專利名稱：中草藥首烏藤提取物在制備減肥降脂藥物或制備具有脂肪酶活性抑制作用的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及中草藥首烏藤提取物在制備減肥降脂藥物或制備具有脂肪酶活性抑制作用的藥物中的應用。
背景技術：
代謝綜合征(Metabolic syndrome, MS)主要包括肥胖、糖耐量異常、血脂代謝紊舌L、高血壓等危險因素。MS患者糖尿病(Diabetes mellitus, DM)、心血管疾病的發病率常是正常人群的數倍。MS已嚴重危害人類的身心健康，成為世界性的公共衛生問題，但迄今我們對MS的認識卻很有限。目前初步的研究證實，在眾多病因中，肥胖與MS的關系尤為密切，是MS發病、發展的關鍵因素和核心環節。隨著經濟的發展、人們生活水平的提高以及生活方式的改變，肥胖已成為全球成年人最大的慢性疾病。目前，美國FDA只批準了 2種藥物可以長期用于肥胖癥治療西布曲明 (Sibutramine)和奧利司他(Orlistat)。西布曲明是一種單胺類神經遞質再攝取抑制劑， 它作用于中樞神經系統以減少攝食而降低體重，但該藥可能引起患者血壓升高、心率加快， 且不能用于冠心病、心率失常和卒中等病史的患者中，使該藥應用受到限制。奧利司他是一種胰脂肪酶抑制劑，可抑制胃腸道中胰脂肪酶的活性，并使脂肪吸收減少約30%，其全身性副作用明顯低于其他現有減肥藥，是脂酶抑制劑的一個成功例子。中草藥是我國獨具優勢的天然藥物資源，古今中醫典籍記載和臨床應用都有大量的中草藥減肥降脂的實例。但由于中草藥活性成分不明確，藥理機制不清楚等限制，使傳統中草藥無法走向世界，迄今我國還沒有具有自主知識產權的減肥藥物。因此從中草藥中篩選具有脂肪酶活性抑制作用的有效成分，并進行減肥降脂藥物的研制，是本發明的主要目的。
發明內容
本發明的目的在于公開中草藥首烏藤提取物在制備減肥降脂藥物或制備具有脂肪酶活性抑制作用的藥物中的應用。本發明目的是通過如下技術方案實現的下述中草藥的水提取物或醇提取物均具有脂肪酶活性抑制作用黃芩、普洱茶、烏龍茶、鐵觀音茶、苦丁茶、紅茶、綠茶、代代花、紅花、花椒、蘆薈、虎杖、番瀉葉、葛根、丹參、白術、桃花、羅布麻、菊花、凌霄花、茉莉花、木蝴蝶、葡萄籽、金蓮花、 丁香、金銀花、白薇、苦參、水皂角、艾葉、人參、槐米、金蕎麥、澤瀉、枳殼、枳實、牛膝、訶子、 首烏藤、木香、銀杏葉、貫眾、杜仲、生蒲黃、瓜蔞、桑葉、桑白皮；上述中草藥水提取物的制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預制，粉碎；力口 5-10體積倍的去離子水，煮沸30-60分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物；上述中草藥醇提取物的制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預制，粉碎；加5-10體積倍的50% -95%乙醇，超聲提取30-90分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物，取上清液即得提取物；上述中草藥水提取物的優選制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預制，粉碎；加7體積倍的去離子水，煮沸45分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物；上述中草藥醇提取物的優選制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預制，粉碎；加7體積倍的85%乙醇，超聲提取60分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物。
下述中草藥的醇提取物具有脂肪酶活性抑制作用大黃、甘草、川芎、木瓜、雞血藤、厚樸、丹皮、絞股藍、姜黃、羌活、何首烏、檳榔、桂枝；上述中草藥醇提取物的制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預制，粉碎；力口 5-10體積倍的50% -95%乙醇，超聲提取30-90分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物；上述中草藥醇提取物的優選制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預制，粉碎；加7體積倍的85%乙醇，超聲提取60分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物。下述中草藥的水提取物具有脂肪酶活性抑制作用枸杞子、荷葉、桔梗；上述中草藥水提取物的優選制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預制，粉碎；加5-10體積倍的去離子水，煮沸30-60分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物；上述中草藥水提取物的優選制備方法如下取上述各單味中草藥飲片，預制，粉碎；加7體積倍的去離子水，煮沸45分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物。本發明上述中草藥提取物在制備減肥降脂藥物的應用中均可單味使用，也可組合使用，減肥降脂藥物可以由上述中草藥的水、醇及有機溶劑提取物或其它方法純化的有效成分制成；減肥降脂藥物還可以包含如下一種或多種其它作用機理的減肥降脂活性成分糖苷酶抑制劑、脂肪酸合成酶抑制劑、膽固醇合成酶抑制劑、淀粉酶抑制劑；為了增加藥效或減少副作用，減肥降脂藥物還可以包含如下一種或多種其它藥理作用的中草藥山茱萸、麻黃、大青葉、蒲公英、熟地；減肥降脂藥物還可以包含如下一種或多種賦形劑阿拉伯樹膠、脫脂牛奶、甘露聚糖、葡甘露聚糖、魔芋粉、淀粉、親脂性硬化劑；減肥降脂藥物還可以包括如下一種或多種藥用輔料或減少藥物副作用的現有產品阿拉伯樹膠、脫脂牛奶、甘露聚糖、葡甘露聚糖、魔芋粉、淀粉、親脂性硬化劑、硬脂酸。上述脂肪酶尤其是指胰脂肪酶。本發明以胰脂肪酶活性為靶點，以胰脂肪酶活性被抑制的程度為指標，從大量的中草藥中，篩選到上述中草藥，其提取物均具有明顯的抑制脂肪酶活性的作用，本發明解決了現有臨床減肥藥物(尤其是中藥)有效率低，副作用大的缺點，提供一種機理明確、靶點科學，副作用小、臨床有效率高的減肥降脂藥物。下面實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發明。實驗例1本發明中草藥的水提取物和醇提取物對脂肪酶抑制作用實驗
1、制備本發明中草藥的水提取物或醇提取物水提取物制備取各單味中草藥飲片，預制，粉碎；加5體積倍的去離子水，煮沸30 分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物；乙醇提取物制備取各單味中草藥飲片，預制，粉碎；加5體積倍的75%乙醇，超聲提取60分鐘，過濾或離心，取濾液或上清液即得提取物。2、脂肪酶活力抑制率的 測定A.準備試劑、橄欖油乳液及測定酶液橄欖油乳化液的制備取橄欖油12ml與阿拉伯樹膠22. 5g，研磨均勻，加水研磨至 300ml，用18000r/min的勻質機乳化2次，每次3分鐘；取乳劑在顯微鏡下檢查，90%乳粒的直徑在3 μ m以下，并不得有10 μ m的乳粒，即可；牛膽鹽溶液的制備精密稱取牛膽鹽8. 0g，置于50ml燒杯中，以水溶解，轉移至 IOOml容量瓶中定容；0. lmol/L氫氧化鈉溶液的制備精密稱取氫氧化鈉2. 0g，加水溶解定容至 500ml ；三羥甲基氨基甲烷緩沖液制備取三羥甲基氨基甲烷3.030g，用0. lmol/L鹽酸溶液調PH值至8. 0，加水至500ml，搖勻，再調節pH值至8. 0 ；脂肪酶溶液的制備精密稱取胰脂肪酶(SIGMA :L3126)于容量瓶中，用冷卻至5°C 以下的三羥甲基氨基甲烷緩沖液溶解，制成每Iml中含胰脂肪酶100活力單位的溶液，作為酶原液備用；繪制標準曲線時，將酶原液用三羥甲基氨基甲烷緩沖液稀釋至不同梯度90u/ ml、80u/ml、70u/ml、60u/ml、50u/ml、40u/ml、30u/ml、20u/ml、10u/ml 的測定酶液；Ou/ml 的測定酶液，即酶空白，是在水浴中煮沸15-30分鐘的酶原液；B.建立脂肪酶測活體系1).水為樣品空白溶液脂肪酶測活體系取橄欖油乳液25ml、8%牛膽鹽溶液2ml 與水10ml，置100ml三角瓶中，加水2ml，用0. lmol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至9. 0 ；2). 75%乙醇為樣品空白溶液脂肪酶測活體系取橄欖油乳液25ml、8%牛膽鹽溶液2ml與水10ml，置100ml三角瓶中，加75%乙醇溶液2ml，用0. lmol/L氫氧化鈉溶液調節 pH值至9. 0 ；3).樣品溶液脂肪酶測活體系取橄欖油乳液25ml、8%牛膽鹽溶液2ml與水 10ml，置100ml三角瓶中，分別加樣品溶液2ml，用0. lmol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至9. 0 ； 樣品溶液可以是六十三種中草藥的水提取物或醇提取物的一種。C.繪制脂肪酶抑制率“ ”與pH變化幅度“ ΔρΗ”關系標準曲線繪制標準曲線時，先將不同梯度的測定酶液換算成對應的抑制率，抑制率換算公式Y(%) = (X0-Xn)A0Υ(% )_表示脂肪酶抑制率X0-表示酶原液濃度(u/ml)Xn-表示不同稀釋度的酶液濃度(u/ml)；設定酶濃度為零時，抑制率為100%;設定酶原液濃度的抑制率為0，將酶原液按一定梯度稀釋成 90u/ml、80u/ml、70u/ml、60u/ml、50u/ml、40u/ml、30u/ml、20u/ml、lOu/ml 的測定酶液，則對應的抑制率分別為10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%； 按照標準曲線繪制法繪制標準曲線，本發明的標準曲線繪制法如下將上述水或75%乙醇空白溶液脂肪酶測活體系在37°C水浴中保溫10分鐘，用 0. lmol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至9. 0 ；精密量取上述不同梯度濃度的測定酶液1體積份，分別加至空白溶液測活體系中，在37°C水浴中準確反應5分鐘，同時記錄反應前后pH 值，并計算反應前后PH差值；用酶濃度為lOOu/ml時反應前后的pH差值，分別減去酶濃度為 90u/ml、80u/ml、70u/ml、60u/ml、50u/ml、40u/ml、30u/ml、20u/ml、1Ou/ml、Ou/ml 時反應前后的PH差值，即得到對應不同抑制率的pH變化幅度“ Δ pH”值；以抑制率為縱坐標， “ Δ pH”值為橫坐標，繪制脂肪酶抑制率“”與pH變化幅度“ Δ pH”關系標準曲線，并得到水或75%為空白樣品溶液的脂肪酶抑制率計算公式；D.測定方法及樣品溶 液 脂肪酶抑制率的測定空白溶液測定將上述水或75%乙醇空白溶液脂肪酶測活體系在37°C水浴中保溫10分鐘，用0. lmol/L氫氧化鈉溶液調節PH值至9. O ；精密量取酶原液Iml加至空白溶液測活體系中，在37°C水浴中準確反應5分鐘，同時記錄反應前后pH值，并計算空白溶液反應前后的PH差值，記為Al ；另取在水浴中煮沸15-30分鐘的上述酶原液lml，照上述方法測定，作為酶空白對照，PH差值記為AO ；則空白溶液酶反應的pH變化值為ΔΑ = Al-AO ；樣品溶液測定將樣品溶液脂肪酶測活體系在37°C水浴中保溫10分鐘，用 0. lmol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至9. 0 ；精密量取酶原液Iml加至樣品溶液測活體系中， 在37°C水浴中準確反應5分鐘，同時記錄反應前后pH值，并計算樣品溶液反應前后的pH差值，記為Bl ；另取在水浴中煮沸20分鐘的上述酶原液1ml，照上述方法測定，作為酶空白對照，PH差值記為BO ；則樣品溶液酶反應的pH變化值為ΔΒ = B1-B0 樣品溶液的脂肪酶抑制率用空白溶液酶反應的PH變化值(ΔΑ)減去樣品溶液酶反應的PH變化值(ΔΒ)，即得到空白溶液與樣品溶液酶反應的“ ΔρΗ”值，即ΔρΗ = Δ A-Δ B，將此“ Δ pH”值代入上述相應的空白溶液的脂肪酶抑制率計算公式，即求得測定樣品的脂肪酶抑制率，樣品溶液的脂肪酶抑制率結果見表1 表1中草藥提取物對脂肪酶活力抑制率
權利要求
1.一種中草藥首烏藤的水提取物或醇提取物在制備減肥降脂藥物或制備具有脂肪酶活性抑制作用的藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述中草藥首烏藤的水提取物由如下方法制備取首烏藤中草藥飲片，預制，粉碎；加5-10體積倍的去離子水，煮沸30-60分鐘，過濾，或4000r/min離心10-20分鐘，取過濾液或離心上清液即得所述水提取物。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述中草藥首烏藤的水提取物由如下方法制備取所述首烏藤中草藥飲片，預制，粉碎；加7體積倍的去離子水，煮沸45分鐘，過濾，或4000r/min離心15分鐘，取過濾液或離心上清液即得所述水提取物。
4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述中草藥首烏藤的水提取物由如下方法制備取所述首烏藤中草藥飲片，預制，粉碎；加9體積倍的去離子水，煮沸60分鐘，過濾，取過濾液即得所述水提取物。
5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述中草藥 首烏藤的醇提取物由如下方法制備取首烏藤中草藥飲片，預制，粉碎；加5-10體積倍的50% -95%乙醇，超聲提取 30-90分鐘，過濾，或4000r/min離心10-20分鐘，取過濾液或離心上清液即得所述醇提取物。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述中草藥首烏藤的醇提取物由如下方法制備取所述首烏藤中草藥飲片，預制，粉碎；加7體積倍的85%乙醇，超聲提取60分鐘， 過濾，或4000r/min離心15分鐘，取過濾液或離心上清液即得所述醇提取物。
7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述中草藥首烏藤的醇提取物由如下方法制備取所述首烏藤中草藥飲片，預制，粉碎；加9體積倍的95%乙醇，超聲提取60分鐘， 過濾，取過濾液即得所述醇提取物。
8.根據權利要求1-7任一項所述的應用，其特征在于，所述脂肪酶為胰脂肪酶。
9.根據權利要求1-7任一項所述的應用，其特征在于，所述減肥降脂藥物中包含糖苷酶抑制劑、脂肪酸合成酶抑制劑、膽固醇合成酶抑制劑或淀粉酶抑制劑。
10.根據權利要求1-7任一項所述的應用，其特征在于，所述減肥降脂藥物中包含山茱萸、麻黃、大青葉、蒲公英或熟地。
全文摘要
本發明公開了中草藥首烏藤的水提取物或醇提取物在制備減肥降脂藥物或制備具有脂肪酶活性抑制作用的藥物中的應用。本發明解決了現有臨床減肥藥物，尤其是中藥效率低，副作用大的缺點，提供了一種機理明確、靶點科學，副作用小、臨床有效率高的減肥降脂藥物。
文檔編號A61P3/04GK102357126SQ20111031766
公開日2012年2月22日 申請日期2007年8月7日 優先權日2007年8月7日
發明者段震文, 郭樹仁, 閆雪秋 申請人:北京北大維信生物科技有限公司