使用了¹³C碳酸鹽的胃內(nèi)酸度的定量測定方法

專利名稱：使用了¹³C碳酸鹽的胃內(nèi)酸度的定量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明 涉及使用13C標(biāo)記碳酸化合物測定哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)的酸度的方法。更詳細(xì)而言，本發(fā)明涉及使用在給予13C標(biāo)記碳酸化合物后排出的呼氣非侵襲性地定量測定哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的方法。另外，本發(fā)明涉及通過測定胃內(nèi)酸度的傾向(分為胃酸過多癥、正常、低酸癥、及無酸癥)而進(jìn)行的、與胃酸分泌有關(guān)的疾病的診斷方法、及測定具有抑制胃酸作用的藥物(以下，總稱為“胃酸抑制劑”。)的藥效的方法。進(jìn)而，作為上述方法的應(yīng)用例，本發(fā)明涉及從其他觀點(diǎn)考慮，針對受試者、評價(jià)CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)的方法、以及評價(jià)經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物對受試者的藥效、及對該藥物的敏感性的方法。
背景技術(shù)：
醫(yī)療用藥物多以有機(jī)酸及有機(jī)堿形式被合成。已知這樣的有機(jī)酸及有機(jī)堿中的一些化合物受到胃內(nèi)酸度的影響，結(jié)果生物利用度變動(dòng)較大，未出現(xiàn)預(yù)想的藥理效果、或?qū)е挛搭A(yù)料到的嚴(yán)重的副作用。另外，目前正迎來老齡化社會(huì)，據(jù)說低酸癥、無酸癥的患者數(shù)量激增。在這種情況下，人們認(rèn)為如果能在藥物治療前預(yù)先測定患者的胃內(nèi)酸度(HCl濃度X胃液量)的傾向(分為胃酸過多癥、正常、低酸癥、無酸癥等)，則能夠得到對于藥物的選擇、該藥物的治療效果以及副作用預(yù)測非常有用的信息。H2-拮抗劑及質(zhì)子泵遏制劑(PPI (proton pump inhibitor))等胃酸分泌抑制劑的出現(xiàn)對于胃潰瘍及十二指腸潰瘍的治療有很大貢獻(xiàn)。然而，近年來，治療后的復(fù)發(fā)(尤其是反流性食管炎)成為問題，在醫(yī)學(xué)界，包括重新審視胃潰瘍及十二指腸潰瘍的治療方法，注目于治療方法本身。使用了胃酸分泌抑制劑的治療抑制胃酸分泌，其治療效果可通過測定胃酸的基礎(chǔ)分泌量來評價(jià)。另外，反流性食管炎的復(fù)發(fā)是由胃酸分泌抑制劑的給藥中止導(dǎo)致的反彈(rebound)現(xiàn)象，認(rèn)為也能夠通過測定胃酸分泌量對其進(jìn)行一定程度的預(yù)測。如上所述一般認(rèn)為通過測定胃內(nèi)酸度，可在一定程度上預(yù)測藥品的治療效果、副作用。另外，根據(jù)疾病的種類不同，胃內(nèi)酸度的傾向漸已判明(例如，胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌、慢性胃炎、肝 膽道 胰疾病、惡性貧血、復(fù)合維生素B缺乏癥、幽門狹窄、Zollinger-Ellison綜合征等)，認(rèn)為胃內(nèi)酸度的測定可廣泛利用于疾病的診斷。作為現(xiàn)在已知的胃酸分泌量的測定方法，可舉出使用鼻-胃管、在給予促進(jìn)分泌的刺激的同時(shí)從胃中采集酸的方法。但是，所述方法是侵襲性的、給受試者帶來肉體及精神上的負(fù)擔(dān)，因而不實(shí)用。另外，作為非侵襲性的方法，提出了如下方法經(jīng)口給予受試者含有同位素的大量的非水溶性碳酸鹽，從被呼氣排出的二氧化碳中的同位素的量來測定胃液分泌的量的方法(專利文獻(xiàn)I)。然而，該方法是相對于完全中和胃內(nèi)的酸度結(jié)果產(chǎn)生的二氧化碳、測定其中含有的同位素的量的方法，因此需要給予受試者與胃酸量相比為過剩量的碳酸鹽。而且，直到胃酸被給予的碳酸鹽完全中和的時(shí)間、和直到呼氣中的二氧化碳的同位素濃度穩(wěn)定化的時(shí)間的至少60分鐘(優(yōu)選至少150分鐘)需要等待呼氣采集，存在測定需要時(shí)間這樣的問題。另外，提出了如下方法與上述方法同樣，經(jīng)口給予受試者含有同位素的組合物，從被呼氣排出的二氧化碳中的同位素的量非侵襲性地測定胃內(nèi)PH的方法(專利文獻(xiàn)2)。但是，該方法是基于如下發(fā)現(xiàn)而完成的通過用腸溶性基劑或胃溶性基劑等PH依賴性溶解性基劑被覆含有用同位素標(biāo)記過的化合物的組合物，從而發(fā)現(xiàn)對應(yīng)于胃內(nèi)的PH而釋出至生物體外的二氧化碳中同位素的行為不同、胃內(nèi)的PH與該標(biāo)記化合物的排出行為之間存在一定關(guān)系，該方法必須使用用PH依賴性溶解性基劑被覆而形成的給藥制劑。專利文獻(xiàn)1:日本特表2009-515139號公報(bào)專利文獻(xiàn)2 :W0 01/97863A
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于使用13C標(biāo)記碳酸化合物、非侵襲地且簡便地定量地測定以人為代表的哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的方法。另外，本發(fā)明的目的在于提供通過測定胃內(nèi)酸度的傾向(分為胃酸過多癥、正常、低酸癥、及無酸癥)而進(jìn)行的與胃酸分泌有關(guān)的疾病的診斷方法、及胃酸抑制劑(例如，包括質(zhì)子泵遏制劑及H2阻斷劑等胃酸分泌抑制劑、以及抗酸劑等中和胃酸的藥劑。)的藥效測定方法。進(jìn)而，作為上述方法的應(yīng)用例，本發(fā)明的目的在于提供針對受試者、評價(jià)CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)的方法、以及評價(jià)經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物對受試者的藥效、及對該藥物的敏感性的方法。本發(fā)明人等為了解決上述課題，經(jīng)口給予哺乳動(dòng)物13C標(biāo)記碳酸化合物，而后對得到的呼氣中的13CO2排出行為進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無關(guān)于哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的高低，13C標(biāo)記碳酸化合物的給藥量(劑量(dose))與呼氣采集時(shí)的A13C(%。)之間存在通過原點(diǎn)的直線相關(guān)關(guān)系。需要說明的是，此處，“ A13C(%。)”是指，呼氣采集時(shí)⑴呼氣中的130)2量相對于12CO2量的比例(“(S 13C)/0、與13C標(biāo)記碳酸化合物給予前呼氣中的13CO2量相對于12CO2 量的比例(“(S13C)?！?之差〔A 13C (%。) = (613C)t-613C)0)o 另外，“給藥量(劑量)”是指給予受試哺乳動(dòng)物的13C標(biāo)記碳酸化合物的量，給予受試哺乳動(dòng)物I個(gè)個(gè)體(Ibody)的13C標(biāo)記碳酸化合物的用量(摩爾數(shù)、重量)及每Ikg受試哺乳動(dòng)物的體重所給予的13C標(biāo)記碳酸化合物的用量(摩爾數(shù)、重量)均包括在內(nèi)。另外發(fā)現(xiàn)在超過規(guī)定給藥量時(shí)，A 13C (%。)相對于13C標(biāo)記碳酸化合物的給藥量(劑量)的曲線，對應(yīng)于哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的高低不同而成為大致一定的值(A13C(%0)平臺(plateau)值)，另外，該A 13C(%。)成為平臺的給藥量(相當(dāng)于上述“規(guī)定給藥量”)隨著哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的不同而不同，給藥量與胃內(nèi)酸度之間存在對應(yīng)關(guān)系，由此確認(rèn)了 通過以A13C(%。)平臺值為指標(biāo)，可測定、評價(jià)各受試者的胃內(nèi)酸度。需要說明的是，在A 13C (%。)成為平臺之前，如前所述，不論哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的高低如何，13C標(biāo)記碳酸化合物的給藥量(劑量)與a13c(%。)之間存在通過原點(diǎn)的直線相關(guān)關(guān)系。進(jìn)而，本發(fā)明人等確認(rèn)了 對于“ A 13C(%。)_時(shí)間曲線下面積” (AUC)相對于13C標(biāo)記碳酸化合物的給藥量(劑量)，也與上述A13C (%。)同樣，在超過規(guī)定給藥量時(shí)，根據(jù)哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的高低不同而成為大致一定的值(AUC平臺值)，另外，該AUC成為平臺的給藥量(相當(dāng)于上述“規(guī)定給藥量”)隨著哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的不同而不同，給藥量與胃內(nèi)酸度之間存在對應(yīng)關(guān)系，與A13C(%。)同樣，通過以AUC平臺值為指標(biāo)，可測定、評價(jià)各受試者的胃內(nèi)酸度。進(jìn)而，在AUC成為平臺之前，與上述A13C(%。)相同，不論哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的高低如何，在13C標(biāo)記碳酸化合物的給藥量(劑量)與AUC之間存在通過原點(diǎn)的直線相關(guān)關(guān)系。根據(jù)上述內(nèi)容，通過本發(fā)明的方法，可通過以上述A13C(%。)為指標(biāo)，從而在不長時(shí)間地限制受試者的情況下、短時(shí)間、且非侵襲性地、定量地測定評價(jià)受試者的胃內(nèi)酸度。本發(fā)明是基于上述見識完成的，包括下述的實(shí)施方案。(I)測定哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的方法(1-1)測定哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的方法，包括如下工序工序(I)，以在經(jīng)口給予規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻排出的受試哺乳動(dòng)物的呼氣為受試試樣，測定該呼氣中排出的13CO2的行為；工序(2)，將上述⑴中得到的13CO2的行為(測定13CO2行為)與預(yù)先針對作為對照的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)而得到的與上述對應(yīng)的13CO2的行為(基準(zhǔn)13CO2行為)進(jìn)行對比 '及工序(3)，基于上述得到的基準(zhǔn)13CO2行為與測定13CO2行為的差異，確定受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度。(1-2)如(1-1)所述的方法，其中，上述13CO2的行為是由如下呼氣求出的A 13C (%。)t (t為呼氣采集時(shí)間，但在30分鐘以內(nèi))，所述呼氣是在經(jīng)口給予后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻、從經(jīng)口給予了 13C標(biāo)記碳酸化合物的受試哺乳動(dòng)物采集的呼氣。(1-3)如(1-1)或(1-2)所述的方法，其中，上述規(guī)定給藥量為IOmg 5g。(1-4)如(1-1) (1-3)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述13C標(biāo)記碳酸化合物為選自堿金屬碳酸鹽、堿土金屬碳酸鹽、碳酸銨、堿金屬碳酸氫鹽、及碳酸氫銨中的至少任一種的碳酸化合物。(1-5)如(1-1) (1-3)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述13C標(biāo)記碳酸化合物為選自碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鈣、碳酸鎂、碳酸鋇、碳酸銨、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉、及碳酸氫銨中的至少任一種的碳酸化合物。(1-6)如(1-1) (1-5)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述作為受試試樣使用的呼氣為在經(jīng)口給予13C標(biāo)記碳酸化合物后20分鐘以內(nèi)、優(yōu)選15分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻排出的受試哺乳動(dòng)物的呼氣。(1-7)如(1-2) (1-6)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，對比工序(2)中使用的對照哺乳動(dòng)物為胃內(nèi)酸度正常的哺乳動(dòng)物，確定工序(3)是如下工序在測定13CO2行為與基準(zhǔn)13CO2行為相同時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高，另外，在測定13CO2行為比基準(zhǔn)13CO2行為低時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低。(II)胃酸抑制劑的藥效測定方法(I1-1)測定胃酸抑制劑對哺乳動(dòng)物的藥效的方法，包括下述工序(I) (4)
工序(I)，在給予胃酸抑制劑后，以在經(jīng)口給予規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻排出的受試哺乳動(dòng)物的呼氣為受試試樣，測定該呼氣中排出的13CO2的行為；工序⑵，將上述⑴中得到的13CO2的行為(測定13CO2行為)與預(yù)先針對如下哺乳動(dòng)物進(jìn)行測定而得到的與上述對應(yīng)的13CO2的行為(基準(zhǔn)13CO2行為)進(jìn)行對比，所述哺乳動(dòng)物是未給予胃酸抑制劑而經(jīng)口給予了規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)；工序(3)，基于上述得到的基準(zhǔn)13CO2行為與測定13CO2行為的差異，確定受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度；工序(4)，以上述得到的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度為指標(biāo)，確定受試胃酸抑制劑對哺乳動(dòng)物的藥效。(I1-2)如(I1-1)所述的方法，其中，上述13CO2的行為是從如下呼氣求出的A 13C (%。)t (t為呼氣采集時(shí)間，但在30分鐘以內(nèi))，所述呼氣是在經(jīng)口給予后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻、從經(jīng)口給予13C標(biāo)記碳酸化合物的受試哺乳動(dòng)物采集的呼氣。(I1-3)如(I1-1)或(I1-2)所述的方法，其中，上述規(guī)定給藥量為IOmg 5g。(I1-4)如(I1-1) (I1-3)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述13C標(biāo)記碳酸化合物為選自堿金屬碳酸鹽、堿土金屬碳酸鹽、碳酸銨、堿金屬碳酸氫鹽、及碳酸氫銨中的至少任一種的碳酸化合物。(I1-5)如(I1-1) (I1-3)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述13C標(biāo)記碳酸化合物為選自碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鈣、碳酸鎂、碳酸鋇、碳酸銨、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉、及碳酸氫銨中的至少任一種的碳酸化合物。(I1-6)如(I1-1) (I1-5)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述作為受試試樣使用的呼氣為在經(jīng)口給予13C標(biāo)記碳酸化合物后20分鐘以內(nèi)、優(yōu)選15分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻排出的受試哺乳動(dòng)物的呼氣。(I1-7)如(I1-1) (I1-6)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，工序(3)是如下工序在測定13CO2行為與基準(zhǔn)13CO2行為相同時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高，另外，測定13CO2行為比基準(zhǔn)13CO2行為低時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低。(I1-8)如(I1-7)所述的方法，其中，工序(4)是如下工序工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，確定為給予的胃酸抑制劑對受試哺乳動(dòng)物沒有藥效；或者，工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，確定為給予的胃酸抑制劑對受試哺乳動(dòng)物有藥效。(I1-9)如(I1-1) (II1-9)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，胃酸抑制劑為質(zhì)子泵遏制劑、H2阻斷劑或抗酸劑。(I1-1O)如(I1-9)所述的方法,其中，質(zhì)子泵遏制劑為選自奧美拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑、雷貝拉唑、及艾美拉唑中的至少一種*阻斷劑為選自雷尼替丁、西咪替丁、法莫替丁、尼扎替丁、拉呋替丁、及鹽酸羅沙替丁乙酸酯中的至少一種；抗酸劑為選自氫氧化鎂、無水磷酸氫鈣、沉降碳酸鈣、碳酸氫鈉、及氧化鎂中的至少一種。(III)針對等試晡乳動(dòng)物，評價(jià)CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活件(代謝能力)、經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的藥效、及/或?qū)υ撍幬锏拿舾行苑椒?II1-1)針對受試哺乳動(dòng)物，評價(jià)CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)、經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的藥效、及/或?qū)υ撍幬锏拿舾行缘姆椒?，包括下述的工?I) (4)工序(I)，給予奧美拉唑或蘭索拉唑后，以經(jīng)口給予規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻排出的受試哺乳動(dòng)物的呼氣為受試試樣，測定該呼氣中排出的13CO2的行為；工序⑵，將上述⑴中得到的13CO2的行為(測定13CO2行為)與預(yù)先針對如下哺乳動(dòng)物進(jìn)行測定而得到的與上述對應(yīng)的3CO2的行為(基準(zhǔn)13CO2行為)進(jìn)行對比，所述哺乳動(dòng)物是未給予奧美拉唑及蘭索拉唑中任一種而給予了規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)；工序(3)，基于上述得到的基準(zhǔn)13CO2行為與測定13CO2行為的差異，確定受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度；工序(4)，以上述得到的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度為指標(biāo)，針對受試哺乳動(dòng)物，確定CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)；確定經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的藥效；及/或確定受試哺乳動(dòng)物對該藥物的敏感性。(II1-2)如(II1-1)所述的方法，其中，上述13CO2的行為是由如下呼氣求出的A 13C (%。)t (t為呼氣采集時(shí)間，但在30分鐘以內(nèi))，所述呼氣是在經(jīng)口給予后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻、從經(jīng)口給予13C標(biāo)記碳酸化合物的受試哺乳動(dòng)物采集的呼氣。(II1-3)如(II1-1)或(II1-2)所述的方法，其中，上述規(guī)定給藥量為IOmg 5g。(II1-4)如(II1-1) (II1-3)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述13C標(biāo)記碳酸化合物為選自堿金屬碳酸鹽、堿土金屬碳酸鹽、碳酸銨、堿金屬碳酸氫鹽、及碳酸氫銨中的至少任一種的碳酸化合物。(II1-5)如(II1-1) (II1-3)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，上述13C標(biāo)記碳酸化合物為選自碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鈣、碳酸鎂、碳酸鋇、碳酸銨、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉、及碳酸氫銨中的至少任一種的碳酸化合物。(II1-6)如(II1-1) (II1-5)中任一項(xiàng)所述的方法,其中，上述作為受試試樣使用的呼氣為在經(jīng)口給予13C標(biāo)記碳酸化合物后20分鐘以內(nèi)、優(yōu)選15分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻排出的受試哺乳動(dòng)物的呼氣。(II1-7)如(II1-1) (II1-6)中任一項(xiàng)所述的方法其中，工序(3)是如下工序測定13CO2行為與基準(zhǔn)13CO2行為相同時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高，另外，測定13CO2行為低于基準(zhǔn)13CO2行為時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低。(II1-8)如(II1-7)所述的方法，其中，工序⑷中，包括針對受試哺乳動(dòng)物確定CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)的工序，
該工序⑷是如下工序在工序(3)中確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，針對該受試哺乳動(dòng)物、確定為CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)為正?；蚋?；或者在上述工序(3)中確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，針對受試哺乳動(dòng)物、確定為CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)低。(II1-9)如(II1-7)或(II1-8)所述的方法，其中，工序(4)中，包括針對受試哺乳動(dòng)物確定經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的藥效的工序，(a)當(dāng)經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物是在被代謝之前顯示藥效的藥物時(shí)，上述工序(4)是如下工序在工序(3)中確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，確定為該藥物對該受試哺乳動(dòng)物藥效低；或者，在工序(3)中確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，確定為該藥物對該受試哺乳動(dòng)物藥效高；或者，(b)當(dāng)經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或CYP2C 19和CYP3A4兩者代謝的藥物是通過代謝而顯示藥效的藥物時(shí)，上述工序(4)是如下工序在工序(3)中確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，確定為該藥物對該受試哺乳動(dòng)物藥效高；或者，在工序(3)中確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，確定為該藥物對該受試哺乳動(dòng)物藥效低。(II1-10)如(II1-7) (II1-9)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，工序(4)中，包括確定受試哺乳動(dòng)物對經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的敏感性的工序，(a)當(dāng)經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物是在被代謝之前顯示藥效的藥物時(shí)，上述工序(4)是如下工序在工序(3)中確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物對該藥物的敏感性高，或者，在工序(3)中確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物對該藥物的敏感性低；或者，(b)當(dāng)經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物是通過代謝而顯示藥效的藥物時(shí)，上述工序(4)是如下工序在工序(3)中確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物對該藥物的敏感性低，或者，在工序(3)中確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物對該藥物的敏感性高。(II1-1l)如(II1-7)或(II1-8)所述的方法，其中，經(jīng) CYP2C19 單獨(dú)或經(jīng) CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物是地西泮、奧美拉唑、蘭索拉唑、普萘洛爾、及氯吡格雷中的任一種。(111-12)如(II1-9)或(II1-10)所述的方法，其中，在被CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝之前顯示藥效的藥物為選自地西泮、奧美拉唑、蘭索拉唑、及普萘洛爾中的任一種。(111-13)如(II1-9)或(II1-10)所述的方法，其中，通過經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝而顯示藥效的藥物為氯吡格雷。通過本發(fā)明的胃內(nèi)酸度的測定方法，可在不給包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的受試者帶來精神上或肉體上的負(fù)擔(dān)的情況下，通過以13C標(biāo)記碳酸化合物為經(jīng)口給予劑來使用呼氣試驗(yàn)，從而能夠簡便地、定量地測定胃內(nèi)酸度。另外，通過本發(fā)明的方法，針對受試哺乳動(dòng)物，能夠診斷與胃酸分泌有關(guān)的疾病；能夠測定評價(jià)與胃酸分泌有關(guān)的藥物(例如，質(zhì)子泵遏制劑、H2阻斷劑等胃酸分泌抑制劑)、具有中和胃酸作用的藥物(例如，抗酸劑等)(將它們總稱為“胃酸抑制劑”)的藥效；或者，能夠簡單地測定評價(jià)經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的藥效、對該藥物的敏感性(例如，包括它們的代謝酶的缺陷等)。例如，當(dāng)使用與胃酸分泌有關(guān)的藥物中的蘭索拉唑、蘭索拉唑這樣的質(zhì)子泵遏制劑時(shí)，該藥物受到由CYP2C19及CYP3A4肝代謝酶進(jìn)行的代謝，因而通過測定在給予這些藥物后的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度，能夠測定評價(jià)該受試哺乳動(dòng)物的CYP2C19及CYP3A4的酶活性(代謝能力)(CYP2C19、CYP3A4的基因缺損、多態(tài)型的存在而導(dǎo)致的該肝代謝酶的降低、允進(jìn))。另外，從上述觀點(diǎn)考慮，本發(fā)明可提供以包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物作為受試對象、針對該哺乳動(dòng)物測定評價(jià)CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)的方法，并且，可提供測定評價(jià)在被該酶代謝之前顯示藥效的藥物、或通過被該酶代謝而顯示藥效的藥物對于受試哺乳動(dòng)物的藥效(這也可被認(rèn)為是受試哺乳動(dòng)物對這些藥物的敏感性)的方法。


[圖1]⑴表示給藥制劑的各種給藥量(劑量)與A13C(%。)的相關(guān)關(guān)系。⑵表示給藥制劑的各種給藥量(劑量)與“ A13C(%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUCt)的相關(guān)關(guān)系。此處，“時(shí)間”是指從給藥制劑的給予至呼氣采集的時(shí)間(t)。可知達(dá)到一定的給藥量時(shí)，與受試者(哺乳動(dòng)物)的胃內(nèi)酸度高低無關(guān)，給藥量與A 13C (%。)及AUCt均顯示通過原點(diǎn)的直線相關(guān)關(guān)系。另外可知，由于受試者(哺乳動(dòng)物)的胃內(nèi)酸度的高低程度(a:高胃內(nèi)酸度、b:正常胃內(nèi)酸度、c :低胃內(nèi)酸度)不同，因而A13C(%。)成為定值時(shí)的A13C(%。)平臺值及其給藥量、以及AUCt成為定值時(shí)的AUCt平臺值及其給藥量不同。[圖2]為表示在實(shí)驗(yàn)例I中將各種濃度(2500、1000、500、200、100、20或4umol/4mL)的13C-CaCO3懸浮液給予大鼠后、從呼氣中的13CO2測定的A13C(%。)隨時(shí)間變化的推移的圖。圖中，縱軸表示呼氣中A13C (%。)(13C-CaCO3給予后的各采集時(shí)刻(t)時(shí)呼氣中 13C02/12C02 濃度比(6 13Ct)-13C-CaCO3 給予前(0)的呼氣中 13C02/12C02 濃度比(6 13Ctl)〕。另外，橫軸表示13C-CaCO3給予后的呼氣采集時(shí)間(分鐘)。[圖3]為表示以受試者(哺乳動(dòng)物大鼠)為對象進(jìn)行的、4至200iimol/kg的13C-CaCO3給藥量(iimol/kg)與呼氣中A13C(%。)的相關(guān)關(guān)系的圖(實(shí)驗(yàn)例I)。(I)表示以給予給藥制劑5分鐘后采集的呼氣為受試試樣時(shí)的給藥量(ymol/kg)與呼氣中A13C(%。)的相關(guān)關(guān)系；(2)表示以給予10分鐘后采集的呼氣為受試試樣時(shí)、給藥量(ymol/kg)與呼氣中A13C(%。)的相關(guān)關(guān)系；(3)表示以給予15分鐘后采集的呼氣為受試試樣時(shí)、給藥量(u mol/kg)與呼氣中A13C(%。)的相關(guān)關(guān)系。[圖4]表示實(shí)驗(yàn)例I中求出的、4至200ii mol/kg的13C-CaCO3給藥量(umol/kg)與“ A13C(%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC)的相關(guān)關(guān)系。相對于13C-CaCO3給藥量(4 200 u mol/kg)的、呼氣采集時(shí)間0至60分鐘的AUC(AUC60)及呼氣采集時(shí)間0至120分鐘的AUC(AUC120)分別示于右側(cè)及左側(cè)。[圖5](I)將實(shí)驗(yàn)例I中求出的4至200 ii mol/kg的13C-CaCO3給藥量(umol/kg)與呼氣采集時(shí)間30分鐘時(shí)的A13C(%。)的相關(guān)關(guān)系示于左側(cè)，另外，將13C-CaCO3給藥量增加至2500 ii mol/kg時(shí)的給藥量(ii mol/kg)與呼氣采集時(shí)間30分鐘時(shí)的A13C(%0)的關(guān)系示于右側(cè)(其中，縱軸用Log表示)。(2)將實(shí)驗(yàn)例I中求出的4至200 ii mol/kg的13C-CaCO3給藥量(U mol/kg)與呼氣采集時(shí)間0至60分鐘的AUC(AUC60)的相關(guān)關(guān)系示于左側(cè)(與圖4的右圖相同)。另外，將13C-CaCO3給藥量增加至2500 ii mol/kg時(shí)的給藥量(U mol/kg)與AUC60的關(guān)系示于右側(cè)(其中，縱軸用Log表示)。[圖6]_口_及-■_分別為針對第I組(對照組正常大鼠)及第2組(胃內(nèi)酸度降低模型組)測定出的、呼氣中A13C(%。)(給予13C-CaCO3后的各呼氣采集時(shí)刻(t)的呼氣中S 13Ct-13C-CaCO3給予前的呼氣中S13Ctl)隨著13C-CaCO3懸浮液給予后的經(jīng)過時(shí)間(呼氣采集時(shí))變化的推移(實(shí)驗(yàn)例2)。

[圖7]_□_及-■-表示向第I組及第2組(對照組正常大鼠)分別以500 u mol/kg及1000 u mol/kg的給藥量給予13C-CaCO3懸浮液后、呼氣中A 13C (%。)(給予13C-CaCO3后的各呼氣采集時(shí)刻的呼氣中S 13Ct-13C-CaCO3給予前的呼氣中S13Ctl)隨著給予后的時(shí)間(t)變化的推移。另外，-A-及-▲-表示向第3組及第4組(胃酸增加模型組)分別以500 u mol/kg及1000 u mol/kg的給藥量給予13C-CaCO3懸浮液后、呼氣中A 13C (%0)隨著給予后的時(shí)間(t)變化的推移(實(shí)驗(yàn)例3)。[圖8]表示在實(shí)驗(yàn)例3中針對第I組(對照組正常大鼠- _)及第4組(胃酸增加模型組-▲ _)測定的、4至1000 u mol/kg的13C-CaCO3給藥量(y mol/kg)與呼氣采集時(shí)間0至120分鐘的“ A 13C (%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC120)的相關(guān)關(guān)系。[圖9]表示在實(shí)驗(yàn)例4中、以每Ikg體重4ml的比例給予大鼠4ii mol/4mL的13C-CaCO3懸浮液、或6、16、46、96 u mol/4mL 的各濃度的 12C-CaCO3 與 4 u mol/4mL 的 13C-CaCO3的混合給藥液(10、20、50、100iimol/4mL)后的呼氣中A 13C(%。)(給予給藥液后的各采集時(shí)刻(t)的呼氣中S 13Ct-給予給藥液前的呼氣中S13Ctl)的推移。[圖10]表示實(shí)驗(yàn)例5中、以每Ikg體重4ml的比例給予大鼠4ii mol/4mL的13C-CaCO3懸浮液、或4iimol/4mL的13C-CaCO3與乙酸鈉的混合液(最終濃度10、20、50、100 u mol/4mL)后的呼氣中A 13C(%0)(給予后的各采集時(shí)刻的呼氣中S 13C值-給予前的呼氣中S 13C值)的推移。[圖11]為表示在實(shí)驗(yàn)例6中在將各種濃度(400、300、200、100、50*20mg/50ml)
的13C-CaCO3懸浮液給予人(50ml/個(gè)體)后、從呼氣中的13CO2測定出的A 13C(%。)的隨時(shí)間推移的圖。圖中，縱軸表示呼氣中A13C(%。)。另外，橫軸表示13C-CaCO3給予后的呼氣采集時(shí)間(分鐘)。
[圖12]為表示以受試者(人)為對象、20至200mg/個(gè)體的13C-CaCO3給藥量(mg/個(gè)體)與呼氣中A13C(%。)的相關(guān)關(guān)系的圖(實(shí)驗(yàn)例6)。(I)表示以給予給藥制劑8分鐘后采集的呼氣為受試試樣時(shí)、給藥量(mg/個(gè)體)與呼氣中A13C(%。)的相關(guān)關(guān)系；(2)表示以給予12分鐘后采集的呼氣為受試試樣時(shí)、給藥量(mg/body)與呼氣中A13C(%。)的相關(guān)關(guān)系；(3)表示以給予16分鐘后采集的呼氣為受試試樣時(shí)、給藥量(mg/body)與呼氣中A 13C(%。)的相關(guān)關(guān)系。[圖13]表示實(shí)驗(yàn)例I中求出的、20至200mg/個(gè)體的13C-CaCO3給藥量(mg/kg)與“ A 13C (%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC)的相關(guān)關(guān)系。相對于13C-CaCO3給藥量(20 200mg/個(gè)體)的、呼氣采集時(shí)間0至20分鐘的AUC (AUC20)及呼氣采集時(shí)間0至60分鐘的AUC (AUC60)分別示于左側(cè)及右側(cè)。[圖14]將實(shí)驗(yàn)例6中求出的20至200mg/個(gè)體的13C-CaCO3給藥量(mg/個(gè)體)與呼氣采集時(shí)間30分鐘的A13C(%。)的相關(guān)關(guān)系示于左側(cè)，另外，將13C-CaCO3給藥量增加至400mg/個(gè)體時(shí)的給藥量(mg/個(gè)體)與呼氣采集時(shí)間30分鐘時(shí)的A 13C(%。)的關(guān)系示于右側(cè)(其中，縱軸用Log表示)。[圖15]為表示對作為CYP2C19及CYP3A4遏制劑的酮康唑給作為質(zhì)子泵遏制劑的奧美拉唑的胃酸分泌能力帶來的影響進(jìn)行研究的結(jié)果的圖(參見實(shí)驗(yàn)例7)。[圖16]為表示對作為CYP2C19及CYP3A4遏制劑的酮康唑?qū)ν颠虻难“迥种谱饔脦淼挠绊戇M(jìn)行研究的結(jié)果的圖(參見實(shí)驗(yàn)例8)。
具體實(shí)施例方式(I)胃內(nèi)酸度的測定中使用的制劑如下文所述，本發(fā)明的胃內(nèi)酸度的測定法是以經(jīng)口給予了 13C標(biāo)記碳酸化合物的哺乳動(dòng)物為受試對象進(jìn)行的。此處，13C標(biāo)記碳酸化合物只要是如下化合物即可，沒有特別限制在經(jīng)口給予受試者該化合物后，該化合物在該受試者的胃內(nèi)與胃酸反應(yīng)，根據(jù)情況隨后被分解或代謝，在呼氣中以13C標(biāo)記二氧化碳(13CO2)的形式被排出。作為在胃內(nèi)與胃酸反應(yīng)后、快速地以13C標(biāo)記二氧化碳形式出現(xiàn)在呼氣中的化合物，可大量舉出溶解并在分子內(nèi)產(chǎn)生13C標(biāo)記碳酸根離子(13co3_2)或13C標(biāo)記碳酸氫根離子(H13CO3-1)的13C標(biāo)記碳酸化合物。被13C標(biāo)記的所述碳酸化合物包括例如碳酸鈉、碳酸鉀等這樣的堿金屬碳酸鹽、碳酸鈣、碳酸鎂、碳酸鋇等這樣的堿土金屬碳酸鹽、及碳酸銨等狹義的碳酸化合物，除此之外還包括碳酸氫鉀、碳酸氫鈉等這樣的堿金屬碳酸氫鹽、碳酸氫銨等碳酸氫化合物。優(yōu)選為碳酸鈣、碳酸鎂、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、或碳酸氫鉀。所述化合物由于不易受到吸收或代謝等生理要素的影響，因而可正確地反映胃酸的分泌量地進(jìn)行測定。另外，作為在生物體內(nèi)溶解后、在被分解或被代謝后以13C標(biāo)記二氧化碳(13CO2)形式出現(xiàn)在呼氣中的13C標(biāo)記碳酸化合物以外的13C標(biāo)記化合物，可舉出用13C標(biāo)記的氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸或其鹽(例如，Na等堿金屬的鹽)、糖類、脂質(zhì)等。上述物質(zhì)均為在消化吸收后、由肝代謝而在呼氣中產(chǎn)生13C標(biāo)記二氧化碳的物質(zhì)。此處，作為氨基酸，可舉出甘氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸及組氨酸等；作為有機(jī)酸，可舉出乙酸、乳酸、丙酮酸、丁酸、丙酸、辛酸或它們的堿金屬鹽等；作為糖類，可舉出葡萄糖、半乳糖、木糖、乳糖等；作為脂質(zhì)，可舉出三辛酸甘油酯(trioctanoin)等中鏈甘油三酯等；但不限于上述物質(zhì)?？蓛?yōu)選舉出甘氨酸等氨基酸以及乙酸、辛酸等有機(jī)酸及它們的堿金屬鹽(鈉鹽、鉀鹽)。對于利用同位素(13C)進(jìn)行的標(biāo)記方法沒有特別限制，可廣泛采用通常使用的方法。另外，作為用該同位素標(biāo)記的13C標(biāo)記碳酸化合物，也可廣泛使用公知的物質(zhì)、可商業(yè)獲得的物質(zhì)(佐佐木，《5.1安定同位素在臨床診斷中的應(yīng)用》，化學(xué)領(lǐng)域107《安定同位素在醫(yī) 藥學(xué)、生物學(xué)中的應(yīng)用》PP. 149-163(1975)南江堂；梶原、RADIOISOTOPES, 41,45-48(1992)等)。本發(fā)明的 方法中給予受試對象物(哺乳動(dòng)物)的制劑(以下，簡稱為“給藥制劑”)可以是上述13C標(biāo)記碳酸化合物本身(單體)，還可以是配合其他成分而制備出的組合物，作為所述其他成分，例如為乳糖，白糖，氯化鈉，葡萄糖，尿素，淀粉，碳酸鈣，高嶺土，結(jié)晶纖維素，硅酸等賦型劑；單糖漿，葡萄糖液，淀粉液，明膠溶液，羧甲基纖維素，蟲膠，甲基纖維素，磷酸鉀，聚乙烯吡咯烷酮等粘合劑；干淀粉，海藻酸鈉，瓊脂粉末，昆布糖粉末、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯類，十二烷基硫酸鈉，硬脂酸單甘油酯，淀粉，乳糖等崩解劑；季銨堿，十二烷基硫酸鈉等促吸收劑；甘油，淀粉等保濕劑；精制滑石，硬脂酸鹽，硼酸粉末，聚乙二醇等潤滑劑；其他添加劑(例如，矯臭劑、矯味劑、穩(wěn)定化劑等)等。對于本發(fā)明中使用的給藥制劑來說，固態(tài)狀、半固態(tài)狀及液態(tài)均可，可制備成粉末、顆粒、片劑、丸劑、液劑等多種形狀。但本發(fā)明中使用的給藥制劑優(yōu)選在胃內(nèi)迅速溶解，從該觀點(diǎn)考慮，封入膠囊基材而形成的膠囊劑的形態(tài)不太理想。另外，同樣地從即溶性的觀點(diǎn)考慮，顆粒、片劑及丸劑也優(yōu)選為未被具有PH依賴溶解性的覆膜、不易溶解的糖衣等被覆的形態(tài)。對于給藥制劑的量沒有特別限制，但從容易服用的觀點(diǎn)考慮，通?？稍诿繂挝唤o藥IOmg 20g、優(yōu)選IOmg IOg的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。另外，對于在給藥制劑的給藥單位形態(tài)中配合的13C標(biāo)記碳酸化合物的比例沒有特別限制，但通?？稍诿縄個(gè)個(gè)體(Ibody) IOmg 5g、優(yōu)選IOmg 4g、較優(yōu)選20mg 2g的范圍內(nèi)適當(dāng)選擇。需要說明的是，上述配合比例可根據(jù)受試哺乳動(dòng)物的種類、個(gè)體的體重適當(dāng)調(diào)整。給藥在采集用于測定胃內(nèi)酸度的呼氣的30分鐘以內(nèi)、優(yōu)選20分鐘以內(nèi)、較優(yōu)選15分鐘以內(nèi)進(jìn)行，給藥次數(shù)通常為I 2次，優(yōu)選為1次。(II)胃內(nèi)酸度的測定方法本發(fā)明的哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的測定以從經(jīng)口給予了前述的給藥制劑(13C標(biāo)記碳化合物或含有其的制劑)的哺乳動(dòng)物(以下，也稱為“受試者”)采集的呼氣為測定對象的受試試樣非侵襲性地行進(jìn)行。作為本發(fā)明的對象的哺乳動(dòng)物只要是具有發(fā)揮與人的呼吸系統(tǒng)及消化系統(tǒng)相同的作用的呼吸系統(tǒng)及消化系統(tǒng)(尤其是胃酸分泌系統(tǒng))的哺乳動(dòng)物即可，沒有特別限制，可舉出人、猴、狗、貓、兔子、豚鼠、大鼠、小鼠等。優(yōu)選人，但在使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)，從獲得、處理的簡便性方面考慮，優(yōu)選狗、兔子、豚鼠、大鼠、小鼠。作為胃內(nèi)酸度的測定方法的一個(gè)方案，可舉出具有下述的工序(I) (3)的方法。工序(1)，以在經(jīng)口給予規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻排出的受試哺乳動(dòng)物的呼氣為受試試樣，測定該呼氣中排出的13CO2的行為；
工序(2)，將上述(I)中得到的13CO2的行為(以下，稱為“測定13CO2行為”)與預(yù)先針對作為對照的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)而得到的與上述對應(yīng)的13CO2的行為(以下，稱為“基準(zhǔn)13CO2行為”)進(jìn)行對比；工序(3)，基于上述得到的測定13CO2行為與基準(zhǔn)13CO2行為的差異，確定受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度。需要說明的是，作為上述工序⑴及⑵中使用的“13c標(biāo)記碳酸化合物”，具體而言，可舉出(I)章節(jié)中說明過的13C標(biāo)記碳化合物，但也可用(I)章節(jié)中說明過的含有該13C標(biāo)記碳酸化合物的制劑來代替該13C標(biāo)記碳酸化合物(本發(fā)明中，將13C標(biāo)記碳酸化合物或含有其的經(jīng)口給藥制劑一并總稱為“給藥制劑”)。也就是說，上述記載的工序(I)中“13c標(biāo)記碳酸化合物”可以改稱其為“給藥制劑”。以下，說明胃內(nèi)酸度的測定方法的各工序。(I)測定呼氣中排出的13CO2的行為的工序工序⑴是如下工序以預(yù)先經(jīng)口給予了規(guī)定給藥量的給藥制劑(13C標(biāo)記碳化合物或含有其的制劑)的受試者(哺乳動(dòng)物)為對象，由該受試者采集呼氣，測定了該采集的呼氣中含有的13CO2的行為。對于對受試者經(jīng)口給予給藥制劑的方法、以及給予時(shí)期沒有特別限制。在測定基礎(chǔ)胃內(nèi)酸度(空腹時(shí)胃內(nèi)酸度)時(shí)，優(yōu)選在不受進(jìn)食影響的空腹時(shí)給予。希望較優(yōu)選禁食開始至少4小時(shí)后、較優(yōu)選10小時(shí)后經(jīng)口給予。但為了在抑制個(gè)體間的測定值的偏差的情況下測定通常的生理狀態(tài)的胃內(nèi)酸度，優(yōu)選在刺激胃酸分泌后測定胃內(nèi)酸度。在這種情況下，服用試驗(yàn)飲料(例如，水、含咖啡因飲料、酒精飲料、肉湯、例如Ca I or i eMate (注冊商標(biāo))等固態(tài)或液態(tài)的食品等)、或注射胃酸分泌刺激劑(例如，鹽酸組胺、鹽酸倍他唑、胃泌素、胰島素等)，刺激胃酸分泌，然后優(yōu)選在至少I小時(shí)后經(jīng)口給予。經(jīng)口給予受試者的給藥制劑在進(jìn)入胃內(nèi)后被胃液溶解，13C標(biāo)記碳酸化合物溶出，其與胃酸反應(yīng)，由此生成13C標(biāo)記二氧化碳(13CO2),其逐步從在呼氣中被排出。作為13C標(biāo)記碳酸化合物，以下以使用13C標(biāo)記碳酸鈣(Ca13CO3)的情況為例給出生成13C標(biāo)記二氧化碳(13CO2)的反應(yīng)式。Ca13C03+2HCl — CaCl2+H20+13C02 f需要說明的是，作為本發(fā)明中測定的“13C02的行為”，可舉出例如下述(a) ⑷(a)在經(jīng)口給予給藥制劑(包括13C標(biāo)記碳酸化合物單獨(dú)制劑。以下相同)后，在30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻在呼氣中排出的13CO2量；(b)在經(jīng)口給予規(guī)定的給藥量的給藥制劑后，在30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻在呼氣中排出的13CO2量相對于12CO2量的比例(13co2/12co2濃度比:S13C值)；(c)在經(jīng)口給予規(guī)定給藥量的給藥制劑后，在30分鐘以內(nèi)的任意的呼氣采集時(shí)(t)的呼氣中含有的“130)2量相對于120)2量的比例”(以下，將其稱為“ S13ct”)、與在經(jīng)口給予給藥制劑之前的呼氣中含有的“13C02量相對于12CO2量的比例”(以下，將其稱為“ 8 13C0")之差[A 13C (%。) = 6 13Ct- 6 13C0](以下，將其稱為 “ A 13C (%。)t” 或 “ A 13C (%。)，，)；(d)通過以從給予規(guī)定給藥量的給藥制劑開始直至呼氣采集的時(shí)間為橫軸、以A13C(%0)為縱軸畫出圖形而算出的“A13C(%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC)。優(yōu)選為A 13C (%。)及“ A 13C (%。)-時(shí)間曲線下面積” (AUC)。較優(yōu)選為A 13C (%。)。
上述13CO2的行為具體而言可如下測定。在經(jīng)口給予受試者規(guī)定量的給藥制劑后，按照常規(guī)方法13C呼氣檢查法(梶原，RADI0IS0T0PESM, 41,45-48 (1992);梶原等，RADI0IS0T0PS，41，331-334 (1992)等)采集呼氣，以各呼氣采集時(shí)⑴的“13C02/12C02濃度比(6 13C) ”“ S 13Ct”:在呼氣中排出的二氧化碳13CO2量相對于12CO2量的比例，t表示呼氣采集時(shí)間(給予給藥制劑后的經(jīng)過時(shí)間)。)形式測定該呼氣中排出的13CO2量。接著，由“ s 13Ct ”與在給予給藥制劑之前預(yù)先測定的基準(zhǔn)“ 13C02/12C02濃度比(6 13C) ” (以下，也稱為 “ 5 13C?！?。)之差，算出 “ A 13C(%。)”〔 A 13C(%。) = 6 13Ct- 6 13C0)。在給予給藥制劑后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻(t)、在呼氣中排出的13CO2的行為可由上式〔A13C(%0) = S13Ct-S13Ctl)求出(此處，“t”表示從給予給藥制劑開始30分鐘以內(nèi)的呼氣采集時(shí)間)。另外，被呼氣排出的13CO2的經(jīng)時(shí)行為可通過追蹤上述A 13C(%0 )的隨時(shí)間的推移來求得。具體而言，可通過以呼氣采集時(shí)間(分鐘)換言之為給予給藥制劑后的經(jīng)過時(shí)間(分鐘)為橫軸、以A13C(%。)為縱軸畫出圖形來求出。需要說明的是，采集呼氣中含有的標(biāo)記物(13CO2)的測定、分析可使用液體閃爍計(jì)數(shù)管法、質(zhì)譜法、紅外分析法、發(fā)射光譜法、磁共振波譜法等這樣的常規(guī)使用的分析方法進(jìn)行。從測定精度方面考慮，優(yōu)選紅外分光分析法及質(zhì)譜法。進(jìn)而，“ A13C(%。)_時(shí)間曲線下面積”(AUC)可由上述得到的以給予給藥制劑后的經(jīng)過時(shí)間(呼氣采集時(shí)間t)(分鐘)為橫軸、以A13C(%。)為縱軸得到的圖形、通過計(jì)算其曲線下面積而求出。需要說明的是，呼氣采集時(shí)間通常為經(jīng)口給予給藥制劑開始經(jīng)過10秒以上之后，較優(yōu)選為經(jīng)過I分鐘以上之后。作為從給予給藥制劑后開始至采集呼氣的時(shí)間，可優(yōu)選舉出30分鐘以內(nèi)、較優(yōu)選20分鐘以內(nèi)、更優(yōu)選15分鐘以內(nèi)。例如，在經(jīng)口給予給藥制劑開始10秒以上30分鐘以內(nèi)、優(yōu)選I分鐘以上20分鐘以內(nèi)、較優(yōu)選I分鐘以上15分鐘以內(nèi)的時(shí)間內(nèi)、采集I次或2次呼氣作為受試試樣。優(yōu)選呼氣采集次數(shù)為I次。將上述得到的A13C(%。)及“ A13C(%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC)相對于給藥制劑的給藥量(劑量)分別求得的結(jié)果的示意圖分別示于圖1(1)及(2)。圖1中，a表示針對胃內(nèi)酸度比正常高的哺乳動(dòng)物的A13C(%。)或AUC與給藥量(劑量)的相關(guān)關(guān)系，b表示針對胃內(nèi)酸度為正常的哺乳動(dòng)物的A13C(%。)或AUC與給藥量(劑量)的相關(guān)關(guān)系，c表示針對胃內(nèi)酸度比正常低的哺乳動(dòng)物的A13C(%。)或AUC與給藥量(劑量)的相關(guān)關(guān)系。如該圖所示，無論胃內(nèi)酸度的高低如何，具有正常的胃內(nèi)酸度(以下，也稱為“正常酸度”)的受試者、胃內(nèi)酸度比正常酸度高的受試者(哺乳動(dòng)物)(例如，包括“胃酸過多癥”的患者)、和胃內(nèi)酸度比正常酸度低的受試者(哺乳動(dòng)物)(例如，包括“低酸癥”及“無酸癥”的患者)均有如下關(guān)系給藥制劑的給藥量與A 13C (%。)、或給藥量與A13C(%。)和AUC均在達(dá)到一定的量之前顯示通過原點(diǎn)的線性相關(guān)關(guān)系，但超過一定的量后變?yōu)轱@示一定的值。將上述一定的值分別稱為“ A 13C (%。)平臺值”及“AUC平臺值”，將A13CWf5KAUC開始成為平臺值的給藥量稱為“基準(zhǔn)給藥量”。需要說明的是，上述“ A13C(%。)平臺值”和“基準(zhǔn)給藥量”隨著受試者(哺乳動(dòng)物)的胃內(nèi)酸度不同而發(fā)生變動(dòng)。具體而言，如圖1(1)所示，上述“ A 13C(%。)平臺值”和“基準(zhǔn)給藥量”依賴于受試者(哺乳動(dòng)物)的胃內(nèi)酸度，以正常的胃內(nèi)酸度的“ A13C(%。)平臺值”及“基準(zhǔn)給藥量”為標(biāo)準(zhǔn)值(以下，在本說明書中簡稱為“正常A13C(%。)平臺值”及“正?；鶞?zhǔn)給藥量”。)時(shí)，例如胃酸過多癥的患者那樣的具有高于正常的胃內(nèi)酸度的受試者(高胃酸度受試者)的A13C(%。)平臺值比該正常A13C(%。)平臺值高，基準(zhǔn)給藥量就要比該正?；鶞?zhǔn)給藥量多。另外，低酸癥或無酸癥的患者那樣的胃內(nèi)酸度低于正常的受試者(低胃酸度受試者)的A13C(%。)平臺值比該正常A13C(%。)平臺值低，基準(zhǔn)給藥量就要比該正常基準(zhǔn)給藥量少。在本說明書中，將針對胃內(nèi)酸度高于正常的受試者(哺乳動(dòng)物)得到的“ A13C (%。)平臺值”及“基準(zhǔn)給藥量”簡稱為“高酸度A13C (%。)平臺值”及“高酸度基準(zhǔn)給藥量”，將針對胃內(nèi)酸度低于正常的受試者得到的“ A 13C (%。)平臺值”及“基準(zhǔn)給藥量”簡稱為“低酸度a13c(%。)平臺值”及“低酸度基準(zhǔn)給藥量”。所述“A13C(%。)平臺值”(正常A13C(%。)平臺值、高酸度A13C(X0)平臺值、低酸度a13c(%。)平臺值)及“基準(zhǔn)給藥量”(正常基準(zhǔn)給藥量、高酸度基準(zhǔn)給藥量、低酸度基準(zhǔn)給藥量)可如下求得預(yù)先以作為對照的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)為對象實(shí)施下述的工序(a) (C)，制作以給藥制劑的給藥量為橫軸、以A13c(%。)為縱軸繪制的圖形(以下，稱為“‘劑量-A 13C (%。)’圖(plot)”)，由此求出。

工序(a)，在給藥量0 2500(劑量)的范圍內(nèi)給對照哺乳動(dòng)物經(jīng)口給予給藥制劑(也包括單獨(dú)含有13C標(biāo)記碳酸化合物的制劑)，測定每單位給藥量的、在哺乳動(dòng)物的呼氣中排出的13CO2量；工序(b)，由上述得到的13CO2量，算出呼氣采集時(shí)(t)的呼氣中的13CO2量相對于12CO2量的比例(13co2/12co2濃度比)(“ S 13Ct")與給予前的呼氣中的13CO2量相對于12CO2量的比例(13C02/12C02 濃度比)(“ S 13C0")之差(A 13C (%。) = 6 13Ct- 6 13Ctl)，求出 A 13C (%。)
t 5工序(C)，繪制上述(b)工序中得到的八13((%。)，相對于給藥制劑的給藥量的圖(plot)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。作為此處使用的對照哺乳動(dòng)物，優(yōu)選與受試哺乳動(dòng)物為相同種的哺乳動(dòng)物。例如，如果測定對象的受試者(哺乳動(dòng)物)是人，則優(yōu)選作為對照的受試者(哺乳動(dòng)物)也是人。另外，如果測定對象的受試者(哺乳動(dòng)物)是作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的大鼠，則優(yōu)選作為對照的受試者(哺乳動(dòng)物)也是大鼠。需要說明的是，雖然沒有限制，但優(yōu)選性別、年齡或體重等也一致。另外，上述給藥量0 2500 (劑量)的單位例如可舉出“ ii mol/kg”或“mg/個(gè)體”。如實(shí)驗(yàn)例所示，在為大鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)，也可使用“ U mol/kg”的單位，但在人的情況下，優(yōu)選使用“mg/個(gè)體”的單位。正常A13C(%。)平臺值及正?；鶞?zhǔn)給藥量可通過使用作為對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度為正常的哺乳動(dòng)物(正常哺乳動(dòng)物)算出。通常，普通的哺乳動(dòng)物具有正常的胃內(nèi)酸度，但也可使用例如《胃 腸 胰腺功能檢查》(臨床檢查法概要修訂第33版，金原出版株式會(huì)社)、專利文獻(xiàn)I等中記載的其他測定方法預(yù)先確認(rèn)對照哺乳動(dòng)物是否具有正常的胃內(nèi)酸度。需要說明的是，本發(fā)明中所說的胃內(nèi)酸度相當(dāng)于“胃內(nèi)的鹽酸濃度(mEq/L)X胃液量(L) ”。另外，高酸度A 13C (%。)平臺值及高酸度基準(zhǔn)給藥量可通過作為該對照哺乳動(dòng)物、使用胃內(nèi)酸度高于正常的哺乳動(dòng)物算出。胃內(nèi)酸度高的哺乳動(dòng)物的區(qū)別可通過測定胃內(nèi)酸度的其他方法(參見專利文獻(xiàn)1、上述文獻(xiàn))嚴(yán)加區(qū)別。另外，如后述的實(shí)驗(yàn)例3所示，也可通過向上述正常哺乳動(dòng)物給予促進(jìn)胃酸分泌使其增加的藥物、實(shí)施提高胃內(nèi)酸度的人工措施，來制作胃內(nèi)酸度高的哺乳動(dòng)物，也可使用如此制作的該哺乳動(dòng)物。另外，低酸度A13C(%。)平臺值及低酸度基準(zhǔn)給藥量可通過使用胃內(nèi)酸度低于正常的哺乳動(dòng)物作為該對照哺乳動(dòng)物算出。胃內(nèi)酸度低的哺乳動(dòng)物的區(qū)別可通過測定胃內(nèi)酸度的其他方法(參見專利文獻(xiàn)1、上述文獻(xiàn))嚴(yán)格區(qū)別。另外，如后述的實(shí)驗(yàn)例2所示，也可通過向上述正常哺乳動(dòng)物給予抑制胃酸分泌的藥物降低胃內(nèi)酸度的人工措施，來制作胃內(nèi)酸度低的哺乳動(dòng)物，也可使用如此制作的該哺乳動(dòng)物。工序(I)中預(yù)先給予受試者(哺乳動(dòng)物)的給藥制劑(13C標(biāo)記碳化合物或含有其的制劑)的給藥量可基于針對上述對照哺乳動(dòng)物預(yù)先制作的“劑量- A 13C(%。) ”圖、或由此求出的“基準(zhǔn)給藥量”(正?；鶞?zhǔn)給藥量、高酸度基準(zhǔn)給藥量、低酸度基準(zhǔn)給藥量)來確定。本發(fā)明中，將其稱為“規(guī)定給藥量”。作為工序(I)中使用的規(guī)定給藥量，通常為高酸度基準(zhǔn)給藥量以下的給藥量。優(yōu)選為低酸度基準(zhǔn)給藥量 高酸度基準(zhǔn)給藥量的范圍，較優(yōu)選為正?；鶞?zhǔn)給藥量或其左右(± IOOii mol/kg或± IOOmg/個(gè)體)的量。作為正常基準(zhǔn)給藥量，沒有特別限制，將可舉出例如200 u mol/kg左右或200mg/個(gè)體。以上說明了 “ A13C(%。)平臺值”與“基準(zhǔn)給藥量”的關(guān)系，但如圖1所示，確認(rèn)至IJ “AUC平臺值”與“基準(zhǔn)給藥量”也存在同樣的關(guān)系，因而，也可使用AUC平臺值來代替A 13C(%。)平臺值。⑵對比測定13CO2行為與基準(zhǔn)13CO2行為的工序(3)確定受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的工序工序(2)是對上述工序(I)中得到的13CO2的行為(測定13CO2行為)與預(yù)先針對作為對照的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)而得到的與上述對應(yīng)的13CO2的行為(基準(zhǔn)13CO2行為)進(jìn)行對比的工序。另外，工序(3)是基于在工序⑵中得到的測定13CO2行為與基準(zhǔn)13CO2行為的差異確定受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的工序。此處，“13C02的行為”可舉出前述的下述(a) ⑷，采用與由受試哺乳動(dòng)物測定出的13CO2的行為(測定13CO2行為)相同的13CO2行為作為基準(zhǔn)13CO2行為。(a)在經(jīng)口給予規(guī)定給藥量的給藥制劑(包括13C標(biāo)記碳酸化合物單獨(dú)制劑。以下相同)后，在30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻在呼氣中排出的13CO2量；(b)在經(jīng)口給予規(guī)定的給藥量的給藥制劑后，在30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻在呼氣中排出的13CO2量相對于12CO2量的比例(13C02/12C02濃度比6 13C)；(c)在經(jīng)口給予規(guī)定的給藥量的給藥制劑后，在30分鐘以內(nèi)的任意的呼氣采集時(shí)(t)的呼氣中含有的“130)2量相對于120)2量的比例”(6 13Ct)、與在經(jīng)口給予給藥制劑之前的呼氣中含有的“13C02量相對于12CO2量的比例”(5 13C0")之差[A 13C(%0) = 8 13Ct- 6 13C0]；(d)通過以從給予規(guī)定給藥量的給藥制劑開始直至呼氣采集的時(shí)間為橫軸、以A13C(%0)為縱軸畫出圖形而算出的“A13C(%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC)。優(yōu)選為A 13C (%。)及 AUC，較優(yōu)選為 A 13C (%。)。例如，以采用A13C(%。)作為“13C02的行為”的情況為例時(shí)，例如，可通過下述的方法定量受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度。(i)向受試哺乳動(dòng)物給予作為規(guī)定給藥量的正?；鶞?zhǔn)給藥量的給藥制劑。(ii)在給藥后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻采集呼氣，由在呼氣中排出的13CO2量求出A 13C (%。)(將其稱為“測定 A 13C (%。)”)。(iii)由針對胃內(nèi)酸度為正常的對照哺乳動(dòng)物預(yù)先制作的“劑量- A 13C(%。) ”圖(表示給藥制劑的給藥量與A13C(%。)的關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線)，求出與正?；鶞?zhǔn)給藥量對應(yīng)的A 13C (%。)(稱為“基準(zhǔn)A 13C (%。)”)，與上述測定A 13C (%。)進(jìn)行對比。(iv)測定A13C(%。)低于基準(zhǔn)A13C(%。)時(shí)，可確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低于正常值。(V)測定A13C(%。)與基準(zhǔn)A13C(%。)相同時(shí)，可確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與正常值相同或高于正常值。例如，參照將直至給藥量為200mg/個(gè)體的Ca13CO3經(jīng)口給予給人時(shí)的“劑量-A13C(%。)”圖即圖12的左上圖(實(shí)驗(yàn)例6)進(jìn)行說明時(shí)，在經(jīng)口給予給藥制劑(Ca13CO3) 150mg/個(gè)體后8分鐘的時(shí)刻測定A 13C ( %。)時(shí)，如果A 13C ( %。)是與“劑量-A 13C (%0 ) ”圖相交的值(140)，則判斷為胃內(nèi)酸度為正?；蚋哂谡?，如果低于該值
(140)例如為100時(shí),則判斷為胃內(nèi)酸度低于正常。這時(shí)，可如下定量受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度。(a)求出上述“劑量_A13C(%。)”圖與上述測定A13C(%。)的值相交的給藥量(mg/個(gè)體或y mol/kg)(以下，稱為“碳酸鈣等量”)。(b)由(a)中求出的碳酸鈣等量(mg/個(gè)體或ii mol/kg)利用下式算出胃內(nèi)酸度(M 或 Eq)。胃內(nèi)酸度(mM[mmol])=[碳酸I丐等量(mg/個(gè)體)X 2]/CaCO3的分子量或胃內(nèi)酸度(UEq)=碳酸鈣等量(y mol/kg) X受試哺乳動(dòng)物的體重X 2由此，在圖12的左上圖的“劑量-A 13C (%。)”圖中，測定A 13C (%0 )為100的受試者的碳酸鈣等量(mg/個(gè)體)被判斷為IOOmg/個(gè)體，因而由下式可得，該受試者的胃內(nèi)酸度為 2mM。胃內(nèi)酸度(mM[mmol])= [IOOmg/ 個(gè)體 X 2]/100 (CaCO3 的分子量)。另外，作為其他方法，例如，在以采用“ A 13C(%。)_時(shí)間曲線下面積”(AUC)作為"13CO2的行為”的情況為例時(shí)，可通過下述的方法定量受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度。(i)向受試哺乳動(dòng)物給予作為規(guī)定給藥量的正常基準(zhǔn)給藥量的給藥制劑。(ii)在給予后經(jīng)時(shí)地采集呼氣，由在規(guī)定期間在呼氣中排出的13CO2量求出A13C(%。)，以給予開始至呼氣采集的時(shí)間為橫軸、以A13C(%。)為縱軸繪制圖形，求出“ A 13C (%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC)(稱為“測定AUC，，)。(iii)由針對對照哺乳動(dòng)物預(yù)先制作的“劑量-AUC”圖(表示給藥制劑的給藥量與A13C(%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC)的關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線)，求出與正?；鶞?zhǔn)給藥量對應(yīng)的AUC (稱為“基準(zhǔn)AUC”)，與上述測定AUC進(jìn)行對比。(iv)測定AUC低于基準(zhǔn)AUC時(shí)，可確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低于正常值。(V)另外，測定AUC與基準(zhǔn)AUC相同時(shí)，可確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與正常值相同或高于正常值。在這種情況下，也與使用A13C(%。)作為“13C02的行為”的情況相同，可如下定量受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度。(a)求出上述“劑量-AUC”圖與上述測定AUC的值相交的給藥量(mg/個(gè)體或U mol/kg)(以下，稱為“碳酸鈣等量”)。(b)由(a)中求出的碳酸鈣等量利用下式算出胃內(nèi)酸度(M或Eq)。胃內(nèi)酸度(mM[mmol])=[碳酸I丐等量(mg/個(gè)體)X 2]/CaCO3的分子量或胃內(nèi)酸度(UEq)=碳酸鈣等量(y mol/kg) X受試哺乳動(dòng)物的體重X 2以上說明的本發(fā)明的胃內(nèi)酸度的測定方法也可作為針對哺乳動(dòng)物診斷評價(jià)其胃酸的基礎(chǔ)分泌量是否降低或上升的方法使用。本發(fā)明的胃內(nèi)酸度的測定法、尤其是作為“13C02的行為”以A13C(%。)為指標(biāo)的方法，可通過在不長時(shí)間地限制受試者的情況下進(jìn)行少次數(shù)的呼氣采集(優(yōu)選I次的呼氣采集)從而非侵襲性地、簡單地評價(jià)診斷胃內(nèi)酸度，就此點(diǎn)而言該方法是有用的。另外，通過利用本發(fā)明的胃內(nèi)酸度的測定方法，可測定胃內(nèi)酸度的傾向(分為胃酸過多癥、正常、低酸癥、無酸癥等)，結(jié)果，可診斷與胃酸分泌有關(guān)的疾病。另外，也可針對胃酸抑制劑評價(jià)其藥效或治療效果。具體而言，該評價(jià)可如下實(shí)施在給予受試者胃酸抑制劑之前和給予之后，分別使用本發(fā)明的給藥制劑進(jìn)行胃內(nèi)酸度的測定，對兩者進(jìn)行比較。也可由此評價(jià)給予藥物(胃酸抑制劑)的藥效、各種藥物對受試者的治療效果，結(jié)果，也可作為選擇適合于每個(gè)受試者的藥物(胃酸抑制劑)的方法來利用。需要說明的是，作為胃酸抑制劑，可舉出質(zhì)子泵遏制劑(PPI)、H2阻斷劑等胃酸分泌抑制劑、以及抗酸劑那樣的具有中和胃酸作用的藥物那樣的、具有提高胃內(nèi)pH作用的藥物。因此，也可作為檢測本發(fā)明所述的藥物引起的胃內(nèi)PH的變動(dòng)、評價(jià)該藥物對受試者的藥效的方法使用。在實(shí)施本發(fā)明的方法時(shí)，在預(yù)先預(yù)想受試者的胃內(nèi)酸度高時(shí)，可通過采用高酸度基準(zhǔn)給藥量作為規(guī)定給藥量，從而更可靠且無浪費(fèi)地評價(jià)受試者的胃內(nèi)酸度。在評價(jià)胃酸抑制劑對胃內(nèi)酸度高的受試者的藥效時(shí)，由于預(yù)計(jì)通過給予這些藥物可導(dǎo)致胃內(nèi)酸度降低，所以采用正?；鶞?zhǔn)給藥量作為規(guī)定給藥量，由此可更可靠且無浪費(fèi)地評價(jià)這些藥物的藥效。另外，在預(yù)先預(yù)想受試者的胃內(nèi)酸度低時(shí)，可通過采用低酸度基準(zhǔn)給藥量作為規(guī)定給藥量，從而可無浪費(fèi)地評價(jià)受試者的胃內(nèi)酸度。需要說明的是，胃酸抑制劑中奧美拉唑、蘭索拉唑這樣的質(zhì)子泵遏制劑是通過CYP2C19及CYP3A4肝代謝酶代謝的藥物。因此，這些藥物的藥效依賴于受試者的CYP2C19及CYP3A4的酶活性(代謝活性)，但這些酶存在多種基因多態(tài)型，由于基因多態(tài)型不同因而酶活性(代謝能力)不同，所以奧美拉唑、蘭索拉唑的藥效也產(chǎn)生差異。通過利用本發(fā)明的胃內(nèi)酸度測定方法，可由給予奧美拉唑、蘭索拉唑后的胃內(nèi)酸度測定評價(jià)受試者的CYP2C19及CYP3A4的酶活性(代謝活性)。另外，通過如此進(jìn)行，即使對于奧美拉唑、蘭索拉唑以外的藥物，也可通過評價(jià)在給予奧美拉唑、蘭索拉唑后的胃內(nèi)酸度，從而評價(jià)受試者對于被CYP2C19及CYP3A4代謝從而活性消失的藥物、被上述酶代謝反而顯示藥效的藥物(例如，氯吡格雷)的藥效(敏感性)。
(III)胃酸抑制劑的藥效測定方法如前所述，通過利用上述本發(fā)明的胃內(nèi)酸度的測定方法，可測定受試胃酸抑制劑對于哺乳動(dòng)物的藥效。該藥效測定方法具體而言可通過進(jìn)行下述的工序(I) (4)實(shí)施。工序(I)，在給予胃酸抑制劑之后，以經(jīng)口給予了規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻排出的受試哺乳動(dòng)物的呼氣為受試試樣，測定該呼氣中排出的13CO2的行為；工序(2)，將上述⑴中得到的13CO2的行為(測定13CO2行為)與預(yù)先針對如下哺乳動(dòng)物進(jìn)行測定而得到與上述對應(yīng)的13CO2的行為(基準(zhǔn)13CO2行為)進(jìn)行對比，所述哺乳動(dòng)物是未給予胃酸抑制劑而經(jīng)口給予了規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)；工序(3)，基于上述得到的基準(zhǔn)13CO2行為與測定13CO2行為的差異，確定受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度；工序(4)，以上述得到的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度為指標(biāo)，確定受試胃酸抑制劑對于哺乳動(dòng)物的藥效。此處，胃酸抑制劑包括具有抑制胃酸分泌作用的質(zhì)子泵遏制劑及H2阻斷劑、以及具有中和胃酸作用的抗酸劑。質(zhì)子泵遏制劑是作用于胃壁細(xì)胞的質(zhì)子泵、從而抑制胃酸分泌的藥物，可舉出例如奧美拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑、雷貝拉唑、及艾美拉唑等。另外，H2阻斷劑是指通過競爭性地拮抗存在于胃壁細(xì)胞且促進(jìn)胃酸分泌的組胺H2受體從而抑制胃酸分泌的藥物，可舉出例如雷尼替丁、西咪替丁、法莫替丁、尼扎替丁、拉呋替丁、及鹽酸羅沙替丁乙酸酯等。進(jìn)而，抗酸劑是具有中和過多分泌出的胃酸、調(diào)節(jié)胃內(nèi)PH的作用的藥物，可舉出例如氫氧化鎂、無水磷酸氫鈣、沉降碳酸鈣、碳酸氫鈉、氧化鎂等。測定被呼氣排出的13CO2的行為的工序、即上述工序(I)，以如下受試哺乳動(dòng)物作為對象來實(shí)施；作為受試哺乳動(dòng)物，為在給予了評價(jià)藥效的對象的胃酸抑制劑后、經(jīng)口給予了 13C標(biāo)記碳酸化合物的受試哺乳動(dòng)物。作為受試哺乳動(dòng)物，優(yōu)選與胃內(nèi)酸度測定方法同樣為人，另外，也可使用猴、狗、貓、兔子、豚鼠、大鼠、小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。對于向受試哺乳動(dòng)物給予胃酸抑制劑和給予13C標(biāo)記碳酸化合物的時(shí)間間隔沒有特別限制，但通常為I分鐘 12小時(shí)的范圍，優(yōu)選為2 480分鐘、較優(yōu)選為5 240分鐘之間。對于該工序(I)來說，除了使用在給予13C標(biāo)記碳酸化合物之前給予了胃酸抑制劑的受試哺乳動(dòng)物之外，可同樣地使用前述的“(II)胃內(nèi)酸度的測定方法”的(I)項(xiàng)中說明過的方法，另外，作為13C標(biāo)記碳酸化合物，也可同樣地使用“(I)胃內(nèi)酸度的測定中使用的制齊U”中說明過的給藥制劑。對比測定13CO2行為與基準(zhǔn)13CO2行為的工序、即上述工序(2)，是對上述工序⑴中得到的13CO2行為(測定13CO2行為)與預(yù)先針對作為對照的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)而得到的與上述對應(yīng)的13CO2行為(基準(zhǔn)13CO2行為)進(jìn)行對比的工序。此處使用的對照哺乳動(dòng)物是未給予胃酸抑制劑而與受試哺乳動(dòng)物同樣地經(jīng)口給予了規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物的哺乳動(dòng)物，如(II)說明的那樣，通常使用與受試哺乳動(dòng)物為相同種的哺乳動(dòng)物。雖然沒有特別限制，但優(yōu)選將性別、年齡、體重等也設(shè)定為大致相同。
對于該工序(2)來說，除了使用針對上述的對照哺乳動(dòng)物而得到的13CO2行為作為基準(zhǔn)13CO2行為之外，還可同樣地使用前述的“(II)胃內(nèi)酸度的測定方法”的⑴及⑵項(xiàng)中說明過的方法。對于確定胃內(nèi)酸度的工序即上述工序(3)來說，可基于在上述工序(2)中得到的基準(zhǔn)13CO2行為與測定13CO2R為的差異進(jìn)行，可同樣地使用前述的“(II)胃內(nèi)酸度的測定方法”的⑵及⑶項(xiàng)中說明過的方法。以該工序(3)中得到的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度為指標(biāo)，實(shí)施作為確定胃酸抑制劑的藥效的工序的上述(4)。具體而言，該工序(4)中，當(dāng)上述工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，可確定為給予的胃酸抑制劑對于受試哺乳動(dòng)物沒有藥效。另外，當(dāng)工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，可確定為給予的胃酸抑制劑對于受試哺乳動(dòng)物有藥效。(IV)針對等試晡乳動(dòng)物、評價(jià)CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活件(代謝能力)、經(jīng)YP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的藥效、及/或?qū)υ撍幬锏拿舾行缘姆椒ㄈ缜八?，通過利用上述本發(fā)明的胃內(nèi)酸度的測定方法，可針對受試哺乳動(dòng)物、評價(jià)CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)、經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的藥效、及/或?qū)υ撍幬锏拿舾行?。上述評價(jià)方法具體而言可通過進(jìn)行下述的工序(I) (4)來實(shí)施。工序(I)，在給予奧美拉唑或蘭索拉唑后，以經(jīng)口給予了規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻排出的受試哺乳動(dòng)物的呼氣為受試試樣，測定該呼氣中排出的13CO2的行為；工序(2)，將上述⑴中得到的13CO2的行為(測定13CO2行為)與預(yù)先針對如下哺乳動(dòng)物進(jìn)行測定而得到的與上述對應(yīng)的13CO2的行為(基準(zhǔn)13CO2行為)進(jìn)行對比，所述哺乳動(dòng)物是未給予奧美拉唑及蘭索拉唑中任一種而給予了規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)；工序(3)，基于上述得到的基準(zhǔn)13CO2行為與測定13CO2行為的差異，確定受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度；工序(4)，以上述得到的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度為指標(biāo)，針對受試哺乳動(dòng)物，確定CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)；確定經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的藥效；及/或確定受試哺乳動(dòng)物對該藥物的敏感性。此處，奧美拉唑及蘭索拉唑均為在體內(nèi)受到作為肝代謝酶的CYP2C19及CYP3A4的作用而被代謝的藥物。測定被呼氣排出的13CO2的行為的工序即上述工序⑴，以如下受試哺乳動(dòng)物作為對象來實(shí)施作為受試哺乳動(dòng)物，為在給予奧美拉唑或蘭索拉唑后經(jīng)口給予了 13C標(biāo)記碳酸化合物的受試哺乳動(dòng)物。作為受試哺乳動(dòng)物，優(yōu)選與胃內(nèi)酸度測定方法同樣為人，另外，也可使用猴、狗、貓、兔子、豚鼠、大鼠、小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。對于向受試哺乳動(dòng)物給予奧美拉唑或蘭索拉唑和給予13C標(biāo)記碳酸化合物的時(shí)間間隔沒有特別限制，但通常為I分鐘 12小時(shí)的范圍，優(yōu)選為2分鐘 480分鐘、較優(yōu)選5分鐘 240分鐘之間。對于該工序(I)來說，除了使用在給予13C標(biāo)記碳酸化合物之前給予了奧美拉唑或蘭索拉唑的受試哺乳動(dòng)物之外，還可同樣地使用前述的“(II)胃內(nèi)酸度的測定方法”的(I)項(xiàng)中說明過的方法，另外，作為13C標(biāo)記碳酸化合物，也可同樣地使用“(I)胃內(nèi)酸度的測定中使用的制劑”中說明過的給藥制劑。對比測定13CO2行為和基準(zhǔn)13CO2行為的工序即上述工序(2)，是對上述工序(I)中得到的13CO2行為(測定13CO2行為)與預(yù)先針對作為對照的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)而得到的與上述對應(yīng)的13CO2行為(基準(zhǔn)13CO2行為)進(jìn)行對比的工序。此處使用的對照哺乳動(dòng)物是未給予奧美拉唑或蘭索拉唑中任一種而與受試哺乳動(dòng)物同樣地經(jīng)口給予了規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物的哺乳動(dòng)物，如(II)中說明那樣，通常使用與受試哺乳動(dòng)物相同種的哺乳動(dòng)物。雖然沒有特別限制，但優(yōu)選將性別、年齡、體重等也設(shè)定為大致相同。對于該工序⑵來說，除了使用針對上述的對照哺乳動(dòng)物而得到的13CO2行為作為基準(zhǔn)13CO2行為之外，還可同樣地使用前述的“(II)胃內(nèi)酸度的測定方法”的⑴及⑵項(xiàng)中說明過的方法。對于確定胃內(nèi)酸度的工序即上述工序(3)來說，可基于在上述工序(2)中得到的基準(zhǔn)13CO2行為與測定13CO2R為的差異進(jìn)行，可同樣地使用前述的“(II)胃內(nèi)酸度的測定方法”的⑵及⑶項(xiàng)中說明過的方法。以該工序(3)中得到的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度為指標(biāo)，實(shí)施上述工序(4):確定
(a)受試哺乳動(dòng)物的CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力);確定
(b)經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的藥效；及/或確定(c)受試哺乳動(dòng)物對該藥物的敏感性。該工序(4)可以是以受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度為指標(biāo)、確定與受試哺乳動(dòng)物有關(guān)的上述(a) (C)中任一事項(xiàng)的工序，還可以是確定選自上述(a) (C)中兩項(xiàng)以上事項(xiàng)的工序。優(yōu)選為確定(a)受試哺乳動(dòng)物的CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)的工序；確定(b)經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的藥效的工序；及在確定(a)之后確定(b)的工序。當(dāng)工序(4)包括確定(a)受試哺乳動(dòng)物的CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)的工序時(shí)，在該工序(4)中，當(dāng)上述工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，可確定為受試哺乳動(dòng)物的CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)為正?；蚋哂谡?。另外，在工序(4)中，當(dāng)工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，可確定為受試哺乳動(dòng)物的CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)低于正常。工序(4)包括確定(b)經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的藥效的工序時(shí)，在該藥物為由于被CYP2C19單獨(dú)或被CYP2C19和CYP3A4兩者代謝從而活性消失或降低的藥物的情況、和該藥物為由于被CYP2C19單獨(dú)或被CYP2C19和CYP3A4兩者代謝從而表達(dá)或增強(qiáng)活性的藥物的情況，該藥物的藥效不同。當(dāng)使用被CYP2C19單獨(dú)或被CYP2C19和CYP3A4兩者代謝從而活性消失或降低的藥物作為藥物時(shí)，上述工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，在工序(4)中可確定該藥物對受試哺乳動(dòng)物的藥效低。另外，當(dāng)工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，在工序(4)中可確定該藥物對受試哺乳動(dòng)物的藥效高。另一方面，當(dāng)使用被CYP2C19單獨(dú)或被CYP2C19和CYP3A4兩者代謝從而表達(dá)或增強(qiáng)活性的藥物作為藥物時(shí)，當(dāng)上述工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，在工序(4)中可確定該藥物對受試哺乳動(dòng)物的藥效高。另外，當(dāng)工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，在工序(4)中可確定該藥物對受試哺乳動(dòng)物的藥效低。當(dāng)工序(4)包括確定(C)受試哺乳動(dòng)物對經(jīng)CYP2C19單獨(dú)或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4兩者代謝的藥物的敏感性的工序時(shí)，在該藥物為被CYP2C19單獨(dú)或被CYP2C19和CYP3A4兩者代謝從而活性消失或降低的藥物的情況、和該藥物為被CYP2C19單獨(dú)或被CYP2C19和CYP3A4兩者代謝從而表達(dá)或增強(qiáng)活性的藥物的情況下，該敏感性不同。當(dāng)使用被CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者代謝從而活性消失或降低的藥物作為藥物時(shí)，當(dāng)上述工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，在工序(4)中可確定受試哺乳動(dòng)物對該藥物的敏感性低。另外，當(dāng)工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，在工序(4)中可確定受試哺乳動(dòng)物對該藥物的敏感性高。
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另一方面，當(dāng)使用被CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者代謝從而表達(dá)或增強(qiáng)活性的藥物作為藥物時(shí)，上述工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高時(shí)，在工序(4)中可確定受試哺乳動(dòng)物對該藥物的敏感性高。另外，當(dāng)工序(3)中測定出的受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低時(shí)，在工序(4)中可確定受試哺乳動(dòng)物對該藥物的敏感性低。實(shí)施例以下，使用實(shí)驗(yàn)例來說明本發(fā)明。但本發(fā)明不受這些實(shí)驗(yàn)例的任何限制。實(shí)驗(yàn)例I 13C-CaOX的給藥暈(^ mol/kg)、與給藥前后的濃度比(5值)之差〔八呷(％。)= (Sn倌):-(0倌U的相關(guān)性評價(jià)、及DC-CaOX的給藥暈(umol/kR)與“A&(%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC)的相關(guān)性評價(jià)⑴13C-CaOU合藥液的制備一邊向 13C-CaCO3 (MW :101, Cambridge Isotope Laboratory 制)946. 8mg 中逐步少量地添加0. 5% CMC水溶液(將羧甲基纖維素鈉溶解在注射用蒸餾水中)一邊使用乳缽進(jìn)行混煉，制備濃度2500 u mol/4mL的13C-CaCO3懸浮液15mL。用0. 5% CMC水溶液稀釋得到的 13C-CaCO3 懸浮液，制備各種濃度(2500、1000、500、200、100、20 或 4 ii mol/4mL)的給藥液。(2)實(shí)駘向作為受試動(dòng)物的禁食的大鼠(雄，SD系大鼠n = 3)強(qiáng)制地經(jīng)口給予上述制備的各種濃度的13C-CaCO3懸浮液(4ml/kg)。接下來,在13C-CaCO3懸浮液給予前(13C-CaCO3給予前)(0 分鐘)和給予后(13C-CaCO3 給予后)(2、5、10、15、20、30、40、50、60、80、100、120分鐘)的各時(shí)刻采集呼氣，使用呼氣分析用質(zhì)譜儀(ABCA:SerC0n公司制)由在呼氣中排出的130)2濃度求出A13C(%。)。需要說明的是，A 13C(%。)如下求得分別測定13C-CaCO3給予前(0分鐘)和給予后的各呼氣采集時(shí)(t分鐘)的呼氣中13co2/12co2濃度比(S13C值)，由13C-CaCO3給予后的各采集時(shí)⑴的s 13C值〔(S 13C值)t〕與給予前的s 13C值〔(S 13C值)?！持睢?S 13C值)t-( S 13C值)?！乘愠鯝13C(%。)，由此求得(以下的實(shí)驗(yàn)例也同樣)。在將各種濃度的13C-CaCO3懸浮液給予大鼠后，將測定的呼氣中A13C(%。)的推移示于圖2。圖中，縱軸為呼氣中A13C(%。)。另外，橫軸表示13C-CaCO3給予后的呼氣采集時(shí)間(分鐘)。如圖2所示，觀察到13C-CaCO3在生物體內(nèi)被代謝、以13CO2形式排出呼氣中。另夕卜，在給藥量超過200 ii mol/kg(- ■-)時(shí)確認(rèn)到飽和現(xiàn)象。從4 ii mol/kg 至 200 U mol/kg 的 13C-CaCO3 懸浮液的給藥量(U mol/kg)、與各呼氣采集時(shí)((I)給予后5分鐘、⑵給予后10分鐘、(3)給予后15分鐘)的呼氣中A13C(%。)的關(guān)系如圖3所示。由此可知，對于呼氣中A 13C (%。)相對于直至200 ii mol/kg的給藥量(U mol/kg)來說，無論呼氣采集時(shí)間如何，所有呼氣試樣均大致為通過原點(diǎn)的直線。即，通過以至少在給藥量200 u mol/kg以下的范圍、而且在給予給藥制劑開始至少5分鐘后采集的呼氣為受試試樣，從而確認(rèn)到13C-CaCO3給藥量(ii mol/kg)與呼氣中A 13C(%。)之間存在直線相關(guān)關(guān)系(R2值:0. 9以上)。從4 V- mol/kg 至 200 U mol/kg 的 13C-CaCO3 懸浮液的給藥量(V- mol/kg)與“ A13C(%。)-呼氣采集時(shí)間(60分鐘或120分鐘)曲線下面積”(AUC)的相關(guān)關(guān)系如圖4所示。相對于13C-CaCO3給藥量(4 200 ii mol/kg)的、呼氣采集時(shí)間0至60分鐘的AUC(AUC60)及呼氣采集時(shí)間0至120分鐘的AUC(AUC120)分別示于右側(cè)及左側(cè)。由此可知，相對于直至200 ii mol/kg的13C-CaCO3給藥量(u mol/kg)的、呼氣采集時(shí)間0至60分鐘及0至120分鐘的AUC(AUC60及AUC120)均大致為通過原點(diǎn)的直線。即，至少在給藥量200 u mol/kg以下的范圍，確認(rèn)到 13C-CaCO3給藥量與AUC之間存在直線相關(guān)關(guān)系。上述內(nèi)容意味著在胃內(nèi)酸度為正常的哺乳動(dòng)物中，在13C標(biāo)記碳酸化合物的200 U mol/kg以下的給藥量范圍內(nèi)，該給藥量與13CO2的呼氣排出行為(各呼氣采集時(shí)的呼氣中13CO2濃度(△ 13C (%。))、及“ A 13C (%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC))之間存在直線相關(guān)關(guān)系。需要說明的是，如圖3及4所示，直至200 U mol/kg的13C-CaCO3懸浮液的給藥量(U mol/kg)與(A13c(%。))及“ A13C(%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC)之間分別存在直線相關(guān)關(guān)系。給藥量4 2500 ii mol/kg與呼氣采集時(shí)間30分鐘的A 13C (%。)的關(guān)系如圖5(1)所示。圖5的左側(cè)示出了 13C-CaCO3給藥量(4 200 ii mol/kg)與A 13C (%。)的關(guān)系，右側(cè)示出了 13C-CaCO3給藥量(4 2500 ii mol/kg)與A13C(%。)的關(guān)系。由該結(jié)果可知，如圖1(1)所示，雖然13C-CaCO3給藥量在為一定的量以下時(shí)與A13C(%。)之間存在直線相關(guān)關(guān)系，但在給藥量超過一定的量時(shí)，A 13C(%。)值成為定值(平臺)。另外，給藥量4 2500 U mol/kg與呼氣采集時(shí)間0至120分鐘的AUC的關(guān)系如圖5⑵所示。圖5⑵的左側(cè)示出了 13C-CaCO3給藥量(4 200 u mol/kg)與AUC的關(guān)系(與圖4的右側(cè)相同)、右側(cè)示出了 13C-CaCO3給藥量(4 2500 u mol/kg)與AUC的關(guān)系。由該結(jié)果可知，如圖1 (2)所示，與上述A 13C (%。)同樣，雖然13C-CaCO3給藥量在為一定的量以下時(shí)與AUC之間存在直線相關(guān)關(guān)系，但給藥量超過一定的量時(shí)，AUC值成為定值(平臺)。實(shí)驗(yàn)例2胃酸分泌降低的測定(I)質(zhì)子泵遏制劑(PP1:奧美拉嗶)給藥液的制備
向I小瓶(vial)具有抑制胃酸分泌作用的奧美拉唑注射用20 (奧美拉唑20mg/小瓶 AstraZeneca K. K.)中加入生理鹽水ImL制備成20mg/mL,將其作為PPI給藥液。(2)實(shí)駘使用禁食的大鼠(雄，SD系大鼠)作為受試動(dòng)物。對于第I組(對照組正常大鼠、n = 3)經(jīng)口給予實(shí)驗(yàn)例I中制備的13C-CaCO3懸浮液(100 ii mol/4mL) (4mL/kg)。對于第2組(胃內(nèi)酸度降低模型組PPI給予大鼠、n =3)，首先靜脈內(nèi)給予PPI給藥液(20mg/mL) (lmL/kg)來制作抑制了胃酸分泌的模型動(dòng)物，在給予PPI給藥液4小時(shí)后經(jīng)口給予13C-CaCO3懸浮液(100 u mol/4mL) (4mL/kg)。接下來，以各組大鼠為對象、在13C-CaCO3懸浮液給予前(0分鐘)和給予后(2、5、
10、15、20、30、40、50、60分鐘)的各時(shí)刻采集呼氣，使用呼氣分析用質(zhì)譜儀(ABCA =SerCon公司制)由在呼氣中排出的13CO2濃度測定A13C(%。)。結(jié)果如圖6所示。圖6中，-□-及-■-分別為針對第I組(對照組)及第2組(胃內(nèi)酸度降低模型組)測定出的呼 氣中A13C(%。)的經(jīng)時(shí)推移。由圖6可知，通過給予PPI從而抑制了胃酸分泌的大鼠(胃內(nèi)酸度降低模型組-■-)的呼氣中A13C(%。)與正常大鼠(對照組-□_)的呼氣中A13C(%。)相比顯著降低。以上的結(jié)果意味著即使在以胃酸分泌受到抑制從而胃內(nèi)酸度降低的哺乳動(dòng)物為對象時(shí)，至少在IOOii mol/kg以下的13C標(biāo)記碳酸化合物的給藥量的范圍內(nèi)，該給藥量與13CO2的呼氣排出行為(各呼氣采集時(shí)的呼氣中13CO2濃度(八13以％。))、及“八13((%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC))之間存在直線相關(guān)關(guān)系(線性)。實(shí)驗(yàn)例3胃酸分泌增加的測定(I)五肽胃泌素給藥液的制備向具有刺激胃酸分泌從而增加胃酸的作用的五肽胃泌素(SIGMA) 7. 5mg中加入生理鹽水2ml和DMS0，使總量為10ml，制備成0. 75mg/ml。(2)實(shí)駘使用禁食的大鼠(雄，SD系大鼠)作為受試動(dòng)物。設(shè)置對照組(正常大鼠、n = 3)第I組和第2組兩組，分別以500 U mol/kg及1000 u mol/kg的比例向第I組及第2組經(jīng)口給予在實(shí)驗(yàn)例I中制備的13C-CaCO3懸浮液。設(shè)置胃內(nèi)酸度增加模型組(n = 3)第3組和第4組兩組，對于第3組及第4組，首先靜脈內(nèi)給予五肽胃泌素溶液(0. 75mg/mL) (lmL/kg)來增加胃酸分泌(胃酸分泌增加模型動(dòng)物的制作)，在給予五肽胃泌素I小時(shí)后，分別以500 ii mol/kg及IOOOii mol/kg的比例經(jīng)口給予13C-CaCO3 懸浮液。接下來，以各組大鼠為對象，在13C-CaCO3懸浮液給予前(0分鐘)和給予后(2、
5、10、15、20、30、40、50、60、80、100、120分鐘)的各時(shí)刻采集呼氣，使用呼氣分析用質(zhì)譜儀(ABCA =SerCon公司制)由在呼氣中排出的13CO2濃度測定A 13C(%0)。結(jié)果如圖7所示。圖7中，-□-及-■-為針對對照組的第I組(13C-CaCO3懸浮液500 u mol/kg給予組)及第2組(13C-CaCO3懸浮液1000 u mol/kg給予組)測定出的呼氣中13CO2濃度(A13C(%。))的推移，另外，-A-及-▲-為針對胃內(nèi)酸度增加模型組的第3組(五肽胃泌素+13C-CaCO3懸浮液500y mol/kg給予組)及第4組(五肽胃泌素+13C-CaCO3懸浮液1000 i! mol/kg給予組)測定出的呼氣中13CO2濃度(A13c(%。))的推移。由圖7可知，通過給予五肽胃泌素使胃酸分泌增加了的大鼠(胃內(nèi)酸度增加模型組-A-、- ▲-)的呼氣中13CO2濃度(A13C(%。))與正常大鼠(對照組
的呼氣中13CO2濃度(A13C (%。))相比顯著升高。通過對照組(- _)與胃內(nèi)酸度增加模型組(-▲_)對比4至2500 ii mol/kg的13C-CaCO3給藥量(U mol/kg)與呼氣采集時(shí)間0至120分鐘的“ A 13C(%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC120)的相關(guān)關(guān)系的結(jié)果如圖8所示。需要說明的是，在13C-CaCO3給藥量與A 13C(%0)之間，也同樣確認(rèn)到在該13C-CaCO3給藥量與AUC之間確認(rèn)到的關(guān)系。由此可知，在作為正常模型(對照組)的第I組(_ -)中，確認(rèn)了在200 U mol/kg之前的給藥量時(shí)為通過原點(diǎn)的直線線型，給藥量與AUC之間為直線相關(guān)關(guān)系，但給藥量超過該值時(shí)，確認(rèn)到達(dá)到頂點(diǎn)現(xiàn)象。另一方面，在作為胃內(nèi)酸度增加模型的第2組(-▲-)中，確認(rèn)了至少在1000 u mol/kg之前的給藥量時(shí)，為通過原點(diǎn)直線，給藥量與AUCV之間存在直線相關(guān)關(guān)系。以上的結(jié)果意味著即 使在以胃酸分泌增加從而胃內(nèi)酸度上升的哺乳動(dòng)物為對象時(shí)，至少在IOOOiI mol/kg以下的13C標(biāo)記碳酸化合物的給藥量的范圍內(nèi)，該給藥量與13CO2的呼氣排出行為(各呼氣采集時(shí)的呼氣中13CO2濃度(A13C(%。))、及“A13C(%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC))之間存在直線相關(guān)關(guān)系(線性)。另外，由上述的結(jié)果可知，對胃內(nèi)酸度增加的模型而言，確認(rèn)到給藥量與a13c(%。)及AUC之間的直線相關(guān)關(guān)系(線性)的給藥量(Ug/kg)的范圍比正常模型寬，換言之，確認(rèn)了與正常模型相比在更高的給藥量時(shí)出現(xiàn)達(dá)到頂點(diǎn)現(xiàn)象(參見圖1)。由實(shí)驗(yàn)例2和3的結(jié)果確認(rèn)了如下可能性可利用給予13C-CaCO3并測定在呼氣中排出的13CO2濃度的呼氣試驗(yàn)定量地測定胃內(nèi)酸度，可由給藥量與13CO2的呼氣排出行為(各呼氣采集時(shí)的呼氣中13CO2濃度(A 13C (%。))、“ A 13C (%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC))評價(jià)有無胃酸分泌的降低或亢進(jìn)。實(shí)駘例4 12C-CaCO,與13C-CaCO2混合液的給予(I)12C-CaCO3 與 13C-CaCO3 的混合給藥液(10、20、50、100 ii mol/4mL)的制備一邊向 13C-CaCO3(MW :101, Cambridge Isotope Laboratory 制)10.1mg 中逐步少量添加0. 5% CMC水溶液(將羧甲基纖維素鈉溶解在注射用蒸餾水中)一邊使用乳缽進(jìn)行混煉，制備濃度4 V- mol/2mL的13C-CaCO3懸浮液20mL。另一方面，對于12C-CaCO3溶液來說，一邊逐步少量向碳酸鈣(MW : 100，和光純藥株式會(huì)社)中添加0. 5% CMC溶液一邊使用乳缽進(jìn)行混煉，制備濃度6、16、46、96iimol/2mL的12C-CaCO3 懸浮液。等量混合如此得到的懸浮液，制備10、20、50、100iimol/4mL各濃度的12C-CaCO3和13C-CaCO3的混合給藥液(以下，簡稱為“混合給藥液”)。另外，等量混合13C-CaCO3懸浮液(4 u mol/2mL)和 0. 5% CMC 水來制備 4 u mol/4mL 濃度的 13C-CaCO3 溶液。(2)實(shí)駘向作為受試動(dòng)物的禁食的大鼠(雄，SD系大鼠n = 3)強(qiáng)制地經(jīng)口給予上述制備的各種濃度的混合給藥液(4mL/kg)。接下來,在混合給藥液給予前(0分鐘)和給予后(2、5、10、15、20、30、40、60、80、100、120分鐘)的各時(shí)刻采集呼氣，使用呼氣分析用質(zhì)譜儀(ABCA =SerCon公司制)由在呼氣中排出的13CO2濃度測定A 13C(%0)。結(jié)果如圖9所示。圖9為向大鼠給予混合給藥液后的呼氣中A13C(%。)的推移。由此可知，即使在13C-CaCO3中加入12C-CaCO3來進(jìn)行給予，呼氣中A13C(%。)的行為也不受12C-CaCO3 的影響。實(shí)驗(yàn)例5 13C-CaOX和乙酸鈉混合液的給予(I) 13C-CaOX 和乙酸鈉的混合液(4、10、20、50、100umol/4mL)的制各13C-CaCO3懸浮液按照下述方式來制備按照一邊向Ca13CO3(MW :101, CambridgeIsotope Laboratory制)10.1mg中逐步少量添加0. 5% CMC水溶液(將羧甲基纖維素鈉溶解在注射用蒸餾水中)一邊在乳缽中混煉、形成濃度mol/2mL的13C-CaCO3懸浮液(20mL)。乙酸鈉溶液按照向乙酸鈉(MW :82，和光純藥株式會(huì)社)中加入0. 5% CMC水溶液、形成規(guī)定濃度(6、16、46、96 ii mol/2mL)的方式來制備。等量混合如此制備的液體形成13C-CaCO3與乙酸鈉的混合液(10、20、50、100 u mol/4mL)。需要說明的是，4 u mol/4mL濃度的13C-CaCO3溶液通過等量混合13C-CaCO3懸浮液(4 u mol/2mL)和0. 5% CMC水來制備。(2)實(shí)駘向作為受試動(dòng)物的禁食的大鼠(雄，SD系大鼠n = 3)強(qiáng)制地經(jīng)口給予各種濃度(4、10、20、50、100iimol/4mL)的13C-CaCO3和乙酸鈉的混合液(以下，簡稱為“混合液”)(4mL/kg)。接著在混合液給予前(0分鐘)和給予后(2、5、10、15、20、30、40、60、80、100、120分鐘)的各時(shí)刻采集呼氣，使用呼氣分析用質(zhì)譜儀(ABCA:SerC0n公司制)由在呼氣中排出的13CO2濃度測定A 13C (%。)。結(jié)果如圖10所示。圖10為向大鼠給予上述混合液后的呼氣中A13C(%。)的推移。由此可知，即使向13C-CaCO3中加入不含13C的乙酸鈉那樣的堿性物質(zhì)來進(jìn)行給予，呼氣中13CO2濃度的行為也不受影響。即，已知即使13C-CaCO3中混有堿性物質(zhì)，對于給予13C-CaCO3并測定在呼氣中排出的13CO2濃度的呼氣試驗(yàn)也沒有影響。如以上的實(shí)驗(yàn)例4及5所示，即使在13C標(biāo)記碳酸化合物中配合12C-碳酸化合物或乙酸鈉，也不會(huì)對13CO2行為產(chǎn)生影響，因而可知，本發(fā)明的方法通過配合12C-碳酸化合物或乙酸鈉，可以用更少量的13C標(biāo)記碳酸化合物進(jìn)行實(shí)施。即，可通過減少13C標(biāo)記碳酸化合物來實(shí)現(xiàn)成本的降低。需要說明的是，上述實(shí)驗(yàn)例I 5均使用大鼠作為哺乳動(dòng)物，但大鼠是作為具有與人的呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)發(fā)揮同樣作用的呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)(尤其是胃酸分泌系統(tǒng))的哺乳動(dòng)物通常使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，一直以來也用于胃酸分泌刺激劑、或胃酸分泌抑制劑的篩選。如下述的實(shí)驗(yàn)例6所示，上述結(jié)果均可容易地外推至人，即使對人進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)也可得到同樣的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)例6 13C-CaOX的給藥暈(mg/個(gè)體)與A_aCj%oJ及“ A iaC (%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC)的相關(guān)性評價(jià)(人)以胃內(nèi)酸度正常的人(n = 3)為對象進(jìn)行與實(shí)驗(yàn)例I相同的實(shí)驗(yàn)。⑴13C-CaOU合藥液的制備一邊向 13C-CaCO3(MW :101, Cambridge Isotope Laboratory 制)中逐步少量添加0.5% CMC水溶液(將羧甲基纖維素鈉溶解在注射用蒸餾水中)一邊使用乳缽進(jìn)行混煉，制備各種濃度(400、300、200、100、50或20mg/50mL)的給藥液。(2)實(shí)駘在第二天早上的8:30向從給藥前一天的21時(shí)開始禁食禁水的人受試者(n = 3)經(jīng)口給予上述制備的各種濃度的13C-CaCO3懸浮液(50mL/個(gè)體)。接下來，在13C-CaCO3懸浮液給予前(13C-CaCO3給予前)(0分鐘)和給予后(13C-CaCO3給予后)(2、4、6、8、10、12，
14、16、18、20、25、30、40、50、60分鐘)的各時(shí)刻采集呼氣，使用呼氣分析用質(zhì)譜儀(ABCA SerCon公司制)由在呼氣中排出的13CO2濃度求出A13C(%。)。在將各種濃度(400、300、200、100、50或20mg/個(gè)體)的13C-CaCO3懸浮液給予各人受試者后測定的呼氣中A13c(%。)的推移如圖11所示。圖中，縱軸為呼氣中a13c(%。)。另夕卜，橫軸表示13C-CaCO3給予后的呼氣采集時(shí)間(分鐘)。如圖11所示，觀察到13C-CaCO3在生物體內(nèi)被代謝、以13CO2形式在呼氣中排出。另外，在給藥量超過200mg/個(gè)體(33iimol/kg)時(shí)確認(rèn)到飽和現(xiàn)象。從20mg/個(gè)體至200mg/個(gè)體的13C-CaCO3懸浮液的給藥量(mg/個(gè)體)、與各呼氣采集時(shí)((I)給予后8分鐘、⑵給予后12分鐘、(3)給予后16分鐘)的呼氣中A13C(%。)的關(guān)系如圖12所示。由此可知，相對于直至200mg/個(gè)體的給藥量(mg/個(gè)體)，呼氣中A 13C(%。)無論呼氣采集時(shí)間如何，所有呼氣試樣均大致為通過原點(diǎn)的直線。S卩，通過以至少在給藥量200mg/kg以下的范圍、而且在給予給藥制劑開始至少8分鐘后采集的呼氣為受試試樣，從而確認(rèn)到13C-CaCO3給藥量(mg/個(gè)體)與呼氣中A 13C (%。)之間存在直線相關(guān)關(guān)系(R2值0. 9以上)。
`
從20mg/個(gè)體至200mg/個(gè)體的13C-CaCO3懸浮液的給藥量(mg/個(gè)體)與“ A13C(%。)-呼氣采集時(shí)間(20分鐘或60分鐘)曲線下面積”(AUC)的相關(guān)關(guān)系如圖13所示。相對于13C-CaCO3給藥量(20 200mg/個(gè)體)的、呼氣采集時(shí)間0至20分鐘的AUC(AUC20)及呼氣采集時(shí)間0至60分鐘的AUC(AUC60)分別示于左側(cè)及右側(cè)。由此可知，相對于直至200mg/個(gè)體的13C-CaCO3給藥量(mg/個(gè)體)的呼氣采集時(shí)間0至20分鐘及0至60分鐘的AUC(AUC20及AUC60)均大致為通過原點(diǎn)的直線。即，確認(rèn)到至少在給藥量為200mg/個(gè)體以下的范圍內(nèi)，13C-CaCO3給藥量與AUC之間存在直線相關(guān)關(guān)系。以上內(nèi)容意味著在胃內(nèi)酸度正常的人中，在13C標(biāo)記碳酸化合物的200mg/個(gè)體以下的給藥量范圍內(nèi)，該給藥量與13CO2的呼氣排出行為(各呼氣采集時(shí)的呼氣中13CO2濃度(A13C (%。))、及“ A 13C (%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC))之間存在直線相關(guān)關(guān)系。需要說明的是，如圖12及13所示，直至200mg/個(gè)體的13C-CaCO3懸浮液的給藥量(mg/個(gè)體)與(A13C(%。))及“ A13C(%。)-時(shí)間曲線下面積”(AUC)之間分別存在直線相關(guān)關(guān)系。給藥量20 400mg/個(gè)體與呼氣采集時(shí)間30分鐘的A13C(%。)的關(guān)系如圖14所示。由該結(jié)果可知，如圖1(1)所示，雖然13C-CaCO3給藥量在為一定的量以下(此處為200mg/個(gè)體以下)時(shí)與a13c(%。)之間存在直線相關(guān)關(guān)系，但在給藥量超過一定的量時(shí)，A13C(%。)值成為定值(平臺)。實(shí)驗(yàn)例7 CYP2C19及CYP3A4的酶活性與奧美拉嗶的藥效的相關(guān)性作為質(zhì)子泵遏制劑(PPI)的奧美拉唑主要被作為肝代謝酶的CYP2C19代謝，但作為旁路路徑也被CYP3A4代謝，因而其藥效依賴于受試者的CYP2C19及CYP3A4的代謝能力。因此，使用本發(fā)明的胃內(nèi)酸度測定方法，使用CYP2C19及CYP3A4的遏制劑(酮康唑)評價(jià)CYP2C19及CYP3A4的酶活性與奧美拉唑的藥效的相關(guān)關(guān)系。(I)受試試樣的制備(i)酮康唑(CYP2C19及CYP3A4遏制劑):逐步少量地向酮康唑中添加0. 5% CMC水溶液并使用乳缽進(jìn)行混煉，制備濃度50mg/4mL(23. 54 u mol/4mL)的酮康唑懸浮液。(ii)奧美拉唑用生理鹽水溶解注射用奧美拉唑，制備成濃度為3mg/mL。(iii) 13C-CaCO3懸浮液逐步少量地向13C-CaCO3中添加0. 5% CMC水溶液并使用乳缽進(jìn)行混煉，制備濃度100 ii mol/4mL的13C-CaCO3懸浮液。(2)實(shí)駘使用禁食的大鼠(7周齡、雌，SD系大鼠)作為受試動(dòng)物，分為奧美拉唑給予組(n=3)、酮康唑前處理組(n = 3)、及對照組(n = 3)。對于奧美拉唑給予組，單次靜脈內(nèi)給予奧美拉唑(3mg/kg),在給予2小時(shí)后以4mL/kg的給藥量經(jīng)口給予13C-CaCO3懸浮液(100 y mol/4mL)，采集呼氣。對于酮康唑前處理組，預(yù)先單次經(jīng)口給予酮康唑(50mg/kg),在30分鐘后單次靜脈內(nèi)給予奧美拉唑(3mg/kg)，接下來在給予2小時(shí)后以4mL/kg的給藥量經(jīng)口給予13C-CaCO3懸浮液(100iimol/4mL)，采集呼氣。另外，對于對照組(無處置大鼠)，僅經(jīng)口給予13C-CaCO3懸浮液(100iimol/4mL)4mL/kg，采集呼氣。將這些呼氣作為受試試樣，使用呼氣 分析用質(zhì)譜儀(ABCA :SerCon公司制)由在呼氣中排出的13CO2濃度測定A 13C (%。)。結(jié)果如圖15所示。圖15中，-X-為針對對照組測定出的呼氣中13CO2濃度(A13C(%。))的推移「■_為針對奧美拉唑給予組測定出的呼氣中13CO2濃度(A13c(%。))的推移；以及，為針對酮康唑前處理組測定出的呼氣中13CO2濃度(A13C(%。))的推移。結(jié)果，如圖15所示，相對于對照組，奧美拉唑給予組的胃酸分泌受到抑制，13C-CaCO3給予后的呼氣反應(yīng)降低，進(jìn)而，通過酮康唑前處理，13C-CaCO3給予后的呼氣反應(yīng)降低。認(rèn)為該現(xiàn)象的原因是由CYP2C19及CYP3A4遏制劑(酮康唑)進(jìn)行的奧美拉唑在體內(nèi)的代謝受到抑制，其胃酸分泌抑制作用得到增強(qiáng)，因而胃內(nèi)酸度降低。由上述實(shí)驗(yàn)可確認(rèn)通過利用本發(fā)明的胃內(nèi)酸度的測定方法，可針對各受試者評價(jià)經(jīng)CYP2C19或經(jīng)CYP2C19和CYP3A4代謝的藥物的效果(藥效)。另外，奧美拉唑、后述的氯吡格雷的藥效存在個(gè)體差異，作為其原因之一，暗示了藥物代謝酶的CYP2C 19基因及/或CYP3A4基因的多態(tài)型參與。因此，通過利用本發(fā)明的胃內(nèi)酸度的測定方法，可針對各受試者評價(jià)CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)、關(guān)于CYP2C19及/或CYP3A4的基因多態(tài)型的存在，并且可評價(jià)與CYP2C19單獨(dú)或CYP2C19和CYP3A4兩者的酶活性(代謝能力)有關(guān)的藥物對受試者的藥效(受試者對藥物的敏感性)。參考例I CYP2C19的酶活性與氯吡格雷的藥效的相關(guān)性作為抗血栓藥的氯吡格雷通過CYP2C19及CYP3A4而形成活性代謝物，通過與在血小板表面表達(dá)的P2Y12受體結(jié)合，而抑制血小板的凝集，因而其藥效依賴于受試者的CYP2C19及CYP3A4的代謝能力。因此，使用本發(fā)明的胃內(nèi)酸度測定方法，使用CYP2C19及CYP3A4遏制劑(酮康唑)評價(jià)CYP2C19及CYP3A4的活性與氯吡格雷的藥效的相關(guān)性。
(I)受試試樣的制備(i)酮康唑(CYP2C遏制劑)向酮康唑中逐步少量地添加0. 5% CMC水溶液并使用乳缽進(jìn)行混煉，來制備濃度50mg/4mL(23. 54 u mol/4mL)的酮康唑懸浮液。(ii)氯吡格雷用0. 5% CMC水溶液溶解氯吡格雷，制備成濃度10mg/mL。(2)實(shí)駘使用禁食的大鼠(7周齡、雌，SD系大鼠)作為受試動(dòng)物，分為氯吡格雷給予組(n=3)、酮康唑前處理組(n = 3)、及對照組(n = 3)。對于氯吡格雷給予組，單次經(jīng)口給予氯吡格雷(10mg/kg)，在給予2小時(shí)后進(jìn)行采血。對于酮康唑前處理組，預(yù)先單次經(jīng)口給予酮康唑(50mg/kg),在30分鐘后單次經(jīng)口給予氯批格雷(10mg/kg),然后在給予2小時(shí)后進(jìn)行采血。使用采集的多血小板血漿，使用多功能血小板凝集測定裝置(MC MEDICAL株式會(huì)社制)測定ADP刺激導(dǎo)致的血小板凝集。結(jié)果如圖16所示。由此可知，氯吡格雷引起的血小板凝集抑制作用由于CYP2C19及CYP3A4遏制劑酮康唑而減弱。認(rèn)為該減少的原因是氯吡格雷在體內(nèi)的代謝活化受到CYP2C19及CYP3A4遏制劑(酮康唑)的抑制，結(jié)果血小板凝集抑制作用降低。由該結(jié)果及實(shí)驗(yàn)例6的結(jié)果可認(rèn)為通過利用本發(fā)明的胃內(nèi)酸度的測定方法，可對各受試者評價(jià)氯吡格雷的效果(藥效)。另外認(rèn)為也可通過利用本發(fā)明的胃內(nèi)酸度的測定方法評價(jià)與CYP2C19及CYP3A4的酶活性(代謝活性)關(guān)聯(lián)的氯吡格雷對受試者的藥效(受試者對氯吡格雷的敏感性)。
權(quán)利要求
1.一種測定哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的方法，包括如下工序 工序(I)，以在經(jīng)口給予規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻排出的受試哺乳動(dòng)物的呼氣為受試試樣，測定該呼氣中排出的13CO2的行為； 工序(2)，對上述⑴中得到的13CO2的行為(測定13CO2行為)與預(yù)先針對作為對照的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)而得到的與上述對應(yīng)的13CO2的行為(基準(zhǔn)13CO2行為)進(jìn)行對比；及 工序(3)，基于上述(2)中得到的基準(zhǔn)13CO2行為與測定13CO2行為的差異，確定受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度。
2.如權(quán)利要求1所述的測定方法，其中，上述13CO2的行為是由如下呼氣求出的A 13C (%。)，所述呼氣是在經(jīng)口給予后在30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻從經(jīng)口給予了 13C標(biāo)記碳酸化合物的受試哺乳動(dòng)物采集的呼氣。
3.如權(quán)利要求1或2所述的測定方法,其中，上述規(guī)定給藥量為IOmg 5g。
4.如權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的測定方法，其中，上述13C標(biāo)記碳酸化合物為選自堿金屬碳酸鹽、堿土金屬碳酸鹽、碳酸銨、堿金屬碳酸氫鹽、及碳酸氫銨中的至少任一種碳酸化合物。
5.如權(quán)利要求2 4中任一項(xiàng)所述的測定方法，其中，確定工序(3)是如下工序在測定13CO2行為與基準(zhǔn)13CO2行為相同時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度與對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度相同或比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度高，另外，在測定13CO2行為低于基準(zhǔn)13CO2行為時(shí)，確定為受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度比對照哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度低。
6.如權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述的測定方法，該方法用于對受試哺乳動(dòng)物進(jìn)行i)胃酸抑制劑的藥效評價(jià)、ii)CYP2C19或CYP2C19和CYP3A4的酶活性(代謝能力)的評價(jià)、iii)經(jīng)CYP2C19或CYP2C19和CYP3A4代謝的藥物的藥效評價(jià)。
全文摘要
本發(fā)明提供使用13C標(biāo)記碳酸化合物測定哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的方法。具體而言，本發(fā)明是包括如下工序的測定哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度的方法工序(1)，以在經(jīng)口給予規(guī)定給藥量的13C標(biāo)記碳酸化合物后30分鐘以內(nèi)的任意時(shí)刻排出的受試哺乳動(dòng)物的呼氣為受試試樣，測定該呼氣中排出的13CO2的行為；工序(2)，對上述(1)中得到的13CO2的行為(測定13CO2行為)與預(yù)先針對作為對照的哺乳動(dòng)物(對照哺乳動(dòng)物)而得到的與上述對應(yīng)的CO2的行為(基準(zhǔn)CO2行為)進(jìn)行對比；及工序(3)，基于上述(2)中得到的基準(zhǔn)CO2行為與測定13CO2行為的差異，確定受試哺乳動(dòng)物的胃內(nèi)酸度。
文檔編號A61K49/00GK103069274SQ201180040038
公開日2013年4月24日 申請日期2011年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月19日
發(fā)明者稻田睦, 國崎純一, 飛田和貴, 赤松優(yōu), 飯塚伸司 申請人:大塚制藥株式會(huì)社