專利名稱：用于人凝血因子Ⅷ制劑的干熱處理方法及其穩定劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，更具體的，本發明涉及一種可防止人凝血因子VIII制劑在80°C,72h干熱滅活過程中，一種用于人凝血因子VIII制劑的干熱處理方法和干熱處理穩定劑。
背景技術：
人凝血因子VIII (Human Coagulation Factor VIII)稱“抗血友病球蛋白”，是體內內源性凝血系統的重要成分之一。因子VIII和因子IXa、磷脂和鈣離子形成復合物，在因子X的激活過程中起輔因子作用。人凝血因子VIII制劑是防治甲型血友病人出血的特效血液制劑。由于血液制品的特殊性，容易攜帶艾滋病、甲肝、乙肝等病毒，如果病毒滅活不徹底，那么很容易造成病人的感染，因此病毒滅活是生產人凝血因子VIII的一個關鍵步驟。目前報道現在巴氏滅活、S/D病毒滅活法、干熱滅活法等多種病毒滅活方法都已應用于人凝血因子VIII因子濃制劑的生產過程中，如德國Centeon Pharma GmbH公司的產品Humate-P即采用的巴氏滅活。在上述病毒滅活方法中，S/D病毒滅活方法反應條件相對比較溫和，不會造成人凝血因子VIII的效價損失，但是其作用原理限制了它只能作為脂包膜病毒的滅活，僅用S/D法處理的凝血因子制品仍有傳播甲肝、B19等非脂包膜病毒的可能。目前常用的巴氏滅活法在內的溫度滅活法相對較為可靠，尤其是干熱滅活比較穩定。專利號為CN1181974公開一種低糖分，穩定的，不含白蛋的一種重組體凝血因子制劑。但此重組體凝血因子制劑不含有人血白蛋白的rFVIII (重組人凝血因子VIII)的穩定劑，此重組人凝血因子VIII不采用干熱病毒滅活工藝。但是，在干熱滅活過程中發現在沒有穩定劑的情況下，人凝血因子VIII效價損失十分嚴重，最多可能會造成50%的效價損失。這不僅造成了大量的經濟損失，同時也增加了生產成本，因此改變人凝血因子VIII的配方，降低效價損失是十分必要的。
發明內容
為解決上述技術問題，本發明目的在于克服或改善現有的問題，本發明提供了一種人凝血因子VIII制劑的干熱處理的穩定劑。為實現上述目的，本發明技術方案為一種用于人凝血因子VIII制劑的干熱處理方法，其特征在于，在凍干步驟前，在所述的人凝血因子VIII溶液中加入所述穩定劑，其中所述穩定劑包括人血白蛋白、Ca2+可溶解鹽、氨基酸、檸檬酸三鈉和氯化鈉，其中所述的人血白蛋白濃度百分比為0.5%-5%， Ca2+濃度為 lmmol/L。本發明的另一方面，所述的人血白蛋白濃度百分比為0. 5% -2%。本發明的另一方面，所述的氨基酸為甘氨酸、賴氨酸或其鹽。本發明的另一方面，在凍干步驟前，在所述的人凝血因子VIII溶液中，加入所述的穩定劑含有0.1-10%的甘氨酸。
本發明的另一方面，在凍干步驟前，在所述的人凝血因子VIII溶液中，加入所述的氯化鈉含量為0. 01mmol/L-0. Immol/L0本發明的另一方面，所述方法為80°C，72小時條件下干熱滅活。本發明的另一實施方式，所述的穩定劑包括人血白蛋白、Ca2+可溶解鹽、氨基酸、檸檬酸三鈉和氯化鈉，其中所述的人血白蛋白濃度百分比為0.5% -5%, Ca2+濃度為lmmol/ L0本發明的另一方面，所述的人血白蛋白濃度百分比為0. 5% -2%。本發明的另一方面，所述的氨基酸為甘氨酸、賴氨酸或其鹽類，所述的穩定劑含有 0. 1-10%的甘氨酸。本發明的另一實施方式，一種干熱處理穩定劑在人凝血因子VIII制劑中的應用。人凝血因子VIII是一種用健康人血漿為原料的血液制品，需采用干熱病毒滅活工藝滅活可能存在的病毒。本發明的有益效果為本發明提供的穩定劑使制劑在80°C，72小時干熱處理的過程中，人凝血因子VIII 的損失減少，活性回收率可提高5% -50%。在人凝血因子VIII制劑中加入以上所述穩定劑，既能達到病毒滅活的效果，又能減少凝血因子VIII的活性損失。本發明選擇在80°C 72小時下干熱處理，對脂包膜和非脂包膜病毒都有效，且干熱處理往往是最后的步驟，成本較低，可操作性和可控制性較強。
具體實施例方式下面結合實例對本發明穩定劑對人凝血因子VIII制劑在80°C，72小時干熱滅活過程中的保護作用做詳細的說明。實施例1 加入穩定劑后病毒滅活驗證(1)人凝血因子VIII的制備0-4°C下離心血漿得到冷沉淀，溶解冷沉淀，經過酸沉淀及澄清過濾，加入S/D溶液至tween80終濃度1%，TNBP 0. 3%，24j6°C下保溫6小時，然后經過柱層析得到含有人凝血因子VIII的蛋白溶液，所得洗脫液用含有0. 01-0. IMNaCl,0. OlM檸檬酸三鈉， 0. 1%-0. 349%賴氨酸鹽酸鹽，0. -10%甘氨酸的透析液進行超濾脫鹽透析，得到人凝血因子VIII的濃縮液。(2)加入穩定劑，制備人凝血因子VIII凍干劑在濃縮液中加入20 %人血白蛋白至溶液中濃度為2 %，加CaCl2至Ca2+濃度至 lmmol/L0除菌，分裝，凍干后經過80°C/72小時病毒干熱滅活即為成品。冷凍干燥前。(3)病毒滅活分別取三批人凝血因子VIII進行病毒滅活實驗，三批人凝血因子VIII病毒滅活實驗結果如下表1人凝血因子VIII80°C 72小時病毒滅活結果
權利要求
1.一種用于人凝血因子VIII制劑的干熱處理方法，其特征在于在凍干步驟前，在所述的人凝血因子VIII溶液中加入所述穩定劑，其中所述穩定劑包括人血白蛋白、Ca2+可溶解鹽、氨基酸、檸檬酸三鈉和氯化鈉，其中所述的人血白蛋白濃度百分比為0. 5% -5%, Ca2+ 濃度為lmmol/L。
2.根據權利要求1中所述的方法，其特征在于所述的人血白蛋白濃度百分比為 0. 5% -2%。
3.根據權利要求1中所述的方法，其特征在于所述的氨基酸為甘氨酸、賴氨酸或其鹽類。
4.根據權利要求3中所述的方法，其特征在于在凍干步驟前，在所述的人凝血因子 VIII溶液中，加入所述的穩定劑含有0. 1-10%的甘氨酸。
5.根據權利要求1中所述的方法，其特征在于在凍干步驟前，在所述的人凝血因子 VIII溶液中，加入所述的氯化鈉含量為0. 01mmol/L-0. lmmol/L。
6.根據權利要求1中所述的方法，其特征在于所述方法是在80°C，72小時條件下干熱滅活。
7.一種用于人凝血因子VIII制劑的干熱處理穩定劑，其特征在于所述的穩定劑包括人血白蛋白、Ca2+可溶解鹽、氨基酸、檸檬酸三鈉和氯化鈉，其中所述的人血白蛋白濃度百分比為 0. 5% -5%，Ca2+濃度為 lmmol/L。
8.根據權利要求7中所述的穩定劑，其特征在于所述的人血白蛋白濃度百分比為 0. 5% -2%。
9.根據權利要求7中所述的穩定劑，其特征在于所述的氨基酸為甘氨酸、賴氨酸或其鹽類，所述的穩定劑含有0.1-10%的甘氨酸。
10.根據權利要求7-9中任一所述的干熱處理穩定劑在人凝血因子VIII制劑中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種用于人凝血因子VIII制劑的干熱處理方法，在凍干步驟前，在所述的人凝血因子VIII溶液中加入所述穩定劑，其中所述穩定劑包括人血白蛋白、Ca2+可溶解鹽、氨基酸、檸檬酸三鈉和氯化鈉，其中所述的人血白蛋白濃度百分比為0.5％-5％，Ca2+濃度為1mmol/L。本發明還公開了一種用于人凝血因子VIII制劑的干熱處理穩定劑。本發明選擇在80℃，72小時下干熱處理，對脂包膜和非脂包膜病毒都有效，且干熱處理往往是最后的步驟，成本較低，可操作性和可控制性較強。
文檔編號A61K38/37GK102430116SQ201110240278
公開日2012年5月2日 申請日期2011年8月19日 優先權日2011年8月19日
發明者熊可強, 閻晨 申請人:上海新興醫藥股份有限公司