劑加強法加強背襯層的整合增強了該敷料的機械強度，從而提供整個敷料操作的最佳的力分布，其中該敷料被應用于重度和/或活動性流血部位。該背襯還降低了該敷料背部的粘性，以使得該敷料不會粘到外科醫生的手上。在一些示范性實施例中，該背襯層可以包括一種或多種適合的材料，例如，在一添加種基本的明膠-TG混合物時，能夠增加止血和/或流體控制能力。根據一些實施例，可以經由減緩該流體并且允許該明膠-TG更長時間地交聯與阻塞流體漏泄，從而得到增加的止血和/或流體控制能力。任選地，通過一種包含明膠的背襯來加強該敷料。任選地，該明膠背襯由一個非交聯的明膠層組成，其中該明膠層由明膠溶液的一個凍干層形成，其中該明膠溶液處于l%w/w-25%w/w并且優選5%-15%的起始濃度。在一個替代性實施例中，該明膠背襯由一個交聯的明膠層組成，其中該明膠層通過化學交聯、輻射交聯或物理交聯形成。在一個優選的實施例中，使用一種醛糖，通過類似于在美國專利4971954中所述的用于膠原的交聯方法的一種方法來完成該交聯，如在此充分闡述的，將其通過引用結合在此，如同在此提出的，其程度上必需對本發明的示例性的交聯實施例提供實現，并且作為這樣一種交聯方法的一個非限制性實例。在另一個優選的實施例中，使用干熱交聯來完成該交聯，其中將該明膠層在真空下用干熱進行加熱。在一個替代性可任選的實施例中，該敷料背襯由一種可再吸收的止血材料如纖維素或氧化纖維素組成。本領域的普通技術人員已知的多種可再吸收的材料中的任一種都可任選地用在本發明中。例如，該可再吸收的材料可以是一種蛋白質性質的物質，如纖維蛋白、角蛋白、膠原和/或明膠，或一類碳水化合物物質，如藻酸鹽、殼多糖、纖維素、蛋白聚糖(例如，聚-N-乙酰葡糖胺)、乙醇酸聚合物、乳酸聚合物或乙醇酸/乳酸共聚物。例如，該可再吸收的材料可以是一種碳水化合物物質。可再吸收的材料示意性實例在商標名VICRYL.TM.以及DEX0N.TM.下出售。本領域的普通 技術人員已知的多種不可再吸收的材料中的任一種都可任選地用在本發明中。非可再吸收的材料的非限制性實例包括硅酮、膠乳、聚氨酯、聚丙烯、聚乙烯、硅橡膠、聚對苯二甲酸乙二酯(PET)、滌綸、針織滌綸、絨滌綸、聚乙二醇、尼龍、聚氯乙烯合成硅橡膠、硅酮橡膠、PMMA[聚-(甲基丙烯酸甲酯)、聚烯烴、纖維素、聚乙烯基]醇(PVA)、聚(甲基丙烯酸羥基乙酯(PHEMA)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯腈)(PAN)、氟乙烯-共六-氟丙烯(FEP)、特氟隆(PTFE)、Co--Cr合金、其共聚物及其混合物。這些背襯可以是多孔的或固體的。在一個任選的實施例中，蝕刻、紋刻、激光切割或者以其他方式在該背襯上產生一種圖案，以便于增加該背襯與該敷料之間的界面的表面積。這樣能具有部分地或完全地將該敷料基質結合到該背襯上的作用。實例23描述了硅酮背襯上的一個蝕刻的圖案，用于增加它對一種明膠敷料基質的粘附。止血■或密封敷料的組件根據本發明的一些實施例，可以將該轉谷氨酰胺酶層應用于該第一明膠層，以使得它與該第一明膠層非同延和/或在第二明膠層應用時將與該第二明膠層非同延。例如，該轉谷氨酰胺酶層可以占據該第一明膠層的表面積的大約5%至大約95%和/或該第二明膠層的表面積的大約5%至大約95%。可以將該轉谷氨酰胺酶以單點應用于該明膠層或作為該明膠層上的連續點，以使得該轉谷氨酰胺酶點的總表面積占據該第一明膠層的表面積的大約5%至大約95%和/或該第二明膠層的表面積的大約5%至大約95%。這樣一個或多個轉谷氨酰胺酶的點可以具有任何幾何形狀，例如，實心圓或空心圓、矩形、三角形、線形、無定形的形狀或其組合。可以將此類點以有序的或隨機的圖案應用于該第一明膠層。多個點可以形成許多種形狀與圖案的任一種，如，一個陣列、網格、一連串的同心點(例如，同心圓或正方形)、一系列點的重疊(例如，重疊的圓)、發源于一個軸的輪輻(spokes)，或任何其他配置，條件是該轉谷氨酰胺酶的總表面積是該第一明膠層的表面積的大約5%至大約95%和/或該第二明膠層的表面積的大約5%至大約95%。一般而言，優選大量的小點更甚于少量的大點。例如，通常優選一個20乘以20的點陣列更甚于一個占據相同總表面積的10乘以10的點陣列。然而，這些點可以是任何大小的，條件是該轉谷氨酰胺酶的總表面積是該第一明膠層的表面積的大約5%至大約95%和/或該第二明膠層的表面積的大約5%至大約95%。例如，取決于該敷料的總體大小，這些點可以具有，但不限于，至少大約 0.01mm、0.lmm、0.5mm> 1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm 或更大的直徑、寬度或長度。例如，在一個實施例中，4個圓點具有的直徑，每個占據敷料的一平方厘米。多種其他配置也在本發明的范圍內并且易于被本領域的普通技術人員利用。該敷料可任選地被制備為多種大小與形狀中的任一種。典型地，這些敷料具有易于由本領域的普通技術人員處理的大小與形狀，典型地沿著任一邊的長度小于12’ ’，例如，I，，xl，，、1，，x2’ ’、4’ ’ x4’ ’等。該敷料的水分水平典型地小于8% (例如，小于7%、6%、5%、4%、3%、2% 或 1%)。通常，能以本領域的普通技術人員已知并可得的任何手段將該止血敷料的不同層附著到另一個上。例如，任選地并且優選地，這個或這些明膠層和/或這個或這些轉谷氨酰胺酶層被用作一系列的速凍水溶液層并且隨后低壓凍干或冷凍干燥，例如，施用每一層之后，以及在組裝該整個敷料時。可以通過多種技術的任一種應用這些層，包括噴霧、移液(例如，用多道移液器)、噴灑、使用一種掩模、靜電沉積、使用一種微量調節注射器陣列系統或使用一種包含多個用于產生高密度陣列的端口的分配歧管進行分配。在本發明的某些實施例中，當使用一種模型制備這些敷料時，在應用該敷料的第一層之前，將一種脫模劑，如蔗糖應用于該模型中。在此類實施例中，該止血敷料進一步包括一個脫模層，該脫模層包含所述脫模劑。可替代地，可以將一種生理學上可接`受的粘合劑應用于該可再吸收的材料和/或該背襯材料(當存在時)時，并且隨后將這個或這些明膠層和/或這個或這些轉谷氨酰胺酶層附著到其上。在該敷料的一個實施例中，該生理學上可接受的粘合劑具有這樣一個剪切強度和/或結構以使得將該敷料用于傷口組織之后，該可再吸收的材料和/或背襯材料可以與該明膠層分離。在另一個實施例中，該生理學上可接受的粘合劑具有這樣一個剪切強度以使得將該敷料用于傷口組織之后，該可再吸收的材料和/或背襯材料不能與該明膠層分離。每單位面積傷口的明膠濃度取決于多種因素，包括但不限于該繃帶的最終構造、應用的材料等等。根據本發明的其他實施例，提供了用于制備止血敷料的多種方法，這些方法通過任選地并且優選地提供一個第一明膠層，將一個轉谷氨酰胺酶層應用至該第一明膠層，并且施用一個第二明膠層至該轉谷氨酰胺酶層，其中該轉谷氨酰胺酶層與該第一明膠層是非同延的和/或與該第二明膠層是非同延的。類似地，本發明的其他實施例包括用于制備止血敷料的一種方法，該方法通過提供具有附著到其上的一個第一明膠層的一個可再吸收的或不可再吸收的背襯層；將一個轉谷氨酰胺酶層應用至所述第一明膠層的該可再吸收的或不可再吸收的背襯層附著到其上的一側的相對側上；并且施用一個第二明膠層至該轉谷氨酰胺酶層上，其中該轉谷氨酰胺酶層與該第一明膠層是非同延的和/或與該第二明膠層是非同延的。在一些示范性實施例中，該敷料和/或貼劑可以通過不同的方法制備，包括，例如，具有交聯的背襯的“夾層”貼劑，其中該貼劑可包含一個發泡的明膠薄層，一種酶粉末以及至少一個具有或不具有頂層噴涂的發泡的明膠其他層。該酶可任選地是任何類型的交聯酶，能夠交聯明膠，但優選地包括一種轉谷氨酰胺酶。其它夾層敷料配置實施例的非限制性實例可任選地包含以下各項。任選地，該夾層特征是一個發泡的加熱交聯的背襯層，具有整合到該背襯中的粉末狀酶，接著是一個發泡的的、凍干的明膠層，并且然后是一個噴霧的酶層。在此使用的術語“發泡的的”涉及發泡的明膠。可替代地，該夾層可任選地特征是一個發泡的加熱交聯的背襯層，同樣具有整合到該背襯中的粉末狀酶，接著是一個發泡的的、凍干的明膠層，但是在這個非限制性示意性實施例中，下一層包含粉末狀酶，接著是一個發泡的的、凍干的明膠層并且接著是一個噴霧的酶層。可替代地，該夾層可任選地特征是一個任何類型的背襯層(例如，任選地前述包括聚氨酯、硅酮的背襯層之一，或確實前述醫學塑料和/或橡膠材料的任一種)，接著是一個發泡的的、凍干的明膠層，接著是載體(例如，HPMC或任何其他纖維素的或如前述的其他聚合物材料)中的一個酶層，接著是一個發泡的的、凍干的明膠層并且接著是一個噴霧的酶層。可替代地，該夾層可任選地特征是一個發泡的加熱交聯的背襯層，接著是一個整合到該背襯中的粉末狀酶層，接著是一個發泡的的、凍干的明膠層，接著是一個基于載體的酶層(任選地具有如在此所述的任何聚合物載體)，接著是一個發泡的的、凍干的明膠層并且接著是一個噴霧的酶層。明膠基質的生產方法在上文所述的止血和密封敷料的一些實施例中，該明膠層或明膠基質由凍干的發泡的明膠溶液(在此也稱為“明膠泡沫”或簡稱為“泡沫”)組成。在發泡之前，該明膠溶液的濃度任選地在0.1%與30%w/w之間并且優選地在5%與15%w/w之間。該明膠泡沫可任選地處于的密度可任選地在5mg/cm3至100mg/cm3的密度范圍內，優選地處于IOmg/cm3至50mg/cm3的范圍內，并且最優選地處于20mg/cm3至40mg/cm3的范圍內。在一些示范性實施例中，該明膠泡 沫可任選地使用，例如，一種分批混合的方法來產生。根據一些實施例，該明膠溶液可在一個直立的混合器(例如，由Bosch ，Kenwood 和KitchenAid 所生產的類型的)中以100RPM與10，000RPM之間范圍內的速度，并且優選地以1000RPM至6000RPM或2000至4000RPM之間范圍內的速度強烈地混合。根據一些實施例，優選地根據該明膠溶液的黏度與其它特性調整該速度，以便于誘導泡沫(氣泡)產生，但不破壞該泡沫結構。根據一些實施例，在混合之后，可將得到的泡沫填充在托盤中并凍干。在一些示范性實施例中，該明膠泡沫可任選地使用，例如一種連續混合的方法產生。根據這些實施例，可以將該明膠溶液與壓縮空氣同時通過一個球形的靜態混合器一起注入，從而直接在托盤中形成一種明膠泡沫，然后可將該明膠泡沫凍干。根據一些實施例，可優選地根據該明膠溶液的黏度與其它特性調整該氣壓和/或混合速度，以便于誘導泡沫(氣泡)產生，但不破壞該泡沫結構。在一些示范性實施例中，該明膠泡沫可任選地使用，例如化學發泡產生。根據這些實施例，該明膠泡沫的形成可通過一種發泡劑的添加獲得。根據一些實施例，該發泡劑可包含任何能夠促進泡沫形成和/或增強該泡沫的膠體穩定性(例如，通過抑制氣泡的聚結)的表面活性劑。例如，可以將碳酸氫鈣添加到酸化的基質中，例如，從而導致明膠溶液中氣態的二氧化碳的形成，產生泡沫。在一些示范性實施例中，該明膠泡沫可任選地使用，例如，文氏管發泡產生。根據這些實施例，該明膠溶液可被引入穿孔管中。該明膠溶液可以高速度流動通過該管，例如，以在穿孔部位引起負氣壓。根據一些實施例，這可導致空氣抽吸進入明膠流以及隨后的管內明膠的發泡(通過添加靜態混合元素可得到發泡的增強)。在一些示范性實施例中，在依據在此所述的一些示范性實施例中的貼劑的制備中可以使用不同形狀和/或大小的發泡的明膠，包括，例如，小片的發泡的明膠、處于流動或可流動形式的明膠、明膠微粒和/或用酶浸泡的研磨的明膠墊片，例如但不限于用于空腔形傷口的空隙。在本發明的一些示范性實施例中，具有嵌入酶的非交聯的蛋白基質的離散的碎片、顆粒、部分、片段或粒料被應用到傷口部位，以使得它們連接從而在傷口部位上形成單交聯的基質，例如像所述的用于空隙。這些實施例可任選地被用于治療完整的敷料不可能到達全部的傷口部位表面的空腔形傷口，以使得這些基質碎片可以安裝到不規則的空腔中從而達到止血或者以其他方式治療該不規則的空腔形傷口的目的。在一個任選的實施例中，該蛋白(明膠)基質碎片的直徑小于10cm。優選地，這些碎片的直徑小于lcm。最優選地，這些碎片的直徑小于5mm。在一個任選的實施例中，該蛋白基質是密度處于5mg/cm3至100mg/cm3的范圍中并且優選地處于10mg/cm3至50mg/cm3的范圍中的一種多孔基質。實例15中描述了 酶嵌入的蛋白基質碎片的一個實例，這些碎片被連接從而形成單交聯的基質以治理一個模擬傷口。在依據在此所述的一些示范性實施例中的敷料或傷口治療組合物的制備中可以使用不同形狀和/或大小的發泡的明膠。酶合并方法在上文所述的止血和密封敷料的一些實施例中，該轉谷氨酰胺酶(“該酶”)可以被合并、整合或嵌入到一種明膠基質中，以使得(不希望限制于一個封閉的列表):在整個過程中可以保留酶活性酶可以被均勻地分布在該明膠基質的表面上酶可以被嵌入到該明膠基質的深處(梯度或均勻分布)此類合并、整合或嵌入在此也被稱作“酶合并”。在一些示范性實施例中，可以使用預混合的酶合并來實現將該酶合并到該明膠基質中。根據這些實施例，以上文所述的分批或連續方法，可以將該明膠溶液與壓縮空氣混合，例如，以形成一種泡沫。在一些實施例中，可以將該酶同時流入該溶液流中。使用分批發泡，可以將該酶在混合之前或混合過程中添加到該明膠溶液中。根據一些實施例，使用連續發泡，在該溶液進入該靜態混合器時，可以將該酶流線(inline)添加到該明膠溶液中。發泡包含該明膠與該酶的泡沫之后，可以將其冷卻以減緩或阻礙交聯并且然后凍干，以使得應用至傷口上時，僅當凍干的泡沫與生理流體接觸時發生大部分的交聯。在一些示范性實施例中，可以使用凍干后的酶溶液合并實現將該酶合并到該明膠基質中。根據這些實施例，可以形成該明膠基質并將其凍干為干燥泡沫。根據這些實施例，可以通過噴霧該酶溶液到該干明膠基質表面上將該酶溶液合并到該基質中，例如，其中噴霧之前可以將該酶溶解于溶劑或水/溶劑混合物中。根據一些實施例，可以使用該酶溶液到該明膠基質中的注射，例如，通過注射針或注射針基質，將該酶溶液合并到該基質中。根據一些實施例，可以通過將干明膠基質沉入到一種包含酶的溶劑混合物中，例如，EtOH/水、乙腈/水、乙腈/水/EtOh以及類似物，將該酶溶液合并到該基質中。根據一些實施例，可以通過將包含酶的溶劑混合物應用到該干明膠基質上，而將該酶溶液合并到該基質中。適用于這個目的的揮發性溶劑的其他實例此外可以選自下組，該組由以下項構成:乙酸乙酯、苯、二氯甲烷、丙酮、氯仿、揮發性液態硅酮(六甲基二硅氧烷(HMDS)、八甲基環四硅氧烷、十甲基環戊硅氧烷、八甲基三硅氧烷)、揮發性的烷類(正己烷、異辛烷、辛烷、新戊烷)、揮發性的碳氟化合物(五氟丙烷、全氟庚烷、全氟甲基環己烷)、醇類(包括但不限于一個或多個1-丙醇、2-丙醇、乙醇)及其混合物。根據一些示范性實施例，將該酶溶液應用到該明膠基質中和/或其上之后，可以，例如，通過空氣干燥、真空干燥、加溫干燥或其他方法蒸發該溶液。根據一些實施例，可以使用凍干后的酶粉末合并將該酶溶液合并到該基質中。根據這些實施例，可以形成該明膠基質并將其凍干為干燥泡沫。

在一些示范性實施例中，然后可以通過機械方法，例如，通過將該酶粉末刷在表面上和/或使用針輥涂布酶粉末，通過酶粉末嵌入干明膠基質中而將該酶合并到該基質中。根據其他示范性實施例，在應用酶粉末之前，可以通過用機械針輥穿孔和/或穿刺該明膠基質，將該酶合并到該基質中。根據另外的其他示范性實施例，可以使用壓縮空氣負載的酶粉末應用，例如，使用類似于噴砂的方法，將該酶合并到該基質中。任選地，應用干酶粉末之后，例如，通過用一種有機溶劑/水混合物噴霧該基質的表面，可以將該粉末密封在該明膠基質內部，并且然后干燥該基質。根據一些示范性實施例，例如，在上文所述的，可以結合兩種或多種方法進行酶整
口 ο蛋白基質中的酶深度在本發明的一個任選但優選的實施例中，該酶被嵌入到該蛋白基質中以使得該酶存在于距該基質的表面至少0.5mm,優選至少Imm的深度并且任選地高達20mm的深度。現有技術描述傷口敷料包括在該生物材料或蛋白生物材料基質的表面上的一種組織粘合劑材料。該實例描述于PCT申請W0/2011/079336 Al以及W0/2010/145817中。然而，這些解決方案具有顯著的缺點，即在該蛋白基質的表面上的組織粘合劑機構不是固有地整合到該基質本身之內。因此，必須進行額外的努力從而將該組織粘合劑層固定到該基質上。此外，由于該基質本身不參與到該組織粘合劑或傷口閉合機構中，一旦該敷料被應用到該組織部位或傷口部位上，可以將它與該組織粘合劑分離。
如在此所述的，利用一種基于該蛋白基質本身的交聯的粘合劑機構存在顯著的益處，這是因為這個方法確保該蛋白基質本身將直接參與該貼劑、裝置或傷口敷料結合到組織部位或傷口部位上并且將不與該組合物的粘附的頂層分離。此外，交聯酶存在于該基質的表面之外有利于確保正好超過該基質表層的該蛋白基質的交聯。雖然該表層可以粘附到傷口或組織部位上，該基質的交聯的表層單獨經常將不足以閉合傷口或將敷料固定到組織部位上。當酶存在于該敷料表面之外時，在0.5mm或超過其的深度處，合并到該交聯粘合反應中的蛋白基質的量較大，并且因此該傷口閉合障礙或裝置固定層可以更厚并且更結實。此外，將酶包埋到該蛋白基質的深處減少了應用到組織部位之后該基質部分保持未交聯以及與粘附到該組織部位的基質部分脫離的可能性。下面提供的例子描述了傷口敷料，其中酶存在高達該基質的不同深度。除實例8與12之外，在所有的實例中，從該基質的表面向下穿過列于下表中的最大深度都存在嵌入酶。在實例8與12中，嵌入酶存在于不具有酶的蛋白基質層的下面。使用數字顯卡尺測量藍色的酶溶液滲透到該多孔蛋白基質中的深度，從而測量最大酶深度。在所有的情況下，酶厚度大約15mm。
權利要求
1.一種貼劑，該貼劑包括一種可植入的外科用網片、一種可交聯的蛋白基質以及一種與所述基質接觸的、用于交聯所述可交聯的蛋白的蛋白交聯酶，其中所述基質被合并在、分層到或環繞所述網片，其條件是所述酶不是凝血酶。
2.根據權利要求1所述的貼劑，其中所述可交聯的蛋白包括明膠。
3.根據權利要求2所述的貼劑，其中所述可交聯的蛋白基質是多孔的。
4.根據權利要求3所述的貼劑，其中所述多孔基質包括泡沫。
5.根據權利要求4所述的貼劑，其中所述酶存在于與所述基質同延或非同延的一個層上。
6.根據權利要求4所述的貼劑，其中所述酶被均勻地遍及該基質合并到其中或存在于距離該基質表面至少0.5mm的深度處的基質中。
7.根據權利要求6所述的貼劑，其中所述酶存在于所述基質的至少Imm的深度處。
8.根據權利要求7所述的貼劑，其中所述酶存在于所述基質的高達20mm的深度處。
9.一種敷料，該敷料包括一個可交聯的蛋白層以及一種用于交聯所述可交聯的蛋白的交聯酶，其中所述酶存在于所述蛋白層的至少0.5mm的深度處并且其中所述酶是一種非血液衍生的酶。
10.根據權利要求9所述的敷料，其中所述酶存在于所述蛋白層的至少Imm的深度處。
11.根據權利要求10所述的敷料，其中所述酶存在于所述蛋白層的高達20mm的深度`處。
12.根據權利要求9-11中任一項所述的敷料，其中所述蛋白包括明膠，其中所述蛋白層可任選地是泡沫的或多孔的。
13.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，進一步包括一個加強背襯層。
14.一種貼劑，包括一個明膠層以及一個加強背襯層， 其中所述明膠層包括明膠以及一種整合到載體中的酶，該載體選自下組，該組由以下項構成=HPC (羥丙基纖維素)、HPMC (羥丙基甲基纖維素)、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、乙基纖維素、PVP (聚乙烯基吡咯烷酮)、PVA (聚乙烯醇)、PEG (聚乙二醇)、PEI (聚乙烯亞胺)、淀粉、微晶纖維素、氧化纖維素。
15.根據權利要求14所述的貼劑，其中所述明膠包括發泡的明膠。
16.根據權利要求15所述的貼劑，其中所述發泡的明膠包括干燥的或凍干的發泡的明膠溶液。
17.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中所述酶存在于一個酶層中并且其中所述明膠被放置在以下位置的一個或多個中:所述貼劑或敷料之內、所述酶層之上、所述酶層之中、所述加強背襯層之上、所述加強背襯層之中或所述酶層與所述加強背襯層之間。
18.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中所述明膠是發泡的明膠并且其中在發泡之前，該明膠溶液的濃度在0.1%與30%w/w之間。
19.根據權利要求18所述的貼劑或敷料，其中在發泡之前，該明膠溶液的濃度在1%與20%w/w 之間。
20.根據權利要求19所述的貼劑或敷料，其中在發泡之前，該明膠溶液的濃度在5%與15%w/w 之間。
21.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中所述可交聯的蛋白存在于一種蛋白基質中并且其中所述基質具有從5mg/cm3至100mg/cm3范圍內的密度。
22.根據權利要求21所述的貼劑或敷料,其中所述密度在從10mg/cm3至50mg/cm3的范圍內。
23.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中根據一種方法生產所述發泡的明膠，該方法選自下組，該組由以下項構成:分批混合的過程、連續混合的過程、化學發泡的過程或文氏管發泡的過程。
24.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中所述蛋白包括明膠并且其中所述酶包括轉谷氨酰胺酶(TG )。
25.根據權利要求24所述的貼劑或敷料，其中該明膠被合并到具有所述轉谷氨酰胺酶的一種明膠基質中，以使得以下一項或多項發生:在整個制備過程中保留大部分酶活性；酶均勻地分布在該明膠基質表面上；和/或將酶嵌入該明膠基質的深處(梯度或均勻分布)。
26.根據權利要求25所述的貼劑或敷料，其中，根據在干燥所述基質之前或干燥所述基質之后的一種或多種混合，所述轉谷氨酰胺酶被合并到所述明膠基質中，任選地其中所述基質被干燥至包含不超過10%的水分含量。
27.根據權利要求25或26所述的貼劑或敷料，其中所述基質的密度在5mg/cm3-100mg/cm3的范圍內，或轉谷氨酰胺酶以從0.05mg至2mg轉谷氨酰胺酶/cm3明膠基質的濃度存在。
28.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，進一步包括一個加強背襯層并且其中存在一種外科用網片，其中所 述外科用網片位于以下一個或多個位置處:該加強層與該明膠基質之間；該明膠基質的中部；或該明膠基質的上部；或其組合。
29.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中該可交聯的蛋白包括多個部分，并且其中超過50%的所述部分是非交聯的。
30.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，進一步包括一個加強背襯層，其中所述加強背襯層包含一種可再吸收的材料。
31.根據權利要求30所述的貼劑或敷料，其中所述可再吸收的材料選自下組，該組由以下項構成:纖維素，氧化纖維素，蛋白質性質的物質，如纖維蛋白、角蛋白、膠原和/或明膠，或一類碳水化合物物質，如藻酸鹽、殼多糖、纖維素、蛋白聚糖(例如，聚-N-乙酰葡糖胺)、乙醇酸聚合物、乳酸聚合物或乙醇酸/乳酸共聚物。
32.根據前述權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中所述貼劑可以閉合具有至少200mmHg的爆破壓力的組織傷口。
33.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，特征是一種網片并且被適配成用于其中網片可以粘附到器官表面、組織表面或腔上的地方的外科用網片固定。
34.根據權利要求33所述的貼劑或敷料，將其適配成用于腹股溝、股骨、臍或切口的腹疝修復，或其他類型的外科用網片重建。
35.根據權利要求33或34所述的貼劑或敷料，將其適配成與減壓釘合或縫合方法一起使用。
36.根據權利要求33或34所述的貼劑或敷料，將其適配成與釘合、粘合或縫合中的一個或多個一起使用，從而補充網片粘附。
37.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，進一步包括一種與所述貼劑整合的醫學裝置。
38.根據權利要求33-37中任一項所述的貼劑或敷料，將其適配成用于任何大膈疝修復、用于直腸固定術(直腸脫出的)網固定、用于脫出的陰道穹窿的重建、或用于其他骨盆底網加強手術(婦科方法)。
39.根據權利 要求33-38中任一項所述的貼劑或敷料，其中所述網片包括合成網片、生物網片或合成-生物網片組合的任一種。
40.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，進一步包括一種另外的試劑，該試劑選自下組，該組由以下項構成:抗生素、抗凝劑、類固醇、心血管藥、局部麻醉劑、抗增殖的/抗腫瘤藥、抗病毒劑、細胞因子、集落刺激因子；促紅細胞生成素；抗真菌劑；抗寄生蟲劑；抗炎劑；麻醉劑、如布比卡因；鎮痛藥；防腐劑；以及荷爾蒙。
41.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，進一步包括一種另外的試劑，該試劑選自下組，該組由以下項構成:維生素以及其他營養補充物；糖蛋白；纖連蛋白；肽與蛋白；碳水化合物(單一的和/或復合的)；蛋白聚糖；抗血管生成素；抗原類；類脂或脂質體；以及寡核苷酸(正義和/或反義DNA和/或RNA)。
42.根據權利要求41所述的貼劑或敷料，其中所述細胞因子選自下組，該組由以下項構成:α_或β_或Y-干擾素、α-或β -腫瘤壞死因子以及白細胞介素。
43.根據權利要求41所述的貼劑或敷料，其中所述抗病毒劑選自下組，該組由以下項構成:更昔洛韋、疊氮胸苷、阿曼替尼、阿糖腺苷、瑞巴瑞尼、三氟尿苷、阿昔洛韋、雙脫氧尿苷以及針對病毒組分或基因產物的抗體。
44.根據權利要求41所述的貼劑或敷料，其中所述抗腫瘤藥選自下組，該組由以下項構成:5_氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉酚和/或多西他賽。
45.根據權利要求41所述的貼劑或敷料，其中所述心血管藥選自下組，該組由以下項構成:鈣通道阻滯劑、血管擴張劑和血管收縮劑；化學引誘物。
46.根據權利要求41所述的貼劑或敷料，其中所述類固醇選自下組，該組由以下項構成:地塞米松、前列腺環素的抑制劑、前列腺素、白細胞三烯類和/或抑制炎癥的激肽。
47.根據權利要求41所述的貼劑或敷料，其中所述抗凝劑選自下組，該組由以下項構成:激活蛋白C、肝素、前列腺環素(PGI2)、前列腺素、白細胞三烯類、抗轉谷氨酰胺酶II1、ADPase以及纖維酶原激活物。
48.根據權利要求41所述的貼劑或敷料，其中所述抗生素選自下組，該組由以下項構成:四環素、環丙沙星、阿莫西林以及甲硝唑。
49.根據權利要求41所述的貼劑或敷料，進一步包含一種創傷愈合劑。
50.根據權利要求41所述的貼劑或敷料，進一步包括一種止血劑。
51.—種生產貼劑或敷料的方法，包括 生產一種可交聯的蛋白基質，該基質包含一種可交聯的蛋白； 將一種酶的組合物沉淀到所述蛋白基質的至少0.5mm的深度處，其中所述酶的組合物包含一種能夠交聯所述可交聯的蛋白的酶；由此生產該貼劑或敷料。
52.一種生產根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料的方法，其中所述可交聯的蛋白包括處于明膠溶液形式的明膠，該方法包括將所述明膠溶液在混合器中以一定的速率混合以形成一種發泡的溶液，干燥所述發泡的溶液以形成一種干溶液并且合并所述干溶液與所述酶。
53.根據權利要求52所述的方法，其中所述混合所述明膠溶液包括將所述明膠溶液在混合器中以一定的混合速率以及氣壓與壓縮的空氣混合，以便于發泡該溶液；其中所述方法進一步包括將該發泡的明膠溶液凍干以形成明膠溶液的凍干層。
54.根據權利要求52所述的方法，其中所述速率是從IOORPM至10，000RPM。
55.根據權利要求54所述的方法，其中所述速率是從1000RPM至6000RPM。
56.根據權利要求53所述的方法，其中所述速率是從0.1cm3/秒至10，OOOcm3/秒每發泡體積。
57.一種生產根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料的方法，其中所述可交聯的蛋白包括處于明膠溶液形式的明膠，該方法包括將所述明膠溶液與一種化學發泡劑混合以便于發泡該溶液；其中所述方法進一步包括干燥該發泡的明膠溶液凍干以獲得明膠溶液的干燥層。
58.根據權利要求57所述的方法，其中所述化學發泡劑包括碳酸氫鈉并且其中該明膠溶液與該碳酸氫鈉的混合物具有低于7的pH。
59.一種生產根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料的方法，其中所述可交聯的蛋白包括處于明膠溶液形式的明膠，該方法包括通過具有多個小孔的試管以一定的速率及壓力對所述明膠溶液施加壓力以便于發泡該溶液；其中所述方法進一步包括干燥該發泡的明膠溶液以形成明膠溶液的干燥層。
60.根據以上權利要求中任一項所述的方法，該方法包括產生一個明膠層:通過混合明膠溶液與所述酶以形成一種發泡的的明膠溶液，所述酶包括轉谷氨酰胺酶；其中所述方法進一步包括將該發泡的明膠溶液`凍干以形成一種凍干的發泡的明膠溶液，并且將所述凍干的發泡的明膠溶液添加到所述貼劑或敷料中。
61.根據權利要求60所述的方法，其中在所述混合之前或所述混合過程中，將所述轉谷氨酰胺酶添加到所述明膠溶液中。
62.根據權利要求60所述的方法，其中在混合過程中通過連續流動將所述轉谷氨酰胺酶添加到所述明膠溶液中。
63.根據權利要求60-62中任一項所述的方法，進一步包括在進行凍干之前，冷卻所述發泡的明膠溶液。
64.根據以上權利要求中任一項所述的方法，該方法包括發泡明膠溶液以形成一種發泡的明膠溶液；干燥該發泡的明膠溶液以形成所述干燥的發泡的明膠溶液；并且以溶液形式將所述轉谷氨酰胺酶添加到所述干燥的發泡的明膠溶液中以形成一種包含酶的泡沫。
65.根據權利要求64所述的方法，其中添加所述轉谷氨酰胺酶到所述干燥的溶液包括以下的一個或多個:將一種酶溶液噴霧到干明膠基質表面上；通過注射針或注射針基質將一種酶溶液注射該明膠基質中；將干明膠基質沉入到一種包含酶的溶劑混合物中；和/或將包含酶的溶劑混合物分配到干明膠基質上。
66.根據權利要求65所述的方法，進一步包括干燥所述包含酶的泡沫。
67.根據權利要求66所述的方法，其中所述干燥所述包含酶的泡沫包括以下一項或多項:空氣干燥、真空干燥、凍干和/或熱干燥。
68.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑、敷料或方法，其中所述酶包括轉谷氨酰胺酶并且所述轉谷氨酰胺酶包括任何類型的鈣依賴型的或不依賴型的轉谷氨酰胺酶(mTG)。
69.根據權利要求68所述的貼劑、敷料或方法，其中所述轉谷氨酰胺酶包括一種微生物的轉谷氨酰胺酶。
70.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑、敷料或方法，其中干燥發生在高達30C的溫度下。
71.根據權利要求70所述的貼劑或方法，其中所述干燥發生在高達20C的溫度下。
72.根據權利要求71所述的貼劑或方法，其中所述干燥發生在從OC至20C的多個溫度下。
73.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑、敷料或方法，其中該貼劑或敷料包含多個明膠層并且其中任選地所述明膠層的每一個具有不同的明膠濃度百分數。
74.根據權利要求73所述的貼劑、敷料或方法，其中至少一個明膠層包含從大約l%w/w至大約15%w/w的明膠百分數。
75.根據權利要求74所述的貼劑、敷料或方法，其中至少一個明膠層包含從大約2.5%w/w至大約10%w/w的明膠百分數。
76.根據權利要求73-75中任一項所述的貼劑、敷料或方法，其中至少一個明膠層包含至少大約5%w/w的明膠百分數。
77.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑、敷料或方法，其中至少一個明膠層包含一種潤滑劑。
78.根據權利要求77所述的貼劑、敷料或方法，其中所述潤滑劑包括甘油。
79.根據權利要求78所述的貼劑、敷料或方法，其中所述甘油以從0.1%至10%的量存在。
80.根據權利要求79所述的貼劑、敷料或方法，其中所述甘油以從2%至6%的量存在。
81.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料用于治療慢性傷口的用途。
82.根據權利要求81所述的用途，其中所述慢性傷口包括糖尿病患者的皮膚潰瘍。
83.一種治療對其有需要的患者的慢性傷口的方法，該方法包括向所述慢性傷口上粘附根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料。
84.根據權利要求83所述的方法，其中所述慢性傷口包括糖尿病患者的皮膚潰瘍。
85.—種止血敷料、組織粘合劑或傷口閉合組合物，該組合物包含一種可交聯的多孔蛋白基質以及一種誘導該可交聯的蛋白交聯的、非血液衍生的酶，其中基質密度處于5mg/cm3-100mg/cm3 的范圍內。
86.根據權利要求85所述的敷料、粘合劑或組合物,其中所述密度在40mg/cm3-70mg/cm3的范圍內。
87.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，具有至少30%的總水分含量。
88.根據權利要求87所述的貼劑或敷料，具有至少20%的總水分含量。
89.根據權利要求88所述的貼劑或敷料，具有至少10%的總水分含量。
90.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中酶與基質的比率是從0.05mg/cm3 酶 /cm3 至 5mg/cm3 酶 /cm3 基質。
91.根據權利要求90所述的貼劑或敷料,其中所述比率是0.5mg/cm3酶/cm3至2.5mg/cm3酶/cm3基質。
92.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑、敷料或方法，其中該溶液包含一種乳液或懸浮液。
93.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，進一步包括一個加強背襯層，其中所述加強背襯層包含一種非可再吸收的材料。
94.根據權利要求93所述的貼劑或敷料，其中所述非可再吸收的材料選自下組，該組由以下項構成:硅酮、膠乳、聚氨酯、聚丙烯、聚乙烯、硅橡膠、聚對苯二甲酸乙二酯(PET)、滌綸、針織滌綸、絨滌綸、聚乙二醇、尼龍、聚氯乙烯硅橡膠彈性體、PMMA[聚_(甲基丙烯酸甲酯)、聚烯烴、纖維素、聚乙烯基]醇(PVA)、聚(甲基丙烯酸羥基乙酯(PHEMA)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯腈)(PAN)、氟乙烯-共六-氟丙烯(FEP)、特氟隆(PTFE)、Co—Cr合金、其共聚物及其混合物。
95.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中提供所述可交聯的蛋白作為一種進一步包含一個加強背襯層的蛋白基質，其中所述加強背襯層是機械改性的以便于增加蛋白基質與背襯層 界面的表面積。
96.根據權利要求95所述的貼劑或敷料，其中所述機械改性包括以下一項或多項:蝕刻、雕刻、切割、紋刻或紋織。
97.一種生產根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料的方法，其中該酶溶液或包含酶的溶劑溶液包括合并了一種或多種揮發性溶劑的溶液或懸浮液中的酶。
98.根據權利要求97所述的方法，其中該揮發性溶劑包括以下一項或多項:乙酸乙酯、苯、二氯甲烷、丙酮、乙腈、氯仿、揮發性液態硅酮(六甲基二硅氧烷(HMDS)、八甲基環四硅氧烷、十甲基環戊硅氧烷、八甲基三硅氧烷)、揮發性的烷類(正己烷、異辛烷、辛烷、新戊烷)、揮發性的碳氟化合物(五氟丙烷、全氟庚烷、全氟甲基環己烷)、醇類(1-丙醇、2-丙醇、乙醇)及其混合物。
99.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中在合并到該貼劑或敷料中之前，將該酶包入膠囊。
100.根據權利要求99所述的貼劑或敷料，其中將該酶裝入一種材料的膠囊中，該材料選自下組，該組由以下項構成:PLA、PGA、PLGA、k_角叉藻聚糖、脂質體、明膠、膠原、纖維蛋白原、白蛋白、聚乙二醇、聚乙烯醇、纖維素醚。
101.一種生產根據權利要求99或100所述的貼劑或敷料的方法，其中將該酶通過一種技術包入膠囊，該技術選自下組，該組由以下項構成:振動噴嘴及噴霧干燥、鍋包衣、空氣懸浮包衣、離心擠出(共擠出)、物理-化學法(離子型凝膠化或凝聚(coaceravation))、化學法(界面縮聚、界面交聯、原位聚合以及基質聚合)。
102.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中在合并到該貼劑或敷料中之前，對該酶進行化學改性。
103.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中通過暴露于電子束輻射下對該貼劑或敷料進行滅菌以達到10_6的無菌保證水平。
104.根據權利要求103所述的貼劑或敷料，其中該放射劑量在10kGy-50kGy的范圍內。
105.根據權利要求104所述的貼劑或敷料，其中該放射劑量在20kGy-40kGy的范圍內。
106.根據權利要求103-105所述的貼劑或敷料，進一步合并一種輻射防護劑，該輻射防護劑選自下組，該組由以下項構成:抗壞血酸鹽、苯甲醇、苯甲酸芐酯、叔丁對甲氧酚(BHA)、三氯叔丁醇、半胱氨酸、甘露醇、尼泊金甲酯、煙酰胺、苯酚、丙二醇、沒食子酸丙酯、對羥基苯甲酸丙酯、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、水楊酸鈉、硫代硫酸鈉、生育酚、海藻糖。
107.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，進一步合并一種緩沖劑，該緩沖劑任選地選自下組，該組包括:乙酸鈉、HEPES、檸檬酸鈉、苯甲酸鈉。
108.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，進一步包括一種或多種增塑劑和/或柔性增強劑，該增塑劑和/或柔性增強劑任選地選自下組，該組由以下項構成:甘油、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚山梨酯20、聚山梨酯80。
109.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，進一步包括一種或多種發泡穩定齊U，該發泡穩定劑任選地選自下組，該組由以下項構成:離子表面活性劑(即SDS)、羥基丙基甲基纖維素、透明質酸、甘氨酸、右旋糖酐。
110.根據以上權利要求中任一項所述的貼劑或敷料，其中多種分離的、包含酶的蛋白基質片段一起形成一個單個的貼劑或敷料。
111.根據權利要求110所述的貼劑或敷料，其中每個片段的直徑在0.1cm至IOcm的范圍內。
112.根據權利要求111所述的貼`劑或敷料，其中每個片段的直徑在lcm-5cm的范圍內。
全文摘要
包含干明膠組合物的貼劑及其使用與制造方法。
文檔編號A61L15/38GK103118713SQ201180044965
公開日2013年5月22日 申請日期2011年8月5日 優先權日2010年8月5日
發明者奧萊恩·普里斯-布魯姆, 托馬斯·拜爾, 查蓋·康羅思, 蓋伊·托莫, 瑪麗亞·齊夫 申請人:生命連結有限公司