專利名稱：一種治療血管栓塞性疾病的復方丹參素注射劑及其制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明采用分別源于丹參、牡丹皮中提取的高純度丹參素和丹皮酚為原料，并按照制劑學方法制備成治療血管栓塞性疾病的復方丹參素注射劑，其技術屬于藥物制劑學及臨床應用領域。
背景技術：
心、腦血管栓塞性疾病如冠心病、心絞痛、腦血栓、腦梗塞(又稱腦卒中)等是臨床常見病和多發病。比如腦梗塞是一種突然起病的腦血液或腦血管循環障礙性疾病，臨床表現以猝然昏撲、不省人事或突然發生口眼歪斜、半身不遂、舌強言蹇、智力障礙為主要特征。腦卒中分為缺血性腦卒中和出血性腦卒中，在中國急性缺血性卒中是引起死亡及致殘的首要原因。據流行病學調查統計，我國每年新發卒中病人約150 200萬人，病死率約80 120/10萬人口，致殘率高達75%，其發病率、死亡率、致殘率在疾病譜中一直處于前三位，且隨著社會人口老齡化，發病率還有增加趨勢。腦卒中造成患者腦實質神經細胞的損傷，使患者運動、感覺、言語和認知等功能不同程度地受到損害，從而導致患者不同程度地喪失獨立生活及工作能力，需要依賴他人，不僅給患者帶來極大痛苦，而且還給家庭及社會保障體系造成巨大負擔。因此，研究和創制防治腦卒中且成分明確、作用機制清楚的高效低毒藥物藥物具有重要意義。丹參素(0￡111吐61^11，055)，化學名稱0(+)-0-(3，4-二羥基苯基)乳酸，是從唇形科植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bge.)和甘西鼠尾草(Salvia przewalskii Maxim.)的根及根莖中分離出的一種生物活性物質，分子量為198. 17，分子式*C9H1(i05。丹參素是丹參及甘西鼠尾草中的主要水溶性成分之一，具有抗炎、抗腫瘤、抗動脈粥樣硬化、抗血栓形成、心肌保護、腦保護、臟器損傷保護等作用。研究表明，丹參素能夠改善實驗大鼠血液流變性，降低血液“濃、粘、聚、凝”狀態，抑制細胞內源性膽固醇(Ch)的合成，降低細胞內總膽固醇(TC)和氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)水平；因此，具有保護血管屏障，防止脂質沉積及動脈粥樣硬化作用。張新樂等采用D-半乳糖致衰老大鼠模型，觀察丹參素對模型大鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量變化影響，結果顯示丹參素干預后大鼠腦組織SOD活性升高，MDA含量減少，表明丹參素具有抗腦自由基損傷、抗衰老的作用。楊瑩等用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，通過神經功能學評分、蘇木素和伊紅(HE)染色及流式細胞術檢測丹參素對大鼠腦缺血再灌注損傷后行為學、缺血側腦組織病理形態學及神經細胞凋亡的影響，發現丹參素可明顯改善腦缺血大鼠神經功能缺損體征，減輕腦組織病理形態學損傷，降低神經細胞凋亡百分率。抑制神經細胞凋亡可能是丹參素治療腦血管疾病的作機制之一。丹參素對心腦血管的廣泛作用提示其作為腦保護類藥物應用于卒中的治療將有廣闊的前景。丹皮酚(I^aeonoI，Pae)，又稱牡丹酚，是從中藥牡丹皮(毛茛科植物牡丹Aaeoinasuffruticosa Andr.的干燥根皮)和徐長卿(蘿蘑科植物徐長卿Cynanchum paniculatumKitag.的干燥根及根莖)等中分離得到的生物活性物質，化學名稱為2-羥基-4-甲氧基苯乙酮，分子量為166，分子式為C9HltlO315丹皮酚味苦、辛，具有熔點低(51-52°C )、易揮發、在水中溶解度差等特性。臨床多用于治療心腦血管疾病、神經系統疾病以及某些變應性疾病如蕁麻疹、濕疹等，有較好的療效。武繼彪等的研究顯示丹皮酚能夠提高神經功能癥狀評分，減輕腦缺血再灌注損傷腦組織的病理改變，縮小腦梗死體積，減輕神經元壞死程度，減少梗死灶周圍中性粒細胞浸潤數目，具有明顯的保護缺血腦組織的作用。通過觀察丹皮酚對大鼠腦缺血再灌注后腦組織脂質過氧化相關酶類的影響，推測丹皮酚能夠通過發揮抗炎、抗自由基損傷作用，改善缺血半暗帶的腦血流量，保護半暗帶內神經元免受進一步損害，進而促進病變區的恢復。此外，張碩等的研究表明丹皮酚還能抑制由缺血再灌注損傷所致的ICAM-I及VCAM-I表達的上調，通過降低黏附分子表達減輕腦缺血再灌注損傷后的炎癥反應而發揮腦保護作用。我們的研究證實，丹參素和丹皮酚按一定比例配伍，可以降低大鼠腦缺血再灌注損傷引起的腦含水量升高，減輕腦水腫程度，降低動物的腦梗死率，改善動物的神經行為學評分，提高腦組織SOD活性、降低MDA含量，對腦缺血再灌注損傷發揮保護作用，且其作用明顯較強于丹參素、丹皮酚單用時的療效。藥代動力學及組織分布研究結果顯示，丹參素與丹皮酚配伍后可以改變丹皮酚在大鼠體內的藥物動力學過程，顯著提高丹皮酚在腦組織中的濃度，提示其二者配伍組合作為腦血管治療藥物的潛在開發與應用價值。祖國醫學認為中風的主要病機是瘀血閉塞清竅，內阻腦絡，靈機失用，元神不明，而致中風昏迷，故瘀阻腦竅為中風病機之關鍵，活血化瘀為治本之大法。丹參具有祛瘀止痛，活血通經，清心除煩之功效。牡丹皮味辛苦，性涼，功能清熱涼血，活血化瘀。二者都是常用的活血化瘀中藥，傳統醫學雖有一些二者合用用于防治心腦血管疾病的復方(如雙丹方等)，但其具有成分復雜、有效成分配比關系不清、作用機制不明確、質量難以控制等缺陷。我們采用高純度丹參素和丹皮酚原料藥配伍，制備成以活血化瘀為主要功效的復方丹參素注射劑，用于治療血管栓塞性疾病，其分子中藥組方的主要特征在于一是成分清楚、作用機制明確；二是起效迅速，療效顯著。由此表明，本發明對于提高中風治愈率、保障人們的健康具有重要意義。
發明內容
本發明的目的在于提供一種起效迅速、劑型先進、制劑穩定的以丹參素和丹皮酚為主要功效成分的復方丹參素注射劑及其制備方法。本發明采用2-羥丙基-β-環糊精(HP-β-CD)對處方中的丹皮酚進行包合，解決了丹皮酚在注射用水中溶解難的問題。另外，本發明將丹參素、丹皮酚包合物制成注射用凍干注射劑，克服了丹參素和丹皮酚口服生物利用度較低及丹參素水溶液長期儲存穩定性差的缺陷，不僅提高了制劑的臨床療效和質量，還明顯提高了制劑的穩定性。本發明通過以下技術方案實現分別從丹參、牡丹皮中提取高純度丹參素、丹皮酚(純度均> 99. 5% )。丹皮酚用2-羥丙基-β -環糊精包合，制成丹皮酚-羥丙基-β -環糊精包合物；再將丹參素和丹皮酚包合物按照重量比(丹參素丹皮酚)混勻，用注射用水溶解，加入凍干賦形劑如甘露醇等，攪拌、溶解、過濾，濾液調整至設計容量，調節ΡΗ，濾過、除菌，分裝入棕色管制瓶，冷凍干燥，即得。
1、附圖1是高純度丹參素的提取制備方法工藝流程圖。2、附圖2是高純度丹皮酚的提取制備方法工藝流程圖。
具體實施例方式1、原料藥材、試藥(劑)和輔料丹參和牡丹皮藥材、無水乙醇等試藥(劑)、甘露醇等輔料均市購。2、高純度丹參素的提取制備方法見說明書附圖1。3、高純度丹皮酚的提取制備方法見說明書附圖2。4、復方丹參素注射劑的制備方法(1)按重量份計，取1份丹皮酚，用20份無水乙醇溶解；另取6份羥丙基- β -環糊精，于50°C水浴中加注射用水制成飽和溶液；將丹皮酚無水乙醇液以3滴/分鐘的速度緩慢滴加至羥丙基-β-環糊精中，保持水浴溫度繼續攪拌至無水乙醇揮干，超聲處理1小時，4°C冷藏過夜，濾過，濾渣于40°C干燥，得丹皮酚-羥丙基-β -環糊精包合物；測定包封率及包合物中丹皮酚的含量。(2)按處方標示重量稱取丹參素、丹皮酚包合物和賦形劑，混合，用注射用水溶解，過濾，濾液調PH至6. 8-7. 2，除菌、濾過，用無菌注射用水稀釋至設計總溶量，分裝于棕色管制瓶中，冷凍干燥，即得。5、復方丹參素注射劑的臨床適應癥及其用法復方丹參素注射劑具有活血化瘀，通絡止痛的功效。主要用于心、腦血管栓塞性疾病的治療。其成人用法用量如下肌肉注射或靜脈滴注，一次1-5瓶，一日1-2次或遵醫囑。6、制劑特點本發明采用高純度丹參素、丹皮酚原料藥制備成注射劑，具有藥效物質成分明確、起效快、穩定性好、臨床主要適用于心、腦血管栓塞性疾病如冠心病、心絞痛、腦血栓、腦梗
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具體實施例實例處方丹參素IOOg丹皮酚Ig甘露醇60g制備工藝(1)取Ig丹皮酚，用20mL無水乙醇溶解；另取6g羥丙基-β-環糊精，于50°C水浴中加注射用水制成飽和溶液；將丹皮酚無水乙醇液以3滴/分鐘的速度緩慢滴加至羥丙基-β-環糊精中，保持水浴溫度繼續攪拌至無水乙醇揮干，超聲處理1小時，4°C冷藏過夜，濾過，濾渣于40°C干燥，制得丹皮酚-羥丙基-β -環糊精包合物。(2)按處方標示重量稱取丹參素、丹皮酚包合物和賦形劑，混合，用注射用水溶解，過濾，濾液調PH至6. 8-7. 2，除菌、濾過，用無菌注射用水稀釋至設計總溶量，分裝于棕色管制瓶中，冷凍干燥，即得。實例處方丹參素IOOg丹皮酚5g甘露醇70g制備工藝(1)取5g丹皮酚，用IOOmL無水乙醇溶解；另取30g羥丙基-β-環糊精，于50°C水浴中加注射用水制成飽和溶液；將丹皮酚無水乙醇液以3滴/分鐘的速度緩慢滴加至羥丙基-β -環糊精中，保持水浴溫度繼續攪拌至無水乙醇揮干，超聲處理1小時，4°C冷藏過夜，濾過，濾渣于40°C干燥，得丹皮酚-羥丙基-β -環糊精包合物。(2)按處方標示重量稱取丹參素、丹皮酚包合物和賦形劑，混合，用注射用水溶解，過濾，濾液調PH至6. 8-7. 2，除菌、濾過，用無菌注射用水稀釋至設計總溶量，分裝于棕色管制瓶中，冷凍干燥，即得。實例處方丹參素IOOg丹皮酚20g甘露醇80g制備工藝(1)取20g丹皮酚，用400mL無水乙醇溶解；另取120g羥丙基-β-環糊精，于50°C水浴中加注射用水制成飽和溶液；將丹皮酚無水乙醇液以3滴/分鐘的速度緩慢滴加至羥丙基-β-環糊精中，保持水浴溫度繼續攪拌至無水乙醇揮干，超聲處理1小時，4°C冷藏過夜，濾過，濾渣于40°C干燥，得丹皮酚-羥丙基-β -環糊精包合物。(2)按處方標示重量稱取丹參素、丹皮酚包合物和賦形劑，混合，用注射用水溶解，過濾，濾液調PH至6. 8-7. 2，除菌、濾過，用無菌注射用水稀釋至設計總溶量，分裝于棕色管制瓶中，冷凍干燥，即得。
權利要求
1.一種復方丹參素注射劑，其處方組成的特征在于丹參素100克、丹皮酚1-20克、甘露醇60-80克。
2.根據權利要求1所述的復方丹參素注射劑的處方組成，其制備工藝的特征在于(1)丹參素的制備丹參粗粉采用超臨界二氧化碳萃取，提取物分別用堿化液I、堿化液II處理后，再用乙酸乙酯等倍量萃取得萃取液，減壓濃縮得粗制品，硅膠柱層析精制，乙醇重結晶，得丹參素，經HPLC檢測，其純度> 99. 5 %，供作藥用原料；(2)丹皮酚的制備牡丹皮粗粉采用超臨界二氧化碳萃取，提取物加10倍量氯化鈉水溶液浸潤，水蒸氣蒸餾，4°C冷藏過夜，收集結晶；蒸餾藥渣重復蒸餾并結晶，合并結晶后再用80%乙醇重結晶，得丹皮酚，經HPLC檢測，其純度> 99. 5%，供作藥用原料；(3)丹皮酚包合物的制備按重量份計，取1份丹皮酚，用20份無水乙醇溶解；另取6份羥丙基-β -環糊精，于50°C水浴中加注射用水制成飽和溶液；將丹皮酚無水乙醇液以3滴/分鐘的速度緩慢滴加至羥丙基-環糊精中，保持水浴溫度繼續攪拌至無水乙醇揮干，超聲處理1小時，4°C冷藏過夜，濾過，濾渣于40°C干燥，得丹皮酚-羥丙基-β -環糊精包合物；檢測包封率和包合物中丹皮酚含量；(4)復方丹參素注射劑的制備按處方標示重量分別稱取丹參素、丹皮酚包合物和賦形劑，混合，用注射用水溶解，過濾，濾液調PH至6. 8-7. 2，除菌、濾過，用無菌注射用水稀釋至設計總溶量，分裝于棕色管制瓶中，冷凍干燥，即得；
3.根據權利要求1 2所述制備的復方丹參素注射劑，其藥物的藥理作用及其使用特征在于本品具有活血化瘀，通絡止痛的功效；適用于心、腦血管栓塞性疾病如冠心病、心絞痛、腦血栓、腦梗塞等患者；其成人用法與用量為肌肉注射或靜脈滴注，一次1 5瓶，一日1 2次或遵醫囑。
全文摘要
本發明的目的在于提供一種高效、劑型先進、制劑穩定的以丹參素和丹皮酚為主要成分的復方丹參素注射劑及其制備方法；本技術屬于生物醫藥領域。從丹參中提取丹參素，牡丹皮中提純丹皮酚并用2-羥丙基-β-環糊精包合，制成丹皮酚-羥丙基-β-環糊精包合物；再將丹參素、丹皮酚包合物和賦形劑按處方標示重量稱取、混合，用注射用水溶解，過濾，濾液調pH至6.8-7.2，除菌、濾過，用無菌注射用水稀釋至設計總溶量，分裝于棕色管制瓶中，冷凍干燥，即得。本品具有活血化瘀，通絡止痛的功效；適用于血管栓塞性疾病如冠心病、心絞痛、腦血栓、腦梗塞等患者。成人用法用量為肌肉注射或靜脈滴注，一次1-5瓶，一日1-2次或遵醫囑。
文檔編號A61K31/192GK102379864SQ20111033298
公開日2012年3月21日 申請日期2011年10月28日 優先權日2011年10月28日
發明者張邦樂, 曹蔚, 李驊, 楊倩, 畢琳琳, 王四旺, 謝艷華 申請人:中國人民解放軍第四軍醫大學