一種注射用紅細胞凍干粉制劑及其制備方法

專利名稱：一種注射用紅細胞凍干粉制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種注射用凍干粉制劑，特別涉及一種紅細胞的注射用凍干粉制劑。
背景技術：
紅細胞主要由細胞膜和血紅蛋白組成，是血液的重要成分，主要功能是輸送氧氣和二氧化碳。在氧分壓較高的肺部，血紅蛋白與氧結合成氧合血紅蛋白，然后隨血液流到氧分壓較低的組織，血紅蛋白分離，將攜帶的氧氣釋放，再與組織所產生的二氧化碳結合，運輸至肺部，排出體外。人體在大量失血后需要補充血液。隨著成分輸血技術的推廣，失血后已不必補充全血，而是給予一定量的紅細胞等血液組分即可。因此，紅細胞的體外保存和生物活性的保持成為成分輸血技術的技術前體。現用紅細胞的保存方法主要有液體保存法、冷凍保存法和冷凍干燥法。其中液體法一般指的是 4°C低溫保存法，冷凍保存指-80°C或_196°C深低溫保存。冷凍干燥法是將其適當脫水后經干燥制成，比液體法和冰凍法有明顯的優勢，其制品可以室溫保存，易于水化，重量大大減輕，便于運輸，減少浪費。目前，液體保存紅細胞已廣泛應用于臨床，并得到不斷的完善；冷凍保存紅細胞已開始應用于臨床；冷凍干燥保存紅細胞的技術尚未成熟，缺乏實用性。紅細胞保存的研究倍受重視。其保存期的長短已成為衡量一個國家臨床輸血水平的一個重要指標。目前研究認為，采用凍干技術可以延長紅細胞的保存期，研究中常用的冷凍保護劑等關鍵輔料包括海藻糖、二甲基亞砜、聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白等。海藻糖是一種穩定的非還原性雙糖，其羥基能代替水分子同蛋白質表面部分結合，進入細胞后會形成保護層，對細胞形成保護。但只有當海藻糖達到一定濃度并均勻分布在細胞膜內外時，才能在凍干過程中對紅細胞起到保護作用。因此，凍干前有效負載海藻糖至胞內是紅細胞凍干保存成功的主要因素之一。然而紅細胞膜對海藻糖具有非滲透性，因此將海藻糖負載進入紅細胞胞內，需要復雜的工藝過程，耗時長達4小時，并需要引入更多種化學物質。使得工藝問題和安全性問題成為困擾紅細胞凍干粉應用的難題之一。二甲基亞砜可防止凍干過程中形成冰晶對細胞造成損傷。溫度接近0°C時，二甲基亞砜使溶液的凝固點下降，無冰晶形成；溫度繼續降低時，細胞外液中形成冰晶，而紅細胞內溶液不凍結。紅細胞胞外水不斷形成冰晶，胞外濃度增大，會使細胞內的自由水透過細胞膜滲出到胞外，如果降溫速度足夠慢，即可使紅細胞逐漸脫水而不會形成冰晶。但是，二甲基亞砜作為一種化學試劑，對人體具有一定的毒性作用，不適于注射給藥，殘留的二甲基亞砜可能會在長期輸注凍干紅細胞的患者體內逐漸積累而形成傷害，所以使用前需要反復沖洗，從而造成紅細胞回收率降低的問題。聚乙烯吡咯烷酮與海藻糖相似，是非滲透性細胞保護劑，對凍干細胞具有一定的保護作用。牛血清白蛋則是一種膜保護劑。目前實驗室研究結果認為，紅細胞凍干過程中，需要海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮、牛血清白蛋白組合使用才能對凍干過程中的紅細胞發揮一定的保護作用。而海藻糖需要二甲基亞砜才能有效進入細胞發揮作用。并且，目前研發的各種紅細胞凍干工藝和處方，因成分復雜，工藝參數不易控制等原因，存在紅細胞回收率低、凍干紅細胞形態變異、凍干紅細胞酶活性降低等諸多問題。因此，尋找新的安全性高且能夠維持凍干紅細胞高回收率和高活性的紅細胞凍干粉處方和工藝，已成為已成為制約紅細胞臨床使用的關鍵因素。四氫嘧啶，化學名為1，4，5，6-四氫-2-甲基_4_嘧啶羧酸或2-Methyl-l，4，5，6 -tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid 或(S)_2_methyl_l， 4, 5, 6-tetra-hydro pyrimidine-4-carboxylic acid 或 1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidine carbonic acid, CAS號為96702-03-3，是1985年從海洋生物體內發現的氨基酸衍生物，具有保濕、防紫外線照射等作用，近年來已被用于化妝品作為保濕性成分或輔料。

發明內容
針對上述現有技術，本發明的目的在于提供一種注射用凍干粉制劑，具體的說是一種注射用紅細胞凍干粉制劑。另一方面，本發明還提供了一種注射用紅細胞凍干粉制劑的制備方法。為實現上述目的，本發明采用的技術方案為
一種注射用紅細胞凍干粉制劑，由紅細胞和冷凍保護劑組成，所述冷凍保護劑由非滲透性冷凍保護劑和四氫嘧啶或羥基四氫嘧啶組成，所述非滲透性冷凍保護劑選自聚乙烯吡咯烷酮、牛血清白蛋白和海藻糖中的任意一種；所述四氫嘧啶或羥基四氫嘧啶用量為每 IO12個紅細胞細胞用5mg-80mg，所述非滲透性冷凍保護劑的用量為每IO12個紅細胞細胞用 2mg_50mgo所述四氫嘧啶或羥基四氫嘧啶的用量為每IO12個紅細胞細胞用10mg-30mg。所述非滲透性冷凍保護劑的用量為每IO12個紅細胞細胞用aiig-20mg。所述非滲透性冷凍保護劑為聚乙烯吡咯烷酮。所述聚乙烯吡咯烷酮的用量為每IO12個紅細胞細胞用ang-Hmg。所述注射用紅細胞凍干粉制劑的制備方法，步驟為
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入非滲透性冷凍保護劑和四氫嘧啶或羥基四氫嘧啶，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至7Pa-15I^，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至_10°C，維持干燥6小時；
c、二次干燥一次干燥后，以0. I0C /分鐘的升溫速度升溫至25V，維持干燥5小時， 滅菌分裝即得。本發明的技術方案中所述的四氫嘧啶，化學名為2-Methyl-l，4，5，6-tetra hydropyrimidine-4-carboxylic acid 或(S)-2-methyl-l, 4, 5, 6-tetra-hydro pyrimidine-4-carboxylic acid 或 1, 4, 5, 6-tetrahydro-2-methyl-4-pyrimidine carbonic acid。1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸俗稱羥基四氫嘧啶，CAS號為96702-03-3，這是本領域技術人員周知的。本發明人在實驗研究中驚奇的發現，四氫嘧啶與某些非滲透性冷凍保護劑的混合物，對凍干紅細胞有出乎意料的保護作用，紅細胞與四氫嘧啶及其衍生物和非滲透性冷凍保護劑混合后凍干，所得的注射用紅細胞凍干粉制劑安全性高，穩定性強，回收率、體內存活時間和紅細胞功能相對較高，凍干對紅細胞的影響極小，利于紅細胞的長期貯存和運輸。


圖1光鏡下實施例9制備的注射用紅細胞凍干粉復水后的紅細胞形態。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步的解釋。應當理解的是，以下實施例僅用于解釋本發明，而不是限制本發明的保護范圍。實施例1注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
四氫嘧啶12mg
聚乙烯吡咯烷酮IOmg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為IX IO9細胞/ml的懸液， 然后加入四氫嘧啶和聚乙烯吡咯烷酮，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至12Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例2注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
羥基四氫嘧啶20mg
聚乙烯吡咯烷酮7mg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入羥基四氫嘧啶和聚乙烯吡咯烷酮，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至9Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥6 小時；c、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25V，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例3 紅細胞細胞羥基四氫嘧啶海藻糖 1)配液:
注射用紅細胞凍干粉處方及制備
2 X IO9 細胞/ml 1000ml 30mg 45mg將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入羥基四氫嘧啶和海藻糖，靜置1小時； 2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至10Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例4 注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
羥基四氫嘧啶4ang
牛血清白蛋白18mg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入羥基四氫嘧啶和牛血清白蛋白，靜置1小時；
2)凍干a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C/分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2小時；b、一次干燥抽真空至10Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C， 維持干燥6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25V，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例5 注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
四氫嘧啶26mg
聚乙烯吡咯烷酮IOmg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入四氫嘧啶和聚乙烯吡咯烷酮，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至10Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例6 注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
四氫嘧啶58mg
海藻糖50mg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入四氫嘧啶和海藻糖，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2注射用紅細胞凍干粉處方及制備 2 X IO9 細胞/ml 60mg
3mg
小時；b、一次干燥抽真空至12Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，即得。實施例7 注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
四氫嘧啶7ang
牛血清白蛋白23mg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入四氫嘧啶和牛血清白蛋白，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至10Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例8 紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml 四氫嘧啶聚乙烯吡咯烷酮
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入四氫嘧啶和聚乙烯吡咯烷酮，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至12Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例9 紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml 四氫嘧啶聚乙烯吡咯烷酮
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入四氫嘧啶和聚乙烯吡咯烷酮，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至15Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。
注射用紅細胞凍干粉處方及制備 2 X IO9 細胞/ml 15mg
12g
實施例10 注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
四氫嘧啶17mg
聚乙烯吡咯烷酮19mg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入四氫嘧啶和聚乙烯吡咯烷酮，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至9Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥6 小時；c、二次干燥一次干燥后，以0. I0C /分鐘的升溫速度升溫至25V，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例11 注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
羥基四氫嘧啶20mg
聚乙烯吡咯烷酮IOmg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入羥基四氫嘧啶和聚乙烯吡咯烷酮，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至10Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例12 注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
羥基四氫嘧啶iang
牛血清白蛋白15mg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入羥基四氫嘧啶和牛血清白蛋白，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至10Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例13 注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
四氫嘧啶18mgCN 102327289 A
說明書7/9頁
海藻糖59mg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入四氫嘧啶和海藻糖，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至10Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例14 注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
四氫嘧啶Ilmg
海藻糖75mg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入四氫嘧啶和海藻糖，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至10Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例15 注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
四氫嘧啶Ilmg
牛血清白蛋白32mg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入四氫嘧啶和牛血清白蛋白，靜置1小時；
2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至7Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥6 小時；c、二次干燥一次干燥后，以0. I0C /分鐘的升溫速度升溫至25V，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例16 注射用紅細胞凍干粉處方及制備
紅細胞細胞2X IO9細胞/ml 1000ml
四氫嘧啶19mg
海藻糖41mg
1)配液:
將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液，然后加入四氫嘧啶和海藻糖，靜置1小時； 2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C /分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至10Pa，然后以5°C /分鐘的升溫速度升溫至-10°C，維持干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以0. 1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時，滅菌分裝即得。實施例17 注射用紅細胞凍干粉制劑的急性毒性實驗
SPF級KM小鼠，雌雄各半，體重16g-30g，稱重后隨機分為17組，一組尾靜脈注射給予未凍干的紅細胞，其余16組分別靜脈注射給予實施例1-實施例16所制備的凍干粉(凍干粉用生理鹽水復溶)，以紅細胞細胞個數計算給藥劑量為IO12/只，給藥后連續觀察14天。觀察項目包括毒性反應、體重和組織病理學。結果表明，小鼠尾靜脈注射給予紅細胞凍干粉， 以紅細胞細胞個數計為IO14/只時，無明顯毒性反應，給藥前后及實驗結束時小鼠體重無明顯差異，組織病理學觀察，未發現顯著異常。說明本發明的注射用紅細胞凍干粉制劑安全性良好。實施例18 注射用紅細胞凍干粉制劑的長期毒性實驗
Wister大鼠，雌雄各半，420g-600g，稱重后隨機分為17組，一組尾靜脈注射給予未凍干的紅細胞，其余16組分別靜脈注射給予實施例1至實施例16所制備的凍干粉(凍干粉用生理鹽水復溶)，以紅細胞細胞個數計算給藥劑量為2 X IO9/只，每兩天給藥1次，共30天， 恢復期為14天。給藥期間及恢復期內，觀察大鼠給藥前及給藥后進行大體觀察，記錄大鼠的一般癥狀、記錄給藥前及給藥后大鼠的體重，并定期進行血液學、尿液學和血生化檢查， 記錄給藥前及給藥后大鼠的心電圖。結果顯示，各組動物體重與對照組無顯著差異，大體觀察未發現異常。實驗組動物的血液學、尿液學和血生化數據與對照組無顯著差異。說明四注射用紅細胞凍干粉制劑長期給藥的安全性良好，耐受性符合臨床用藥的要求。實施例19 注射用紅細胞凍干粉制劑的紅細胞回收率
體外紅細胞細胞回收率=(復水后紅細胞數目/凍干前紅細胞數目)χιοο% 將實施例1-實施例16所制備的凍干粉用生理鹽水復水，對各組紅細胞細胞復水前及復水后個數進行計數，計算各組紅細胞細胞回收率(每組取三份樣品測定后取平均值)。結果表明，各組凍干粉的體外紅細胞細胞回收率(均值)為85. 7%-96. 0%，其中實施例1、實施例 2、實施例9和實施例11制備的由四氫嘧啶或羥基四氫嘧啶與聚乙烯吡咯烷酮組成的凍干粉的體外紅細胞細胞回收率集中于87. 1%-98. 3%，顯著高于其他各組。實施例20 注射用紅細胞凍干粉制劑的紅細胞復水后的細胞形態學觀察
將實施例1至實施例16所制備的注射用紅細胞凍干粉用生理鹽水復溶后，紅細胞涂片作姬姆薩染色(Giemsa stain)，新鮮紅細胞經同樣涂片染色后作為正常對照；光學顯微鏡觀察并照相。結果表明實施例1至實施例16所制備的注射用紅細胞凍干粉用生理鹽水復溶后，紅細胞形態未見異常。實施例9注射用紅細胞凍干粉復水后的紅細胞形態見圖1。實施例21 注射用紅細胞凍干粉制劑的紅細胞復水后的三磷酸腺苷酶和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性測定
將實施例1至實施例16所制備的注射用紅細胞凍干粉用生理鹽水復溶后，使用試劑盒測定三磷酸腺苷酶(ATP)和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD)活性。新鮮紅細胞和洲標準紅細胞懸液作同樣測定作為對照。結果見表1。
表 權利要求
1.一種注射用紅細胞凍干粉制劑，其特征在于由紅細胞和冷凍保護劑組成，所述冷凍保護劑由非滲透性冷凍保護劑和四氫嘧啶或羥基四氫嘧啶組成，所述非滲透性冷凍保護劑選自聚乙烯吡咯烷酮、牛血清白蛋白和海藻糖中的任意一種；所述四氫嘧啶或羥基四氫嘧啶用量為每IO12個紅細胞細胞用5mg-80mg，所述非滲透性冷凍保護劑的用量為每IO12個紅細胞細胞用ang-50mg。
2.根據權利要求1所述的注射用紅細胞凍干粉制劑，其特征在于所述四氫嘧啶或羥基四氫嘧啶的用量為每IO12個紅細胞細胞用10mg-30mg。
3.根據權利要求1所述的注射用紅細胞凍干粉制劑，其特征在于所述非滲透性冷凍保護劑的用量為每IO12個紅細胞細胞用ang-20mg。
4.根據權利要求1-3所述的注射用紅細胞凍干粉制劑，其特征在于所述非滲透性冷凍保護劑為聚乙烯吡咯烷酮。
5.根據權利要求4所述的注射用紅細胞凍干粉制劑，其特征在于所述聚乙烯吡咯烷酮的用量為每IO12個紅細胞細胞用2mg-Hmg。
6.權利要求1-5所述的注射用紅細胞凍干粉制劑的制備方法，其特征在于，步驟為1)配液:將紅細胞用生理鹽水洗滌2次，用滅菌注射用水配成濃度為2X IO9細胞/ml的懸液， 然后加入非滲透性冷凍保護劑和四氫嘧啶或羥基四氫嘧啶，靜置1小時；2)凍干a、預凍將分裝于西林瓶的溶液以10°C/分鐘的速度從_20°C降至_50°C，維持冷凍2 小時；b、一次干燥抽真空至7Pa-15I^，然后以5°C/分鐘的升溫速度升溫至_10°C，維持干燥6小時；c、二次干燥一次干燥后，以0.1°C /分鐘的升溫速度升溫至25°C，維持干燥5小時， 滅菌分裝即得。
全文摘要
本發明涉及一種注射用凍干紅細胞制劑及其制備方法，凍干保護劑由非滲透性保護劑與四氫嘧啶或羥基四氫嘧啶組成。本發明的注射用凍干紅細胞制劑安全性高，穩定性強，回收率、體內存活時間和紅細胞功能相對較高，凍干對紅細胞的影響極小，利于紅細胞的長期貯存和運輸。
文檔編號A61K47/32GK102327289SQ20111031273
公開日2012年1月25日 申請日期2011年10月17日 優先權日2011年10月17日
發明者厲保秋, 厲凌子, 高繼友 申請人:濟南環肽醫藥科技有限公司