專利名稱：一種桑葉總堿提取物及其制備方法和其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種從桑科桑屬植物的葉中提取的桑葉總堿提取物及其制備方法，以及桑葉總堿提取物用于制備治療或預防糖尿病及其并發癥的藥物或保鍵品或食品中的應用。
背景技術：
桑科桑屬植物桑葉(Morus alba L.)是傳統入藥的部位，民間入藥中常用包括雞桑 Morus australis Poir.、蒙桑 M. mongolica Schnoid.、山桑 M. bombyc is koidz.
Μ. notabilis Schne.、華桑Μ. cathayana Hensl.等。國內外的大量研究表明，桑葉具有很好的降血糖功能，其降血糖的機理研究表明主要與其中氮雜糖類生物堿物質密切相關。桑葉中主要含有黃酮及其衍生物、香豆精衍生物、三萜類、生物堿類等成份。國內外已有研究表明，桑葉水提物具有降血糖活性，并在心血管系統、血液系統、神經系統、泌尿系統和消化系統等方面具有顯著的藥理作用桑葉復方濃縮液對鏈脲霉素所致的血糖升高及葡萄糖性高血糖都有較好的降血糖作用，桑葉的水浸液對實驗性糖尿病大鼠有明顯的降血糖作用；桑葉粉飼料可使自然發病且癥狀類似成人型糖尿病和糖尿病并發癥的大鼠空腹血糖值明顯降低；桑葉提取物能阻止四氧嘧啶高血糖小鼠從飲食中攝入的淀粉和葡萄糖的高血糖反應；用50%桑屬植物甲醇提取物可在大鼠小腸管實驗中迅速抑制蔗糖吸收，并顯示對二糖類分解酶活性有抑制作用；桑葉水提部分可作用于淀粉消化的最后階段，對二糖酶(麥芽糖酶和乳糖酶)有明顯的抑制作用，可能成為控制餐后血糖的有效手段；從桑葉中分離出6種氮雜糖化合物，觀察其對STZ引起的糖尿病小鼠的療效發現，不同成分通過增加胰島素的釋放和抑制2-糖苷酶活性的途徑來起到降低血糖值；以1-脫氧野尻霉素(DNJ) 為主的氮雜糖類生物堿是降血糖的活性成分。現有技術中已有多種方法富集桑葉中的生物堿成分，例如，二次離子交換樹脂制備法(CN01113191. 8)、大孔樹脂和離子交換樹脂二次過柱制備法(CN200510122356. 3)、酸洗離子交換樹脂制備法(CN200710098454. 7)等。盡管這些方法可提高桑葉中DNJ的相對含量，但存在工序復雜，要求反復過柱，脫鹽處理，生產周期長，成本相對較高等缺陷。桑葉多羥基生物堿類物質分子量在150-300道爾頓左右，水溶性極好，目前的脫鹽方法難以適用于桑葉多羥基生物堿類物質的脫鹽①離子交換法要重新過柱，工序復雜， 影響收得率，且難以去除Na+;②電滲析或反滲透法主要用于從水中除鹽，不適用于從水溶性好的極性桑葉生物堿分子中除鹽；③蛋白質脫鹽用透析法或凝膠法，適用于較大分子量物質的脫鹽，其工業化成本高，不能用于桑葉生物堿。盡管現有技術中已采用離子交換樹脂法進行桑葉總生物堿的提取，而片面地純化 1-脫氧野尻霉素(DNJ)則容易忽視樹脂的使用成本，如CN200710067498.3將酸化液濃縮后直接采用離子交換樹脂柱層析進行分離，雖然節約了絮凝劑的成本，但是嚴重地縮短了離子交換樹脂柱的使用周期而增大生產成本。因此，需要提供一種操作簡單，適于工業化操作、成本低，且具有良好治療或預防糖尿病及其并發癥的藥物或保鍵品或食品中應用前景的桑葉總生物堿的方法。
發明內容
針對現有技術的不足，本發明提供了一種操作簡單，適于工業化操作、成本低，且具有良好治療或預防糖尿病及其并發癥的藥物或保鍵品或食品中應用前景的桑葉總生物堿的方法。本發明的技術方案是一種桑葉總生物堿提取物的制備方法，包括以下步驟1)將桑科桑屬植物的葉經粉碎后通過溶劑提取，得桑葉提取液；所述溶劑選自水、質量濃度為40-80%的乙醇水溶液、含0. 001N-0. IN酸的水、含
0.00IN-O. IN酸的乙醇的任一種；2)所得桑葉提取液濃縮至相對密度為1. 02-1. 20后，先加入質量濃度為5%-50% 的石灰乳，搖均，再加入乙醇沉淀，使乙醇的終濃度為40% -80%，離心分離，取上清液；3)上清液調節pH至2. 0-5. 0，除沉淀后通過大孔型陽離子交換樹脂或凝膠型陽離子交換樹脂吸附，水洗去除雜質后，用質量濃度為0. 20% -5. 0%氨水洗脫樹脂，收集氨水洗脫液，濃縮干燥，即得。所述桑科桑屬植物選自白桑、雞桑、蒙桑、山桑、川桑、華桑的任一種或其組合，優選為白桑。步驟1)所述溶劑提取方法選自回流提取法、冷浸提取法、溫浸提取法、滲漉提取法、超聲提取法和逆流循環提取法中的任意一種，優選為回流提取法。步驟2)所述石灰乳的質量濃度優選為15% -30%。步驟2)提取液濃縮后的相對密度優選為1. 05-1. 15。步驟2)提取液濃縮后，加入石灰乳和乙醇沉淀，所述乙醇的終濃度優選為 50% -60%。步驟3)所述pH值優選為3. 0-4. 0，優選所用的酸為硫酸。步驟3)所述的陽離子交換樹脂選自鹽型、氫型或鈉型的任一種或其組合，優選為氫型。步驟3)所述的陽離子交換樹脂選自大孔型陽離子交換樹脂或凝膠型陽離子交換樹脂，類型優選DOOl型陽離子交換樹脂，001X4型凝膠型樹脂、001X7型凝膠型樹脂、 001X12型凝膠型樹脂的任一種或其組合，最優選為001 X 7型凝膠型樹脂。步驟(3)步所述的洗脫用氨水的質量濃度優選為0.25%_3.0%，最優選為
1.5% -2. 5%。本發明還提供了一種桑葉總生物堿提取物，由上述桑葉總生物堿提取物的制備方法所制得。本發明還提供了所述桑葉總生物堿提取物在制備治療或預防糖尿病及其并發癥的藥物或保健品或食品中的應用。下面對本發明做進一步的解釋和說明除非另有說明，本發明所述的百分比均為質量百分比。本發明的優選技術方案中，所述的生物總堿含有1-脫氧野尻霉素、1，N-甲基-1-脫氧野尻霉素、2-0-β -D-吡喃半乳糖基-1-脫氧野尻霉素、FagomineU,4- 二脫氧-1，4-亞胺基-D-阿拉伯糖醇的任一種或其組合。本發明首次采用石硫醇法結合離子交換樹脂提取桑葉中的生物堿類，不僅其提取物得率可達1.2-2.5%，生物總堿含量50-90%，其中1-脫氧野尻霉素(DNJ)含量為 3-30%，且通過石硫醇法的制備步驟，延長了離子交換樹脂的使用壽命，節約了工業化大生產中的成本，有效保持了桑葉在治療或預防糖尿病及其并發癥中的活性。本發明對所述生物總堿的降糖作用進行了系統的試驗比較和優選，結果說明其對糖苷酶有較好的抑制作用，可以用于制備治療或預防糖尿病及其并發癥的藥物或保鍵品或食品中的應用。本發明的桑葉生物堿類成分的測定方法包括(一)總生物堿測定 精密稱定樣品約0. 3g，加50 %乙醇20ml溶解，再加水40ml，加0. Ig醋酸鉛，搖勻， 靜置20分鐘后，濾過，濾液蒸干，殘渣加0. lmol/L的硫酸溶液20ml溶解，濾過，濾液加在強酸性陽離子交換樹脂柱上，以水洗200ml，棄去水液，再以2mol/L氨溶液200ml洗脫，收集洗脫液，蒸干。殘渣精密加無水冰醋酸50ml使溶解，作為供試品溶液。取2份，每份精密量取 20ml，加結晶紫指示液1滴，用0. 05mol/L的高氯酸滴定液緩緩滴定至藍色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每Iml高氯酸滴定液(0. lmol/L)相當于16. 3mg的1-脫氧野尻霉素 (化學式 C6H13NO4)。(二)1-脫氧野尻霉素(DNJ)照高效液相色譜法(中國藥典2005年版附錄VI D)測定。色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相 A，以0. 醋酸溶液為流動相B，按下表進行梯度洗脫，色譜圖記錄時間25分鐘。檢測波長為265nm ；理論板數按1_脫氧野尻霉素峰計算應不低于2000。
權利要求
1.一種桑葉總生物堿提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟1)將桑科桑屬植物的葉經粉碎后通過溶劑提取，得桑葉提取液；所述溶劑選自水、質量濃度為40 % -80 %的乙醇水溶液、含0. 001N-0. IN酸的水或含 0. 00IN-O. IN酸的乙醇中的任意一種；2)所得桑葉提取液濃縮至相對密度為1.02-1. 20后，先加入質量濃度為5% -50%的石灰乳，搖均，再加入乙醇沉淀，使乙醇的終濃度為40% -80%，離心分離，取上清液；3)上清液調節pH至2.0-5. 0，除沉淀后通過大孔型陽離子交換樹脂或凝膠型陽離子交換樹脂吸附，水洗去除雜質后，用質量濃度為0. 20% -5. 0%氨水洗脫樹脂，收集氨水洗脫液，濃縮干燥，即得。
2.根據權利要求1所述桑葉總生物堿提取物的制備方法，步驟1)所述溶劑提取方法選自回流提取法、冷浸提取法、溫浸提取法、滲漉提取法、超聲提取法和逆流循環提取法中的任意一種。
3.根據權利要求1所述桑葉總生物堿提取物的制備方法，步驟2)所述石灰乳的質量濃度為 15% -30%。
4.根據權利要求1所述桑葉總生物堿提取物的制備方法，步驟2)中所述提取液濃縮至相對密度為1.05-1. 15。
5.根據權利要求1所述桑葉總生物堿提取物的制備方法，步驟2)中所述乙醇的終濃度為 50% -60%。
6.根據權利要求1所述桑葉總生物堿提取物的制備方法，步驟3)中用硫酸調節pH至 3. 0-4. O0
7.根據權利要求1所述桑葉總生物堿提取物的制備方法，步驟3)所述的大孔型陽離子交換樹脂或凝膠型陽離子交換樹脂的類型為DOOl型陽離子交換樹脂、001X4型凝膠型樹脂、001X7型凝膠型樹脂、001 X 12型凝膠型樹脂中的任一種或幾種。
8.根據權利要求1所述桑葉總生物堿提取物的制備方法，步驟(3)步所述的洗脫用氨水的質量濃度為1.5% -2.5%。
9.一種桑葉總生物堿提取物，其特征在于，由權利要求1-8之一所述桑葉總生物堿提取物的制備方法所制得。
10.權利要求9所述桑葉總生物堿提取物在制備治療或預防糖尿病及其并發癥的藥物或保健品或食品中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種桑葉總堿提取物及其制備方法，具體步驟為1)將桑葉經粉碎后通過溶劑提取，得桑葉提取液；2)所得桑葉提取液濃縮至相對密度為1.02-1.20后，先加石灰乳，搖均，再加入乙醇沉淀，離心分離，取上清液；3)上清液調節pH至2.0-5.0，除沉淀后通過大孔型陽離子交換樹脂或凝膠型陽離子交換樹脂吸附，水洗去除雜質后，用質量濃度為0.20％-5.0％氨水洗脫樹脂，收集氨水洗脫液，濃縮干燥，即得。該制備方法延長了陽離子交換樹脂的使用周期，節約了生產成本。本發明還公開了該方法所制得的桑葉總生物堿提取物在制備治療或預防糖尿病及其并發癥的藥物或保健品或食品中的應用。
文檔編號A61K127/00GK102327324SQ20111028553
公開日2012年1月25日 申請日期2011年9月23日 優先權日2011年9月23日
發明者周應軍, 徐冰, 談英, 譚沛, 陳周全 申請人:華潤三九醫藥股份有限公司