專利名稱：免疫誘導劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及包含氣孔率在50%以下的β -磷酸三I丐(β -Tricalcium phosphate:下文也稱為“ β -TCP”)的免疫誘導劑，更具體而言，涉及通過移植或注射到生物體內從而在其附近誘導淋巴細胞和樹突細胞(下文也稱為“DC細胞”)的免疫誘導劑。
β -TCP等磷酸鈣類化合物由于其優秀的生物體親和力而用于多種制品。例如，市場上銷售一種人工骨骼填充劑等(例如，參見非專利文獻I)，所述人工骨骼填充劑具有氣孔率約75%的、包含100 400 μ m的連續大孔和小孔的高純度β -TCP結晶層，性質為在手術現場易于加工的強度即2 3MPa的壓縮強度；這樣的β-TCP多孔體兼有替換自身骨骼這一作為人工骨骼填充材料而言理想的性質，對于這一性質，對在生物體內化學溶解和由細胞吞食這2種機制所致的吸收作用進行了簡要說明(例如，參見專利文獻I)。
本發明人等已經確認，使用在柔軟的薄片構件的表面包被具有75%以上的氣孔率、粒徑為25 75 μ m的β -TCP多孔體粉末而制成的癌細胞抑制薄片，使癌癥直接與β -TCP接觸，能夠通過激活巨噬細胞運動而抑制惡性腫瘤(例如，參見專利文獻2)。在該發明中，沒有確認到β -TCP多孔體粉末介導的淋巴細胞和樹突細胞聚集的作用，由于需要進行導入薄片這類侵入性處理，難以進行多次施用、濃度變化型施用等細致處理。此外，在β-TCP多孔體粉末的情況下，當其粒徑小于25 μ m時，初期的細胞抑制效果與粒徑為25 75 μ m的情況相同，但是隨時間流逝，存在抑制效果降低的問題。
現有技術文 獻
專利文獻
專利文獻1:日本特開2001-259016號公報
專利文獻2:日本特開2010-126434號公報
非專利文獻
非專利文獻1:七5彡〃 ^ 43 (2008)第11期，第967-988頁發明內容
發明要解決的問題
本發明的問題是提供可以用簡單的操作移植或注射到生物體內，可以在生物體內無副作用地激活免疫作用的免疫誘導劑。
用于解決問題的方案
本發明人等通過改變β-TCP的氣孔率而研究它的免疫誘導作用時，發現將氣孔率在50%以下的β-TCP移植、注射到生物體內時，在β-TCP的附近區域，聚集、誘導了與免疫作用相關的B細胞、T細胞、天然殺傷細胞(下文也稱為“ΝΚ細胞”)等淋巴細胞、樹突細胞。此外，確認了在移植β-TCP的部位附近的非病變部位中，構建了與天然淋巴結相似的細胞結構，從而完成了本發明。
換言之，本發明涉及(I) 一種免疫誘導劑，其包含氣孔率在50%以下的β-磷酸三鈣(β-TCP) ; (2)上述(I)所述的免疫誘導劑，其特征在于，用于移植或注射到生物體內；(3)上述(I)或(2)所述的免疫誘導劑，其特征在于，在附近誘導淋巴細胞和樹突細胞；(4)上述(I) (3)的任一項所述的免疫誘導劑，其特征在于，淋巴細胞是選自T細胞、B細胞和NK細胞中的I種或2種以上；(5)上述(I廣(4)的任一項所述的免疫誘導劑，其特征在于，劑型是粒徑在0.05 μ m以上且小于25 μ m的粒子或顆粒；(6)上述(I廣(4)的任一項所述的免疫誘導劑，其特征在于，劑型是片劑或柱狀體；(7)通過上述(I廣(6)的任一項所述的免疫誘導劑形成的淋巴結樣組織。
此外，作為本發明的其他形態，可以列舉將氣孔率在50%以下的β -TCP移植或注射到生物體內，誘導免疫反應的方法；將氣孔率在50%以下的β -TCP移植或注射到生物體內，激活免疫作用的方法；將氣孔率在50%以下的β-TCP移植或注射到生物體內，形成淋巴結樣組織的方法；將氣孔率在50%以下的β-TCP作為向生物體內移植或注射使用的免疫誘導劑的使用方法；將氣孔率在50%以下的β-TCP作為向生物體內移植或注射使用的淋巴結樣組織的形成劑的使用方法；氣孔率在50%以下的β-TCP用于制備向生物體內移植或注射使用的免疫誘導劑的用途；氣孔率在50%以下的β-TCP用于制備向生物體內移植或注射使用的淋巴結樣組織的形成劑的用途。
發明的效果
通過本發明，通過簡單的操作，即，將包含氣孔率在50%以下的β -TCP的免疫誘導劑移植或注射到生物體內，特別是癌癥等病變部位附近(非病變部位)，激活免疫作用，可以對病變部位產生治療效果，并可以預期進一步在切除了癌癥等病變部位的部位中實現阻止復發。此外，移植或注射的是具有生物相容性的β-TCP，由于誘導患者體內原本存在的淋巴細胞和樹突細胞，因此可以阻止在體內發生免疫激活以外的反應。
此外，在注射或移植粒徑在0.05 μ m以上且小于25 μ m的、氣孔率在50%以下的β -TCP粒子或顆粒的情況下，相比注射或移植25 μ m以上、氣孔率在50%以下的β -TCP粒子或顆粒的情況，可以誘導更多的淋巴細胞、樹突細胞。在注射或移植氣孔率在50%以下的β -TCP片劑的情況下，可以預期長期的免疫誘導效果。在氣孔率在50%以下的β -TCP粒子(顆粒)或β -TCP柱狀體的情況下，可以通過注射器等，簡單地進行多次施用、局部施用。
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圖1是作為本發明的免疫誘導劑的實施方案之一的β -TCP片劑的整體結構圖。
圖2是氣孔率18%的β -TCP片劑的切面的SEM照片。
圖3是移植了氣孔率18%的β -TCP片劑的皮膚組織的HE染色照片。
圖4是放大圖3的區域a的照片。
圖5是放大圖3的區域b的照片。
圖6是未處理的正常皮膚組織的HE染色照片。
圖7是移植了氣孔率60%的β -TCP多孔體的皮膚組織的HE染色照片。
圖8是移植了氣孔率75%的β -TCP多孔體的皮膚組織的HE染色照片。
圖9是移植了塑料的皮膚組織的HE染色照片。
圖10是顯示移植到皮膚組織的移植片的種類、由該移植片誘導的淋巴細胞和巨噬細胞的細胞數之間的關系的圖。
圖11是顯示β -TCP的氣孔率與淋巴細胞誘導之間的關系的表。
圖12是使用T細胞特異性抗體進行免疫染色的P -TCP移植部位的照片(X 10倍)。圖13是使用T細胞特異性抗體進行免疫染色的小鼠脾淋巴組織的照片(X 10倍)。圖14是使用B細胞特異性抗體進行免疫染色的P -TCP移植部位的照片(X 10倍)。圖15是使用B細胞特異性抗體進行免疫染色的小鼠脾淋巴組織的照片(X 10倍)。圖16是使用NK細胞特異性抗體進行免疫染色的P -TCP移植部位的照片(X40倍)。圖17是使用NK細胞特異性抗體進行免疫染色的小鼠脾淋巴組織的照片(X40倍)。圖18是使用DC細胞特異性抗體進行免疫染色的@ -TCP移植部位的照片(X40倍)。圖19是使用DC細胞特異性抗體進行免疫染色的小鼠脾淋巴組織的照片(X40倍)。圖20是移 植了 P -TCP粉末的皮膚組織的HE染色照片。圖21是顯示P -TCP粉末的粒徑與細胞誘導之間的關系的表。圖22是P -TCP粉末的粒徑0.05 25 u m級分的SEM照片。圖23是P -TCP粉末的粒徑0.05 25 u m級分的粒度分布圖。
具體實施例方式本發明的免疫誘導劑只要是含有氣孔率在50%以下的P -磷酸三鈣(P -TCP)的免疫誘導劑即可，沒有特殊的限制，在本文中，免疫誘導是指誘導免疫反應，即，誘導免疫系統對異物(抗原)所發生的作用。上述P-TCP是用Ca3 (PO4)2表示的組合物的一種結晶形態，是在常溫下穩定的具有生物體親和性的化合物。此外，上述3-TCP優選是燒結體。計算上述P -TCP的氣孔率的方法可列舉這樣的方法:測定氣孔率為0%的P -TCP石(與作為測定對象的燒結體組成相同，結晶型的不具有氣孔的P-TCP燒結體)的真密度P，根據作為測定對象的燒結體的體積和重量計算表觀密度P’，由此計算氣孔率P(%)=(1-P ’ / P ) XlOOo此外，本發明的免疫誘導劑可列舉氣孔率在50%以下的P -TCP粒子、氣孔率在50%以下的P -TCP顆粒(多個粒子的結合體)、氣孔率在50%以下的P -TCP片劑、氣孔率在50%以下的P-TCP柱狀體等，這些可以是僅由P-TCP組成的，還可以是以P-TCP作為有效成分并含有其他成分的。在50%以下的P -TCP的氣孔率優選在40%以下，更優選在30%以下，其中特別優選在20%以下。以粉末、懸浮液(溶膠)、濃稠物(凝膠)等形態，將上述P -TCP粒子、P -TCP顆粒施用到生物體的癌癥等病變部位附近等(非癌癥部位等)。可以使用例如ACCuPyC1330系列(株式會社島津制作所生產)測定這些3 -TCP粒子、3 -TCP顆粒的氣孔率P。上述0 -TCP粒子、P -TCP顆粒的制備方法可列舉例如下述方法:將磷酸氫鈣和碳酸鈣的粉末按摩爾比1:廣3，優選1:1.5^2.5稱量、混合，向這些磷酸氫鈣-碳酸鈣混合物中加入純水，配制為漿料，用球磨機濕磨處理所配制的漿料約24小時，通過機械化學(mechano chemical)法進行反應,在70 90°C,優選75 85°C干燥經研磨處理的衆料,將干燥獲得的固體物質粉碎，在70(T800°C預燒所獲得的P -TCP粉末數小時，制備P -TCP預燒粉末，將獲得的3-TCP預燒粉末過篩，可以獲得各粒徑的級分，測定各級分的氣孔率，可以獲得氣孔率在50%以下的級分。具體而言，首先，將通過105 u m篩孔的篩且殘留在75 y m篩孔的篩上的P -TCP作為級分(A);然而,將通過75 y m篩孔的篩且殘留在25 U m篩孔的篩上的@-TCP作為級分(B);再將通過25 篩孔的篩的P-TCP作為級分(C)，在此情況下，以級分(C)作為氣孔率實際上在50%以下的P -TCP。上述P -TCP粒子、P -TCP顆粒的粒徑可列舉例如0.05 ii m以上且小于500 U m,優選小于10011111，更優選小于5011111，更優選小于2511111，其中優選小于15iim。所述粒徑可以通過上述利用過篩實現的分級或通過在SEM照片中與標志物進行比較而確認的P -TCP粒子、顆粒的大小來進行評價。只要可以發揮免疫誘導效果，對移植或注射的P-TCP粒子、P-TCP顆粒的施用量沒有限制，可以根據疾病種類、病變大小、患者體重等恰當的決定，可示例優選
0.0lmg IOOg,更優選0.1mg IOg,更優選Img lg。移植和/或注射的頻率可示例每I周 6周進行I次。上述P-TCP片劑、P-TCP柱 狀體的形狀可列舉圓板狀、圓柱狀、近似圓柱狀、橢圓柱狀、三角-七角柱體等柱狀體，可以考慮病變部位的種類、施用部位、病變大小、患者的體重等，恰當的決定上述P-TCP片劑、柱狀體的大小。P-TCP片劑的直徑可列舉
1.0^10.0mm,優選 3.0^7.0mm,更優選 4.0^6.0mm,高度可列舉 0.5^4.0mm,優選 1.0^3.0mm,更優選1.5^2.5mm。上述0 ^TCP柱狀體的直徑可列舉0.2.0mm,優選0.3^1.0mm,更優選
0.4 0.6mm,長度可列舉1.0 6.0mm,優選2.0 5.0mm,更優選3.0 4.0mm。上述0 -TCP片劑、^ -TCP柱狀體的制備方法可列舉可以制備氣孔率在50%以下、單一相或幾乎單一相的P-TCP片劑、柱狀體的方法。具體而言，可列舉這樣的方法，即:如上所述制備3-TCP預燒粉末，將獲得的3-TCP預燒粉末壓縮成形(壓片)賦予片劑、柱狀體的形狀，在45(T650°C，優選600°C燒結這些賦形了的P -TCP預燒片劑、柱狀體2.5^3.5小時，優選3小時，然后在85(T950°C，優選900°C下燒結0.5^1.5小時，優選I小時，再在1000 13001:下燒結0.75 1.5小時，優選I小時，獲得作為燒結體的P-TCP片劑、柱狀體；還可以燒結上述P-TCP預燒粉末，在獲得作為P-TCP燒結體的粉末后，壓縮成形(壓片)，制備3-TCP片劑、柱狀體。還可以通過將3-TCP片劑沖壓成柱狀，制備3-TCP柱狀體。本發明中的生物體內只要是除骨骼和牙齒以外的部位即可，沒有特殊的限制，可列舉皮下、皮內、肌肉內、腹腔內、胸腔內、腦內，優選可列舉皮下。一旦將本發明的免疫誘導劑移植和/或注射到生物體內，T細胞、B細胞、NK細胞等淋巴細胞和樹突細胞就可以聚集到移植和/或注射的免疫誘導劑附近，構成淋巴結樣組織。在本文中，淋巴結樣組織意指淋巴細胞、樹突細胞聚集而成的細胞團。上述誘導淋巴細胞和樹突細胞的免疫誘導劑附近可列舉位于病變部位附近的非病變部位的部位、離開病變部位的遠離部位、切除病變部位后的部位，具體而言，可列舉離病變部位或病變切除部位Imm以上且IOOcm以內，優選50cm以內，更優選5cm以內，更優選3cm以內，例如1.5cnT2.0cm距離的區域。誘導至免疫誘導劑附近的淋巴細胞和樹突細胞是原本存在于患者體內的淋巴細胞、樹突細胞，因而阻止了在體內發生除激活免疫以外的反應。
本發 明中的病變只要是除骨骼和牙齒以外的病變即可，沒有特殊的限制，可列舉癌癥、過敏、感染癥，其中優選可以列舉癌癥，可特別優選示例頭蓋骨內組織的癌癥、肺癌、皮膚癌、乳腺癌、軟組織癌、膀胱癌、胃癌、肝癌、膽囊癌、胰腺癌、頭部的癌癥、頸部的癌癥、腎癌、腎上腺癌、前列腺癌、大腸癌、小腸癌、食道癌、女性生殖器官癌(例如卵巢癌、子宮癌)或甲狀腺癌。
本發明的免疫誘導劑的移植方法可列舉將上述片劑放置在經外科處理而切開的部位的方法，將上述粒子、顆粒散布在經外科處理而切開的部位的方法；本發明的免疫誘導劑的注射方法可列舉使用填充了上述粒子、顆粒的懸浮液等的注射器，自最低限度的開口部位直接注射到生物體內的方法，使用注射針中安裝了上述柱狀物的注射器，自最低限度的開口部位直接按壓注射到生物體內的方法。
只要不削弱或抑制本發明的效果，本發明的免疫誘導劑可以包含除β-TCP以外的藥學可接受的常規載體、結合劑、穩定劑、賦形劑、稀釋劑、PH緩沖劑、崩解劑、溶解劑、助溶劑、等滲劑等各種用于制備的配伍成分，這些成分可以與上述粒子或顆粒混合后注射，也可以一開始混合并壓縮成形(壓片)來制備。
下面通過實施例具體說明本發明，但本發明的技術范圍不限于這些示例。
實施例1
(制備β -TCP 片劑)
將磷酸氫鈣和碳酸鈣的粉末按摩爾比1:2稱量、混合，向這些磷酸氫鈣-碳酸鈣混合物中加入恰當比例的純水，配制為漿料，用球磨機濕磨處理所配制的漿料約I天，在80°C下干燥經研磨處理的漿料數小時，將干燥獲得的固體物質粉碎，獲得β -TCP粉末。在750°C預燒所獲得的β-TCP粉末數小時，制備β-TCP預燒粉末。將上述β-TCP預燒粉末容納到內徑5mm、高2mm的容器內，用旋轉數IOOrpm壓片，賦予片劑形狀。這些片劑在600°C下3小時、900°C下I小時、再在100(Γ1300 下I小時進行燒結。所獲得的β-TCP片劑由于一部分具有晶體構造，所以是半透明的，具有高吸濕性的特征。圖1是β-TCP片劑的整體組成圖。
( β -TCP片劑的物理性質)
調查上述β -TCP片劑的氣孔率。測定氣孔率為0%的β -TCP石(與作為測定對象的燒結體組成相同，結晶型的不具有氣孔的β-TCP燒結體)的真密度P，根據作為測定對象的燒結體的體積和重量計算表觀密度P ’，由此計算氣孔率P(%) =Cl-P Vp )Χ100。結果獲得了氣孔率3、8、18、42、50、60和75%的β-TCP片劑。圖2是用掃描電子顯微鏡(SEM)觀察氣孔率18%的β-TCP片劑的切面的照片。照片內的珠子是作為尺寸指標使用的，直徑是 2 μ m。
實施例2
(研究β-TCP片劑的免疫細胞誘導效果)
在上述實施例1制備的β -TCP片劑中，使用氣孔率18%的β -TCP片劑，移植到2只7周齡小鼠的皮下，評估本申請的免疫誘導劑的免疫細胞誘導效果。具體而言，麻醉小鼠，切開約IOmm背部皮膚，將氣孔率18%的β-TCP片劑移植到皮下后，喂養小鼠2周，采集含移植片劑部位的皮膚組織。用福爾馬林固定所采集的皮膚組織后，石蠟包埋，制備用于病理標本的超薄切片，進行HE (蘇木精 伊紅)染色，用光學顯微鏡觀察。圖:T圖5顯示了移植氣孔率18%的P -TCP片劑的情況下的照片。圖4和圖5分別是放大圖3的移植部位的邊緣部分a或中心部分b的照片。此外，圖6顯示了從作為陰性對照的未移植P -TCP片劑的皮膚組織制備的超薄切片的HE染色圖像。作為比較實驗，用氣孔率60%的P -TCP片劑、氣孔率75%的P -TCP片劑或塑料片替代氣孔率18%的P -TCP片劑作為移植片，除此之外，用與實施例3相同的步驟移植、喂養和制備、染色超薄切片，用光學顯微鏡觀察。圖7顯示了移植氣孔率60%的P-TCP片劑、圖8顯示了移植氣孔率75%的P-TCP片劑、圖9顯示了移植塑料片的結果。此外，在所拍攝的移植了各移植片的皮膚組織的HE染色圖像中，比較移植片中誘導的淋巴細胞和巨噬細胞的數量。結果顯示在圖10中。(結果)根據圖3 圖5，在移植氣孔率18%的P -TCP片劑的情況下，片劑周圍全部分布了大量淋巴細胞，特別是在片劑邊緣部分，確認形成了淋巴細胞以高密度進行定位的淋巴結樣組織。具體而言，由圖10可知，在氣孔率18%的P -TCP片劑的移植部位中，存在數量為比較實驗中使用的其他移植片約120飛50倍的淋巴細胞，另一方面，幾乎不存在巨噬細胞。在移植氣孔率60%和75%的P -TCP多孔體的情況下，以移植部位的邊緣部分為中心確認到成骨細胞，而幾乎沒有確認到淋巴細胞，在移植塑料的情況下，確認了分散的淋巴細胞，其數量極少。圖11顯示了對上述實施例1中制備的氣孔率3、8、18、42、50、60、75%的P-TCP片劑實施相同分析的結果。結論是當氣孔率在50%以下時，確認誘導淋巴細胞，而氣孔率在60%和75%的P -TCP片劑則無法確認到任一種淋巴細胞的誘導。根據上述結果，確認了氣孔率在50%以下的P -TCP片劑具有免疫誘導作用，S卩，有效地誘導淋巴細胞，通過所誘導的淋巴細胞激活免疫機能。實施例3(研究淋巴細胞的種類和分布)通過免疫染色，研究用上述實施例1中制備的P -TCP片劑誘導的淋巴細胞的種類和分布。用與上述實施例2相同的步驟，將氣孔率18%的P -TCP片劑移植到小鼠皮下，移植后喂養小鼠2周，采集移植部位，制備超薄切片，使用特異性抗體，對超薄切片中的T細胞、B細胞、NK細胞和DC細胞分別實施免疫染色。此外，對由移植了免疫誘導劑的小鼠中采集的淋巴結超薄切片，也進行各細胞的免疫染色。圖12 圖19顯示了通過光學顯微鏡觀察移植了氣孔率18%的P -TCP的移植部位附近和未進行移植的上述小鼠的脾淋巴組織的結果。圖12和圖13分別是對上述移植部位附近的和脾淋巴組織中的T細胞染色的結果。在兩者中同樣可見T細胞在中心部分的密度高于邊緣部分。圖14和圖15分別是對上述移植部位附近的和脾淋巴組織中的B細胞染色的結果。在兩者中冋樣可見B細胞在邊緣部分聚集(參見圖14和圖15的ft]■頭)。圖16和圖17分別是對上述移植部位附 近的和脾淋巴組織中的NK細胞染色的結果。箭頭指示的細胞是NK細胞。在兩者中都確認了同樣分散了少數NK細胞。圖18和圖19分別是對上述移植部位附近的和脾淋巴組織中的樹突細胞染色的結果。箭頭指示的細胞是DC細胞。在兩者中都確認了同樣分散了少數DC細胞。
根據上述免疫染色的觀察結果，確認在上述實施例1中制備的β -TCP片劑可以誘導T細胞、B細胞、NK細胞等各種淋巴細胞，并且還誘導樹突細胞，移植到體內后，具有與正常淋巴結相同的分布和密度，組成與正常淋巴結相同的細胞團塊結構。這些結果提示，本發明的包含β-TCP的片劑可以誘導與天然淋巴結相同的淋巴結樣組織、發揮免疫機能，是優秀的免疫誘導劑。
實施例4
(制備β-TCP粒子或顆粒)
將上述實施例1獲得的β-TCP預燒粉末過篩，首先，將通過105 μ m篩孔的篩、進而殘留在75 μ m篩孔的篩上的β-TCP作為β-TCP粒徑在75 μ m以上且小于105 μ m的(A);將通過75 μ m篩孔的篩、殘留在25 μ m篩孔的篩上的β -TCP作為β -TCP粒徑在25 μ m以上且小于75 μ m的(B);將通過25 μ m篩孔的篩的β -TCP作為β -TCP粒徑在0.05 μ m以上且小于25 μ m的(C)，獲得3種級分(A) (C)0
( β -TCP粒子或顆粒的氣孔率)
用干式自動密度計(AccuPycl330、株式會社島津制作所生產)計算測定上述(A) (C) 3種級分的氣孔率，確認(A)級分的氣孔率:60-70% ； (B)級分的氣孔率:40-50% ； (C)級分的氣孔率:0 30%。
(研究β-TCP粒子或顆粒的免疫細胞誘導效果)
混合等量的上述挑選的(A) (C)級分，再按200g/ml的比例懸浮在PBS中。之后，注射移植到皮內，進行HE染色，通過光學顯微鏡觀察超薄切片。圖20顯示了它的觀察結果照片。此外，圖21顯示了 β-TCP粉末的粒徑與細胞誘導之間的關系。
在圖20中，分別顯示A是氣孔率6(Γ70%、Β是氣孔率40 50%、C是氣孔率0 30%的β-TCP粉末。確認A的周圍分布了大量的巨噬細胞。與此相對，確認B的周圍分布了淋巴細胞，C的周圍定位有非常高密度的淋巴細胞。由此可見，特別是在C中更有效地誘導了淋巴細胞。在圖22中顯示了作為(C)級分的下限的粒徑0.05 μ m的粒子的SEM圖像。此外，在圖23中顯示了(C)級分的粉末粒度分布。
實施例5
( β -TCP片劑的抗腫瘤效果)
使用氣孔率0.1 12%的圓板狀β-TCP片劑(直徑5mm、高2mm)，研究在小鼠中的抗腫瘤效果。作為對照，使用同樣大小的、不含可能具有免疫原性的異種蛋白質的塑料載體材料。
(方法)
在6周齡雄性裸小鼠(BALB/c-nu/nu)皮內移植2.5 X IO6個人大腸癌細胞C0L0205(從ATCC公司購入)，5 7天后，計算測定在小鼠中形成的腫瘤大小，計算腫瘤體積。根據下列數學式計算腫瘤體積。
腫瘤體積=(長徑X短徑2) /2 (mm3)
(結果)
將β -TCP片劑和作為對照的塑料載體材料分別移植到離所形成的腫瘤15 20mm部位的皮下。約I個月后，測定腫瘤大小，觀察β-TCP對腫瘤增殖的作用。結果是相對于對照的1400mm3的腫瘤體積，β -TCP片劑施用組中的腫瘤體積減少至1200mm3。
附圖標記說明
I 免疫誘導劑
2 β -TCP
權利要求
1.一種免疫誘導劑，其包含氣孔率在50%以下的P -磷酸三鈣(P -TCP)。
2.根據權利要求1所述的免疫誘導劑，其特征在于，用于移植或注射到生物體內。
3.根據權利要求1或2所述的免疫誘導劑，其特征在于，在附近誘導淋巴細胞和樹突細胞。
4.根據權利要求廣3的任一項所述的免疫誘導劑，其特征在于，淋巴細胞是選自T細胞、B細胞和NK細胞中的I種或2種以上。
5.根據權利要求r4的任一項所述的免疫誘導劑，其特征在于，劑型是粒徑在0.05 i! m以上且小于25 ii m的粒子或顆粒。
6.根據權利要求廣4的任一項所述的免疫誘導劑，其特征在于，劑型是片劑或柱狀體。
7.—種通過權利要求f 6的任`一項所述的免疫誘導劑形成的淋巴結樣組織。
全文摘要
以提供可以用簡單的操作移植或注射到生物體內，可以在生物體內無副作用地激活免疫作用的免疫誘導劑為課題。作為解決手段，將包含氣孔率在50%以下的β-磷酸三鈣(β-TCP)的免疫誘導劑移植或注射到生物體內，特別是癌癥等病變部位附近(非病變部位)。可以在β-TCP的附近誘導T細胞、B細胞、NK細胞等淋巴細胞、樹突細胞，形成淋巴細胞以高密度進行定位的淋巴結樣組織。免疫誘導劑的劑型可列舉粒徑在0.05μm以上且小于25μm的粒子或顆粒、片劑或柱狀體。
文檔編號A61K33/42GK103153317SQ201180035998
公開日2013年6月12日 申請日期2011年7月28日 優先權日2010年7月28日
發明者程錦雁, 丸山宏二 申請人:奧林巴斯株式會社, 靜岡縣