專利名稱：雙旋覆花內(nèi)酯甲在制備腫瘤壞死因子抑制劑藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物，具體涉及旋覆花提取物在制藥中的應(yīng)用，尤其涉及雙旋覆花內(nèi)酯甲在制備腫瘤壞死因子抑制劑藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1975年Caswell等首先將卡介苗和內(nèi)毒素給小鼠注射，在其血清中發(fā)現(xiàn)一種能使小鼠腫瘤發(fā)生出血性壞死的物質(zhì)，稱為腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor)。TNF是單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，不僅對(duì)人與動(dòng)物的多種腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒性和細(xì)胞靜止作用，而且是機(jī)體炎癥與免疫的重要調(diào)節(jié)因子。它與機(jī)體發(fā)熱、休克、惡液質(zhì)等的發(fā)生有密切關(guān)系，因此受到人們的日益重視和注意。TNF是由單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的，具有與風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)理有關(guān)的多種生物活性，首先通過(guò)刺激內(nèi)皮可以促進(jìn)所有類型白細(xì)胞的積累以表達(dá)粘附分子并釋放二級(jí)趨化性胞質(zhì)，如白介素8 ；其次，TNF可以刺激關(guān)節(jié)內(nèi)細(xì)胞，合成并表達(dá)可誘導(dǎo)的環(huán)氧合酶及可誘導(dǎo)的NO合酶。這些酶的產(chǎn)物，前列腺素及NO均是疼痛和發(fā)炎的主要介質(zhì)； 再次，也可能是最重要的一點(diǎn)，TNF像白介素1 一樣，可以活化軟骨細(xì)胞，降解其自身的細(xì)胞外基質(zhì)，并抑制導(dǎo)致軟骨破壞的軟骨基質(zhì)成分的合成。除了這些作用外，TNF在其他胞質(zhì)生產(chǎn)的調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用。腫瘤壞死因子-α (TNF-α)是一種具有多種生物活性的細(xì)胞因子，具有致炎、 引發(fā)細(xì)胞壞死和新血管形成等作用，參與風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、過(guò)敏性皮炎、哮喘乃至肝硬化、 糖尿病、冠心病等多種復(fù)雜炎癥或免疫性疾病的發(fā)病過(guò)程和病情進(jìn)展過(guò)程。降低組織內(nèi)的TNF-a水平或阻斷其病理作用對(duì)這些疾病的治療具有重要價(jià)值。近年來(lái)，臨床上以抗 TNF-α抗體治療自身免疫性炎癥疾病取得重大進(jìn)展，進(jìn)一步證明細(xì)胞外阻斷這種促炎細(xì)胞因子是一種有效的治療手段。由于TNF-α抗體等生物制品價(jià)格昂貴且必須注射給藥，當(dāng)前更多的研究關(guān)注開(kāi)發(fā)可以口服的長(zhǎng)效TNF-a小分子抑制劑。然而，相對(duì)于TNF-a單抗等生物制劑，TNF-α的小分子拮抗劑的基礎(chǔ)和應(yīng)用研究進(jìn)展緩慢。目前報(bào)道的小分子TNF拮抗劑限于腫瘤壞死因子轉(zhuǎn)化酶(TACE，一種參與TNF合成和分泌的關(guān)鍵酶)抑制劑、機(jī)制不明的TNF-a表達(dá)抑制劑、基于細(xì)胞水平分析的機(jī)制不明的TNF-a活性抑制劑、以及各種與TNF-α表達(dá)和活性相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路抑制劑(包括NF-kB、AP-I和JNK/p38通路抑制劑)等。而直接以TNF-α分子為靶標(biāo)的小分子抑制劑僅為2005年SCIENCE報(bào)道1例 [Science 2005 ；310 :1022]。旋覆花屬(Inula L.)植物是菊科(Compositae)中的一屬，全世界約有100種，分別于亞洲、歐洲和非洲，以地中海地區(qū)為主。中國(guó)有20余種，本屬有多種植物供藥用，如土木香(I.helenium)可作為健胃、利尿、祛痰和驅(qū)蟲藥；大花旋覆花(I. britarmica)具有消痰、下氣、軟堅(jiān)、行水等功效。倍半萜類化合物是本屬植物的特征性成分，以桉烷型、吉馬烷型和愈創(chuàng)木烷型為主，還包括偽愈創(chuàng)木烷型、裂環(huán)桉烷型、欖烷型、蒼耳烷型和少量的無(wú)環(huán)倍半萜及倍半萜二聚體。研究表明，該屬植物中的倍半萜類化合物具有驅(qū)蟲殺蟲、抗菌抗腫瘤、抗病毒、免疫抑制的功效。旋覆花(Inula japonica)又名金佛花，金佛草(江浙)，六月菊(河北)。多年生草本，根狀莖短，橫走或斜生，有粗壯的須根。分布在中國(guó)北部、東北部、中部、東部、四川、 廣東等地，可供藥用。旋覆花的根及葉可治療刀傷疔毒；煎服可平喘鎮(zhèn)咳；其花是健胃祛痰藥，也治療胸中痞悶、胃部膨脹、噯氣、咳嗽、嘔逆等(《江蘇省藥材志》)。旋覆花在古方為祛痰、除濕、利腸，又為治水腫的主要藥。化合物雙旋覆花內(nèi)酯甲(Japonicone Α)是旋覆花(安徽亳州)的提取物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式I如下
權(quán)利要求
1.雙旋覆花內(nèi)酯甲在制備腫瘤壞死因子抑制劑藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述雙旋覆花內(nèi)酯甲的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述雙旋覆花內(nèi)酯甲通過(guò)下列方法制備(1)提取將旋覆花的地上部分干燥，粉碎，以80 95%乙醇室溫浸泡提取3 4次， 每次12 M小時(shí)；合并提取液，提取液減壓濃縮成流浸膏，加水稀釋后，先以石油醚萃取， 再以二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集二氯甲烷萃取部位；(2)分離將上述二氯甲烷萃取部位應(yīng)用硅膠柱色譜，以體積比為100 0 2 1的二氯甲烷/甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，薄層色譜檢測(cè)，收集含有雙旋覆花內(nèi)酯甲的流分，再經(jīng)葡聚糖凝膠柱色譜，以體積比為1 1的二氯甲烷/甲醇洗脫，最后經(jīng)液相色譜制備，得雙旋覆花內(nèi)酯甲。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為由雙旋覆花內(nèi)酯甲作為活性成分與藥用載體組成的藥物組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為制備治療骨關(guān)節(jié)病、哮喘、支氣管炎或過(guò)敏性鼻炎藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了雙旋覆花內(nèi)酯甲(化學(xué)結(jié)構(gòu)式I)在制備腫瘤壞死因子抑制劑藥物中的應(yīng)用。雙旋覆花內(nèi)酯甲為旋覆花提取物。本發(fā)明采用反相對(duì)接技術(shù)虛擬篩選，發(fā)現(xiàn)TNF-α為雙旋覆花內(nèi)酯甲的潛在結(jié)合蛋白，又通過(guò)BIACORE技術(shù)，證明雙旋覆花內(nèi)酯甲可直接與偶聯(lián)在芯片上的TNF-α結(jié)合，可以抑制TNF-α與偶聯(lián)于傳感器芯片的TNF-R的結(jié)合。并進(jìn)一步通過(guò)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)雙旋覆花內(nèi)酯甲能直接結(jié)合于TNF-α，并抑制其與TNF受體的相互作用，可用于制備腫瘤壞死因子抑制劑藥物。本發(fā)明所述藥物是由雙旋覆花內(nèi)酯甲作為活性成分與藥用載體組成的藥物組合物?？勺鳛榕c治療腫瘤壞死因子相關(guān)的疾病如骨關(guān)節(jié)病、哮喘、支氣管炎、過(guò)敏性鼻炎等，為治療這些疾病提供了新的途徑，有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)A61P19/02GK102406637SQ201110361799
公開(kāi)日2012年4月11日 申請(qǐng)日期2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日
發(fā)明者單磊, 張衛(wèi)東, 李慧梁, 沈云亨, 胡振林, 蘇娟, 覃江江, 趙靜, 金慧子 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)