專利名稱：一種自異體表皮細胞混合懸液的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種具有皮膚創面修復作用的自異體表皮細胞混合懸液制備方法。屬生物醫學工程領域。
背景技術：
創面修復是燒傷治療的重要組成部分，繼各種皮片、皮瓣和微粒皮用于移植手術后，近年來又興起了表皮細胞培養和體外構建皮膚組織的組織工程技術，并已成為臨床醫學和醫學生物工程領域的研究熱點。表皮細胞培養和移植技術可為深度燒傷創面的治療提供充足的皮膚組織，其中，表皮細胞膜片體外培養和移植技術已成功用于燒傷患者臨床救治，但細胞膜片的機械性能差、對操作水平要求高、難以運輸和與創面基質粘著性能差，其臨床應用范圍受到了限制。體外培養表皮細胞以游離方式應用于皮膚創面，是以表皮細胞修復皮膚創面的一種新方法。
發明內容
為了提高表皮細胞在創面修復中的臨床應用效果，本發明提供一種自異體表皮細胞混合懸液的制備方法，該方法通過將體外培養的自體表皮細胞和異體表皮細胞與一定濃度的高分子水溶液混合，使細胞以懸浮狀態存在。此細胞懸液移植到燒傷創面，能夠使創面再上皮化，從而修復創面。本發明的技術方案是取患者自體刃厚皮，通過酶反應獲取游離表皮細胞；實驗室進行培養，至一定量時與已儲存的異體表皮細胞混合進行第二階段培養。將培養的自異體表皮細胞進行酶反應后得到游離自異體表皮細胞，將其加入高分子水溶液制備成為自異體表皮細胞懸液。具體來說，取患者自體皮膚，經清洗、消毒，剪裁成為0. 3X0. 3cm的方形小皮片，經Dispase酶中消化，分離表真皮。將分離的表皮至于胰蛋白酶溶液中消化后，力口入少量小牛血清終止消化，過濾，離心，重懸細胞。將上述細胞與同濃度的異體表皮細胞混合，體外培養。細胞增殖后，消化、離心得到游離自異體表皮細胞。以纖維蛋白膠重懸和稀釋表皮細胞，得到自異體表皮細胞混合懸液。
具體實施例方式下面的實例將具體說明本發明的操作方法，但不能作為對本發明的限定。實施例一取患者皮膚，面積為2X 3cm，以生理鹽水充分清洗后，置洗必泰中消毒，剪裁成為 0.3X0. 3cm的方形小皮片，經0. 2%的Dispase酶在4°C消化16h，剝離表皮組織。將表皮塊至于0. 25%胰蛋白酶中，在37°C下消化10-20min，加入少量小牛血清終止消化，過濾，離心，以DMEM重懸細胞，細胞濃度為2X106/ml。將上述細胞與同濃度的異體表皮細胞混合， 至DMEM培養液中，在37°C、5% CO2培養箱中培養，每2天換液1次。細胞增殖成團簇，細胞活力大于90%時，消化、離心得到游離自異體表皮細胞。以纖維蛋白膠重懸和稀釋表皮細胞，得到終濃度為lX107ml的自異體表皮細胞混合懸液。
權利要求
1.一種自異體表皮細胞混合懸液，其特征在于外觀為透明且成膠狀，是以體外培養自異體表皮和經高分子溶液重懸的方法所得到。
2.如權利要求1所述的自異體表皮細胞混合懸液，其特征在于表皮細胞包括從皮膚組織分離培養得到的自體表皮細胞，和低溫儲藏的異體表皮細胞。
3.如權利要求1所述的自異體表皮細胞混合懸液，其特征在于自體皮膚經分散酶和胰蛋白酶消化得到自體游離表皮細胞。
4.如權利要求1所述的自異體表皮細胞混合懸液，其特征在于自體皮膚經分散酶消化10-20小時，經胰蛋白酶消化10-50分鐘。
5.如權利要求1所述的自異體表皮細胞混合懸液，其特征在于以濃度為1-20%的纖維蛋白水溶液膠體重懸自異體表皮細胞，自異體表皮細胞混合懸液的濃度為1-10X107 ml ο
全文摘要
本發明專利涉及生物醫學工程領域，具體涉及一種自異體表皮細胞混合懸液的制備方法。該自異體表皮細胞混合懸液是由自體表皮細胞培養、自異體表皮細胞培養和自異體表皮細胞經消化、重懸得到的。避免大面積自體植皮手術對皮膚的損傷，自體表皮細胞膜片操作復雜、機械性能差等缺點，有利于將表皮細胞應用于燒傷創面的治療，提高創面的愈合效率和效果，減少病人的手術次數和醫療支出。
文檔編號A61L27/60GK102488930SQ20111041933
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月15日 優先權日2011年12月15日
發明者呂國忠, 朱宇剛, 蔡良良, 趙朋, 黃繼人 申請人:無錫市第三人民醫院