專利名稱：：甘草總皂苷的新用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及甘草總皂苷的新用途。屬于藥物領域。
背景技術：
：腸易激綜合征(IrritableBowelSyndrome,IBS)最早于1820年由Powell報道，屬于胃腸功能紊亂性疾病，指一組包括腹痛、腹脹、排便習慣和大便性狀異常，持續存在或間歇發作，而無形態學和生化異常改變的癥候群，是臨床上最為常見的功能性胃腸病之一。目前IBS診斷主要以癥狀學為依據并建立在排除器質性疾病的基礎上。近年來許多研究顯示胃腸動力障礙和內臟感覺異常是本病癥狀的主要病理生理基礎，而其發病明顯受到心理社會因素的影響。各地研究報道顯示IBS是一種世界范圍內的常見病、多發病，其發病率相當高。根據流行病學調查，西方國家的人群患病率約9%_22%，以女性較男性多見，比例約21-31。在我國所進行的調查顯示，北京地區IBS的人群患病率是(羅馬標準)-7%(Manning標準)，廣東地區用羅馬Π標準調查的IBS人群患病率為5.67%，中國人群患病率估計在20%。IBS的病因與發病機制尚未完全清楚，盡管人們不斷提出各種假說試圖闡明其發病機制及病理生理，但都不能以一種單一的發病機制來完全解釋所有IBS的臨床表現，而且各種可能的發病機制間又有著相互的聯系。其發病機制包括動力異常、內臟感覺異常、腦-腸軸異常、炎癥、內分泌異常、神經-免疫-內分泌網絡調控異常及心理社會因素等。由于臨床上IBS的病因病機以肝郁脾虛型最為常見，因此多數醫家在治療腹瀉型IBS時均采用疏肝健脾法為基礎隨證加減。常用的基礎方主要有四逆散、痛瀉要方、柴胡疏肝散、參苓白術散、逍遙散、芍藥甘草湯等。目前對芍藥甘草湯的某些有效部位進行了研究，例如，專利號02156681.x，該專利中公開了芍藥甘草提取物可用于神經、肌肉和內臟的急慢性攣急疼痛的解痙止痛和養血護肝、解毒止痛，降酶退黃，治療急慢性病毒肝炎。芍藥甘草提取物中，白芍總苷、甘草三萜酸和甘草總黃酮的總含量大于50%；通過其實施例2可知，該提取物中含有甘草皂苷類提取物約為42%，該甘草皂苷類提取物中含有甘草三萜酸50%以上。其中，該專利還公開了白芍總苷、甘草三萜酸的制備方法，其中，甘草三萜酸的制備方法為將甘草用40-80%乙醇回流提取，提取液回收乙醇，加蒸餾水，去除沉淀，濾液上打孔樹脂，先用水洗，再用20-95%乙醇洗脫，所得提取物中，甘草三萜酸和甘草總黃酮的總含量高于50%。專利申請號200610144333.7，該申請使用了前述專利(02156681.x)中的芍藥甘草提取物，通過藥理學試驗證明，芍藥甘草提取物可用于制備治療腸易激綜合征的藥物。該專利中還指出，芍藥甘草提取物給藥200mg/Kg時才具有顯著的藥效，結合專利號02156681.χ中的相關內容可以推知，200mg的芍藥甘草提取物中含有甘草總皂苷約8%ig，換算成人用劑量為9.32mg/kg,即每日0.56g/人。甘草為芍藥甘草湯的組成藥物之一，為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.、脹果甘草GlycyrrhizainflataBat.或光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根及根莖。主要含有三萜皂苷類、黃酮類、糖類、有機酸類以及多種萜類化合物。目前，還未見僅用甘草總皂苷治療腸易激綜合征的報道。
發明內容本發明的目的在于提供甘草總皂苷的新用途。本發明的另一目的在于提供一種治療腸易激綜合征的藥物組合物。本發明提供了甘草總皂苷在制備治療腸易激綜合征的藥物中的用途。進一步地，所述藥物是治療內臟高敏感性腸易激綜合征的藥物。其中，所述藥物是治療腹痛、結腸功能紊亂的藥物。其中，所述甘草總皂苷中，含有皂苷的含量以甘草酸單銨鹽計不得低于50%W/W。進一步地，所述甘草總皂苷是由如下方法制備得到的(1)取甘草粗粉，先用80-95%V/V乙醇提取，提取液回收乙醇后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，正丁醇萃取液備用；(2)步驟(1)的藥渣再用10-30%V/V乙醇提取，所得的提取液回收乙醇后，用正丁醇萃取，所得萃取液與步驟(1)所得正丁醇萃取液合并，回收正丁醇后，加水溶解，將上清液過大孔吸附樹脂柱，先用水洗至無molish反應后，再用30-50%V/V乙醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，干燥，即得甘草總皂苷。更進一步地，步驟(1)中，選用95%V/V乙醇進行提取；步驟⑵中，用20%V/V乙醇提取，再選用非極性或中極性大孔吸附樹脂，以40%V/V乙醇洗脫。其中，步驟O)中，選用DlOl型大孔吸附樹脂。其中，所述藥物是以甘草總皂苷為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑；其中，每日用制劑中有效成分的含量以甘草總皂苷計為0.25g/人。本發明還提供了一種治療腸易激綜合征的藥物組合物，它是由甘草總皂苷為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。甘草總皂苷可通過改善腸敏感性，降低結腸頻率、峰電位、峰峰值及峰面積，降低血漿中升高的CCK含量，升高血清中降低的GAS含量，顯著升高患者低水平的血清DA含量及降低結腸中增多的肥大細胞數，從而在對腸易激綜合征的治療過程中發揮顯著療效，能夠抑制腸易激綜合征所致的腹痛，改善結腸功能紊亂的現象，為臨床用藥提供了一種新的選擇。以下通過具體實施方式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應該將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。具體實施例方式實施例1甘草總皂苷的制備方法(1)取甘草粗粉，用20倍量95%乙醇滲漉，滲漉液過濾后，70°C減壓濃縮成稠膏狀，加熱水攪拌溶解后，依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，乙酸乙酯所得部分為總黃酮，正丁醇萃取液部分備用。(2)取步驟(1)所得濾渣，用20倍量20%V/V乙醇滲漉，滲漉液過濾后，提取液在60-70°C減壓濃縮至無醇味，再用水飽和正丁醇萃取，所得萃取液與步驟(1)所得正丁醇萃取液合并，減壓回收正丁醇后，殘渣加水溶解，離心，取上清液，調節至一定濃度后，通過徑高比為120的DlOl大孔吸附樹脂柱，吸附流速1.5ml/min,以3BV蒸餾水洗去雜質，收集5BV40%V/V乙醇洗脫液，流速為1.5ml/min，減壓回收乙醇，濃縮液干燥后即得甘草總皂苷。甘草總皂苷中有效成分的含量測定以甘草酸單銨鹽作為對照品，以5%香草醛-冰醋酸溶液及高氯酸作為顯色劑，采用分光光度法，在589nm波長處制定了標準曲線，并對甘草總皂苷提取物進行了含量測定。實驗結果甘草總皂苷中皂苷的含量以甘草酸單銨鹽計為50.2%W/W。以下通過藥效學試驗進一步證明本發明的有益效果。本發明的藥效實驗中，均采用冰醋酸、芥末油制作腸易激綜合征(IBS)模型，對目標藥物進行藥效研究。本發明所用具體造模方法，是采用朱力陽等報道的內臟高敏感性模型建立的(朱力陽，等，《中國藥理學通報》，2010年沈卷2期，267-269頁)。使用該造模方法，在一段時間內連續給予化學刺激后，實驗動物出現了明顯的IBS臨床表現，實驗表明，該方法重復性良好。實驗例1甘草總皂苷治療冰醋酸內臟高敏感性IBS疾病模型的實驗研究1.1材料和方法L1.1藥物1.1.1.1受試藥物甘草總皂苷(由實施例1制備得到)。1.1.1.2陽性藥物曲美布丁片，天津田邊制藥有限公司生產，生產批號0905005，規格0.Ig/片X20片/盒。實驗時用蒸餾水配制成濃度為2%(每毫升含曲美布丁0.02g)的藥液，備用。1.1.1.3主要試劑0.5%冰醋酸(體積分數)，1.5%戊巴比妥鈉，生理鹽水，液體石蠟。1.1.2動物SD大鼠，雌雄兼有，體重200士20g，由成都中醫藥大學實驗動物研究中心提供，許可證號SCXK(川)2008-11，檢疫后備用。1.1.3器材電子天平PA2003(上海天平儀器廠生產)8F導尿管(湛江市事達實業有限公司)BL-420E生理機能儀(成都泰盟科技有限公司生產)秒表、溫度計、卷尺、注射器1.1.4實驗方法SD大鼠雌雄兼有，隨機分為空白組，模型組，自然恢復組，陽性藥組，甘草總皂苷高、中、低劑量組。所有需造模大鼠禁食24h后，在清醒狀態下用鈍針頭經肛門插入直腸灌注0.5%冰醋酸(體積分數)，5ml/kg，首劑劑量濃度加倍，連續6天，灌注后使大鼠頭部朝下，肛門朝上托10秒。從第7天開始，除空白組、模型組外，各組分別灌胃生理鹽水，2%曲美布丁，各組分高、中、低劑量藥液，IOmlAg01次/天，連續3天。末次給藥/造模前禁食Mh，末次給藥/造模后Ih經肛門直腸擴張(CRD)后，觀察動物腹部撤離反射(AWR)，評價動物的內臟敏感性。腸敏感性測定結束后，立即用1.5%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉動物，按外科常規手術行下腹正中切口，將自制針灸針銀電極埋置于結腸漿膜面，距回盲部約2cm，雙極的間距5mm，用BL-420E生理記錄儀同步描記胃腸電，時間常數^，高頻濾波0.3Hz0待波形穩定后，記錄5分鐘內的電生理活動，計算頻率、峰電位、峰峰值、峰面積。1.2實驗結果見表1、2。表1甘草總皂苷對冰醋酸所致IBS模型大鼠腸敏感性的影響(χ士SD)組別動物(只)生藥給藥量(g/kg)提取物給藥量(mg/kg)有效成分給藥S(mg/kg)抬腹閾值(ml)拱背閾值(ml)空白對照組80.72±0.09'0.78±0.08λλIBS模型組9-----·56±0·040.62±0.04自然恢復組10-----0.62±0.110.68±0.12曲美布丁組100.2---0.69±0.1(Γ0·74±0·11甘草總皂苷高劑量10310050.200.62±0.170·68±0·17組甘草總皂苷中劑量101.55025.1.67±0.100.71±0.09組甘草總皂苷低劑量100.752512.550.66±0.05*0.71±0.06ft組注與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。表2甘草總皂苷對冰醋酸所致IBS模型大鼠結腸肌電的影響(I±SD)組別動物■(只)生藥給藥量(g/kg)提取物給藥量(mg/kg)有效成分給藥量(mg/kg)頻率(次/min)峰電位(mV)峰峰值(mV)峰面積(mV、)空白對照組8---5.75±1.490.62±0.181.23±0.4222.98±7.54IBS模型組9---7.78±1.920.64±0.321.27±0.6324.15±14·81向然恢復組10---8·50±2·760.58±0.141·10±0·3320.38±8.94曲美布丁組100.2————8.50士1.960.75士0.281.56士0.5427.80士11.59甘草總皂昔高劑量10050.20組甘草總皂廿中劑量ο1.55025.1組甘草總皂苷低劑量100.752512.558.40±2.590.61±0.251.31±0.4722.13±9.23組8·40±2·590.73±0.241.44±0.5424.00±9.557.40±2.40.50±0.131.06±0.2619.90±5.541.3結論由以上結果知，甘草總皂苷低劑量組能對抗冰醋酸所致大鼠腸敏感性，使抬腹、拱背閾值增高，甘草總皂苷中、低劑量組能有效改善冰醋酸所致大鼠結腸肌電頻率。6實驗例2甘草總皂苷治療芥末油內臟高敏感性IBS疾病模型的實驗研究1.1材料及方法1.1.1藥物1.1.1.1受試藥物甘草總皂苷(實施例1制備)。1.1.1.2陽性藥物曲美布丁片，天津田邊制藥有限公司生產，生產批號0905005，規格0.Ig/片X20片/盒。實驗時用蒸餾水配制成濃度為2%(每毫升含曲美布丁0.02g)的藥液，備用。1.1.1.3主要試劑5%芥末油(體積分數)，1.5%戊巴比妥鈉，生理鹽水，液體石蠟。1.1.1.4動物SD大鼠，雌雄兼有，體重200士20g，由成都中醫藥大學實驗動物研究中心提供，許可證號04-11號，檢疫后備用。1.1.1.5器材電子天平PA2003(上海天平儀器廠生產)8F導尿管(湛江市事達實業有限公司)BL-420E生理機能儀(成都泰盟科技有限公司生產)秒表、溫度計、卷尺、注射器1.1.2實驗方法SD大鼠雌雄兼有，隨機分為空白組，模型組，自然恢復組，陽性藥組，甘草總皂苷高、中、低劑量組。所有需造模大鼠禁食24h后，在清醒狀態下用鈍針頭經肛門插入直腸灌注5%芥末油(體積分數)，細Ι/kg，首劑劑量濃度加倍，連續6天，灌注后使大鼠頭部朝下，肛門朝上托10秒。從第7天開始，除空白組、模型組外，各組分別灌胃生理鹽水，2%曲美布丁，各組分高、中、低劑量藥液，IOmlAg01次/天，連續3天。末次給藥/造模前禁食M小時，末次給藥/造模后1小時經肛門直腸擴張(CRD)后，觀察動物腹部撤離反射(AWR)，評價動物的內臟敏感性。腸敏感性測定結束后，立即用1.5%戊巴比妥鈉35mg/kg腹腔注射麻醉動物，按外科常規手術行下腹正中切口，將一對針灸針自制銀電極埋置于結腸漿膜面，距回盲部約2cm，雙極的間距5mm，用BL-420E生理記錄儀同步描記胃腸電，時間常數^，高頻濾波0.:3Hz。待波形穩定后，記錄五分鐘內的電生理活動，計算頻率、峰電位、峰峰值、峰面積。1.2實驗結果1.2.1甘草總皂苷對芥末油所致IBS模型大鼠腸敏感性和結腸肌電的影響表3甘草總皂苷對芥末油所致IBS模型大鼠腸敏感性的影響(I±SD)權利要求1.甘草總皂苷在制備治療腸易激綜合征的藥物中的用途。2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于所述藥物是治療內臟高敏感性腸易激綜合征的藥物。3.根據權利要求1所述的用途，其特征在于所述藥物是治療腹痛、結腸功能紊亂的藥物。4.根據權利要求1-4任意一項所述的用途，其特征在于所述甘草總皂苷中，皂苷的含量以甘草酸單銨鹽計不得低于50%W/W。5.根據權利要求4所述的用途，其特征在于所述甘草總皂苷是由如下方法制備得到的(1)取甘草粗粉，先用80-95%V/V乙醇提取，提取液回收乙醇后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，正丁醇萃取液備用；(2)步驟(1)的藥渣再用10-30%V/V乙醇提取，所得的提取液回收乙醇后，用正丁醇萃取，所得萃取液與步驟(1)所得正丁醇萃取液合并，回收正丁醇后，加水溶解，將上清液過大孔吸附樹脂柱，先用水洗至無molish反應后，再用30-50%V/V乙醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，干燥，即得甘草總皂苷。6.根據權利要求5所述的用途，其特征在于步驟(1)中，選用95%V/V乙醇進行提取；步驟O)中，用20%V/V乙醇提取，再選用非極性或中極性大孔吸附樹脂，以40%V/V乙醇洗脫。7.根據權利要求6所述的用途，其特征在于步驟O)中，選用DlOl型大孔吸附樹脂。8.根據權利要求1-7任意一項所述的用途，其特征在于所述藥物是以甘草總皂苷為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑；其中，每日用制劑中有效成分的含量以甘草總皂苷計為0.25g/人。9.一種治療腸易激綜合征的藥物組合物，其特征在于它是由甘草總皂苷為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。全文摘要本發明提供了甘草總皂苷在制備治療腸易激綜合征的藥物中的用途。甘草總皂苷可通過改善腸敏感性，降低結腸頻率、峰電位、峰峰值及峰面積，降低血漿中升高的CCK含量，升高血清中降低的GAS含量，顯著升高患者低水平的血清DA含量及降低結腸中增多的肥大細胞數，從而在對腸易激綜合征的治療過程中發揮顯著療效，能夠抑制腸易激綜合征所致的腹痛，改善結腸功能紊亂的現象，為臨床用藥提供了一種新的選擇。文檔編號A61P1/00GK102416037SQ20111040192公開日2012年4月18日申請日期2011年12月6日優先權日2010年12月6日發明者彭成,朱力陽,李瑜,郭力申請人:成都中醫藥大學