專利名稱：半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗的制備與使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種動(dòng)物抗病疫苗的制備方法，特別是涉及一種半滑舌鰨美人魚發(fā)光 桿菌疫苗的制備方法。本發(fā)明還涉及該疫苗的使用方法。
背景技術(shù)：
美人魚發(fā)光桿菌廣泛存在于海水及寄生于海產(chǎn)動(dòng)物中，主要感染變溫動(dòng)物尤其是 養(yǎng)殖魚類，除感染雀鯛科魚類外，還感染鯊魚、大菱鲆、五條螄、半滑舌鰨等，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖生 產(chǎn)的危害是相當(dāng)嚴(yán)重的，近年來，隨著半滑舌鰨養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，由美人魚發(fā)光桿菌引起的 疾病給半滑舌鰨養(yǎng)殖生產(chǎn)造成了很大的損失，因此，對(duì)美人魚發(fā)光桿菌引起的疾病的有效 預(yù)防，以最大限度地降低其危害程度，將能顯著地提高半滑舌鰨養(yǎng)殖生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益。目前尚未見有半滑舌鰨抗病疫苗的研究與應(yīng)用，目前養(yǎng)殖戶大多使用化學(xué)合成藥 物或抗生素類藥物控制疾病的發(fā)生與流行，市場上缺乏一種適用于半滑舌鰨的抗美人魚發(fā) 光桿菌疫苗。因此，開發(fā)研制半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗，對(duì)于有效控制半滑舌鰨美人魚 發(fā)光桿菌弓I起的疾病的發(fā)生與流行具有重要的應(yīng)用前景。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種提高半滑舌鰨免疫 力、降低半滑舌鰨養(yǎng)殖生產(chǎn)中由病原美人魚發(fā)光桿菌所造成的危害、以滿足半滑舌鰨養(yǎng)殖 生產(chǎn)上的抗病需求的半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗的制備方法。本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)是提供了幾種如上所述的半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿 菌疫苗的免疫使用方法。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是 一種半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗的制備方法，其特點(diǎn)是它以美人魚發(fā)光桿菌STl iPhotobacteriunidaniseIae STl)為免疫原，以黃芪浸出液為佐劑；其具體步驟如下
(1)將美人魚發(fā)光桿菌STliPho tobac teriumdamseIae STl)菌株接種在普通營養(yǎng)瓊 脂肉湯培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)Mh，加入終濃度0. 3%的甲醛滅活48h，得滅活菌體；
(2)取黃芪用蒸餾水浸泡30-60min后煎煮，過濾，濃縮至終濃度為原藥lg/mL，得黃芪 浸出液；
(3)將滅活菌體與得黃芪浸出液混合，制得水劑型黃芪佐劑半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌 疫苗；疫苗中病原美人魚發(fā)光桿菌免疫原為1. 17X IO11ceIlsAiL,黃芪浸出液為lg/mL。本發(fā)明方法中涉及的美人魚發(fā)光桿菌STl {Pho tobac teri umdamse Iae STl) 已經(jīng)在《半滑舌鰨病原美人魚發(fā)光桿菌表型及分子特征》(Wienotypic and molecular characterization of Photobacterium damselae, a pathogen of the cultured tongue sole Cynoglossus semilaevis in China.)中公開，該公開文獻(xiàn)的發(fā)表刊物為新西蘭《海 洋與淡水研究》，2011，45 (1):1-13 (New Zealand Journal of Marine and Freshwater Research, 2011，45 (1):1-13.)。該菌株的分離菌DNA序列長度及登錄號(hào)如下表分離菌DNA序列長度及登錄號(hào)
權(quán)利要求
1.一種半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗的制備方法，其特征在于它以美人魚發(fā)光桿菌 STl iPhotobacteriunidaniseIae STl)為免疫原，以黃芪浸出液為佐劑；其具體步驟如下(1)將美人魚發(fā)光桿菌STliPho tobac teriumdamseIae STl)菌株接種在普通營養(yǎng)瓊 脂肉湯培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)Mh，加入終濃度0. 3%的甲醛滅活48h，得滅活菌體；(2)取黃芪用蒸餾水浸泡30-60min后煎煮，過濾，濃縮至終濃度為原藥lg/mL，得黃芪 浸出液；(3)將滅活菌體與得黃芪浸出液混合，制得水劑型黃芪佐劑半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌 疫苗；疫苗中病原美人魚發(fā)光桿菌免疫原為1. 17X IO11ceIlsAiL,黃芪浸出液為lg/mL。
2.一種如權(quán)利要求1所述的制備方法所制得的半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗的使用 方法，其特征在于它采用浸泡免疫的方法，先將半滑舌鰨在充氣條件下用質(zhì)量濃度為8% 的NaCl溶液浸泡5min，然后按體積比1 :5用水稀釋半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗得半滑 舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗溶液，再將半滑舌鰨放于半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗溶液中充 氣浸泡lh，一周后按前述方法加強(qiáng)免疫1次。
3.—種如權(quán)利要求1所述的制備方法所制得的半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗的使用 方法，其特征在于它采用注射免疫的方法，取體長為15-20cm的半滑舌鰨按0. 2mL/尾的免 疫劑量進(jìn)行初次注射免疫，后每隔一周按前述免疫劑量加強(qiáng)免疫1次，共免疫4次。
4.一種如權(quán)利要求1所述的制備方法所制得的半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗的使用 方法，其特征在于它采用口服免疫方法，將硬顆粒飼料用半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗浸 泡后投喂，每天半滑舌鰨攝入滅活菌體量為1. 17X107cellS/g體重，連續(xù)投喂一周，隔周后 再按前述方法進(jìn)行加強(qiáng)免疫一周。
全文摘要
本發(fā)明是一種半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗的制備方法，其特征在于將美人魚發(fā)光桿菌ST1菌株接種在普通營養(yǎng)瓊脂肉湯培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)24h，加入終濃度0.3%的甲醛28℃滅活48h，得滅活菌體；取黃芪用蒸餾水浸泡后煎煮，過濾，濃縮得黃芪浸出液；將滅活菌體與得黃芪浸出液混合制得半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗。本發(fā)明疫苗能使半滑舌鰨產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，增強(qiáng)半滑舌鰨對(duì)病原美人魚發(fā)光桿菌的免疫力，提高半滑舌鰨養(yǎng)殖的成活率，增加半滑舌鰨養(yǎng)殖的產(chǎn)量，提高半滑舌鰨養(yǎng)殖生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益。從根本上解決了目前半滑舌鰨養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中易發(fā)生美人魚發(fā)光桿菌所致疾病的問題。本發(fā)明還公開了一種半滑舌鰨美人魚發(fā)光桿菌疫苗的使用方法。
文檔編號(hào)A61P31/04GK102139103SQ201110086569
公開日2011年8月3日 申請日期2011年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月7日
發(fā)明者張曉君, 閻斌倫 申請人:淮海工學(xué)院