專利名稱：大孔吸附樹脂提取純化山橿總黃酮的方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，特別是一種大孔吸附樹脂提取純化山檀總黃酮的方法。
背景技術：
山檀Lindera reflexa Hemsl.系樟科Lauraceae山胡椒屬植物，為灌木或小喬木。主要分布于河南(大別山、桐柏山和伏牛山南部)、江蘇、安徽等地，而河南信陽地區分布最廣泛，且產量豐富，是山檀的主要產地。山檀根或根皮入藥，性溫，味辛，具有行氣止痛， 健脾消積，活血消腫等作用，且山檀在長期的臨床應用中收到良好的效果。在河南省民間用于治療慢性胃炎，胃潰瘍已取得確切的臨床療效，而且有很長的歷史。由于其良好的臨床療效和豐富的蘊藏資源，被收入《河南省地方藥材標準》。雖然山檀在臨床上有確切的治療脾胃虛寒性胃炎、胃潰瘍等作用，由于良好的臨床療效而備受人們關注，但有效部位不明確，缺乏系統的藥理跟蹤研究。本發明結合臨床療效，建立多個藥理模型，以藥理實驗為導向，進行有效部位和有效成分的系統研究，闡明其療效的物質基礎，以便為山檀的進一步開發利用提供科學的依據。為了明確這一臨床卻有療效的有效部位，建立能確切反映該藥臨床療效的控制方法，控制有效部位的質量。由于山檀資源廣泛，價格低廉，對抗炎、抗潰瘍和鎮痛的有效部位、活性成分進行深入研究，將其開發成治療胃病的新藥，既會創造顯著的經濟效益，也將產生良好的社會效益；更重要的是對胃病的治療將起到很大的推動作用。研究表明，山檀主要活性成分有黃酮類(或稱總黃酮)，生物堿類和揮發油類，以球松素為代表的總黃酮為主要有效活性成分，并具有很好的治療胃潰瘍及鎮痛抗炎的功效，那么，如何將山檀總黃酮純化提取出來是本領域技術人員一直在研究解決的問題，但至今未見有公開的報導。
發明內容
針對上述情況，克服現有技術之缺陷，本發明之目的就是提供一種大孔吸附樹脂提取純化山檀總黃酮的方法，可有效解決從山檀中提取純化總黃酮，以滿足制備治療胃潰瘍及鎮痛抗炎藥物的問題。本發明解決的技術方案是，由以下步驟實現1、制備山檀提取物溶液將山檀粉碎成粉，然后加質量濃度為60-80%的乙醇(或稱為60-80%乙醇，以下同)超聲提取2-4次，每次提取40-90分鐘，每次60-80%乙醇的加入量為山檀重量的10-14倍；合并提取液，減壓回收乙醇至提取液無醇味，得濃縮液，濃縮液加水稀釋成相當于每Iml含生藥0.05mg(0.05mg/ml生藥)的山檀提取物溶液，備用；2、大孔吸附樹脂處理方法是，將大孔吸附樹脂先用95%乙醇浸泡1 后，用95% 乙醇清洗至乙醇洗脫液與水混合不呈白色混濁，再用蒸餾水洗至無醇味，備用；3、濕法裝柱取樹脂柱子，按樹脂柱子直徑與柱高比1 7-9的比例，用步驟2處理過的大孔吸附樹脂濕法裝柱；4、上樣純化提取取步驟1制備的山檀提取物溶液上樣，上樣量為大孔吸附樹脂重量的4-6倍，上樣流速為1. Oml/min，上樣完成后靜置池，用大孔吸附樹脂4_6倍重量的純水沖洗除雜質，再用大孔吸附樹脂4-6倍重量的70-90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，得山檀根有效部位的純化山檀總黃酮。本發明方法簡單，穩定可靠，所得提取物山檀總黃酮，有效用于制備治療胃潰瘍及鎮痛抗炎藥物，開拓了山檀藥用價值，是藥物上的創新。
具體實施例方式以下結合實施例對本發明的具體實施方式
作詳細說明。實施例1本發明在具體實施中，是由以下步驟操作的1、制備山檀提取物溶液將山檀粉碎成粉，然后加質量濃度為70%的乙醇(或稱為70%乙醇，以下同)超聲提取3次，每次提取1小時，每次70%乙醇的加入量為山檀重量的12倍；合并三次的提取液，減壓回收乙醇至提取液無醇味，得濃縮液，濃縮液加水稀釋成相當于每Iml含生藥0.05mg(0.05mg/ml生藥)的山檀提取物溶液，備用；2、大孔吸附樹脂處理方法是，將大孔吸附樹脂先用95%乙醇浸泡1 后，用95% 乙醇清洗至乙醇洗脫液與水混合不呈白色混濁，再用蒸餾水洗至無醇味，備用；3、濕法裝柱取樹脂柱子，按樹脂柱子直徑與柱高比1 8的比例，用步驟2處理過的大孔吸附樹脂濕法裝柱；4、上樣純化提取取步驟1制備的山檀提取物溶液上樣，上樣量為大孔吸附樹脂重量的4倍，上樣流速為1. Oml/min，上樣完成后靜置池，用大孔吸附樹脂4倍重量的純水沖洗除雜質，再用大孔吸附樹脂4倍重量的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，得山檀根有效部位的純化山檀總黃酮。實施例2本發明在具體實施中，還可由以下步驟實現1、制備山檀提取物溶液將山檀粉碎成粉，然后加質量濃度為80%的乙醇(或稱為80%乙醇，以下同)超聲提取2次，每次提取90分鐘，每次80%乙醇的加入量為山檀重量的14倍；合并兩次的提取液，減壓回收乙醇至提取液無醇味，得濃縮液，濃縮液加水稀釋成相當于每Iml含生藥0. 05mg(0. 05mg/ml生藥)的山檀提取物溶液，備用；2、大孔吸附樹脂處理方法是，將大孔吸附樹脂先用95%乙醇浸泡12h后，用95% 乙醇清洗至乙醇洗脫液與水混合不呈白色混濁，再用蒸餾水洗至無醇味，備用；3、濕法裝柱取樹脂柱子，按樹脂柱子直徑與柱高比1 9的比例，用步驟2處理過的大孔吸附樹脂濕法裝柱；4、上樣純化提取取步驟1制備的山檀提取物溶液上樣，上樣量為大孔吸附樹脂重量的6倍，上樣流速為1. Oml/min，上樣完成后靜置池，用大孔吸附樹脂6倍重量的純水沖洗除雜質，再用大孔吸附樹脂6倍重量的90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，得山檀根有效部位的純化山檀總黃酮。實施例3本發明在具體實施中，也可由以下步驟實現1、制備山檀提取物溶液將山檀粉碎成粉，然后加質量濃度為60%的乙醇(或稱為60%乙醇，以下同)超聲提取4次，前兩次每次提取60分鐘，每次乙醇加入量為山檀重量的12倍，后兩次每次提取40分鐘，每次乙醇的加入量為山檀重量的10倍；合并四次的提取液，減壓回收乙醇至提取液無醇味，得濃縮液，濃縮液加水稀釋成相當于每Iml含生藥 0. 05mg(0. 05mg/ml生藥)的山檀提取物溶液，備用；2、大孔吸附樹脂處理方法是，將大孔吸附樹脂先用95%乙醇浸泡12h后，用95% 乙醇清洗至乙醇洗脫液與水混合不呈白色混濁，再用蒸餾水洗至無醇味，備用；3、濕法裝柱取樹脂柱子，按樹脂柱子直徑與柱高比1 7的比例，用步驟2處理過的大孔吸附樹脂濕法裝柱；4、上樣純化提取取步驟1制備的山檀提取物溶液上樣，上樣量為大孔吸附樹脂重量的5倍，上樣流速為1. Oml/min，上樣完成后靜置池，用大孔吸附樹脂5倍重量的純水沖洗除雜質，再用大孔吸附樹脂5倍重量的80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，得山檀根有效部位的純化山檀總黃酮。上述方法經多次反復試驗，均得到了相同和相近似的結果，表明方法穩定可靠，易操作，其提取物純化的山檀總黃酮可有效用于制備治療胃潰瘍及鎮痛抗炎藥物，有關試驗資料如下一、有關方法穩定可靠性的試驗資料1.材料、試劑與儀器山檀藥材QOlO年采自于河南省新縣，經鑒定為樟科Lauraceae山胡椒屬植物山檀Lindera reflexa Hemsl.的根)；球松素(由本實驗室從山檀中分離得到，用HPLC法測定其純度達到99. 05% )0甲醇為色譜純(天津市四友精細化學品有限公司)；其他試劑為分析純(天津市化學試劑三廠)；大孔吸附樹脂HPD-450、HPD-600、DlOl (滄州寶恩吸附材料科技有限公司)，DM130、860021(山東魯抗立科藥物化學有限公司)，HP20(日本三菱化學株式會社)。高效液相色譜儀LC_20AT(日本島津公司)，紫外檢測器SPD-20A(日本島津公司)，色譜工作站CBM-102 (日本島津公司)，電子天平(BS2MS，北京賽多利斯儀器系統有限公司)。2.實驗方法與結果2. 1對照品和樣品溶液的制備對照品溶液的制備精密稱取干燥的球松素標準品，甲醇溶解配制成適當濃度的對照品溶液；樣品溶液的制備取山檀藥材粗粉適量，分別加入12倍量70%乙醇超聲提取三次，每次1. Oh,回收乙醇，靜止24h備用。2. 2總黃酮檢測方法分別取適量對照品溶液和樣品溶液，在200nm-600nm波長范圍掃描，對照品和樣品最大吸收波長都在處，確定作為總黃酮紫外檢測波長。2. 2. 1標準曲線及樣品總黃酮檢測取濃度0. 22mg/ml的對照品溶液，稀釋配制成濃度2. 20 μ g/ml>4. 40 μ g/ml、 8. 80 μ g/ml,11. OO μ g/ml、13. 20 μ g/ml、17. 60 μ g/ml 的標準品溶液，分別連續 3 次測定吸光度，以對照品濃度為橫坐標，平均吸光度值為縱坐標繪制標準曲線，結果表明球松素濃度在2. 20 17. 60 μ g/mL之間線性關系良好，線性方程為Y = O. 081X+0. 008，r = 0. 9994。
取樣品溶液，濃縮干燥，精密稱取0. Ig干膏，甲醇溶解并定容至50ml，再精密吸取 0. Iml定容至10ml，于測定吸光度，按線性方程計算樣品溶液中的總黃酮質量分數 (以球松素計)。2. 2. 2方法學考察通過精密度，穩定性，重復性的考察，表明該方法對總黃酮的含量測定穩定、可行。回收率考察精密稱取適量的山檀藥材樣品6份，分別加入一定量的球松素標準品，按樣品溶液制備方法制備，樣品溶液總黃酮檢測方法測定，計算平均回收率為99. 78%, RSD = 2. 94%，表明該方法回收率良好。結果見表1 :表1回收率考察試驗結果
權利要求
1.一種大孔吸附樹脂提取純化山檀總黃酮的方法，其特征在于，由以下步驟實現(1)、制備山檀提取物溶液將山檀粉碎成粉，然后加質量濃度為60-80%的乙醇超聲提取2-4次，每次提取40-90分鐘，每次60-80%乙醇的加入量為山檀重量的10-14倍；合并提取液，減壓回收乙醇至提取液無醇味，得濃縮液，濃縮液加水稀釋成相當于每Iml含生藥0. 05mg的山檀提取物溶液，備用；(2)、大孔吸附樹脂處理方法是，將大孔吸附樹脂先用95%乙醇浸泡1 后，用95%乙醇清洗至乙醇洗脫液與水混合不呈白色混濁，再用蒸餾水洗至無醇味，備用；(3)、濕法裝柱取樹脂柱子，按樹脂柱子直徑與柱高比1 7-9的比例，用步驟(2)處理過的大孔吸附樹脂濕法裝柱；G)、上樣純化提取取步驟(1)制備的山檀提取物溶液上樣，上樣量為大孔吸附樹脂重量的4-6倍，上樣流速為1. Oml/min,上樣完成后靜置池，用大孔吸附樹脂4_6倍重量的純水沖洗除雜質，再用大孔吸附樹脂4-6倍重量的70-90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，得山檀根有效部位的純化山檀總黃酮。
2.根據權利要求1所述的大孔吸附樹脂提取純化山檀總黃酮的方法，其特征在于，由以下步驟實現(1)、制備山檀提取物溶液將山檀粉碎成粉，然后加質量濃度為70%的乙醇超聲提取 3次，每次提取1小時，每次70%乙醇的加入量為山檀重量的12倍；合并三次的提取液，減壓回收乙醇至提取液無醇味，得濃縮液，濃縮液加水稀釋成相當于每Iml含生藥0. 05mg的山檀提取物溶液，備用；(2)、大孔吸附樹脂處理方法是，將大孔吸附樹脂先用95%乙醇浸泡1 后，用95%乙醇清洗至乙醇洗脫液與水混合不呈白色混濁，再用蒸餾水洗至無醇味，備用；(3)、濕法裝柱取樹脂柱子，按樹脂柱子直徑與柱高比1 8的比例，用步驟( 處理過的大孔吸附樹脂濕法裝柱；G)、上樣純化提取取步驟(1)制備的山檀提取物溶液上樣，上樣量為大孔吸附樹脂重量的4倍，上樣流速為1. Oml/min，上樣完成后靜置池，用大孔吸附樹脂4倍重量的純水沖洗除雜質，再用大孔吸附樹脂4倍重量的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，得山檀根有效部位的純化山檀總黃酮。
全文摘要
本發明涉及大孔吸附樹脂提取純化山橿總黃酮的方法，可有效解決從山橿中提取純化總黃酮，以滿足制備治療胃潰瘍及鎮痛抗炎藥物的問題，方法是，將山橿粉碎成粉，然后加乙醇超聲提取，減壓回收乙醇至提取液無醇味，得濃縮液，濃縮液加水稀釋成山橿提取物溶液；將大孔吸附樹脂用乙醇浸泡后，用乙醇清洗，再用蒸餾水洗至無醇味，然后裝柱；取山橿提取物溶液上樣，上樣完成后靜置，用純水沖洗除雜質，再用乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，得山橿根有效部位的純化山橿總黃酮，本發明方法簡單，穩定可靠，所得提取物山橿總黃酮，有效用于制備治療胃潰瘍及鎮痛抗炎藥物，開拓了山橿藥用價值，是藥物上的創新。
文檔編號A61P1/04GK102349945SQ20111031868
公開日2012年2月15日 申請日期2011年10月19日 優先權日2011年10月19日
發明者陳磊磊, 陳隨清 申請人:河南中醫學院