專利名稱：一種治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物及其制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥領域，涉及一種復方藥物新劑型，特別涉及一種穩定透明的用于治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物的制備方法。
背景技術：
特比萘芬是廣譜抗真菌新一代丙烯胺類藥物，為白色或類白色結晶性粉末，難溶于水，可溶于有機溶劑。其突出的優點在于它具有殺菌和抑菌的雙重作用，主要通過抑制真菌角鯊烯環氧化酶，導致角鯊烯聚集，脂滴沉積于細胞壁及細胞漿內，引起細胞膜破裂達到殺菌的目的；其次可導致麥角固醇的缺乏，真菌細胞膜的生長受干擾，真菌停止生長，達到抑菌的目的。特比萘芬對臨床常見真菌具有較強抗菌作用，體內無蓄積，副反應低。丁香酚即4-烯丙基-2-甲氧基苯酚，是一種油狀有香味的化合物，是很多中草藥如丁香、肉桂中的有效成分，幾乎不溶于水，與乙醇、乙醚及油等可混溶。丁香酚來源廣泛， 易于制備，是一種良好的植物源藥物，有廣泛的藥理作用，其具有較強抑制真菌、細菌、殺除螨蟲等作用。紅霉素屬大環內酯類抗生素，為白色或類白色的結晶或粉末，無臭，味苦，微有引濕性，性狀穩定，難溶于水，易溶于有甲醇、乙醇等有機溶媒。對革蘭陽性菌有強大抗菌作用，敏感菌有葡萄球菌、草綠色鏈球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌等。對革蘭陰性菌如淋球菌、螺旋桿菌、百日咳桿菌、布魯菌屬等也有抑制作用。此外，對支原體、放線菌、鉤端螺旋體、立克次體、衣原體、奴卡菌、少數分枝桿菌和阿米巴原蟲有抑制作用。紅霉素毒性低，但刺激性強。肌注可發生局部炎癥，宜采用深部肌注。靜注速度要緩慢，同時應避免露出血管外。犬、貓內服則可引起嘔吐、腹痛、腹瀉等癥狀。以上三種藥物溶解性較差，物理性質不穩定，不能綜合性地預防及治療多種原因引起的寵物皮膚病，需同時多次給藥才能達到治療效果。目前市場上治療寵物皮膚病的藥物有伊維菌素、甲硝唑、林可霉素、多拉菌素等，但上述產品功能單一，使用不便，伊維菌素等藥物使用周期較長，對于寵物毒副作用較大。
發明內容
針對現有技術中存在的缺陷與不足，本發明目的在于提供一種適宜于臨床應用的治療寵物皮膚病的復方特比萘芬納米藥物，該藥物能夠同時治療真菌、細菌、寄生蟲等原因弓I起的寵物皮膚病，且安全有效，生物利用率較高。實現上述發明目的的技術方案是一種治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物，該藥物的粒徑為Inm IOOnm,由下列質量百分比的原料組成
特比萘芬O. 1% 10%、丁香酚O. 1% 15%、紅霉素O. 1% 5%、油相O. 1% 10%、表面活性劑10% 40%、助表面活性劑4% 20%、余量為蒸餾水，上述原料的質量百分比之和為
100% ο制備本發明藥物的配方優選質量百分比范圍是特比萘芬0.2% 8%、丁香酚O. 2% 12%、紅霉素O. 2% 4. 5%、油相O. 5% 8%、表面活性劑15% 35%、助表面活性劑 5% 15%、余量為蒸餾水，上述成分的質量百分比之和為100%。所述的表面活性劑是吐溫-80 (Tween-80)、吐溫-60 (Tween-60)、吐溫-20 (Tween-20)、聚氧乙烯(40)氫化蓖麻油(RH-40)、聚氧乙烯(40)蓖麻油(EL-40)和司盤-80 (Span-80)中的一種或幾種的混合物。所述的助表面活性劑是無水乙醇、乙二醇、1，2-丙二醇、丙三醇、聚乙二醇200 (PEG 200)、聚乙二醇400 (PEG 400)、聚乙二醇600 (PEG 600)中的一種或幾種的混合物。所述的油相是肉豆蘧酸異丙酯、液體石蠟、維生素E油、霍霍巴油、三醋酸甘油酯、 乙酸乙酯、杏仁油、小麥胚芽油、橄欖油、蓖麻油中的一種或幾種的混合物。在表面活性劑的選擇上，本發明選用無毒性和生物相容性好的非離子型表面活性劑。非離子型表面活性劑在溶液中比較穩定，不易受強電解質、無機鹽類的影響，也不易受酸堿的影響，與其他表面活性劑的相容性好，溶血作用較小。理論上，0/W型納米乳狀液的制備需要表面活性劑的HLB值介于8 18之間，考慮到制備工藝的簡單性，即納米乳的易形成性和納米乳的穩定性，本發明選用HLB介于10 15之間的液態非離子型表面活性劑， 或者與一種HLB < 10的非離子型表面活性劑復配。可選用的表面活性劑有Tween-80、 Tween-60> Tween-20、RH-40> EL-40 和 Span-80 中的一種或幾種的混合物。本發明根據當乳化油相所需的表面活性劑的HLB值與表面活性劑相近時，所形成的乳狀液穩定的原則，選用的油脂有肉豆蘧酸異丙酯、液體石蠟、維生素E油、霍霍巴油、 三醋酸甘油酯、乙酸乙酯、杏仁油、小麥胚芽油、橄欖油、蓖麻油中的一種或幾種的混合物。大部分納米乳的形成都需要加入助表面活性劑，其作用主要有降低油水間界面張力、增加界面膜的流動性、調節表面活性劑的HLB值等。本發明選用的助表面活性劑有 無水乙醇、乙二醇、1，2-丙二醇、丙三醇、PEG 200、PEG 400、PEG 600中的一種或幾種的混合物。本發明還有一個目的是提供上述治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物的制備方法，其特征在于，具體包括下列步驟
1)稱取特比萘芬、丁香酚、紅霉素、油、表面活性劑、助表面活性劑、蒸餾水，備用；
2)將特比萘芬、丁香酚、紅霉素加入助表面活性劑中完全溶解；
3)將油加入步驟2)制備的溶液中攪拌均勻；
4)再將表面活性劑加入步驟2)制備的溶液中，攪拌均勻，在20°C 25°C下緩慢加入蒸餾水充分攪拌，直至形成澄清透明、粘度小具有流動性的黃色或無色透明的復方特比萘芬納米乳。本發明的復方特比萘芬納米藥物具有治療動物真菌性皮膚病、細菌性皮膚病、寄生蟲性皮膚病的功能。用法局部外涂，每天I 2次，連續I 2周。本發明經透射電子顯微鏡檢測，液滴直徑分布在I IOOnm之間，外觀為黃色或無色透明液體，具有很好的穩定性
I.光穩定性
將本發明復方特比萘芬納米藥物裝入玻璃瓶中，密封，置于室溫中，光照10d，于Id、 3d、5d、7d、10d取樣檢測。結果表明，復方特比萘芬納米乳外觀仍然澄清透明，無混濁、分層、沉淀等現象，粒徑保持在InnTlOOnm之間。2.溫度穩定性
將適量本發明復方特比萘芬納米藥物裝入玻璃瓶中，密封，分別置于4°C，25°C和37°C 三種溫度條件下留樣考察30d，每隔5d取樣觀察。結果表明，該復方特比萘芬納米藥物在此三種溫度條件下均保持澄清透明，未見分層、渾濁和沉淀的現象。3.抗冷凍穩定性
將本發明復方特比萘芬納米乳于_4°C保存一周，取出后恢復至室溫。該復方特比萘芬納米藥物在-4°C時成固體，恢復至室溫后其恢復至透明，且放置一周后仍澄清透明。4.加速穩定性
將本發明復方特比萘芬納米藥物置于離心管中，于15000rpm離心20min，觀察結果，發現其未分層，仍澄清透明。本發明的治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物與現有技術相比，具有以下優點
1)熱力學穩定性好，貯存穩定性高，久置不分層，經離心加速試驗仍未分層；
2)本發明屬于納米級藥物，外觀澄清透明，乳液液滴分散度良好，生物利用度高；
3 )本發明藥物能夠同時治療寵物真菌性、細菌性及寄生蟲性皮膚病，使用方便，療效顯著。4)制備工藝簡單，適合規模化生產。
圖I是本發明復方特比萘芬納米藥物的透射電鏡圖。
具體實施例方式以下通過試驗例進一步闡述本發明說述藥物的有益效果，這些試驗例包括本發明藥物的透射電子顯微鏡觀察試驗、體外藥效試驗和臨床療效試驗。試驗例I本發明復方特比萘芬納米藥物透射電子顯微鏡觀測
本發明藥物用透射電子顯微鏡進行微觀形態觀察，結果顯示見圖1，圖I是復方特比萘芬納米乳透射電鏡照片，顯示復方特比萘芬納米乳滴呈球形且分布均勻、分散型良好，粒徑均小于IOOnm。試驗例2本發明復方特比萘芬納米藥物體外抗菌活性試驗
采用微量稀釋法測定藥物對金黃色葡萄球菌、中間葡萄球菌、溶血性鏈球菌(菌種均來自西北農林科技大學動醫學院微生物實驗室)的最小殺菌濃度(MBC)和最低抑菌濃度 (MIC)。試驗設復方特比萘芬納米乳組、紅霉素溶液組、硫酸新霉素溶液組。方法取無菌微孔板，第I孔加入180 μ L 2Χ 105CFU/mL的菌液，其余每孔均加 100 μ L，加至14孔，在第I孔內加入濃度為640μ g/mL的復方特比萘芬納米乳20 μ L，吹打混勻后吸取100 μ L加入第2孔中，同法依次稀釋至第13孔，棄去100 μ L，第14孔為菌液對照，第15孔只加藥液做藥物對照。37°C培養16 24h后觀察結果。以無細菌生長的最低濃度為MIC，將所有完全清晰無細菌生長孔內液體移種于瓊脂平板內，用滅菌玻棒推勻， 經37°C培養過夜，菌落數不超過5個的平板的最低藥物濃度即為該藥物的MBC。同法測定對照藥物紅霉素溶液和硫酸新霉素溶液的MBC和MIC。
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體外抗菌活性試驗表明，復方特比萘芬納米乳對金黃色葡萄球菌的MIC、MBC分別為O. 0625 μ g /mL和O. 125 μ g /mL,顯著低于紅霉素和硫酸新霉素；對中間葡萄球菌的 MIC、MBC分別為O. 5 μ g /mL和I μ g /mL，較紅霉溶液小，與硫酸新霉素溶液相當；對溶血性鏈球菌的MIC、MBC分別為O. 0156 μ g /mL和O. 0625 μ g /mL,顯著低于紅霉素和硫酸新霉素，表明復方特比萘芬納米乳體外抗菌作用強于紅霉素和硫酸新霉素。結果見表I。表I最小殺菌濃度(MBC)和最低抑菌濃度(MIC)(單位μ g /mL)
試驗例3本發明復方特比萘芬納米藥物的離體殺螨試驗
刮取自然感染螨蟲的家兔耳道內長滿血痂的痂皮和表皮患部皮屑，并用鑷子取出置于玻璃平皿內，平皿邊緣涂少量螨蟲趨避劑，稍微加溫，用挑蟲針挑取活性強的螨蟲供試驗用。在解剖鏡下進行蟲體鑒定，鑒定其為兔癢螨及兔疥螨。用分離針挑取螨蟲于凹形載玻片上，滴加供試藥兩滴，將挑選的螨蟲8只置于藥液中并加蓋玻片，在倒置顯微鏡下持續觀察24h，每隔5min觀察一次，每次持續觀察2min， 對每組觀察直至8只螨蟲全部死亡，記錄螨蟲死亡時間。試驗共分為5組，其余四組分別為蒸餾水試驗組，殺螨靈水溶液組、伊維菌素注射液組和1% 丁香酚溶液組，試驗方法同復方特比萘芬納米乳組。試驗結果不同藥液處理24h結果顯示，復方特比萘芬納米乳殺螨時間為3 4min， 低于600倍稀釋殺螨靈水溶液，與伊維菌素殺螨效果相當，強于1% 丁香酚溶液。結果見表 2。表2離體殺螨效果比較結果
權利要求
1.一種治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物，其特征在于，該藥物的粒徑為Inm IOOnm,由下列質量百分比的原料組成特比萘芬O. 1% 10%、丁香酚O. 1% 15%、紅霉素O. 1% 5%、油O. 1% 10%、表面活性劑10% 40%、助表面活性劑4% 20%、余量為蒸餾水，上述原料的質量百分比之和為100% ；所述表面活性劑是 Tween-80、Tween-60、Tween-20、RH-40、EL_40 和 Span-80 中的一種或幾種的混合物；所述助表面活性劑是無水乙醇、乙二醇、1，2-丙二醇、丙三醇、PEG 200、PEG 400、PEG 600中的一種或幾種的混合物；所述油是肉豆蘧酸異丙酯、液體石蠟、維生素E油、霍霍巴油、三醋酸甘油酯、乙酸乙酯、杏仁油、小麥胚芽油、橄欖油、蓖麻油中的一種或幾種的混合物。
2.根據權利要求I所述的治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物，其特征在于，由下列質量百分比的原料組成特比萘芬O. 2% 8%、丁香酚O. 2% 12%、紅霉素O. 2% 4. 5%、油O. 5% 8%、表面活性劑15% 35%、助表面活性劑5% 15%、余量為蒸餾水，上述原料的質量百分比之和為100%。
3.一種治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物，其特征在于，由下列質量百分比的原料組成特比萘芬2%、丁香酚3%、紅霉素1%、油2%、表面活性劑20%、助表面活性劑10%、蒸餾水62%。
4.一種治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物，其特征在于，由下列質量百分比的原料組成特比萘芬O. 2%、丁香酚O. 2%、紅霉素O. 1%、乙酸乙酯8%、Tween-80為30%、乙二醇6%、 蒸懼水55. 5%ο
5.一種治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物，其特征在于，由下列質量百分比的原料組成特比萘芬6%、丁香酚1%、紅霉素1%、三醋酸甘油酯2%、Tween-80為20%、無水乙醇10%、 蒸餾水60%。
6.一種治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物，其特征在于，由下列質量百分比的原料組成特比萘芬O. 5 %、丁香酚12%、紅霉素O. 5%、乙酸乙酯2%、Tween-80為10%、無水乙醇 10%、蒸餾水65%。
7.一種治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物，其特征在于，由下列質量百分比的原料組成特比萘芬1%、丁香酚1%、紅霉素3%、蓖麻油1%、RH_40為40%、無水乙醇8%、蒸餾水46%。
8.一種治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物，其特征在于，由下列質量百分比的原料組成特比萘芬2%、丁香酚2%、紅霉素1%、霍霍巴油1%、Tween-80為20%、無水乙醇4%、蒸餾水 70%ο
9.權利要求I所述治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物的制備方法，其特征在于，具體包括下列步驟1)稱取特比萘芬、丁香酚、紅霉素、油、表面活性劑、助表面活性劑、蒸餾水，備用；2)將特比萘芬、丁香酚、紅霉素加入助表面活性劑中完全溶解；3)將油加入步驟2)制備的溶液中攪拌均勻；4)再將表面活性劑加入步驟2)制備的溶液中，攪拌均勻，在20°C 25°C下緩慢加入蒸餾水充分攪拌，直至形成澄清透明、粘度小具有流動性的黃色或無色透明的復方特比萘芬納米乳。
全文摘要
本發明公開了一種用于治療皮膚病的復方特比萘芬納米藥物，該藥物的粒徑為1nm～100nm，由下列組分的原料組成特比萘芬0.1%～10%、丁香酚0.1%～15%、紅霉素0.1%～5%、油0.1%～10%、表面活性劑10%～40%、助表面活性劑4%～20%、余量為蒸餾水，上述成分的質量百分比之和為100%。該藥物顆粒小、粘度小、流動性好、性質穩定，有較好的經皮滲透性，不僅對寵物皮膚真菌病有較強療效，而且對寵物細菌性皮膚病及寄生蟲性皮膚病均有強有力的治療作用，本發明產品制備簡單、耗能低、不需特殊設備就能大量生產。在寵物皮膚病的治療方面具有廣闊應用前景。
文檔編號A61K31/7048GK102600192SQ20111024611
公開日2012年7月25日 申請日期2011年8月25日 優先權日2011年8月25日
發明者劉梅雪, 歐陽五慶, 歐陽伸雨 申請人:西北農林科技大學