專利名稱：鄰吡啶酰肼衍生物及其制法和藥物組合物與用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及式I和II所示的I-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙叉餅擬基)卩比唳_4_氧基)苯基)服和I-(4-氯-3-ニ氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙基餅羰基)吡啶-4-氧基)苯基)脲，其可藥用鹽，及其制備方法，含有ー個或多個這化合物的組合物，和該類化合物在治療與蛋白激酶有關的疾病如免疫失調和腫瘤疾病方面的用途。
背景技術：
最近幾年，由于對酶和其它ー些與疾病相關的生物分子的認識的提高，極大地促進了治療疾病的新藥的發現或發展，蛋白激酶就是ー種廣泛研究的重要的ー類，它是ー個大家族，與細胞內各種信號轉導過程的控制有夫。由于它們的結構和催化功能的保守性它們被認為從ー個共同的祖先基因進化而來。幾乎所有激酶都含有ー個相似的250-300個氨基酸催化域。這些蛋白激酶按照磷酸化底物的不同被分成多個家族，如蛋白酪氨酸激酶，蛋 白絲氨酸/蘇氨酸激酶，類脂等。一般，蛋白激酶通過影響一個磷酰基從ー個核苷三磷酸轉移到ー個與信號轉導途徑相關的蛋白受體來介導細胞內信號轉導。這些磷酰化事件作為分子開關調節靶蛋白的生物功能，最終被激發對各種細胞外和其它刺激作出反應。激酶存在于多層信號轉導路徑中，受體酪氨酸激酶位于腫瘤血管生成信號轉導路徑的上游及腫瘤細胞信號轉導路徑的上游。絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶位于腫瘤及腫瘤血管生成細胞的信號轉導路徑的下游。研究表明通過在上游阻滯VEGFR及TOGF受體，在下游阻滯Raf/MEK/ERK，能夠同時減少腫瘤的血管生成并抑制腫瘤細胞的復制，從而阻礙腫瘤的生長。Raf激酶是由原癌基因raf編碼的蛋白產物，由648個氨基酸組成，分子量為70000 74000D，其結構中含有3個保守區，分別為CRl (61 194D)、CR2 (254 269D)、CR3 (335 627D)。CRl位于其分子氨基端，富含半胱氨酸，含有鋅指樣結構，與蛋白激酶C的配體結合區結構相似，是活化的Ras與Raf-I蛋白激酶結合的主要部位。CR2亦靠近氨基端，富含絲氨酸和蘇氨酸。CR3位于其分子的羧基端，是蛋白激酶的催化功能區。作為Ras/Raf/MEK/ERK通路中的一個關鍵激酶，Raf可通過依賴或不依賴Ras的方式發揮其信號傳導調節作用。作為Raf激酶的下游底物，激活的MEK磷酸化ERK，調節各種細胞功能。一旦該通路發生過度激活，則引起細胞増殖加速與細胞生存期延長，從而導致腫瘤的生成。研究表明，80%以上的癌基因和原癌基因存在于人的癌編碼蛋白酪氨酸激酶(PTK)中，人類各種癌癥的產生和發展是和來自于蛋白酪氨酸激酶的異常細胞信號傳導有關的，惡性細胞的ー個主要特點是酪氨酸激酶活性的増加。因此，抑制酪氨酸激酶的活化或阻斷其信號傳導路徑成為控制腫瘤的新途徑。內皮生長因子受體(EGFR)是ー種蛋白酪氨酸激酶受體(RTK),位于第7號染色體pl3 q22區，全長200kb，由28個外顯子組成，編碼1186個氨基酸，其糖蛋白分子量約170kDa，廣泛分布于除成熟骨骼肌細胞、體壁內胚層和造血組織以外的所有組織細胞。EGFR家族有 4 個結構相似的受體分子ErbBl (EGFR)、ErbB2 (HER2)、ErbB3 (HER3)、ErbtM (HER4)，同屬于受體酪氨酸激酶(RTKS)。它們都含有I個胞外配體結合結構域，I個跨膜結構域和I個具有酪氨酸激酶活性的胞漿結構域。其胞內區域與erbB癌基因產物高度同源。EGFR的活化可以通過配體誘導的受體ニ聚化作用實現。ErbB受體家族中，除了 HER2タト，其他成員都有其相應配體，各種各樣的配體是由對應的跨膜蛋白前體經過蛋白水解而來的，都有I個EGF樣結構域。與EGFR特異性結合的配體包括表皮生長因子(EGF)、轉化生長因子a (TGFa )、雙向調節蛋白(AR)、P -細胞素(BTC)、肝素結合EGF樣生長因子(HB-EGF)、表皮調節素(EPR)等。胞外配體EGF(內皮生長因子)與ErbB2特異性結合后引起ErbB2構型改變，導致受體ニ聚化從而活化它們的胞漿位點。ErbB2的胞內區域酪氨酸磷酸化后進而活化第二信使轉導，通過MAPK(絲裂原蛋白激酶)途徑誘導細胞外信號的活化(調節激酶Erkl和Erl):通過I3DK (磷脂酰肌醇激酶)途徑活化信號轉導子JAK ;進一步啟動STATl、STATS3的轉錄活化子；另一方面，細胞內信號通過6rb2(生長因子受體結合蛋白)活化下游的ERK(細胞外調節蛋白激酶)，進而介導ATF，NF-kB，Ap-l，C-fos和C-Jun的轉錄活化。這些都是EGFR所介導的生長作用或致癌的基本下游途徑。異常的EGFR活化機制包括受體本身的擴增、受體配體的過表達、活化突變以及負性調節途徑的缺乏，因此EGFR誘導癌癥至少通過3種機制EGFR配體的過表達，EGFR的擴增或EGFR的突變活化。在這3種機制中，EGFR的突變活化是導致腫瘤細胞異常生物學行為的最主要因素。EGFR基因的某些突變會導致受體效果增強和持續時間的延長。Lynch等證明變異受體并不影響受體蛋白質的穩 定性，通過Tyrl068磷酸化測定EGFR活化發現，野生型受體的活化15min即下調，而變異受體表現出比正常EGFR高2倍的效應，且超過3h的持續活化。EGFR突變并沒有影響腫瘤細胞與TKI (酪氨酸激酶抑制劑)結合的能力。TKI對那些因突變而導致EGFR活化的原因可以通過oncogeneaddiction模型來解釋。通過Ras.Raf-MEK. ERK1/ERK2、PI3K. Akt、STAT3/STAT5 通路，EGFR 突變高度激活下游信號，啟動 EGFR調節抗凋亡和生存信號，導致癌癥細胞變得依賴此信號以維持其生存--即具有癌基因(突變的EG依賴的特征；當使用特異性TKI阻斷EGFR信號后，將消除其増殖性影響和輸出生存信號，導致腫瘤細胞死亡。因此認為，癌癥細胞中信號轉導通路的變異是出現藥物高敏感的基礎。相反，正常細胞或非EGFR依賴的腫瘤細胞(對Gefitinib、Erlotinib無反應)不受影響。因為生存還受其他基因驅使，或者在EGFR抑制后能被其他的RTK所彌補。在癌基因依賴模型中，細胞癌癥依賴的癌基因可以同時產生凋亡和生存2個信號的輸出。一般隋況下，癌基因被激活。生存信號占主導地位，而凋亡信號處于相對低水平，使癌癥細胞維持生長和増殖。當癌基因急性失活后，在關鍵的窗ロ期，首先是生存迅速大幅度減弱。而凋亡信號緩慢下降。因此導致信號不平衡(凋亡信號占主導)，啟動細胞發生不可逆的凋亡。研究發現用酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼(gefitinib)/厄洛替尼(Erlotinib)治療NSCLC患者，大約10%患者表現出迅速而滿意的臨床效果，進一歩研究發現這些患者絕大部分存在EGFR基因突變。在目前已知與EGFR-TKI (內皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑)有關的基因突變局限于如下幾種G719X(18外顯子)，E746-A450缺失(19外顯子)，L858R(21外顯子)，L861Q(21 外顯子)，T790M(20 外顯子)和 D770-N771 (20 外顯子)。其中 E746-A450缺失和L858R的突變與TKI的療效高度相關。Mitsudomi T，Yatabe Y對568例非小細胞肺癌患者的分析結果在所有非小細胞肺癌患者中大約90%的EGFR基因突變集中于19或21外顯子中，其中19外顯子的缺失突變及21外顯子中的點突變的患者服用EGFR-TKI的有效率均達到70%以上。近來的研究提示，EGFR外顯子20的插人性突變(D770-N771)可以使受體對EGFR—TKI的敏感性降低100倍，臨床上也發現具有此突變的患者對EGFR—TKI治療反應不明顯。對外顯子20的擴增產物進行亞克隆分析發現，T790M突變是ー個堿基對發生從胞嘧啶核苷(C)到胸腺嘧啶核苷(T)的改變，在蛋白水平就是EGFR酪氨酸激酶功能域790位點的蘇氨酸被蛋氨酸取代CT790M)，這種突變可使EGFR重新處于被激活狀態，從而導致TKI的獲得性耐藥，耐藥的原因是突變導致EGFR結構發生變化，使TKI與其結合出現位阻效應。有研究提示KRAS突變可能是Gefitinib、Erlotinib原發耐藥的原因。Helenalinardou的Meta分析中總結了 1008例NSCLC患者的TKI治療效果，在發生K_ras突變的165名患者中，94%的患者對TKI治療無明顯反應。一般來講，KRAS和EGFR突變NSCLC是相互排斥的.在不同的腫瘤亞型中存在明顯差異EGFR突變主要見于不吸煙者，而KRAS突變更常見于吸煙相關的癌癥。因為KRAS突變總是發生于具有野生型EGFR的NSCLC中，所以難以區分對EGFR-TKI不敏感到底是因為KRAS突變，還是因為無EGFR突變。血管內皮生長因子受體(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)家族包含有3種亞型，即VEGFR-1 (同時也可以寫作Flt-1)、VEGFR-2 (KDR/Flk-1)和VEGFR-3(Flt — 4)，此外，還有神經菌毛蛋白(neuropilin) I和2兩個協同受體。其中VEGFR-I主要分布在血管內皮細胞、造血干細胞、巨噬細胞和單核細胞，可與VEGF-A、VEGF-B和PlGF結合，主要與造血干細胞的生長調節有夫。VEGFR-2主要分布在血管內皮細胞和淋巴內皮細胞中，可以與VEGF-A、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E結合。VEGF刺激內皮細胞增殖、增加血管通透性和新血管生成的作用主要通過結合和激活VEGFR-2來實現.與VEGFR-2相比，VEGFR-I與VEGF的親和カ高10倍，但調節內皮細胞的活性低很多，可能是對VEGFR-2活性具有負向調節作用。VEGFR-3主要表達在淋巴管內皮細胞，能與VEGF-C和VEGF-D結合，調控淋巴內皮細胞的生長。研究表明當腫瘤直徑大于2mm時，需要有新生血管來提供營養物質和排泄代謝廢物。VEGF/VEGFR信號通路在腫瘤血管的生成中起關鍵性作用，可以通過阻斷或干擾VEGF/VEGFR信號通路抑制血管的新生，以達到控制腫瘤的生長的療效。與傳統的細胞毒性藥物相比，以VEGF/VEGFR-2為靶標的抗腫瘤藥物有很大的優勢.在正常生理條件下，血管新生只在創傷愈合和月經周期等生理活動中起作用，所以使用抗血管生成藥物治療腫瘤，對人體毒性作用小，血管內皮細胞與血液直接接觸，使藥物更加容易到達作用位點.通過目前對VEGF/VEGFR信號通路作用機制的了解，可以得到以下幾種可能的抑制劑研究方向
a.利用單克隆抗體抑制VEGF或VEGFR，使其不能特異性結合，阻斷信號傳導。當然也可以利用基因技術抑制它們的表達，減弱其活性。b.設計特定的小分子抑制劑，結合到VEGFR胞外VEGF結合區域，競爭性拮抗VEGF，同理，也可以是結合到VEGF上VEGFR的特定結合域，競爭性拮抗VEGFR。c.抑制VEGFR的胞內激酶域，主要是ATP的結合位點，競爭性地拮抗ATP，使其無法提供磷酸基。d.抑制胞內的VEGFR下游信號的關鍵性蛋白.考慮到患者的依從性，能ロ服的小分子抑制劑可能具有良好的前景。血小板衍生生長因子(platelet, derived growth factor, F1DGF)是誘導和促進血管形成作用最強、最專ー的血管生長因子之一。TOGF主要通過與TOGF受體(TOGFR)結合，進而激活蛋白激酶信號轉導通路而發揮作用。TOGFR由a和P兩種亞基構成，共有3種ニ聚體O3DGFR-a a、a 00 ￠)，其中0 ^ ニ聚體受體(I3DGFR-P)最為重要，其分子量約為 180 190ku,屬于酪氨酸激酶受體(receptor tyrosine kinase, RTK)家族。F1DGFR 在腫瘤形成和發展過程中也起著重要的作用。PDGFR- ^的過度表達或過度活化均能刺激腫瘤內血管生成，促進腫瘤生長。PDGFR-^是腫瘤血管內皮細胞的分子標志之一，在腫瘤新生血管內皮細胞中高表達，并與某些腫瘤的生長、轉移及預后密切相關。MWroGFR-P是ー個較為理想的腫瘤靶向治療靶標。Raf激酶及其介導的Raf/MEK/ERK通路在腫瘤進展及轉移過程中具有顯著作用，且與諸多生長因子包括表皮生長因子(EGF)、血管內皮生長因子(VEGF)及血小板生長因子(PDGF)等密切相關。人們想了多種辦法來調節這一條通路，其中包括抑制Ras蛋白的法尼基化、抑制Rat" -I激酶(也稱C-RAF激酶)的表達、抑制Raf激酶和MEK激酶的活性。上述的方法不僅抑制了 ERK的信號轉導而且成功抑制了異種移植腫瘤的生長。此外，現有證據顯示，大部分腫瘤并非由単一信號傳導通路所支配，針對多靶點進行抑制可能取得更大療效。許多疾病是和蛋白激酶介導事件引發的不正常的細胞反應相關聯的。這些疾病包 括，但不限于，腫瘤，炎癥疾病，免疫疾病，骨疾病，代謝疾病，神經疾病，心腦血管疾病，激素相關的疾病等。因此發現和尋找蛋白激酶抑制劑作為治療藥物是非常必要的。雖然許多發明對本領域作出了很大貢獻，但為改進藥物治療效果，本領域仍在繼續研究。
發明內容
本發明的目的在于提供1-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙叉肼羰基)卩比唳_4_氧基)苯基)服和I-(4-氯-3-ニ氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙基餅擬基)吡啶-4-氧基)苯基)脲，其可藥用鹽。本發明的另一目的在于提供I- (4-氯-3-三氟甲基苯基)-3- (4- (2- (2_異丙叉肼擬基)卩比唳~4~氧基)苯基)服和I- (4-氯-3- ニ氟甲基苯基)-3- (4- (2- (2-異丙基餅擬基)批唳_4_氧基)苯基)服的制備方法。本發明的再一目的在于提供ー種含有1-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙叉餅擬基)卩比唳-4-氧基)苯基)服和1-(4-氯-3- ニ氟甲基苯基)-3- (4- (2- (2-異丙基肼羰基)吡啶-4-氧基)苯基)脲這種化合物的藥物組合物。本發明的又一目的在于提供該類化合物在抗癌，及與蛋白激酶相關疾病的藥物中的用途。為了完成本發明之目的，可采用如下技術方案本發明是涉及具有下列結構的I-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2_異丙叉餅擬基)卩比唳_4_氧基)苯基)服和I-(4-氯-3-ニ氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙基餅擬基)批唳~4~氧基)苯基)服
CF3O 'Y"CF3O
III或其可藥用鹽。本發明還公開了制備本發明化合物的方法，包括如下步驟
I)路線 I
權利要求
1.式I和II所不的1-(4-氯-3-ニ氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙叉餅擬基)P比ロ定-4-氧基)苯基)服和1-(4-氯-3- ニ氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙基餅擬基)P比啶-4-氧基)苯基)脲及其可藥用鹽
2.依據權利要求I的化合物其可藥用鹽，其特征在于，所述的可藥用鹽選自鹽酸鹽，氫溴酸鹽，磷酸鹽，硫酸鹽，甲磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽，こ酸鹽，三氟こ酸鹽，水楊酸鹽，氨基酸鹽，枸杞酸鹽，馬來酸鹽，酒石酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，乳酸鹽。
3.制備權利要求I的所述化合物的及其可藥用鹽，包括如下步驟
4.制備權利要求I的所述化合物的及其可藥用鹽，包括如下步驟
5.制備權利要求I的所述化合物的及其可藥用鹽，包括如下步驟
6.ー種藥物的組合物，其特征在于，含有權利要求1-2任ー項的化合物及其可藥用鹽和制劑學可接受的載體。
7.權利要求1-2任ー項的化合物及其可藥用鹽的化合物在制備預防和治療與蛋白激酶有關的疾病的藥物中的應用。
8.權利要求1-2任ー項的化合物及其可藥用鹽的化合物在制備預防和治療與酪氨酸激酶有關的疾病的藥物中的應用。
9.權利要求1-2任ー項的化合物及其可藥用鹽的化合物在制備預防和治療與Raf 激酶有關的疾病的藥物中的應用。
10.根據權利要求10的應用，其特征在于，所述的與Raf 激酶有關的疾病是腫瘤，免疫失調、神經疾病。
11.根據權利要求11的應用，其特征在于，所述的腫瘤疾病是肝癌，腎癌，肺癌、胰腺癌、結直腸癌、膀胱癌及乳腺癌，卵巣癌，扁平細胞癌，神經膠質瘤，頭頸部癌。
全文摘要
本發明涉及式I和II所示的1-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙叉肼羰基)吡啶-4-氧基)苯基)脲和1-(4-氯-3-三氟甲基苯基)-3-(4-(2-(2-異丙基肼羰基)吡啶-4-氧基)苯基)脲，其可藥用鹽，及其制備方法，含有一個或多個這化合物的組合物，和該類化合物在治療與蛋白激酶有關的疾病如免疫失調和腫瘤疾病方面的用途。
文檔編號A61P35/00GK102786469SQ20111012911
公開日2012年11月21日 申請日期2011年5月18日 優先權日2011年5月18日
發明者馮志強, 唐克, 李燕, 田康, 陳曉光 申請人:中國醫學科學院藥物研究所