一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物及其制備方法

專利名稱：一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于美容保健和醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
關(guān)于人體表皮的技術(shù)背景表皮是人體的第一道防護(hù)屏障，其主要組成細(xì)胞為角朊細(xì)胞，為了完成其屏障功能，角朊細(xì)胞必須進(jìn)行復(fù)雜而且受到嚴(yán)密調(diào)控的分化過程，最終形成包括基底層、棘層、顆粒層、透明層及角質(zhì)層的復(fù)層結(jié)構(gòu)。1、基底層是表皮的最底層，借基膜與深層的真皮相連?；讓蛹?xì)胞皆附在基底膜上，它是表皮中唯一可以分裂復(fù)制的細(xì)胞，并可以直接攝取微血管內(nèi)的養(yǎng)分，以補(bǔ)充細(xì)胞分裂復(fù)制之所需?；讓邮且粚影鶢钌掀ぜ?xì)胞。細(xì)胞較小、排列整齊，核呈卵圓形胞質(zhì)中常含有黑色素顆粒。矮柱狀上皮細(xì)胞之間有黑色素細(xì)胞。黑色素細(xì)胞略呈圓形，有樹枝狀突起，胞核較小，能產(chǎn)生黑色素顆粒。黑色素顆粒的多少與皮膚顏色的深淺有關(guān)。黑色素顆粒能夠吸收紫外線，使深層組織免受紫外線輻射的損害?；讓拥募?xì)胞分裂比較活躍，不斷產(chǎn)生新細(xì)胞并向淺層推移，以補(bǔ)充衰老、脫落的角質(zhì)細(xì)胞。2、棘細(xì)胞層位于基底層的淺面，由4-10層多邊形細(xì)胞組成，細(xì)胞較大，由許多棘狀突起，胞核呈圓形。較老的細(xì)胞往上送達(dá)棘細(xì)胞層。在這兒他們會擴(kuò)大呈扁平狀，并長出棘狀物，以便牢固地攀靠在一起。3、顆粒層位于棘層的淺面，由2-3層梭形細(xì)胞組成。胞質(zhì)中有大小不等的透明角質(zhì)顆粒。普通染色呈強(qiáng)嗜堿性，胞核較小，染色較淡。老化的細(xì)胞繼續(xù)被推送到顆粒層里。 至此，細(xì)胞內(nèi)已充滿著含角質(zhì)素的顆粒。隨著角質(zhì)素的增加，細(xì)胞會逐漸地角質(zhì)化而死亡。4、透明層位于顆粒層的淺面，由2-3層無核的扁平細(xì)胞組成。胞質(zhì)中含有嗜酸性透明角質(zhì)，它由顆粒層細(xì)胞的透明角質(zhì)顆粒變性而成。5、角質(zhì)層位于表皮的最淺層，由幾層到幾十層扁平無核角質(zhì)細(xì)胞組成，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)充滿嗜酸性的角蛋白，對酸、堿，摩擦等因素有較強(qiáng)的抵抗力。角質(zhì)層的表面細(xì)胞常呈小片脫落，形成皮屑。角質(zhì)層是表皮的最上層，由已經(jīng)完全角質(zhì)化的死細(xì)胞所構(gòu)成的。這些緊密相連的死細(xì)胞，構(gòu)成了最重要的保護(hù)屏障層，能防止外界化學(xué)、物理、微生物等的侵犯。關(guān)于人體表皮屏障功能的技術(shù)背景表皮位于皮膚的最外層，是和美容關(guān)系最密切的結(jié)構(gòu)，皮膚的完整性、厚度、質(zhì)地和水合程度在一定程度上決定著皮膚的美觀和皮膚的生理功能。對于各種原因(年齡、日曬、藥物、美容等)引起的角質(zhì)層面部表皮的變薄或損傷，容易導(dǎo)致皮膚的生理功能失調(diào)， 引起皮膚疾病，如皮膚潮紅、毛細(xì)血管擴(kuò)張、色素沉著、皮膚老化，甚至引起某些皮膚疾病。1、在內(nèi)外界各種因素的刺激劑、致敏劑的作用下，使表皮細(xì)胞間的間質(zhì)受到破壞， 細(xì)胞與細(xì)胞間的粘接性喪失，表皮角質(zhì)形成細(xì)胞排列紊亂、錯位。真皮和表皮內(nèi)的水分大量逸出，水分丟失。皮膚丟失水分后皮膚就干燥、缺水，潮紅，龜裂，鱗屑，嚴(yán)重者發(fā)生皸裂，出血。2、表皮屏障功能障礙，將使得表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的細(xì)胞與細(xì)胞之間的細(xì)胞間質(zhì)遭到破壞、丟失，粘合力消失，角質(zhì)形成細(xì)胞就會脫落。真皮內(nèi)和表皮水分丟失，皮膚干燥，表皮細(xì)胞更換時間就會縮短。脫落下來的角質(zhì)形成細(xì)胞是角化過度或角化不全細(xì)胞。大量角質(zhì)細(xì)胞堆積，不斷地脫落，這就成了銀屑病。3、當(dāng)表皮屏障功能喪失，大量水分丟失。表皮喪失了保濕功能，皮膚干燥、鱗屑、龜裂，形成皮膚干燥癥。表皮水分大量丟失，表皮細(xì)胞層次變薄，真皮內(nèi)膠原纖維減少，排列紊亂，從而導(dǎo)致皮膚干燥，萎癟，老化，缺乏彈性，出現(xiàn)皺紋。進(jìn)而發(fā)生皮膚灰暗，色素沉著和發(fā)生各種老年疣。4、皮膚屏障功能障礙，細(xì)胞間隙加大，皮膚完整性被破壞。從而對外界環(huán)境中各種物理，化學(xué)，微生物的刺激敏感性增高。由此引起皮膚病和皮膚干燥癥、皮膚瘙癢癥、濕疹、 異位性皮炎、銀屑病等。這些疾病可以歸結(jié)為干燥性皮膚病。因此，表皮作為人體肌膚的第一道天然屏障，對機(jī)體的保護(hù)具有以下多方面的作用。第一，能防護(hù)機(jī)械性、物理性刺激，這是因?yàn)楸砥さ慕琴|(zhì)層致密而堅(jiān)韌，在經(jīng)常受到摩擦和壓力的部位能增厚，以抵抗摩擦與壓迫。另外，表皮角質(zhì)層和色素可以防止紫外線損傷， 角質(zhì)層可將大部分日光反射回去，日曬會使角質(zhì)層增厚，此為防護(hù)紫外線的保護(hù)性反應(yīng)，而黑色素有較好的吸收和遮斷紫外線的作用，阻止紫外線穿透皮膚，使深部組織器官不致受到傷害；第二，可以防護(hù)化學(xué)物質(zhì)的腐蝕，這是由于角質(zhì)層細(xì)胞為無細(xì)胞核和含大量水分的扁平形細(xì)胞，似房頂瓦片互相交錯，緊密結(jié)合，形成一層幾乎不可滲透的屏障，能阻止多數(shù)化學(xué)物質(zhì)的吸收，并防止表皮下面的液體滲透出來。如角質(zhì)層受到損傷，除失去水分外，滲透性也會發(fā)生變化，皮膚屏障作用喪失。第三，正常的皮膚經(jīng)常接觸細(xì)菌等微生物，在健康情況下不發(fā)生感染。除皮膚面上的毛囊口是相對的弱點(diǎn)外，一般說皮膚是有抵抗細(xì)菌侵襲能力的。有人認(rèn)為這是與正常皮膚的酸性反應(yīng)(PH5.5左右)有關(guān)。皮膚表面上形成的“酸性膜”，不利于細(xì)菌、霉菌和病毒的生長和繁殖。皮膚不僅僅對機(jī)體具有保護(hù)作用，同時對機(jī)體生理功能具有調(diào)節(jié)作用。比如，正常角質(zhì)層中的脂質(zhì)、天然保濕因子使角質(zhì)層保持一定的含水量，對皮膚具有保濕功能，保持皮膚的柔軟性、彈性；另外健康的皮膚既可防止過多的體內(nèi)熱外散，又可防止過高的體外熱傳入。所以，表皮的重建及修復(fù)對于皮膚的保護(hù)是非常重要的。關(guān)于當(dāng)前表皮重建及修復(fù)的技術(shù)背景如何重建或修復(fù)表皮屏障功能是處理皮膚問題的首選。修復(fù)表皮屏障功能最簡單的方法就是外用保濕劑化妝品。所謂保濕化妝品，就是能夠能增加皮膚水分，濕度的就是保濕化妝品，其主要的功能是增加表皮角質(zhì)細(xì)胞的含水量，使用之后可以覆蓋在表皮上形成一層油，防止水分的丟失以及吸收外界水分輸入皮膚，可以很快糾正皮膚干燥、皸裂，但是， 這些單純的保濕化妝品不能從根本上修復(fù)表皮屏障功能，且容易導(dǎo)致皮膚油膩。當(dāng)前，市場上很多的表皮屏障重建及修復(fù)產(chǎn)品，大多是通過添加相關(guān)細(xì)胞因子，促進(jìn)表皮細(xì)胞的增殖、 生長，從而重建及修復(fù)表皮屏障。1、一些表皮重建及修復(fù)產(chǎn)品通過添加相關(guān)的細(xì)胞生長因子來促進(jìn)表皮細(xì)胞的重建和修復(fù)。如表皮生長因子(EGF)作為表皮修復(fù)和重建的主要成分，是人體內(nèi)存在的一種生長因子，它的主要功能是促進(jìn)皮膚細(xì)胞的分裂。研究表明極微量的EGF即能強(qiáng)烈刺激上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的增殖、生長，抑制衰老基因表達(dá)，阻止皮膚衰老，使皮膚各組成份保持最佳生理狀態(tài)。此外，它還能刺激細(xì)胞外一些大分子(如透明質(zhì)酸和膠原蛋白等)的合成與分泌，滋潤皮膚，是決定皮膚活力和健康的關(guān)鍵因素。其作用機(jī)制是EGF主動與表皮細(xì)胞膜上的特異性受體相結(jié)合，從而激活蛋白酶，加快蛋白質(zhì)的合成，促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長， 促進(jìn)表皮細(xì)胞增殖分化，促進(jìn)彈性纖維細(xì)胞的發(fā)育及增強(qiáng)其功能，激活老化細(xì)胞的再生，加速細(xì)胞的新陳代謝和更新，快使衰老死亡的細(xì)胞得以及時補(bǔ)充，更多地合成和分泌膠原蛋白、透明質(zhì)酸等大分子；改善皮膚微循環(huán)，提供良好的營養(yǎng)環(huán)境，使損傷的表皮得以即時修復(fù)和重建，同時還能達(dá)到消除皺紋、抗衰老、淡化色斑、滋潤補(bǔ)水的效果，使肌膚恢復(fù)光潔和平滑。2、角質(zhì)細(xì)胞生長因子(KGF)作為另一種用于表皮重建和修復(fù)的細(xì)胞因子，通過與上皮細(xì)胞膜上的相應(yīng)受體(KGFR)結(jié)合，特異性地刺激皮膚表皮層細(xì)胞的生長、分化和遷移，使皮膚光滑細(xì)膩，消除皺紋，抗表皮老化，增加皮膚彈性；能夠促進(jìn)老化和受損細(xì)胞的修復(fù)，調(diào)節(jié)細(xì)胞新陳代謝；使表皮血管豐富，為皮膚細(xì)胞提供更多的營養(yǎng)成分和氧分子，促進(jìn)皮膚恢復(fù)到最佳生理狀態(tài)，使皮膚紅潤白嫩；另外，KGF可明顯刺激人成熟角質(zhì)細(xì)胞的生長，并具有防輻射和抗炎作用，能夠顯著加強(qiáng)皮膚抵御外界不良刺激的能力。其作用機(jī)制包括①促有絲分裂可能與促有絲分裂的基因(如c-myC、C-f0S)和生長因子(如轉(zhuǎn)錄生長因子)，以及核苷酸合成的調(diào)節(jié)酶(如腺苷琥珀酸裂解酶)有關(guān)。②激活信號通路角質(zhì)細(xì)胞生長因子可能通過PKC和MAH(來完成防護(hù)作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。③調(diào)節(jié)酶活性角質(zhì)細(xì)胞生長因子可能通過誘導(dǎo)一些解毒酶的表達(dá)，如非硒依賴性谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化物還原酶VI、核呼吸因子和肺部表皮型脂肪酸結(jié)合蛋白等，參與活性氧簇的解毒作用。雖然這些細(xì)胞因子在表皮重建及修復(fù)上發(fā)揮了一定的作用，但由于細(xì)胞因子屬于蛋白質(zhì)或多肽，因此單純地添加于化妝品中，不僅會因?yàn)樗鼈冏陨磔^短的半衰期易導(dǎo)致其生物活性降低，而且，還因?yàn)榛瘖y品中配方中的多種化工原料、以及化妝品在制備過程中的加熱條件等諸多因素均容易導(dǎo)致細(xì)胞因子失活；特別是單一的應(yīng)用細(xì)胞因子，無法全方位、 多層次地重建及修復(fù)表皮細(xì)胞；另外，當(dāng)表皮受到紫外線或輻射損傷、皮膚外用某些制劑或藥物、或者皮膚組織衰老時，表皮細(xì)胞膜上的細(xì)胞因子受體表達(dá)量降低，且受體活性也下降，所添加的細(xì)胞因子無法與足夠的受體結(jié)合，從而使得細(xì)胞因子的生物利用度降低，無法很好地發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)；除此之外，目前所添加細(xì)胞因子的化妝品中，缺乏良好的細(xì)胞因子保護(hù)劑和協(xié)同劑，加上添加的細(xì)胞因子濃度或含量大多數(shù)為理論設(shè)計(jì)量，并未經(jīng)過系統(tǒng)和規(guī)范的時效-量效及藥代動力學(xué)等基礎(chǔ)研究，因此，實(shí)際應(yīng)用時不僅應(yīng)用范圍局限，而且作用效果也很有限。所以，如何科學(xué)、合理、有效的應(yīng)用細(xì)胞因子，提高其生物活性、增加相關(guān)功效成分與細(xì)胞因子之間的相互協(xié)同保護(hù)作用、以及強(qiáng)化細(xì)胞因子在表皮重建中的復(fù)配作用，是我們需要去解決的問題之一。關(guān)于全血的基本組分及其功效作用的技術(shù)背景血液是流動在心臟和血管內(nèi)的不透明紅色液體，主要成分為血漿、血細(xì)胞和血小板三種。血細(xì)胞又分為紅細(xì)胞和白細(xì)胞。血漿中含有人體所需最基本、較齊全的營養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)及細(xì)胞生長因子等，如氨基酸、維生素、無機(jī)離子、糖類、激素、酶，這些成分能為細(xì)胞提供營養(yǎng)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化，而血漿中豐富和齊全的細(xì)胞生長因子，能夠特異性與目的細(xì)胞膜上受體結(jié)合、并通過細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路促進(jìn)和加快細(xì)胞的增殖及生長代謝及相關(guān)因子的表達(dá)等，可為體外細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞生長和生存的提供很好的環(huán)境條件。血液中的血細(xì)胞勻漿后能釋放很多的細(xì)胞營養(yǎng)物質(zhì)，如血細(xì)胞中含有大量的超氧化物歧化酶，具有抗自由基，達(dá)到抗衰老的作用；白細(xì)胞釋放的內(nèi)容物可起到抗炎的作用； 血小板中勻漿后能釋放生長因子、轉(zhuǎn)移生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、類胰島素生長因子、 表皮生長因子等，這些生長因子可促進(jìn)軟組織和皮膚的愈合，并且它們之間有著良好的協(xié)同作用。加上自體血液是抽取患者本人靜脈血經(jīng)離心分離后所獲得的自體成分，來源方便、 制備簡便、安全有效、新鮮無污染、無刺激、無過敏、無毒副作用等特點(diǎn)，在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究及醫(yī)學(xué)美容領(lǐng)域中的應(yīng)用越來越廣泛。近年來，隨著自體血漿(血清)在醫(yī)學(xué)美容，整形外科(皮膚修復(fù)治療，外科整形) 中展現(xiàn)出其獨(dú)特的優(yōu)勢，并得到了良好的效果。另外由于來其源于自體，無免疫排斥，并發(fā)癥少，安全性高等特點(diǎn)，為其進(jìn)一步在皮膚美容領(lǐng)域中展現(xiàn)出來廣闊的應(yīng)用前景。但是，由于過低或過高濃度的血清(血漿)制品對細(xì)胞的生長并非最佳濃度，因此難以達(dá)到最佳的生物學(xué)效應(yīng)；而且，過高的血液濃度有時可能會抑制表皮細(xì)胞的增殖、分化，甚至引起細(xì)胞毒性，導(dǎo)致表皮細(xì)胞損傷(生長遲緩或抑制)，特別需要指出的是，血清(血漿)只是全血的一部分，通常只能提供表皮細(xì)胞生長最基本的營養(yǎng)成分和部分微環(huán)境條件，而難以提供自體表皮層結(jié)構(gòu)及其屏障重建所需要達(dá)到的最佳微環(huán)境及細(xì)胞生長因子濃度或含量和種類。 事實(shí)上，全血中的血細(xì)胞含有許多血清(血漿)之中少有的成分，如紅細(xì)胞中含有豐富的抗氧化酶，如超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX)等，對于表皮修復(fù)及屏障結(jié)構(gòu)重建過程中的抗氧化及自由基清除至關(guān)重要；血細(xì)胞中含有的血小板經(jīng)過激活后可釋放多種大量細(xì)胞生長因子，這對促進(jìn)或加快表皮細(xì)胞的分裂、增殖及改善表皮細(xì)胞活性及細(xì)胞膜上相應(yīng)受體也具有重要意義；血細(xì)胞中的白細(xì)胞可釋放出大量抗炎因子、淋巴細(xì)胞因子及其它生物活性成分因子等，對于改善表皮的免疫功能等也具有積極作用。因此，在應(yīng)用血液制品進(jìn)行皮膚修復(fù)和屏障功能重建時，所應(yīng)用的自體血液不僅需要確定合適的濃度或劑量，而且，還需要血細(xì)胞及其所釋放的多種生物活性物質(zhì)及細(xì)胞生長因子等協(xié)同作用，使其有效地應(yīng)用于表皮修復(fù)及皮膚屏障功能重建，更好地發(fā)揮出自體血液自體應(yīng)用的最大價值和生物學(xué)效應(yīng)，這也是我們所要解決的重要技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對背景技術(shù)中存在的缺點(diǎn)和問題加以改進(jìn)、創(chuàng)新，提供一種用于皮膚表皮層屏障重建的新產(chǎn)品，這種產(chǎn)品可以從根本上解決表皮屏障障礙的問題，完全可以滿足人們的需求。①本發(fā)明產(chǎn)品主要成分來源于抽取自體靜脈血經(jīng)全血勻漿后所獲得的自體成分，來源方便、制備簡便、安全有效、新鮮無污染、無刺激、無過敏、無毒副作用；② 本發(fā)明科學(xué)、合理、有效的應(yīng)用細(xì)胞因子，提高其生物活性、并增加相關(guān)功效成分與細(xì)胞因子之間的相互協(xié)同保護(hù)作用、以及強(qiáng)化細(xì)胞因子在表皮重建中的復(fù)配作用；③本發(fā)明確定了自體血液合適的濃度或劑量，而且，還有血細(xì)胞及其所釋放的多種生物活性物質(zhì)及細(xì)胞生長因子等協(xié)同作用，使其有效地應(yīng)用于表皮修復(fù)及皮膚屏障功能重建，更好地發(fā)揮出自體血液自體應(yīng)用的最大價值和生物學(xué)效應(yīng)。本發(fā)明通過發(fā)揮了自體全血勻漿液和細(xì)胞因子各自的優(yōu)勢，同時屏蔽了它們之間不足，制備出了一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物，用于皮膚表皮層屏障的重建。本發(fā)明的目的是提供一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物。 本發(fā)明的另一目的是提供該用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物的制備方法。1、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案(1)本發(fā)明所述的一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物，其
特征在于它是由下述重量配比的原料組成
新鮮自體全血5 95
重組人表皮細(xì)胞生長因子凍干粉0.001 0.050
重組人角質(zhì)細(xì)胞生長因子凍干粉0.001 0.050
枸櫞酸三鈉1.5 4.2
磷酸二氫鈉0.20 0.35
葡萄糖3.0 4.5
枸櫞酸(U0 0.52
腺嘌呤0.015 0.07
生理鹽水5 35。(2)本發(fā)明所述的一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物，其特征在于它是由下述優(yōu)選重量配比的原料組成
新鮮自體全血70
重組人表皮細(xì)胞生長因子凍干粉0.01
重組人角質(zhì)細(xì)胞生長因子凍干粉0.01
枸櫞酸三鈉2.73
磷酸二氫鈉0.22
葡萄糖3.20
枸櫞酸0.327
腺嘌呤0.028
生理鹽水23.475。
(3)本發(fā)明所述的一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物，其特征在于所述的一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物的制備方法包括以下步驟①按上述一種用于表皮重建的血液勻漿復(fù)合物的原料配比，用分析天平分別準(zhǔn)確稱取配方量的枸櫞酸三鈉、磷酸二氫鈉、葡萄糖、枸櫞酸、腺嘌呤置于經(jīng)過洗消過的容器中， 加入配方量的生理鹽水進(jìn)行充分溶解，混合均勻，過濾除菌備用；②在準(zhǔn)備用于盛血的容器中先加入上述配制的液體，然后嚴(yán)格按照人體抽血的規(guī)范化要求，將采集到的受術(shù)者的肘中靜脈血液按配方量加入后顛倒混勻，然后混勻的全血進(jìn)行勻漿處理，勻漿之后再使用超聲破碎處理，勻漿及超聲破碎過程要在低溫環(huán)境中或在冰上操作進(jìn)行；③將獲得的自體全血勻漿物加入配方量的重組人表皮細(xì)胞生長因子凍干粉和重組人角質(zhì)細(xì)胞生長因子凍干粉，充分溶解，輕輕混合均勻后，即為一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物，置于4°C冰箱中保存和備用。(4)本發(fā)明產(chǎn)品使用方法凈面后，用熱毛巾敷面或噴霧機(jī)蒸面10分鐘，待毛孔張開，表皮溫度提高后使用；取適量制備好的自體全血勻漿復(fù)合物自，均勻地涂抹于面部或患處，30分鐘后洗凈即可。2、本發(fā)明的主要技術(shù)優(yōu)點(diǎn)與以往的皮膚表皮屏障重建產(chǎn)品相比，本發(fā)明的產(chǎn)品能從根本上解決表皮屏障功能的問題。基于自體全血勻漿液的生物學(xué)特性，其含有大量皮膚所需的營養(yǎng)成分，能達(dá)到保濕、抗氧化、促進(jìn)相關(guān)細(xì)胞的增殖及蛋白的合成。尤其是能促進(jìn)表皮層細(xì)胞的形成，預(yù)防及解決由于表皮屏障功能損害而引起的皮膚疾病，效果十分理想。①自體全血勻漿來源方便、制備簡單，成本低廉；另外，正常情況下，由于來源于自體，所以自體全血勻漿使用副作用小、且自體血液不會出現(xiàn)過敏反應(yīng)，生物相容性好，安全性高。②自體全血勻漿液能上調(diào)表皮細(xì)胞上的相關(guān)受體，從而使組方中的細(xì)胞因子能更好地與其受體結(jié)合，從而激活受體產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)，達(dá)到表皮重建的效果；另外，細(xì)胞因子和自體全血勻漿液聯(lián)合使用，產(chǎn)生的這種強(qiáng)化協(xié)同作用是單純細(xì)胞因子作用無法比擬的。③因自體全血勻漿經(jīng)過強(qiáng)化后，除含有表皮細(xì)胞生存最基本的全營養(yǎng)成分及最適合的微環(huán)境條件之外，還含有表皮細(xì)胞生長最需要的細(xì)胞生長因子，特別是表皮細(xì)胞生長因子和角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子，可對表皮修復(fù)更好，皮膚屏障功能重建效果更快；自體全血勻漿液除了能強(qiáng)化細(xì)胞因子效果外，還能提高細(xì)胞因子在外環(huán)境中的穩(wěn)定性，使得細(xì)胞因子活性保存時間更長。④用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物具有抗衰老以及保濕效果；同時自體全血勻漿復(fù)合物能促進(jìn)表皮細(xì)胞、角朊細(xì)胞的增殖、分化，最終形成包括基底層、棘層、顆粒層、透明層及角質(zhì)層的復(fù)層結(jié)構(gòu)。從多方面、多層次、根本上改變?nèi)梭w皮膚各種細(xì)胞組織的代謝，改善微循環(huán)，恢復(fù)皮膚健康，達(dá)到表皮層重建的效果。⑤本發(fā)明不僅提高了表皮細(xì)胞生存所需的天然全營養(yǎng)成分、最適PH條件(6. 0 6. 2)、離子濃度、以及細(xì)胞生長、生存、生活的最佳微環(huán)境，還提供了激活表皮細(xì)胞所需最佳的自體全血勻漿液濃度，更加有利于表皮細(xì)胞的分裂和增殖及生命活動。
⑥本發(fā)明所應(yīng)用的自體血液為合適的濃度或劑量，而且，還有血細(xì)胞及其所釋放的多種生物活性物質(zhì)及細(xì)胞生長因子等協(xié)同作用，使其有效地應(yīng)用于表皮修復(fù)及皮膚屏障功能重建，更好地發(fā)揮出自體血液自體應(yīng)用的最大價值和生物學(xué)效應(yīng)。⑦由于過高的血液制品濃度可能會抑制表皮細(xì)胞的增殖、分化，甚至引起細(xì)胞毒性，導(dǎo)致表皮細(xì)胞損傷；過低的濃度又達(dá)不到表皮重建的效果。本發(fā)明產(chǎn)品組方的自體全血濃度是通過實(shí)驗(yàn)反復(fù)確認(rèn)的，所以能更好地應(yīng)用于表皮屏障功能重建，更好地發(fā)揮出其應(yīng)用價值。⑧本發(fā)明制備出的一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物可望成為一個從根本上解決表皮屏障問題的產(chǎn)品，且其制備方法簡單、操作方便、簡單易學(xué)、 易于推廣，適合用于有合法醫(yī)療美容資格的醫(yī)療美容機(jī)構(gòu)。3、本發(fā)明的主要創(chuàng)新點(diǎn)①以自體全血勻漿液為原料制備出一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物，能從根本上解決皮膚屏障功能，而不是治標(biāo)不治本。這是一般保濕劑、營養(yǎng)護(hù)膚品無法達(dá)到的，克服了當(dāng)前技術(shù)背景存在的不足。②在自體全血勻漿中添加了表皮細(xì)胞增殖、分化所需的細(xì)胞因子，彌補(bǔ)了自體全血勻漿在表皮重建中的不足，確保了自體全血勻漿液的生物活性，提高了其重建表皮屏障的效果。③自體全血勻漿液能夠?yàn)榻M方中表皮細(xì)胞生長因子、角質(zhì)細(xì)胞生長因子提供很好的保護(hù)屏障，降低這些細(xì)胞因子被降解的風(fēng)險，從而提高其生物活性；另外，自體全血勻漿液能激活、上調(diào)表皮細(xì)胞上的相關(guān)受體，使得表皮細(xì)胞生長因子、角質(zhì)細(xì)胞生長因子能更好地與受體結(jié)合，產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)，起到了強(qiáng)化細(xì)胞因子的作用，這是細(xì)胞因子單獨(dú)添加于一般基質(zhì)中使用所無法比擬的。④本發(fā)明克服了細(xì)胞因子半衰期短，生物活性低的問題，使得細(xì)胞因子，可以全方位、多層次地重建及修復(fù)表皮細(xì)胞；另外，本發(fā)明經(jīng)過系統(tǒng)和規(guī)范的時效-量效及藥代動力學(xué)等基礎(chǔ)研究，所以更加科學(xué)、合理、有效的應(yīng)用細(xì)胞因子，提高其生物活性、增加相關(guān)功效成分與細(xì)胞因子之間的相互協(xié)同保護(hù)作用、以及強(qiáng)化了細(xì)胞因子在表皮重建中的復(fù)配作用。⑤本發(fā)明確定了在應(yīng)用自體血液進(jìn)行皮膚修復(fù)和屏障功能重建時，所需要的合適濃度或劑量，同時，在血細(xì)胞及其所釋放的多種生物活性物質(zhì)及細(xì)胞生長因子等的協(xié)同作用下，使自體血液有效地應(yīng)用于表皮修復(fù)及皮膚屏障功能重建，更好地發(fā)揮出自體血液自體應(yīng)用的最大價值和生物學(xué)效應(yīng)。⑥組方中自體全血勻漿液和表皮細(xì)胞生長因子、角質(zhì)細(xì)胞生長因子以及其它輔助成分之間能相互促進(jìn)、相互調(diào)節(jié)，達(dá)到了揚(yáng)長避短、強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合的作用；加上復(fù)合物合適的 PH(6. 0 6.幻以及合適的濃度，使得自體全血勻漿復(fù)合物能最大限度地發(fā)揮其表皮屏障重建及修復(fù)作用。4、本發(fā)明的一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物作用原理血液中含有人體所需最基本、較齊全的營養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)及細(xì)胞生長因子等，如氨基酸、維生素、無機(jī)離子、糖類、激素、酶，這些成分能為細(xì)胞提供營養(yǎng)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化，為體外細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞生長和生存的提供很好的環(huán)境條件。而通過勻漿后的全血后能釋放很多的細(xì)胞營養(yǎng)物質(zhì)，如血細(xì)胞中含有大量的超氧化物歧化酶，具有抗自由基，達(dá)到抗衰老的作用；白細(xì)胞釋放的內(nèi)容物可起到抗炎的作用；血小板中勻漿后能釋放生長因子、轉(zhuǎn)移生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、類胰島素生長因子、表皮生長因子等，這些生長因子可促進(jìn)軟組織和皮膚的愈合，并且它們之間有著良好的協(xié)同作用。加上自體血液是抽取患者本人靜脈血經(jīng)離心分離后所獲得的自體成分，來源方便、制備簡便、安全有效、新鮮無污染、無刺激、無過敏、無毒副作用等特點(diǎn)。全血勻漿后的這些特點(diǎn)為其應(yīng)用于表皮層屏障提供了得天獨(dú)厚的條件，能促進(jìn)表皮細(xì)胞的增殖、分化，使得表皮細(xì)胞層變厚，增加真皮層內(nèi)的膠原纖維，使得皮膚水潤，富有彈性；增加表皮細(xì)胞間的粘接性，保持表皮內(nèi)的水分，防止皮膚干燥；可以從根本上解決表皮屏障問題。從而能解決由于各種原因引起的角質(zhì)層面部表皮的變薄或損傷而引起皮膚疾病，如皮膚潮紅、毛細(xì)血管擴(kuò)張、色素沉著、皮膚老化等。組方中的表皮生長因子，能促進(jìn)成纖維細(xì)胞、表皮細(xì)胞代謝、增殖和生長，促進(jìn)彈性纖維細(xì)胞的發(fā)育及增強(qiáng)其功能，激活老化細(xì)胞的再生，加速細(xì)胞的新陳代謝和更新，快速代謝老化角質(zhì)，修復(fù)斷裂的淺表皮成纖維細(xì)胞，延緩表皮細(xì)胞的老化。即使極微量的表皮生長因子也能強(qiáng)烈刺激細(xì)胞生長，抑制衰老基因表達(dá)，阻止皮膚衰老，使皮膚各組成份保持最佳生理狀態(tài)，它還能刺激透明質(zhì)酸和膠原蛋白等的合成與分泌，增加皮膚含水量，進(jìn)而增加皮膚彈性，滋潤肌膚。表皮生長因子能刺激外胚層和內(nèi)胚層起源的各種細(xì)胞增殖遷移，加快新陳代謝達(dá)到皮膚代謝的效果。同時還可以促進(jìn)皮膚血管壁細(xì)胞的新陳代謝，增加毛細(xì)血管的密度，改善皮膚微循環(huán)，從而使氣血通暢，膚色紅潤。表皮生長因子促進(jìn)細(xì)胞營養(yǎng)物質(zhì)從細(xì)胞外主動運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)，增加細(xì)胞內(nèi)的營養(yǎng)，快速生成新生細(xì)胞，使衰老細(xì)胞快速角化、 脫落，促進(jìn)真皮層細(xì)胞分泌合成膠原纖維、多糖、糖蛋白等功能分子，使已斷裂、變性的膠原纖維和彈性纖維得到修復(fù)，肌纖維排列整齊緊密，從而減少和消除皺紋。表皮生長因子對表皮細(xì)胞的增殖有較強(qiáng)的促進(jìn)作用，使用后表皮細(xì)胞變得年輕化，使新生細(xì)胞比例增加，降低了皮膚中黑色素和有色細(xì)胞的含量，使得表皮組織中較少有色素及死亡細(xì)胞的殘留等累積，使皮膚表現(xiàn)出白皙光滑，消除瘀斑和色素沉著等異常皮膚表現(xiàn)。在去斑的治療期和恢復(fù)期使用表皮生長因子能有效遏止色素斑復(fù)發(fā)。角質(zhì)細(xì)胞生長因子通過與上皮細(xì)胞膜上的相應(yīng)受體結(jié)合，特異性地刺激皮膚表皮層細(xì)胞的生長、分化和遷移，使皮膚光滑細(xì)膩，消除皺紋，抗表皮老化，增加皮膚彈性；能夠促進(jìn)老化和受損細(xì)胞的修復(fù)，調(diào)節(jié)細(xì)胞新陳代謝；使表皮血管豐富，為皮膚細(xì)胞提供更多的營養(yǎng)成分和氧分子，促進(jìn)皮膚恢復(fù)到最佳生理狀態(tài)，使皮膚紅潤白嫩；另外，角質(zhì)細(xì)胞生長因子可明顯刺激人成熟角質(zhì)細(xì)胞的生長，并具有防輻射和抗炎作用，能夠顯著加強(qiáng)皮膚抵御外界不良刺激的能力。其作用機(jī)制包括①促有絲分裂可能與促有絲分裂的基因(如 c-myc、c-fos)和生長因子(如轉(zhuǎn)錄生長因子)，以及核苷酸合成的調(diào)節(jié)酶(如腺苷琥珀酸裂解酶)有關(guān)。②激活信號通路角質(zhì)細(xì)胞生長因子可能通過PKC和MAH(來完成防護(hù)作用的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。③調(diào)節(jié)酶活性角質(zhì)細(xì)胞生長因子可能通過誘導(dǎo)一些解毒酶的表達(dá)，如非硒依賴性谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化物還原酶VI、核呼吸因子和肺部表皮型脂肪酸結(jié)合蛋白等，參與活性氧簇的解毒作用。角質(zhì)層細(xì)胞有保護(hù)皮膚的重要功能，衰老和角化嚴(yán)重的角質(zhì)層細(xì)胞只能用表皮細(xì)胞生長因子這一類的生長因子加速表皮細(xì)胞的更新，用新的角層細(xì)胞取代老化的角質(zhì)細(xì)胞。更重要的是皮下組織有豐富的免疫細(xì)胞(如樹狀突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等)，有效地保護(hù)皮膚免遭各種病原對皮膚的侵襲，還能清除各種代謝產(chǎn)物，使代謝產(chǎn)物不容易積累形成暗瘡或黑斑，這些免疫細(xì)胞本身還能釋放各種生長因子，調(diào)節(jié)各種細(xì)胞生長。角質(zhì)細(xì)胞生長因子與表皮細(xì)胞生長因子在功能上是類似的，但在深層修復(fù)，促進(jìn)血管和膠原纖維的生長和發(fā)育上，角質(zhì)細(xì)胞生長因子優(yōu)于表皮細(xì)胞生長因子，但表皮細(xì)胞生長因子分子量小，容易進(jìn)入表皮細(xì)胞，表皮細(xì)胞是其主要的靶細(xì)胞，故對表皮細(xì)胞生長有特別的功能。它們一起是可以兼容并互為補(bǔ)充的，兩者配合使用對修復(fù)表皮和祛除皺紋的作用更顯著。因此利用自體全血勻漿復(fù)合物不僅可以給皮膚提供各種需要的營養(yǎng)成分，而且能夠給皮膚提供合適的微環(huán)境，利于表皮細(xì)胞的增殖、分化?？偟膩碚f，本發(fā)明確定了在應(yīng)用自體血液進(jìn)行皮膚修復(fù)和屏障功能重建時，所需要的合適濃度或劑量，同時，在血細(xì)胞及其所釋放的多種生物活性物質(zhì)及細(xì)胞生長因子等的協(xié)同作用下，使自體血液有效地應(yīng)用于表皮修復(fù)及皮膚屏障功能重建，更好地發(fā)揮出自體血液自體應(yīng)用的最大價值和生物學(xué)效應(yīng)。另外，自體血液與細(xì)胞因子的復(fù)配，克服了細(xì)胞因子半衰期短，生物活性低的問題，使得細(xì)胞因子，可以全方位、多層次地重建及修復(fù)表皮細(xì)胞；另外，本發(fā)明經(jīng)過系統(tǒng)和規(guī)范的時效-量效及藥代動力學(xué)等基礎(chǔ)研究，所以更加科學(xué)、合理、有效的應(yīng)用細(xì)胞因子，提高了細(xì)胞因子的生物活性、增加了相關(guān)功效成分與細(xì)胞因子之間的相互協(xié)同保護(hù)作用、以及強(qiáng)化了細(xì)胞因子在表皮重建中的復(fù)配作用。通過這樣合理的復(fù)配，使得自體全血勻漿液復(fù)合物可以從整體上，多方面、多層次地改變?nèi)梭w皮膚各種細(xì)胞組織的代謝，改善微循環(huán)，恢復(fù)皮膚健康，創(chuàng)造了一個傳統(tǒng)化妝品難以達(dá)到的境界。5、本發(fā)明制備注意事項(xiàng)(1)自體全血的采血部位通常來源于肘中靜脈或其他肘靜脈，如肘靜脈不明顯或采集不便、加上血液用量不是太大時，也可采集手背靜脈和外踝靜脈等，但采集的最好是空腹靜脈血，以減少脂血等。(2)采集血液前，應(yīng)認(rèn)真檢查血液收集管內(nèi)是否干燥和消毒，還應(yīng)仔細(xì)檢查采血針與血液收集器是否正確合理連接；另外，血液收集管是否放好(嚴(yán)防打碎)。在采血過程中， 尤應(yīng)將血液沿血液收集管的管壁自然而緩慢流入，嚴(yán)禁劇烈振搖，嚴(yán)防血液產(chǎn)生氣泡，以免出現(xiàn)溶血和弓I起血漿纖維蛋白原變性。(3)采血過程中，如遇個別受術(shù)者“暈針”或出現(xiàn)抽血眩暈時不要慌張，可立即讓其平臥休息片刻即可恢復(fù)。必要時，可讓其嗅吸芳香氨汀。如仍未恢復(fù)，則可針刺(或拇指掐)人中及合谷等穴位，直至蘇醒。(4)為了防止抽血時發(fā)生低血糖反應(yīng)及緊張性休克，應(yīng)首先做好受術(shù)者的思想工作，消除其緊張心理。抽血完成后，也可囑受術(shù)者適當(dāng)飲食一些飲料、稀飯之類的流質(zhì)食物； 尤其應(yīng)注意了解和觀察受術(shù)者全身反應(yīng)狀況，嚴(yán)密防止高血壓及心血管病等意外。(5)對于可能遇到患有高脂血癥的患者，為了防止出現(xiàn)脂血或乳糜血，建議治療頭幾天堅(jiān)持清淡飲食、同時采集空腹12小時以上的靜脈血。通常情況下，脂血或乳糜血、溶血、黃疸血等情況，不適合用于本發(fā)明。(6)特別應(yīng)該注意的是，在抽血時，嚴(yán)禁將采血器的氣泡或空氣誤入至靜脈之中， 而且，在抽血時注射器只能向外抽、絕對不能向靜脈內(nèi)推，以免注射空氣進(jìn)去，形成氣栓造成嚴(yán)重后果、甚至生命危險。(7)要注意保存好所采集的血液，并及時勻漿。自體全血最好是現(xiàn)采現(xiàn)用、當(dāng)天或一次用完，以保持血液新鮮和治療效果。如實(shí)在用不完，可密封保存于低溫冰箱之中，但時間不要超過3天，且在再次使用或治療時，應(yīng)置于37°C恒溫水浴中稍加復(fù)溫及強(qiáng)化。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例子來進(jìn)一步說明本發(fā)明的產(chǎn)品和制備方法實(shí)施例1 一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物的制備方法一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物是由下述優(yōu)選重量配比的原料組成
新鮮自體全血70重組人表皮細(xì)胞生長因子凍干粉0.01重組人角質(zhì)細(xì)胞生長因子凍干粉0.01枸櫞酸三鈉2.73磷酸二氫鈉0.22葡萄糖3.20枸櫞酸0.327腺嘌呤0.028生理鹽水23.475—種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物的具體制備方法(以配制IOOml為例)(1)按上述一種用于表皮重建的血液勻漿復(fù)合物的原料配比，用分析天平分別準(zhǔn)確稱取配方量的枸櫞酸三鈉2. 73g、磷酸二氫鈉0. 22g、葡萄糖3. 2g、枸櫞酸0. 327g、腺嘌呤 0. 028g置于經(jīng)過洗消過的容器中，加入配方量的生理鹽水進(jìn)行充分溶解，混合均勻，過濾消毒待用；(2)在準(zhǔn)備用于盛血的容器中先加入上述配制的液體，然后嚴(yán)格按照人體抽血的規(guī)范化要求，將采集到的70ml受術(shù)者的肘中靜脈血液按配方量加入后顛倒混勻，然后混勻的全血進(jìn)行勻漿處理，勻漿之后將整個體系在超聲振蕩器中超聲IOmin進(jìn)行血細(xì)胞破碎處理，勻漿及超聲破碎過程要在低溫環(huán)境中或在冰上操作進(jìn)行；(3)關(guān)閉超聲振蕩器，將獲得的自體全血勻漿物加入配方量的重組人表皮細(xì)胞生長因子凍干粉IOmg和重組人角質(zhì)細(xì)胞生長因子凍干粉10mg，充分溶解，輕輕混合均勻后， 即為一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物，置于4°C冰箱中保存和備用。
本發(fā)明所述的實(shí)施例僅僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行的描述，并非對本發(fā)明構(gòu)思和范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)思想的前提下，本領(lǐng)域中的學(xué)者或工程技術(shù)人員對本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變型和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍，本發(fā)明請求保護(hù)的技術(shù)內(nèi)容，已經(jīng)全部記在權(quán)利要求書中。
權(quán)利要求
1. 一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料組成
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物， 其特征在于它是由下述優(yōu)選重量配比的原料組成
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物，其特征在于所述的一種用于表皮重建的血液勻漿復(fù)合物的制備方法包括以下步驟(1)按上述一種用于表皮重建的血液勻漿復(fù)合物的原料配比，用分析天平分別準(zhǔn)確稱取配方量的枸櫞酸三鈉、磷酸二氫鈉、葡萄糖、枸櫞酸、腺嘌呤置于經(jīng)過洗消過的容器中，加入配方量的生理鹽水進(jìn)行充分溶解，混合均勻，過濾除菌備用；(2)在準(zhǔn)備用于盛血的容器中先加入上述配制的液體，然后嚴(yán)格按照人體抽血的規(guī)范化要求，將采集到的受術(shù)者的肘中靜脈血液按配方量加入后顛倒混勻，然后混勻的全血進(jìn)行勻漿處理，勻漿之后再使用超聲破碎處理，勻漿及超聲破碎過程要在低溫環(huán)境中或在冰上操作進(jìn)行；(3)將獲得的自體全血勻漿物加入配方量的重組人表皮細(xì)胞生長因子凍干粉和重組人角質(zhì)細(xì)胞生長因子凍干粉，充分溶解，輕輕混合均勻后，即為一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物，置于4°C冰箱中保存和備用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于自體皮膚表皮層屏障重建的自體全血勻漿復(fù)合物及其制備方法。自體全血經(jīng)過勻漿后，在其所釋放的多種生物活性物質(zhì)及細(xì)胞生長因子的協(xié)同作用下，使自體血液有效地應(yīng)用于表皮修復(fù)及皮膚屏障功能重建，更好地發(fā)揮出自體血液自體應(yīng)用的最大價值和生物學(xué)效應(yīng)；加上自體全血勻漿液能與其它輔助成分起到相互協(xié)同保護(hù)作用、以及強(qiáng)化細(xì)胞因子在表皮重建中的復(fù)配作用。因此，自體全血勻漿液復(fù)合物對表皮修復(fù)、表皮屏障功能重建效果好，能多方面、多層次地改善人體皮膚屏障功能問題，恢復(fù)皮膚健康，從根本上解決表皮屏障功能的問題。另外本發(fā)明制備方法簡單、操作方便、簡單易學(xué)、易于推廣，適合用于有合法醫(yī)療美容資格的醫(yī)療美容機(jī)構(gòu)。
文檔編號A61K8/98GK102188362SQ201110118629
公開日2011年9月21日 申請日期2011年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月9日
發(fā)明者丁克祥, 丁宇, 左夏林, 楊永鵬, 羅迎霞, 董萍 申請人:丁克祥, 董萍