專利名稱：一種利用牛膽汁制備復合膽紅素鈣的方法
技術領域：
本發明屬于制藥技術領域，涉及一種中藥原料藥的中間體的制造方法，尤其涉及一種利用牛膽汁制備復合膽紅素鈣的方法。
背景技術：
牛黃即牛膽結石，天然牛膽結石的形成是多種因素共同作用的結果。肝臟通過合成葡萄糖醛酸酯的方式，將膽紅素、類固醇等非水溶性物質轉變為水溶性物質，然后從膽汁中排出，因而膽汁中的膽紅素多為結合性膽紅素。膽汁中的大腸桿菌在生長繁殖過程中能產生β —葡萄糖醛酸苷酶，可使結合膽紅素水解為游離膽紅素以及葡萄糖醛酸，而膽汁中葡萄糖醛酸增多的時侯，又能促使細菌產生更多的β —葡萄糖醛酸苷酶到膽汁中，β —葡萄糖醛酸苷酶活性的增加又可以增加結合膽紅素的水解，如此循環，使結合膽紅素不斷的水解為游離膽紅素，游離膽紅素與膽汁中鈣離子結合形成膽紅素鈣鹽，在粘多糖的作用下形成膽紅素鈣粘多糖高分子多聚物復合體(復合膽紅素鈣)，即牛黃小顆粒。細菌的活動還能使膽汁的PH值降低，使蛋白質沉降，易于與膽紅素鈣鹽形成復合膽紅素鈣。武漢大鵬藥業有限公司于2001年申報了專利(申請號01133550. 5)。該方法是在牛膽汁加入一定量的大腸桿菌、腸球菌、變形桿菌的單一菌液或其組合菌液，對牛膽汁進行細菌發酵處理。再利用發酵牛膽汁和澄清飽和氧化鈣溶液制取有效成份的沉淀物，然后根據藥用要求加入適量的膽紅素、膽酸、去氧膽酸和無機鹽后，制作復合膽紅素鈣。再利用復合膽紅素鈣和發酵牛膽汁在體外培育牛膽結石。在現有人工合成牛黃技術中，普遍采用的是接種大腸桿菌到膽汁中，通過微生物的發酵改變膽汁的理化性質，再加入飽和石灰水而得到復合膽紅素鈣，這一過程不僅工藝復雜，而且效率極低，實際上微生物發酵的過程就是產生β —葡萄糖醛酸苷酶和調節膽汁 PH值的過程，而這二點我們都可以通過一種新的方法來替代，從而略去發酵的復雜操作，本發明就是在保證復合膽紅素鈣的成份穩定不變的前提下，進一步簡化生產過程，提高產品收率。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種操作簡單、效率更高的復合膽紅素鈣的制備方法。技術方案包括如下步驟
1、調節天然牛膽汁中的牛磺酸含量至3 7% (g/ml)，使其達到藥用要求。2、β 一葡萄糖醛酸苷酶菌液的制備
將大腸桿菌、腸球菌、變形桿菌的單一菌液或組合菌液接種到培養基中進行擴大培養， 直到細菌進入生長平穩期，將處于生長平穩期的大腸桿菌、腸球菌、變形桿菌的單一菌液或組合菌液進行紫外滅菌處理，殺死菌體，并進行超聲振蕩，使菌體破裂，取牛膽汁與菌種處理液按(Γ3) 1的比例進行混合，3(T50°C下攪拌保溫0.5 1.5小時。
3
3、調節pH值，制備復合膽紅素鈣
用稀酸調節牛膽汁與菌種混合液的PH值到3 5，3(T5(TC下攪拌保溫0. 5^1. 5小時，再加入澄清飽和氧化鈣溶液，充分攪拌，濾取棕紅色沉淀物；在棕紅色沉淀物中，加入水進行攪拌、洗滌，靜置后濾去上清液，以除去水溶性雜質；再向沉淀中加入總重量35飛5%的膽紅素、5 15%的膽酸、2. 5 7. 5%的去氧膽酸、0. 3 0. 6%的硫酸鋅、0. 3 0. 6%的硫酸鎂后，攪拌混勻；冷凍后真空干燥。通過使用本發明方法，省去發酵的復雜操作，在保證復合膽紅素鈣的成份穩定不變的前提下，進一步簡化生產過程，提高產品收率。
圖1利用牛膽汁制備復合膽紅素鈣的工藝流程圖。
具體實施例方式實施例1
(1)調節天然牛膽汁中的牛磺酸含量至3% (g/ml)。(2)將處于生長平穩期的大腸桿菌菌液進行紫外滅菌處理，殺死菌體，并進行超聲振蕩，使菌體破裂，取牛膽汁10000ml與菌種處理液按1比1進行混合，30°C下攪拌保溫1. 5 小時，調節混合液PH值至5，30°C下攪拌保溫1. 5小時，再加入11000ml澄清飽和氧化鈣溶液，充分攪拌，濾取棕紅色沉淀物
(3)每569g (干重)沉淀中加入350g膽紅素、50g膽酸、25g去氧膽酸、3g硫酸鋅、 3g硫酸鎂后，攪拌混勻備用。(4)將配好的復合膽紅素鈣放入低溫冷凍箱中，一 5°C冷凍M小時，之后轉入真空干燥箱中，抽真空到0. 085Mpa，40°C干燥48小時，即得復合膽紅素鈣。實施例2
(1)調節天然牛膽汁中的牛磺酸含量至5% (g/ml)。(2)將處于生長平穩期的腸球菌菌液進行紫外滅菌處理，殺死菌體，并進行超聲振蕩，使菌體破裂，取牛膽汁10000ml與菌種處理液按2比1進行混合，40°C下攪拌保溫1小時，調節混合液PH值至4，40°C下攪拌保溫1小時，再加入30000ml澄清飽和氧化鈣溶液，充分攪拌，濾取棕紅色沉淀物
(3)每390g (干重)沉淀中加入450g膽紅素、IOOg膽酸、50g去氧膽酸、5g硫酸鋅、5g硫酸鎂后，攪拌混勻備用。(4)將配好的復合膽紅素鈣放入低溫冷凍箱中，一 8°C冷凍20小時，之后轉入真空干燥箱中，抽真空到0. 085Mpa，50°C干燥36小時，即得復合膽紅素鈣。實施例3
(1)調節天然牛膽汁中的牛磺酸含量至7% (g/ml)。(2)將處于生長平穩期的變形桿菌菌液進行紫外滅菌處理，殺死菌體，并進行超聲振蕩，使菌體破裂，取牛膽汁10000ml與菌種處理液按3比1進行混合，50°C下攪拌保溫0. 5 小時，調節混合液PH值至3，50°C下攪拌保溫0. 5小時，再加入40000ml澄清飽和氧化鈣溶液，充分攪拌，濾取棕紅色沉淀物(3)每213g (干重)沉淀中加入550g膽紅素、150g膽酸、75g去氧膽酸、6g硫酸鋅、6g硫酸鎂后，攪拌混勻備用。 (4)將配好的復合膽紅素鈣放入低溫冷凍箱中，一 10°C冷凍16小時，之后轉入真空干燥箱中，抽真空到0. 085Mpa，60°C干燥M小時，即得復合膽紅素鈣。
權利要求
1.一種利用牛膽汁制備復合膽紅素鈣的方法，其特征在于，包括如下步驟1)調節天然牛膽汁中的牛磺酸含量至3 7%(g/ml)；2)β 一葡萄糖醛酸苷酶菌液的制備將大腸桿菌、腸球菌、變形桿菌的單一菌液或組合菌液接種到培養基中進行擴大培養， 直到細菌進入生長平穩期，將處于生長平穩期的大腸桿菌、腸球菌、變形桿菌的單一菌液或組合菌液進行紫外滅菌處理，殺死菌體，并進行超聲振蕩，使菌體破裂，取牛膽汁與菌種處理液按(Γ3) 1的比例進行混合，3(T50°C下攪拌保溫0. 5 1. 5小時；3)調節pH值，制備復合膽紅素鈣用稀酸調節牛膽汁與菌種混合液的PH值到3 5，3(T50°C下攪拌保溫0. 5^1. 5小時，再加入澄清飽和氧化鈣溶液，充分攪拌，濾取棕紅色沉淀物；在棕紅色沉淀物中，加入水進行攪拌、洗滌，靜置后濾去上清液，以除去水溶性雜質；再向沉淀中加入總質量35飛5%的膽紅素、5 15%的膽酸、2. 5 7. 5%的去氧膽酸、0. 25、. 75%的硫酸鋅、0. 25、. 75%的硫酸鎂后，攪拌混勻；冷凍后真空干燥。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，將配好的復合膽紅素鈣放入低溫冷凍箱中，一 5°C至一 10°C冷凍16-M小時，之后轉入真空干燥箱中，抽真空到0. 085Mpa,干燥 24-48小時。
全文摘要
本發明涉及一種利用牛膽汁制備復合膽紅素鈣的方法。調節天然牛膽汁中的牛磺酸含量至3~7%(g/ml)；將大腸桿菌、腸球菌、變形桿菌的單一菌液或組合菌液接種到培養基中進行擴大培養，直到細菌進入生長平穩期，殺死菌體，并進行超聲振蕩，使菌體破裂，取牛膽汁與菌種處理液進行混合，30~50℃下攪拌保溫；用稀酸調節牛膽汁與菌種混合液的pH值到3~5，30~50℃下攪拌保溫，再加入澄清飽和氧化鈣溶液，充分攪拌，濾取棕紅色沉淀物；再向沉淀中加入膽紅素、膽酸、去氧膽酸、硫酸鋅、硫酸鎂后，攪拌混勻；冷凍后真空干燥。通過本發明方法，進一步簡化生產過程，提高產品收率。
文檔編號A61K33/08GK102512457SQ20111043098
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月21日 優先權日2011年12月21日
發明者李幼鶴, 羅張龍, 蔡紅嬌 申請人:武漢健民大鵬藥業有限公司