透明質酸組合物以及使用方法

專利名稱：透明質酸組合物以及使用方法
技術領域：
本發明涉及用于緩解與可以由使用透明質酸獲益的病癥有關的癥狀的組合物和方法，所說的癥狀非限制性地包括干眼和口干燥。
背景技術：
干眼是一種眼睛持續干燥的情況，包括角膜和結膜持續干燥。其是由眼淚形成異常或不足、以及粘蛋白分泌不足導致的(即，干性角膜結膜炎)。可能由于損害分泌眼淚的 (即產生眼淚的)腺體的基礎性病癥如自身免疫性病癥而出現干眼癥狀，所說的病癥如類風濕性關節炎、斯耶格倫綜合征、系統性紅斑狼瘡、和系統性硬化癥以及肉樣瘤病。可能在眼睛手術，如Lasik 手術后誘發干眼。估計在美國，一千三百萬以上的人口受到干眼的影響。不管基礎的病理學是什么，干眼通常涉及眼睛前的淚膜迅速分解，從而使得暴露的外表面脫水。需要正常形成眼淚以使角膜和結膜保持濕潤，這反過來又有助于防止角膜和結膜的潰瘍和維持角膜的透明度。此外，眼淚有助于眼瞼在眼睛表面上的活動(例如，眨眼)和從眼睛上除去異物。眼淚通常還包含有助于防止眼睛感染的溶菌酶。干眼可能伴有輕度至嚴重的眼睛疼痛。當其長期發生時，其可造成視力模糊、沙礫感和/或灼燒感、以及瘙癢。如果不進行治療地使該情況持續下去，其將進一步導致角膜潰瘍和/或瘢痕化。迄今為止，干眼最常見的治療形式是使用人工淚液。可以通過商業途徑獲得的人工淚液產品包括 Bion Tears (Alcon) >Lacriset (Merck) >Tears Naturale(Alcon)禾口 Tears Naturale II (Alcon)。但是，使用人工淚液的一個缺點是需要頻繁使用，尤其是因為人工淚液制劑提供的緩解通常不能持久而更需要頻繁使用。口干燥(也被稱為口部干燥)是一種特征為唾液產生不足的情況。其可能是一種由壓力(例如，恐懼)、分泌唾液的(即，產生唾液的)腺體的感染、或者使用某些藥物如抗膽堿能藥、利尿劑、抗組胺藥、可樂定、左旋多巴、甲基多巴、和三環抗抑郁劑造成的臨時情況。其還可能是一種病因學未知的持久情況。斯耶格倫綜合征和系統性硬化癥、以及嘴、 頸和頭的放療(例如在口腔癌的治療中)也可能伴有口干燥。口干燥通常還會導致吞咽、 講話的困難和痛苦，并且其可能會干擾味覺。在一些情況中，其還可能會造成牙齒腐蝕。口干燥目前是通過口腔清洗、局部敷用、唾液替代品、或唾液分泌刺激劑如無糖的糖果來進行治療的。目前可以通過商業途徑獲得的唾液刺激劑包括膽堿能激動劑如 EvoxacTM(西維美林 HC1，Daiichi Pharmaceutical Corp.)和 Salagen (皮羅卡品HC1，MGIPharma, Inc.)。可以通過商業途徑獲得的唾液替代品包括Moiltir、Orex和 Salivart0緩解口干燥的大多數普通治療是用人工唾液噴灑在口腔中。但是，與人工淚液一樣，人工唾液需要頻繁應用，其對于受影響的個體而言是一種累贅。以前已經報道過透明質酸可用于治療干眼。但是，該類報道都將注意力放在使用游離透明質酸上，與上面所討論的人工淚液治療相似，其必需頻繁應用。
本發明的概述因為可以克服連續和頻繁應用的需要，所以希望對干眼和口干燥以及將從使用透明質酸受益的其它情況進行長期有效治療。本發明提供了用于治療干眼、口干燥、和與干燥有關的其它情況的作為連續和頻繁應用的供替代的選擇的治療劑。本發明部分是以將透明質酸共價連接到受影響的機體表面或組織可以增強透明質酸緩解干眼和口干燥的功效的發現為基礎的。因為，透明質酸在眨眼或吞咽的過程中比較不易被清洗掉，所以該類連接減少了重復和頻繁使用干眼或口干燥物質的需要。根據本發明，透明質酸通過一種是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子被連接到受影響的機體表面上。該連接分子可包括是轉谷氨酰胺酶底物的氨基和/或甲酰胺基團。 所說的轉谷氨酰胺酶優選地是內源性轉谷氨酰胺酶，但其也可以是外源性轉谷氨酰胺酶。但是，這里所提供的組合物并不僅僅限于應用于干眼和口干燥中。而是其還可用于特征為其它組織干燥的其它病癥，所說的其它組織包括其它粘膜組織如陰道、直腸、和鼻 (包括其它組織)、以及外部表面如皮膚、頭發、指甲、和嘴唇。此外，發現該組合物還可用于其它機體組織如內皮(尤其是主動脈內皮)、和骨關節軟骨。當用于血管內皮時，該透明質酸組合物提供了長期持續的以前報道所給出的透明質酸可以抑制血小板凝固的預防和/ 或治療益處。以前還報道了透明質酸可以降低關節結合點疼痛，從而將透明質酸附著在骨關節軟骨上將提供長期緩解關節炎的作用。當用于由于皮膚干燥而造成的皺紋中時，透明質酸將被局部應用，并且將減少非連接性透明質酸制劑頻繁應用的需要。本發明打算包括為上述各種情況所量身定做的透明質酸-連接分子軛合物制劑。因此，本發明一方面提供了一種包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶的底物的連接分子、以及游離透明質酸的組合物，其中所說的游離透明質酸和軛合物是以至少2的摩爾比存在的。本發明的各種實施方案平等地適用于這里所公開的各個方面。因此，雖然這些實施方案僅敘述一次，但是應當清楚的是，正如本發明說明書和權利要求所教導的那樣，其可應用于各種方面。在一個實施方案中，該連接分子具有至少兩個相連的脂族胺、至少三個相連的脂族胺、至少四個相連的脂族胺、至少五個脂族胺、或至少六個脂族胺。在另一個實施方案中， 所說的連接分子是天然的聚賴氨酸。在另一個實施方案中，聚賴氨酸選自聚-L-賴氨酸、 聚-D-賴氨酸、和聚-DL-賴氨酸。在另一個實施方案中，所說的連接分子是聚賴氨酸的衍生物。在一個實施方案中，該連接分子具有至少兩個相連的甲酰胺、至少三個相連的甲酰胺、至少四個相連的甲酰胺、至少五個甲酰胺、或至少六個甲酰胺。在另一個實施方案中，所說的連接分子是天然的聚谷氨酰胺。在另一個實施方案中，所說的連接分子選自聚-L-谷氨酰胺、聚-D-谷氨酰胺、和聚-DL-谷氨酰胺。還是在另一個實施方案中，所說的連接分子是聚谷氨酰胺的衍生物。在一個實施方案中，該透明質酸是天然的透明質酸。在另一個實施方案中，該透明質酸是選自透明質酸可藥用的鹽、透明質酸酯、和硫酸化的透明質酸的透明質酸衍生物。該摩爾比可選自至少2. 0和至少4. 0。在另一個實施方案中，該組合物是以選自滴眼管、隱形眼鏡溶液、眼用軟膏、眼睛填塞物、和隱形眼鏡的形式被提供的。在另一個實施方案中，該組合物是以選自舌下片、漱口劑、牙膏、糖果、和口部凝膠的形式被提供的。在一個實施方案中，透明質酸具有至少100,000的分子量。在一些重要的實施方案中，該軛合物具有高于1.0的負電荷正電荷比。在另一個實施方案中，該組合物還包含可藥用的載體。在一些重要的實施方案中， 所說的可藥用的載體具有至少^OmOsm的重量滲克分子濃度。在其它實施方案中，該可藥用的載體具有至少6.5的pH。該可藥用的載體可包含眼用防腐劑。在一些實施方案中，所說的眼用防腐劑選自有機汞制劑、季銨化合物、對羥基苯甲酸酯、被取代的醇和苯酚類物質。在一個相關的實施方案中，所說的有機汞制劑選自硝酸苯汞、醋酸苯汞、硼酸苯汞、和硫柳汞。在另一個相關的實施方案中，所說的季銨化合物選自苯扎氯銨、芐索氯銨、氯化十六烷基吡啶傷、和聚季
-1 (polyquaternium-1)(P0LYQUAD)。還是在另一個實施方案中，所說的被取代的醇和苯酚選自氯丁醇、和氯丁醇/苯乙醇。該眼用防腐劑可以是抗生素。還是在另一個實施方案中，該組合物還可以包含選自矯味劑、著色劑和香料的物質。在另一個實施方案中，該組合物還包含精氨酸或氟化物。在一個實施方案中，該軛合物具有選自至少90%、至少95%、和至少99%的重量比。在另一個實施方案中，所說的連接分子是非絡合的。在另一方面，本發明提供了一種包含被共價連接到一種是轉谷氨酰胺酶的底物的連接分子上的透明質酸的藥物組合物，其中所說的連接分子是非絡合的。在一個實施方案中，該組合物包含游離透明質酸。在另一個實施方案中，該組合物是以選自滴眼管、隱形眼鏡溶液、眼用軟膏、眼睛填塞物、和隱形眼鏡的形式被提供的。還是在另一個實施方案中，該組合物是以選自舌下片、漱口劑、牙膏、糖果、和口部凝膠的形式被提供的。還是在另一方面，本發明提供了一種位于滴眼管瓶中的包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物的組合物。在一個實施方案中，該組合物還包含可藥用的載體。在另一個實施方案中，提供了使用說明，其任選地位于所說滴眼管瓶的外表面上。在一個重要的實施方案中，該組合物還包含游離透明質酸。在其它實施方案中，該可藥用的載體具有至少^OmOsm的重量滲克分子濃度和/或至少6. 5的pH。在另一個實施方案中，該可藥用的載體包含精氨酸或溶菌酶。在一個重要的實施方案中，所說的連接分子是非絡合的。另一方面，本發明提供了一種包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物、和選自矯味劑、著色劑和香料的物質的組合物。在一個實施方案中，所說的矯味劑選自甘露醇、糖精鈉、magnasweet、薄荷提取物、 葉粉或油；留蘭香提取物、葉粉或油；冬青油；香草提取物；歐芹；牛至油；月桂葉油；丁香油；鼠尾草油；黃樟油；檸檬油；橙油；茴香油；苯甲醛；杏仁油；樟腦；雪松葉油；馬郁蘭油；cintronellaoil ；熏衣草油；芥子油；松油；松針油；迷迭香油；百里香油；肉桂葉油；薄荷醇；香芹酮；茴香腦；丁香酚；水楊酸甲酯；檸檬烯；維花烴；正-癸醇；香茅醇；α -松油醇；乙酸甲酯；醋酸香茅酯；甲基丁香酚；桉樹腦；芫荽醇；eyktl Iinalool ；香草醛；百里酚；pellira oil ；冬綠油；桉樹油；咖啡因、酒石酸氫鉀、乳酸、蘋果酸、谷氨酸單鈉、亞硝酸鹽、山梨醇、阿司帕坦、乙酰舒泛、葡萄糖、果糖、環己基氨基磺酸鈉、斯替維苷、新橙皮苷 (neo-hesperidyl)雙氫查耳酮、甘草甜素、紫蘇糖、索馬汀、天冬氨酰基苯基丙氨酸甲酯、和對-甲氧基肉桂醛。在另一個實施方案中，所說的著色劑選自FD&C藍#1、FD&C黃#5，FD&C黃#10、 FD&C紅#3、FD&C紅#40 ；焦糖色或粉末(#05439)、巧克力色光(#05349)、綠色淀摻合物 (#09236)、kowet 二氧化鈦(#03970)、黃色液體色(#0040 、和亞硝酸鹽。還是在另一個實施方案中，所說的香料選自草花提取物、草藥提取物、樹花提取物、植物提取物、和人造香料組成的組。在一些重要的實施方案中，該組合物被制備成用于口部或眼睛給藥的組合物。該組合物可以被制備成舌下片、漱口劑、牙膏、口部凝膠、和糖果形式。該組合物還可以包含精氨酸或氟化物。該組合物還可以包含任選地具有至少6. 5的pH和/或高于^OmOsm的重量滲克分子濃度的可藥用載體。本發明另一方面提供了一種在包含氟化物的載體中包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物的組合物。在一個實施方案中，該載體是可藥用的載體。在另一個實施方案中，該可藥用的載體具有至少6. 5的pH、和/或高于^OmOsm的重量滲克分子濃度。在一個實施方案中，該軛合物是以選自舌下片、漱口劑、牙膏、糖果、和口部凝膠的形式被提供的。本發明另一方面還提供了一種舌下片形式的包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物的組合物。在一個相關的實施方案中，該舌下形式還包含選自糖精、 阿司帕坦、山梨醇、乙酰舒泛、葡萄糖、果糖、環己基氨基磺酸鈉、斯替維苷、新橙皮苷雙氫查耳酮、甘草甜素、紫蘇糖、索馬汀、天冬氨酰基苯基丙氨酸甲酯、和對-甲氧基肉桂醛的甜味劑。在另一個實施方案中，該舌下形式包含維生素或氟化物。本發明另一方面還提供了一種包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物、以及有效量游離透明質酸的藥物組合物，其中所說的游離透明質酸和軛合物是以至少2的摩爾比存在的。本發明還提供了治療或預防特征為干燥的病癥的方法，其包括給需要其的個體使用有效量的任何一種前述組合物。在一個實施方案中，所說的病癥是干眼。在一個相關的實施方案中，該干眼病癥伴有選自非進行性結膜瘢痕形成(斯-約二氏綜合征)、斯耶格倫綜合征、沙眼、和疤痕性類天皰瘡的病癥。在另一個實施方案中，所說的病癥是口干燥。在另一個病癥中，個體已經經受或將經受可能可誘導干眼癥狀的手術操作如眼睛矯正手術(例如，Lasik 手術)。本發明另一方面提供了一種對個體進行治療的方法，其包括向眼睛干燥或者有出現眼睛干燥風險的個體的眼睛使用有效量的透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物。在一個實施方案中，該軛合物是以選自滴眼管、隱形眼鏡溶液、眼用軟膏、眼睛填塞物、和隱形眼鏡的形式被提供的。本發明另一方面提供了一種對個體進行治療的方法，其包括給口部干燥或者有口部干燥風險的個體的口部使用有效量的透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物。在一個實施方案中，該軛合物是以選自舌下片、漱口劑、牙膏、糖果、和口部凝膠的形式被提供的。本發明另一方面提供了一種對個體進行治療的方法，其包括給關節不適或有關節不適風險的個體的關節使用有效量的透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物。本發明另一方面提供了一種對個體進行的方法，其包括給凝血過度或有凝血過度的風險、或者血凝風險升高的個體的血管使用有效量的透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物。本發明另一方面還提供了一種對個體治療的方法，其包括給有皺紋或者有出現皺紋風險的個體的皮膚使用有效量的透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物。上述組合物和軛合物適于這里所提供的方法。下面的實施方案可相等地用于上述方法。在一個實施方案中，所說的有效量每天小于 0. 05μ g/kgo在這里將對這些方面和其它方面以及實施方案進行更詳細的描述。附錄和附圖簡要說明附錄1是列出了可用于本發明軛合物的各種聯結子的表。圖IA是以滴眼劑的形式將FITC-標記的聚賴氨酸最后一次給藥后1小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。圖IB是以滴眼劑的形式將FITC-標記的聚賴氨酸最后一次給藥后36小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。圖IC是以滴眼劑的形式將PCS-101 (軛合到透明質酸上的FITC-標記的聚賴氨酸、游離透明質酸、和緩沖劑)最后一次給藥后1小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。圖ID是以滴眼劑的形式將PCS-101 (軛合到透明質酸上的FITC-標記的聚賴氨酸、游離透明質酸、和緩沖劑)最后一次給藥后36小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。圖IE是以滴眼劑的形式將對照載體單獨最后一次給藥后1小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。圖IF是以滴眼劑的形式將對照載體單獨最后一次給藥后36小時兔角膜橫截面熒光顯微鏡檢查的照片。圖2是應用到人手指上的軛合物的體內時間過程。圖3是表示在不存在外源性加入的轉谷氨酰胺酶的情況下重復向兔角膜上應用后PCS-10-FITC的吸收的照片匯編。圖4是表示在不存在外源性加入的轉谷氨酰胺酶的情況下重復向兔角膜(橫截面)上應用后PCS-10-FITC的吸收的照片匯編。圖5是結合到豬腭上的PCS-201的照片匯編。圖6是結合到豬舌上皮的下表面上的PCS-201的照片匯編。圖7是結合到豬齦上皮上的PCS-201的照片匯編。圖8是結合到豬齦上皮和豬舌上皮上的PCS-201的照片匯編。圖9是結合到豬腭、豬齦上皮和豬舌上皮上的PCS-201的照片匯編。


圖10是結合到豬口腔上皮上的PCS-201的照片匯編。圖11是豬主動脈內層上的交聯的PCS-201和聚賴氨酸(二者都用FITC進行了標記)的照片匯編。圖12表示了 NaCl濃度對透明質酸聚賴氨酸FITC在不存在外源性加入的轉谷氨酰胺酶情況下向兔角膜的角化層上的偶合的影響。圖13表示了 PCS-101和游離HA對兔角膜淺層的結合的比較。圖14是對兔角膜模型中與PLL-TRITC軛合的HA-FITC和HA-FITC以及未進行處理的細胞的進行了校正的平均熒光強度進行比較的柱狀圖。這些圖并不是實現要求保護的本發明所必需要求的。本發明的詳細描述本發明提供了一些用于治療將從存在的透明質酸受益的病癥的新穎組合物和方法，所說的病癥包括特征為干燥的病癥。特征為干燥的病癥包括干眼和口干燥，其可能分別是由于眼淚和唾液產生不足而導致的。在一些實施方案中，本發明利用其能吸引和保留水分子的能力用透明質酸作為能潤濕受影響的粘膜或外部組織的活性物質。正如這里更詳細討論的那樣，據報道，已經成功地用透明質酸來潤濕經歷干眼的個體的角膜和結膜。本發明部分地是以可以用轉谷氨酰胺酶-介導的反應將透明質酸連接到受影響的表面如粘膜(例如，角膜或口腔)、內皮、或外部(例如，頭發或指甲)表面上的發現為基礎的。轉谷氨酰胺酶是介導特定的肽結合的Y-谷氨酰基殘基和作為胺供體底物的肽結合的賴氨酸或聚胺的各種伯氨基之間的共價交聯反應的鈣-依賴性酶族的酶(Davies等人， Adv. Exp. Med. Biol. 250，391-401，1988)。在哺乳動物中已經確定、克隆和測序了至少五種酶活性的轉谷氨酰胺酶。本發明包括使用能影響例如谷氨酰胺的甲酰胺基團和例如賴氨酸的氨基之間的共價結合的任何和所有轉谷氨酰胺酶以及其酶衍生物。在優選的實施方案中，影響該軛合物與機體組織的結合的該轉谷氨酰胺酶是一種內源性轉谷氨酰胺酶，但是在一些實施方案中也可以使用外源性轉谷氨酰胺酶。透明質酸不是轉谷氨酰胺酶的固有底物，這是因為其不包含與轉谷氨酰胺酶反應的氨基或甲酰胺基團。但是，根據本發明可以對其進行修飾以使其易于被轉谷氨酰胺酶作用。例如，可以通過向透明質酸的適宜反應基團上加上甲酰胺或氨基側基來實現這一點 (即，“改性的”透明質酸)。這一點還可以通過將谷氨酰胺、賴氨酸或谷氨酸和賴氨酸兩者與透明質酸共價偶合從而形成一種是轉谷氨酰胺酶底物的軛合物來實現。最優選的方法是將一種連接分子，如聚谷氨酰胺、聚賴氨酸、外皮蛋白(一種天然的轉谷氨酰胺酶底物)、或外皮蛋白片斷偶合到透明質酸上從而形成一種適宜的軛合物。然后，存在于上皮組織如角膜上皮或口腔上皮中的內源性轉谷氨酰胺酶能夠催化連接分子(具有連接到其上的透明質酸)與眼睛或口腔中的氨基或甲酰胺底物共價連接。天然的透明質酸一種D-葡萄糖醛酸和N-乙酰基D-葡萄糖胺的二糖重復單體所組成的線形聚合物。除非特別說明，否則這里所用的術語“透明質酸”指的是包括天然的透明質酸以及其衍生物(即，類似物)，非限制性地包括鹽和酯。透明質酸的鹽包括可藥用的鹽如鈉鹽和季銨鹽。透明質酸衍生物包括已經用其它化學反應如酯化作用改性的透明質酸，因此包括透明質酸酯以及硫酸化透明質酸(如US 6，339，074B1所述)。透明質酸衍生物的一個實例是hylan。透明質酸衍生物還包括合成或半合成的變型如US 4,851,521 ；4，965，353 ；和5，202，431中所述的透明質酸和脂族、芳脂族、雜環、和環脂族醇的酯(例如， 透明質酸的芐酯或乙酯)。本發明的組合物除共軛形式的透明質酸外還包括游離形式的透明質酸。以前已經有使用游離透明質酸的報道。現在已經發現可以通過轉谷氨酰胺-介導的鍵合將透明質酸連接到眼睛或其它受影響的表面上。該類連接延長了透明質酸在眼睛(或其它受影響表面)上的存在時間，從而降低或完全消除了向該類表面上重復應用透明質酸的需要。因此， 應當清楚的是，該組合物的治療益處主要是得自所存在的軛合的透明質酸，其一旦被應用到機體組織上，就會立即變得共價連附在該組織上。存在于組合物中的游離透明質酸不會出現這種情況，這是因為之前已經證明了游離透明質酸僅具有有限的治療益處。這里所用的術語“軛合物”既包括該連接分子直接連接到透明質酸上又包括該連接分子間接連接到透明質酸上。間接連接一般指的是在連接分子和透明質酸之間存在一種間隔物(即，聯結子)。在這里對適宜的間隔物進行了描述。雖然不希望受到任何特定理論或機理的束縛，但透明質酸是用于治療特征為干燥的病癥(非限制性地如干眼、口干燥和陰道干燥)的，這是因為其能作為增濕劑和/或濕潤劑。這里所用的增濕劑是一種可以形成膜從而可以捕獲水分子并防止或限制其蒸發程度的物質。這里所用的濕潤劑是一種可以增加組織、表面或其它區域的水含量的物質。透明質酸在中性PH下通常荷負電，并且具有能吸引和保留水分子的親水性羥基。透明質酸既可以形成膜又可以吸引和保留水分子。因此，其既可以作為增濕劑，又可以作為濕潤劑。還已經報道了透明質酸可以抑制血小板聚集，其這種機理被用在本發明血管給藥制劑的實施方案中。透明質酸可以通過商業途徑獲得，并且其在以各種商標名進行銷售，包括Healon、 Hyalastine、Hyalectin、Hyloran (透明質酸鈉)、和Hyaloftil (高分子量的透明質酸)。或者，如 US3, 396，081 ；3，862，003 ；4，141，973 ；4，517，296 ；5，316，926 ；6，090，596 等等中所述的那樣，可以通過合成或通過由動物來源純化(如公雞冠，以Hyalform的形式商業銷售) 或體外發酵(如細菌發酵，以Restylane的形式商業銷售)來獲得透明質酸。所用透明質酸的長度對本發明而言并不關鍵，只要其長度足以將受影響的機體表面或組織水化即可。為此，在一些實施方案中，與較短的透明質酸鏈(即，具有低于 2000的分子量)相比，更優選更長的透明質酸鏈(即，具有高于100，000的分子量)，除非有一些該類較短的鏈被連接到連接分子上。在其中軛合物僅包含一個連接分子和一個透明質酸鏈的情況中，至少為了將可以被保留的水分子數目最大化，優選更長的透明質酸鏈。生產或分離低和高分子量透明質酸的方法是已知的并且已經在US4，141，973(MW至少 750，000) ；5，079，236(MW50, 000 至 200，000) ；5，316，926(MWl, 100，000 至 4，000，000)； 5，925，626 (MW 在 50，000 至 100，000 之間；和在 500，000 至 730，000 之間)；6，090，596 (MW 高于 6，000，000)；和 6，194，392 (MW 在 150，000 至 750，000 之間)中進行了報道。透明質酸鏈的長度將被稱為二糖單元的數目(各單元具有約401道爾頓的分子量)或該鏈的分子量。例如，分子量為200，000的透明質酸鏈由498個二糖單體單元組成。在一些重要的實施方案中，該透明質酸鏈具有高于50，000、高于60，000、高于75，000、 高于100，000、高于150，000、和高于200，000的分子量。在另一些實施方案中，該透明質酸可以具有高于300，000、高于400，000、高于500，000、高于600，000、高于700，000、高于800，000、高于900，000、和高于1,000,000的更高分子量。在一些優選的實施方案中，該透明質酸是至少200，000、至少210，000、至少220，000、至少230，000、至少240，000、或至少 250,000。在一些實施方案中，將本發明的軛合物與游離透明質酸一起提供給個體。這里所用的“游離”透明質酸沒有與連接分子軛合。本發明并不依賴于透明質酸與其特定受體(例如，CD44)的結合來獲得治療結果。而是一般通過直接給藥和轉谷氨酰胺酶界介導的鍵合來控制透明質酸向受影響部位的定位。本發明的方法并不需要透明質酸與其受體的結合。 存在的游離透明質酸并不成問題，這是因為其不會與軛合透明質酸競爭結合同源受體，所以其不會降低所說軛合物的功效。此外，只要其包含足夠水平的內源性轉谷氨酰胺酶和轉谷氨酰胺酶底物，不管其是否還表達透明質酸受體，本發明的軛合物都可以連接到任何表面或組織上。在一些實施方案中，使用以低于天然透明質酸與透明質酸受體親合力的親合力結合到透明質酸受體上的透明質酸衍生物(游離形式和/或軛合形式)。在一些實施方案中， 其親合力比天然透明質酸的結合親合力低2-倍、低5-倍、低10-倍、低20-倍、低50-倍、 或低100-倍。在一些實施方案中，組合物中游離透明質酸與軛合透明質酸的摩爾比為至少10、 至少5、至少4、至少3. 5、至少3、至少2. 5、至少2、至少1. 5、至少1. 2、至少1、至少0. 9、至少0. 8、至少0. 7、至少0. 6、至少0. 5、至少0. 4、至少0. 3、至少0. 2、或至少0. 1。在一些特定的實施方案中，游離透明質酸與軛合透明質酸的摩爾比高于1，優選地高于1.5，并且更優選地高于2。如這里所用的這樣，游離透明質酸與軛合透明質酸的摩爾比是未與連接分子軛合的透明質酸(包括所有麗變型)的摩爾數和與連接分子軛合的透明質酸(相同或不同麗的透明質酸)的摩爾數的比例。因此，在一些實施方案中，游離透明質酸的數量足以與軛合透明質酸競爭與透明質酸受體的結合。本發明的連接分子是轉谷氨酰胺酶的底物。因此，其具有脂族胺或甲酰胺，但是優選地不會同時具有脂族胺或甲酰胺。優選的連接分子是帶有多個是轉谷氨酰胺底物的反應性甲酰胺和/或脂族胺的聚合物。是轉谷氨酰胺酶的底物的包含甲酰胺的化合物是眾所周知的并且包括谷氨酰胺。是轉谷氨酰胺酶的底物的脂族胺也是眾所周知的，并且在例如US 5，490，980給出了其實例，該專利文件的內容在這里被引入作為參考。但是，與描述了單脂族胺部分的該'980專利不同，本發明在一方面包括使用多個脂族胺。該脂族胺(或多個脂族胺)可以是相連的，或者其可以以一定的離散間隔被間隔開，優選地沿著分支或無分支聚合物的長度被間隔開。在一些實施方案中，反應部分的間距對于將該軛合物連接到特定的機體組織上而言是很重要的。一個實施方案包括是具有多個單元的聚合物的連接分子，各單元帶有是轉谷氨酰胺酶的底物的脂族胺。該聚合物可以是均聚物或雜聚物。正如這里在涉及連接分子時所述的那樣，轉谷氨酰胺酶的聚脂族胺底物是一種具有至少三個沿著連接分子的骨架以離散間隔彼此間隔開的脂族胺的連接分子，所說的脂族胺被一個或多個骨架原子分離開。這是最易于想象的，例如，富含賴氨酸的聚合物，而聚合物的離散單元帶有脂族胺，其各自獨立地是轉谷氨酰胺酶的底物。該連接分子本身可以是相連的賴氨酸的聚合物，優選地是至少2、 至少3、至少4、和至少5個或更多個該類相連賴氨酸的聚合物。優選各自帶有脂族胺的相連單元的聚合物。在一些實施方案中，該連接分子可以具有少至兩個相連的賴氨基酸殘基， 并且這些殘基優選地位于該連接分子的任何一個末端上。同樣地，其它重要的連接分子是具有多個單元的聚合物，各單元帶有轉谷氨酰胺酶反應性甲酰胺基團。該聚合物可以是均聚物或雜聚物。轉谷氨酰胺酶的聚甲酰胺底物是一種具有至少兩個沿著連接分子的骨架以離散間隔彼此間隔開的甲酰胺的連接分子，所說的甲酰胺被一個或多個骨架原子分離開。該類連接分子可以是相連甲酰胺的聚合物，優選地是至少2、至少3、至少4、或至少5個或更多個相連甲酰胺的聚合物。在一些重要的實施方案中，該相連的甲酰胺位于所說連接分子的任何一個末端上。最優選的連接分子是富含甲酰胺部分或脂族胺部分的聚合物，如谷氨酰胺或賴氨酸、或谷氨酰胺和賴氨酸。富含甲酰胺的聚合物是一種其中其單元的至少20%是攜帶甲酰胺的單元的聚合物。富含脂族胺的聚合物是一種其中其單元的至少20%是攜帶脂族胺的單元的聚合物。因此，這些聚合物還包括這些具有至少30%、至少40%、至少50%、或更多其所定義的單元的物質。富含谷氨酰胺或賴氨酸的聚合物是一種其單元的至少20%為谷氨酰胺或賴氨酸、或谷氨酰胺和賴氨酸的聚合物。富含甲酰胺或脂族胺的聚合物還可以是一種包括至少3，優選4，并最優選5或更多個獨立件并被規則距離的甲酰胺或脂族胺離散地間隔開的聚合物，如存在鄰接的連接到一起的谷氨酰胺或賴氨酸。但是，應當清楚地是，可以將少至兩個谷氨酰胺或賴氨酸連接或束縛到透明質酸上以使其成為轉谷氨酰胺酶的底物。 在優選的實施方案中，該連接分子和包含其的軛合物是內源性轉谷氨酰胺酶的底物(即， 其具有被內源性轉谷氨酰胺酶作用的足夠的轉谷氨酰胺酶反應性基團)。其它優選的連接分子是聚賴氨酸。聚賴氨酸包括聚-L-賴氨酸、聚-D-賴氨酸、和聚-DL-賴氨酸。另一種重要的連接分子是聚-谷氨酰胺。聚-谷氨酰胺包括聚-L-谷氨酰胺、聚-D-谷氨酰胺、和聚-DL-谷氨酰胺。因此，該連接分子包括天然或衍生物形式的聚賴氨酸和聚谷氨酰胺。聚賴氨酸的一種天然形式是賴氨酸單體的聚合物。聚賴氨酸的衍生物形式是其中一種或多種單體可以被改性(化學改性或其它改性)的賴氨酸單體的聚合物。在一些實施方案中，該排列分子是不能被蛋白酶水解的分子。這些后面所說的肽衍生物可包括不可水解的骨架變型。所說連接分子的長度通常不受限制，本發明既可以使用短鏈連接分子又可以使用長鏈連接分子。因此，可以有效使用短至三個殘基(三個賴氨酸或三個谷氨酰胺)的連接分子。所說連接分子的分子量范圍為小于200Da至高于100，OOODa，相應殘基的數目取決于連接分子的組成。根據實施方案，該連接分子可以具有至少500、至少1000、至少5000、至少10，000、至少25，000、至少50，000、至少75，000、至少100，000或更高的分子量。本領域技術人員將能根據連接分子的分子量以及其組成來確定所說連接分子單體單位的數目。實施例所用的連接分子具有181個賴氨酸殘基的平均長度，因此，其具有約23，000的平均分子量。在一些重要的實施方案中，所說的連接分子是非絡合的，如果其是聚賴氨酸的話尤其如此。“非絡合的”連接分子指的是未與本發明的透明質酸外的化合物、和/或鹽或載體溶液的氨基酸進行連接的那些。在一些重要的實施方案中，非絡合的連接分子例如沒有與治療劑如藥物或核酸復合。已經報道了聚賴氨酸能與核酸結合形成一種離子復合物。因為聚賴氨酸在中性PH下荷正電荷，所以其傾向于與荷負電的物質如核酸發生離子相互作用。但是，在本發明的一些方面，不打算用該軛合物來傳遞核酸，因此該類軛合物的連接分子是非絡合的。連接分子如聚賴氨酸可以被維持在非絡合形式，例如可以通過控制鹽濃度和pH 以消除聚賴氨酸和荷負電物質(例如治療劑如藥物或核酸)之間的離子相互作用來將其維持為非絡合形式。例如，可以增加陰離子濃度以與荷負電物質競爭與聚賴氨酸進行的離子結合。在其它實施方案中，該軛合物可以以略微高滲的溶液的形式被提供，如其重量滲克分子濃度高于^OmOsm。在其它實施方案中，該制劑的重量滲克分子濃度高于^OmOsm、高于 300m0sm、高于 310m0sm、高于 320m0sm、高于 330m0sm、高于 340m0sm、高于 350m0sm、或更高。 可以用任何鹽(包括單價和二價鹽)、氨基酸或緩沖劑來調節該溶液的重量滲克分子濃度。該連接分子還可以以包括其它物質(非限制性地如精氨酸)的非絡合形式被提供。在一些實施方案中，這些物質與賴氨酸單體單位競爭與透明質酸的結合，從而防止了該軛合物的透明質酸和聚賴氨酸組分之間形成離子復合物。因此，在一些重要的實施方案中， 透明質酸和聚賴氨酸組分彼此之間不是離子絡合，而是彼此僅僅在共軛點相接觸(例如， 其之間為共價鍵或二者都連接到一種間隔物分子上)。在另一些實施方案中，因為該軛合物不攜帶核酸分子，在該制劑中可以包括核酸酶如DNA酶和RNA酶。重要的是必需有足夠數目的轉谷氨酰胺酶反應性基團(即，脂族胺或甲酰胺)來通過轉谷氨酰胺酶的作用與組織進行反應。因此，不能將所有的轉谷氨酰胺酶反應性基團都絡合，但是在一些情況中，少至2-3個轉谷氨酰胺酶反應性基團就足以進行轉谷氨酰胺酶-介導的反應。在一些實施方案中，所說的轉谷氨酰胺酶反應性基團可以存在于該聚合物的末端，而在一些其它情況中其可以位于內部。該軛合物的結構可以根據透明質酸和連接分子而變化，前提是其具有足夠數目可獲得的氨基或甲酰胺反應性基團(以使其可以作為轉谷氨酰胺酶的底物)，和透明質酸可以濕潤受影響的表面或組織。就其最簡單的形式而言，該軛合物是透明質酸和連接分子1 1的軛合物。即，該軛合物將包含彼此直接或間接連接的一條透明質酸鏈和一條連接分子。就更復雜的形式而言，該軛合物包含連接到單一連接分子上的數個透明質酸鏈。 透明質酸可以在沿著該連接分子長度的相連部位上被連接到連接分子上，或者其可以以固定或隨機長度的分隔間隔被連接。在后一種實施方案中，該軛合物將是一種具有作為其骨架的連接分子和具有作為其接枝物的透明質酸鏈的接枝共聚物。該連接分子骨架上的透明質酸側鏈的長度、數目、和位置將影響需要被給藥以賦予治療益處的軛合物的數量。在一些實施方案中，可以將透明質酸側鏈接枝到連接分子中幾乎每一個可獲得的反應性基團上， 前提是必需可以獲得足夠的轉谷氨酰胺酶反應性基團以將該軛合物連接到受影響的機體組織或表面上。用于將該軛合物連接到受影響的表面上的位于連接分子上的轉谷氨酰胺酶反應性基團可以位于所說連接分子的末端，但是不是僅限于位于其末端。因此，在一個實施方案中，該反應性基團可以位于連接分子的中間，透明質酸鏈在一個或兩個側面連接到其上。還可以用透明質酸接枝到連接分子上的程度來對該軛合物的結構進行描述。這里所用的接枝比率是表示透明質酸二糖單體的數目與連接分子單體數目的比例。作為實例， 分子量為220，000(并包含約549個透明質酸的二糖單位)的透明質酸鏈的一個鏈與分子量為23，000(并包含約181個賴氨酸殘基)的聚賴氨酸連接分子的軛合相當于約3的接枝比(即，549/181)。可以根據被接枝到連接分子上的透明質酸的數目和長度以及連接分子本身的長度來改變該接枝比。因此，根據該實施方案，接枝比可以從低于0.001到高于 10000的范圍內變化。在一些重要的實施方案中，該接枝比率為至少0. 001、至少0. 005、至少0. 01、至少0. 1、至少0. 5、至少1、至少5、至少10、至少20、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90、至少95、至少100、至少250、至少500、至少750、至少1000、 至少2500、至少5000、至少7500、和至少10000。應當注意到接枝比率本身不是透明質酸和連接分子之間鍵合數的指示。在一些優選的實施方案中，透明質酸二糖單位的數目高于連接分子亞單位(例如，賴氨酸殘基)的數目，因此，該比例高于1。同樣可以用表達為百分比的每軛合物總重量的透明質酸總重量比例(即透明質酸和連接分子的重量)來對軛合物進行結構性描述。這種重量比同樣在低于0.001至 99. 9%的范圍內。在一些重要的實施方案中，該重量比為至少0. 005%、至少0. 01%、至少 0. 1%、至少0. 5%、至少1%、至少5%、至少10%、至少20%、至少30、至少40%、至少50%、 至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少90 %、至少95 %、和至少99 %。在其中透明質酸二糖單體的數目比連接分子單體(例如，賴氨酸殘基)的數目多的優選實施方案中，該重量比優選地高于90%。因此，在優選的實施方案中，該重量比高于90%、高于91%、高于92%、高于93%、高于94%、高于95%、高于96%、高于97%、高于98%、高于99%、高于99. 5%、和高于99.9%。因此，在一些重要的實施方案中，軛合物中連接分子的重量一般為10%或更低。該軛合物的分子量還可以根據該軛合物的復合材料而變化。一種具有一個分子量為220，000的透明質酸鏈和分子量為23，000的連接分子的實例性軛合物具有M3，000的分子量。該軛合物的分子量可以在約50，000至高于10，000，000之間變化，優選的范圍為 75，000至1，000，000，更優選的范圍為100，000至500，000，并且更優選的范圍為100，000 至 300，000。在另一種情況中，可以用透明質酸(重量)與聚賴氨酸(重量)的比例(表示為百分比)來對該軛合物進行描述。還可以用其電荷比例(即，負電荷與正電荷比)來對該軛合物進行描述。小于1 的電荷比表明總體荷正電，而高于1的電荷比表明總體荷負電。在一些重要的實施方案中， 該電荷比可以從高于1至高于10的范圍內變化。在一些實施方案中，該電荷比可高于1、 高于2、高于3、高于4、高于5、高于6、高于7、高于8、高于9、高于10、高于12、或更高。在其它實施方案中，該電荷比的范圍為1至10，優選地為2至8，更優選地為3至7，并且更優選地為4至6。在優選的實施方案中，該軛合物在6. 5至8的pH范圍內總體荷負電。pH高于6. 5時，透明質酸將荷負電。在pH高于約8時，賴氨酸殘基變為電荷中性，但是整個軛合物將荷負電。對于包含聚-谷氨酰胺的軛合物而言，該軛合物在PH高于6. 5時將總是荷負電，這是因為谷氨酰胺殘基為中性電荷。這里所用的軛合物指的是彼此通過任何化學或物理化學方法穩定連接到一起的實體。重要的是該連接的性質應當是其基本不會損害透明質酸的效力或連接分子的底物活性的該類連接。在記住這些參數的情況下，可以使用本領域技術人員公知的任何連接，包括共價或非共價鍵。優選共價鍵。該類手段和方法對于本領域普通技術人員而言是眾所周知的。在用聚賴氨酸作為連接分子的實施方案中，透明質酸和聚賴氨酸通過還原性胺化反應被軛合到一起。實施例提供了形成聚賴氨酸和HA軛合物的實驗方案。一般而言，透明質酸的還原性末端與聚賴氨酸上的氨基殘基偶合從而形成一種希夫氏堿，然后將其還原成亞氨基鍵。在一種實驗性方案中，透明質酸和聚賴氨酸被溶解于一種溶劑如硼酸鹽(PH 8.5)或磷酸鹽(pH 8.3)緩沖劑中。向其中加入還原劑如氰基硼氫化鈉(NaB3HCN)并使該反應在0至50°C的溫度下進行1小時至5天。通過加入有機溶劑如二甲基甲酰胺或二甲基亞砜來對該反應進行控制。其可以通過防止透明質酸和聚賴氨酸之間的離子相互作用來得到增強。可以通過加入鹽如氯化鈉或氯化鉀或者通過增加反應溫度來減少該類離子相互作用。在一些實施方案中，用于形成軛合物的起始材料的摩爾比為0.5 1至5 1的聚賴氨酸透明質酸。在一個重要的實施方案中，聚賴氨酸透明質酸的起始摩爾比為 1.3 1。這些試劑的摩爾比可給出每個聚賴氨酸軛合較少(例如一個或兩個)透明質酸鏈的軛合物。在合成反應結束時，可以將該溶液透析以除去未軛合的聚賴氨酸。但是，優選地不除去未軛合的透明質酸，因此，該分離是一種選擇性除去未軛合的聚賴氨酸而不是未軛合的透明質酸的操作。例如，如果所說的分離技術是透析，則對透析管的孔徑進行選擇，從而使其可以允許進行聚賴氨酸(具有例如23，000的MW)的運轉而不允許進行透明質酸(具有例如至少100，000的MW)的運轉。在構建軛合物時，其希望通過一種間隔物將該連接分子束縛到透明質酸上。這可以消除例如可能由空間位阻所導致的任何問題，在所說的空間位阻所導致的問題中，轉谷氨酰胺酶接近所說連接分子反應性基團的過程受到阻礙。這些間隔物可以是各種分子中的任何分子，優選地是無活性的分子，如直鏈或甚至支鏈的飽和或不飽和的C1-C3tl碳鏈、磷脂、 氨基酸(例如，甘氨酸)等等，其可以是天然存在或合成的。另外的間隔物包括烷基和鏈烯基碳酸酯、氨基甲酸酯、磷酸酯、和脲。這些物質都相關并且可以為間隔物如上述C1-C3tl間隔物增加極性官能度。適宜的間隔物如附錄A中所提供的這些物質，其可以通過商業途徑獲得，例如可得自Pierce Chemical Co。這里所述的軛合或變型使用常規的化學過程，其是化學領域技術人員眾所周知的，因此不夠成本發明的一部分。在文獻中也已經對使用保護基團和已知聯結子如單-和異-雙官能聯結子進行了描述，在這里不再重復敘述。因此，本發明的連接不一定是直接連接。可以為本發明的組合物的組分提供官能化基團以促進其連接和/或可以在這些組合物的組分之間插入聯結子基團以促進其連接。 此外，本發明組合物的組分可以在單一過程中被合成，從而使得這些組分可被看成一種和相同的實體。例如，可以將透明質酸合成為在一個用于通過轉谷氨酰胺酶連接多肽的末端包括聚谷氨酰胺。共價鍵的特定實例包括這些其中使用雙官能交聯劑分子的這些物質。這些交聯劑分子可以是均-雙官能或異-雙官能的，其取決于被軛合分子的性質。均-雙官能交聯劑具有兩個相同的反應性基團。異-雙官能交聯劑被定義為具有兩個使得可以連續進行軛合反應的不同的反應性基團。可以通過商業途徑獲得的各種類型的交聯劑與一個或多個下面的基團反應伯胺、仲胺、巰基(sulphydryls)、羧基、羰基和碳水化合物。胺-特異性交聯劑的實例有二(磺基琥珀酰亞氨基)辛二酸酯、二 [2_(琥珀酰亞胺氧基羰氧基) 乙基]砜、辛二酸二琥珀酰亞胺酯、酒石酸二琥珀酰亞胺酯、己二酸二甲酯_2HCl、di甲基 pimelimidate-2HCl、di 甲基 suberimidate_2HCl、和乙二醇二-[琥珀酰亞氨基-[琥珀酸酯]]。與巰基反應的交聯劑包括二馬來酰亞氨基己烷、1，4_ 二-[3' -(2'-吡啶基二硫基)_丙酰氨基]]丁烷、1_[對-疊氮基水楊酰氨基]_4-[碘乙酰氨基]丁烷、 和N44-(對-疊氮基水楊酰氨基)丁基]-3' -[2'-吡啶基二硫基]丙酰胺。優選地與碳水化合物反應的交聯劑包括疊氮基苯甲酰基胼。優選地與羧基反應的交聯劑包括 4-[對-疊氮基水楊酰氨基]丁胺。與胺和巰基反應的異雙官能交聯劑包括N-琥珀酰亞氨基-3-[2-吡啶基二硫基]丙酸酯、琥珀酰亞氨基[4-碘乙酰基]氨基苯甲酸酯、琥珀酰亞氨基4-[N-馬來酰亞氨基甲基]環己烷-1-甲酸酯、間-馬來酰亞氨基苯甲酰基-N-羥基琥珀酰亞胺酯、磺基琥珀酰亞氨基6-[3-[2_吡啶基二硫基]丙酰氨基]己酸酯、和磺基琥珀酰亞氨基4-[N-馬來酰亞氨基甲基]環己烷-1-甲酸酯。與羧基和胺反應的異雙官能交聯劑包括1-乙基-3_[3- 二甲基氨基丙基]-碳二亞胺鹽酸鹽。與碳水化合物和巰基反應的異雙官能交聯劑包括4-[N-馬來酰亞氨基甲基]-環己烷-1-羧基酰胼· 2HC1、 4-G-N-馬來酰亞氨基苯基)丁酸酰胼·2Ηα、和3-[2_吡啶基二硫基]丙酰基酰胼。該交聯劑是二-[β-4-疊氮基水楊酰氨基]乙基]二硫化物和戊二醛。可以在合成核酸的任何核苷酸上加上氨基或硫醇基團從而為雙官能交聯劑分子提供一種連接點。可以合成混入能共軛試劑的核酸，所說的試劑如Uni-Link氨基改性劑、3’-DMT-C6-胺-ON CPG、氨基改性劑II、N-TFA-C6-氨基改性劑、C6-硫醇改性劑、C6- 二硫化物氨基磷酸酯和C6- 二硫化物 CPG(Clontech, Palo Alto, CA)。用于將透明質酸軛合到本發明的轉谷氨酰胺酶底物上的其它聯結子包括US 5，342，770中所述的肽聯結子。在US 6，303，555B1 (例如具有4_6個碳原子的羧酸、或乙氧基化的多羥基醇、或聚乙烯吡咯烷酮、或MW 6000-10, 000的聚乙二醇)、US 5，952，454(用于將葡萄糖基供體軛合到包含胺的載體上的間隔物)、US 6，361，777B1 (氨基硫醇聯結子)、US 4，680，338 (雙官能聯結子)、US 5，034，514等等中對其它化學聯結子組合物進行了描述。在一些實施方案中，希望用一種可以在正常生理學條件下裂解或在使用刺激物如光時被特定裂解的鍵將透明質酸連接到該連接分子上，從而使得該物質可以被釋放。在某些實施方案中，透明質酸在其軛合形式下是無活性的，并且僅當其被釋放時才有活性。在其它情況中，將從遠離其與機體組織的連接點的地方釋放透明質酸從而使其發揮活性。在另外一些情況中，將以緩釋方式釋放透明質酸，從而與應用到皮膚上但是不與其共價結合的透明質酸相比，可以延長透明質酸的釋放。易于裂解的鍵包括易于水解的鍵，例如，酯鍵、酰胺鍵和希夫氏堿-型鍵。眾所周知的是這些鍵可以被光裂解。在另一些實施方案中，可裂解的鍵可以是連接分子的單體單位之間的肽鍵本身。該類鍵可以被蛋白酶如胰蛋白酶裂解， 根據受影響的組織，其可以在各種濃度的溶液中進行應用。還可以使用非共價軛合的方法。非共價軛合包括疏水性相互作用、離子相互作用、高親合力的相互作用如生物素-抗生物素蛋白和生物素-抗生物素蛋白鏈菌素絡合作用和其它親合力的相互作用。在一個實施方案中，將一種分子如抗生物素蛋白連接到連接分子如聚谷氨酰胺上。一旦根據本發明被連接到組織上，這種軛合物將變成用于被連接到生物素分子上的任何物質的通用連接部分。該連接分子可以是微粒如微球或毫微球的一部分，并且透明質酸可以被包含在微粒中，可以被物理包埋在其中、共價結合到其上或者物理化學地連接到微球上。在優選的實施方案中，所說的微球或毫微球至少在其表面上攜帶著富含谷氨酰胺、賴氨酸、或谷氨酰胺和賴氨酸的聚合物。在文獻中已經對制造微粒的方法進行了描述并且不構成本發明的基礎。本發明僅僅在微粒結構本身的聚合物方面與現有技術不同，該聚合物包含或被衍生化成包含谷氨酰胺和/或賴氨酸、或者谷氨酰胺、賴氨酸的聚合物、或者谷氨酰胺和賴氨酸被包含在形成基質的聚合物混合物中，從而使得該類聚合物被包埋在微粒中和/或位于該微粒的表面上。在 US 5, 075, 019,PCT W095/24929.PCT W094/23738 和 PCT/US96/11990 中可以發現微球和毫微球以及其制造方法的實例，所公開內容引入作為參考。在本發明的另一個方面，用具有任何數目聯結子分子的透明質酸軛合物，包括這里所列舉的和現有技術中公知的這些物質來將各種治療劑傳遞到機體組織或表面上。在一些重要的實施方案中，所說的聯結子是這里所列舉的包含脂族胺和甲酰胺的聯結子。在本發明的這一方面，用透明質酸作為治療劑的載體分子，并且可以賦予透明質酸本身治療益處或者可以不賦予其治療益處。在US 6，267，957B1中公開了其它的聯結子分子。該專利的全部內容在這里都被引入作為參考。該專利還公開了可以通過透明質酸進行給藥的各種治療劑。可以使用的治療劑的實例包括腎上腺素能藥；腎上腺皮質類固醇；腎上腺皮質抑制劑；醇抑制劑；醛固酮拮抗劑；氨基酸；氨解毒劑；組織代謝劑；興奮劑；止痛劑；雄激素；麻醉助劑；麻醉劑；減食欲物質；拮抗劑；垂體前葉抑制劑；驅蟲藥；抗痤瘡藥；抗腎上腺素能；抗變應性藥；抗阿米巴蟲藥；抗雄激素物質；抗貧血藥；抗心絞痛藥；抗焦慮藥； 抗關節炎藥；止喘藥；抗動脈粥樣硬化藥；抗菌劑；anticholelithic ；抗膽結石藥；抗膽堿能藥；抗凝劑；anticoccidal ；抗驚厥藥；抗抑郁劑；治療糖尿病的藥；止瀉劑；制尿劑；解毒劑；止吐劑；抗癲癇劑；抗雌激素藥；抗纖維蛋白溶解劑；殺真菌劑；治療青光眼的物質； 抗血友病藥；抗出血藥；抗組胺藥；抗高血脂藥；抗高脂蛋白血藥；抗高血壓藥；抗低血壓藥；抗感染藥；局部抗感染藥；抗炎藥；抗角質化劑；抗瘧藥；抗菌劑；抗偏頭痛藥；抗有絲分裂藥；抗真菌藥、止惡心藥、抗腫瘤藥、抗中性白細胞減少藥、抗肥胖藥(antiobessional agent)；抗寄生蟲劑；抗震顫麻痹藥；抗蠕動藥、抗肺囊蟲藥；抗增殖劑；抗前列腺肥大藥； 抗原生動物劑；止癢劑；安定藥；抗風濕劑；抗血吸蟲劑；抗皮脂溢劑；抗分泌劑；解痙劑； 抗血栓形成藥；鎮咳劑；抗潰瘍藥；抗尿石藥；抗病毒藥；食欲抑制劑；良性前列腺肥大治療劑；血糖調節劑；骨吸收抑制劑；支氣管擴張藥；碳酸酐酶抑制劑；心臟抑制藥；保心藥； 強心劑；心血管藥；利膽劑；膽堿能藥物；膽堿能激動劑；膽堿酯酶滅活劑；抗球蟲藥；認識助劑；認識增強劑；抑制劑；診斷輔助藥；利尿劑；多巴胺能藥；殺外寄生蟲藥；催吐藥；酶抑制劑；雌激素；溶纖維蛋白藥；熒光劑；氧自由基清除劑；胃腸蠕動效應器；糖皮質激素； 促性腺物質；毛發生長刺激劑；止血劑；組胺H2受體拮抗劑；激素；膽固醇降低劑；降血糖藥；降血脂藥；低血壓藥；顯像劑；免疫劑；免疫調節劑；免疫調節藥；免疫促進劑；免疫抑制劑；性無能治療輔助劑；抑制劑；溶角蛋白劑；LNRH激動劑；肝病治療劑；黃體溶解素；記憶力佐劑；精神行為增強劑；情緒調節劑；粘液溶解藥；粘膜保護劑；散瞳藥；鼻粘膜減充血劑；神經肌肉阻滯劑；神經保護劑；NMDA拮抗劑；非激素留醇衍生物；催產劑；纖維蛋白酶原激活劑；血小板活化因子拮抗劑；血小板聚集抑制劑；中風后和頭部損傷后治療；強化因子；孕激素；前列腺素；前列腺生長抑制劑；prothyrotropin ；精神藥物；肺面；放射性試劑；調節劑；松弛藥；再分配劑；殺芥螨藥；硬化劑；鎮靜劑；鎮靜劑-安眠劑；選擇性腺苷 Al拮抗劑；血清素拮抗劑；血清素抑制劑；血清素受體拮抗劑；類固醇；興奮劑；抑制劑；癥狀性多發性硬化；增效劑；甲狀腺激素；甲狀腺抑制劑；擬甲狀腺藥；鎮定藥；肌萎縮性側索硬化的治療；腦局部出血的治療；佩吉特氏病的治療；不穩定的絞痛的治療；排尿酸藥； 血管收縮藥；血管舒張藥；創傷藥；傷口愈合藥；黃嘌呤氧化酶抑制劑。
正如對本領域技術人員而言顯而易見的那樣，這些后面所說的其中用透明質酸作為其它治療劑的載體的軛合物可用于對需要該類治療的個體進行治療或預防的方法中。確定將從使用該類物質獲益的個體是醫學從業者的領域。 本發明的方法可用于治療這里所述的特定病癥或癥狀或有出現這些病癥或癥狀風險的個體的許多方法中。在患病時，患有該類病癥的個體是由醫學從業者診斷或患者自我診斷已經確診的個體。該類診斷可以以個體所經歷的癥狀為基礎或者可以以實驗室試驗為基礎。有患病風險的個體是由于環境、行為或基因因素而可能形成該病癥的個體。對于患病個體的病癥或情況進行治療，而對有患病風險的個體進行預防。該化合物可用于治療或預防許多病癥，包括那些特征為干燥的病癥。特征為干燥的病癥是一種其中個體經歷組織或機體組織如眼睛或嘴缺乏水分或潤滑的病癥。應當清楚的是，特征為干燥的病癥可以影響機體的任何區域，既可以是內部區域也可以是外部區域。 可以用這里所提供的方法治療的情況的實例包括干眼、口干燥、干性皮膚(例如，皺紋)、陰道腔干燥等等。該化合物可用于治療和/或預防以前已經報道過的可以用透明質酸有益進行治療或預防的任何病癥。以前已經對該類病癥進行過描述并且其對于一般醫學從業者而言也是公知的可以用這里所述的組合物治療的皮膚病癥包括褥瘡、營養不良性潰瘍、燒傷、無痛傷、創傷后潰瘍、靜脈曲張性潰瘍和靜脈炎后潰瘍、放射后壞死、皮膚損害如由單純皰疹病毒誘導的這些皮膚損害和皮膚移植物。在這些實施方案中，可以用紗布墊、乳膏、噴霧形式將該組合物給藥并且其可以包括乳化劑。可包含在局部制劑中的其它物質包括甘露醇、聚乙二醇、油酸、甘油、山梨醇，對-羥甲基苯甲酸酯、石蠟凝膠、和甘氨酸。可以用本發明的化合物治療的其它病癥包括呼吸病癥如肺氣腫、慢性支氣管炎、 哮喘、肺水腫、急性呼吸窘迫綜合征、支氣管肺發育不良、肺纖維化、和肺不張。對于這些病癥而言，該組合物可以被氣管內給藥，包括通過氣霧劑、噴霧器、或滴劑來進行給藥。間質性膀胱炎是可以用本發明的組合物治療的另一種病癥。患有間質性膀胱炎的個體具有諸如尿急和排尿頻率增加、可以通過排尿緩解的恥骨弓上性疼痛、關節炎、痙攣性結腸和低度發熱之類的癥狀。該組合物優選地被直接滴注到膀胱和/或相關的解剖學結構中，例如用導管來進行滴注。被滴注的體積可以為5ml至100ml，更優選地為20ml至 70ml。還可以使用經腹壁給藥。該化合物還可用于經歷關節不適的個體。經歷關節不適的個體是關節如膝關節和臂關節出現不適或疼痛的個體。這種不適最常出現在需要進行關節彎曲的活動中，并且伴有該類關節的活動性不足。其常常是關節炎的表現。以這種方式進行治療的個體包括這些患有關節病癥或者有形成關節病癥風險的個體，所說的關節病癥如骨關節炎、急性或慢性滑膜炎(synoritis)、關節軟骨的變性過程、和慢性絨毛性關節炎疾病。這些情況通常伴有的癥狀包括疼痛和關節功能受損。在這些實施方案中，所說的組合物可以以關節內注射的形式被給藥。該類組合物可包含膠原、蛋白多糖、糖胺聚糖、糖蛋白、硫酸灰分、白蛋白、和防腐劑如苯甲酸鈉、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯。可以向機體的任何關節進行注射，非限制性地包括心皮、球節、蹄槽、或脛骨關節、跗骨或跗趾骨關節、股脛關節的內側囊、或股髕骨關節。 治療或預防關節病癥的方法特別適用于動物如賽馬。所說的化合物還可用于患有過度凝血的患者或形成血塊風險升高的個體、具有不利的心血管情況或有出現不利心血管情況風險的個體。這些個體之前存在血塊或者由于環境、行為(例如飲食)或基因因素而傾向于形成血塊。形成血塊的風險升高是風險高于正常個體群體風險的情況。過度凝血是不適當地發生凝血，其比正常個體群體所經歷的凝血更頻繁或更嚴重。通常用靜脈內或動脈內醫學裝置如斯滕特固定模或氣囊血管成形術來給個體使用本發明的化合物。可以將所說的化合物涂布到醫學裝置上或者可以通過推注或連續注射來將其進行給藥。因此，這里所提供的組合物可用于預防再狹窄。或者，將任選地與游離透明質酸一起使用的軛合物可用于導向通道、旁路、人工靜脈、分流器、以及用于心血管系統的其它生物材料的制備。在一些實施方案中，以具有另一種治療劑的治療制劑形式將組合物用于機體組織或表面上。已知透明質酸可透過組織，因此可用于增加機體組織對另外的制劑的接受性。 所治療的組織可以是正常灌注或由于病理學狀態而灌注不足的這些組織。這里所提供的組合物可用于治療患有干眼或口干燥的個體，但是其應用不僅限于此。干眼可能是由許多基礎情況導致的，所說的基礎情況非限制性地包括損害分泌眼淚的 (即產生眼淚的)腺體的自身免疫性病癥，如類風濕性關節炎、斯耶格倫綜合征、和系統性紅斑狼瘡、以及系統性硬化癥和肉樣瘤病。這些個體中的許多個體形成眼淚的能力下降。 被診斷為患有眼睛(包括角膜和/或結膜)干燥的個體適于用這里所述的治療方法進行治療。這些個體通常陳述眼睛感到輕度不適或嚴重疼痛、視力模糊、沙礫感和/或灼燒感、和瘙癢，并且可能出現角膜潰瘍和/或瘢痕化。本發明還提供了治療患有口干燥的個體的方法。口(即口腔)干燥可能是由壓力、 基礎性情況(如斯耶格倫綜合征和系統性硬化癥、分泌唾液的(即產生唾液的)腺體的感染)、使用特定的藥物(如抗膽堿能藥、利尿劑、抗組胺藥、可樂定、左旋多巴、甲基多巴、和三環抗抑郁劑)、或進行放療所導致的。口干燥的個體通常抱怨吞咽和說話困難和痛苦、味覺受到干擾，并且在一些情況中會出現牙齒腐蝕。由于激素改變，干眼在絕經后的婦女中也很常見。除緩解干眼和口干燥癥狀外，本發明的透明質酸軛合物還可用于其中需要在組織或表面上維持一定水平的濕度和水分的其它情況。實例包括眼內手術如白內障的切除、眼內晶狀體植入和角膜成形術。該組合物還可用于緩解其它粘膜組織(例如陰道、直腸、鼻、肛門等等)以及外部組織(例如頭發、指甲、嘴唇等等)干燥的癥狀。在另一些實施方案中，該軛合物被用于有血小板凝固異常風險的個體，這是因為已經報道了透明質酸可以抑制血小板聚集。該類個體可以是經歷侵入性過程如放置斯滕特固定模或氣囊血管成形術的這些個體，并且本發明的軛合物可以用這些裝置進行給藥，但是給藥并不僅限于這種形式的給藥。應當清楚的是，所提供的組合物可用于治療性方法以及預防性方法中。當用于治療應用時，將用該軛合物來緩解個體已經存在的癥狀，因此，可以在患者提出出現癥狀后使用。當用于治療應用時，將用該化合物來防止正在從事或將從事已知會造成該類癥狀的活動的個體出現癥狀或延遲癥狀的開始。這些活動在干眼的情況中包括例如過度閱讀、過度使用計算機、并且甚至是可能長期使用隱形眼鏡。“個體”指的是人或脊椎動物，非限制性地包括狗、貓、馬、牛、豬、綿羊、山羊、雞、靈
長目動物例如猴、魚(水產養殖種類)例如鮭魚、大鼠、和小鼠。本發明的組合物以有效量來進行給藥。術語“有效量”指的是必需或足以實現所需生理學作用的量。例如，如果對患者的該類癥狀進行治療，包含透明質酸的軛合物的有效量是降低或消除干眼癥狀所必需的數量。如果被治療的個體是患有或懷疑患有口干燥的個體，則有效量是降低或消除口干燥癥狀所必需的量。這里所用的術語“治療”指的是降低或完全消除癥狀，非限制性地如與干眼或口干燥有關的這些癥狀。作為實例，如果在治療后干眼癥狀的嚴重程度降低或頻率減少或者被完全消除，則在治療前出現干眼癥狀的個體將被 “治療”。在這里對與干眼或口干燥有關的癥狀進行了描述。結合這里所提供的教導，通過對各種軛合物結構和權重因子如功效、相對生物利用度、患者體重、不利副作用的嚴重程度和優選的給藥模式、以及計劃進行的基本不會造成毒性或刺激性的有效的預防或治療性處理方案進行選擇，可以徹底有效地對特定的個體進行治療。用于任何特定應用的有效劑量可以根據諸如被治療的疾病或情況或被緩解的癥狀、被給藥的特定軛合物、個體的大小、或疾病、情況或癥狀的嚴重程度之類的因素來進行變化。本領域普通技術人員可以在不必進行試驗的情況下根據經驗來確定特定軛合物的有效量。軛合物的有效量還將取決于軛合物的準確性質，非限制性地包括透明質酸與連接分子的比例、以及透明質酸和連接分子的長度或分子量。當以游離形式應用時，已經以 0. 溶液(w/v)(即，lmg/ml)的形式將透明質酸鈉給藥到眼睛上。但是，考慮到本發明的透明質酸可以通過連接分子被連接到眼睛表面上的能力，其認為本發明制劑中需要較低數量的透明質酸。該劑型每個劑量優選地將效力與0. 透明質酸溶液相當的軛合物數量進行給藥。通常建議該軛合物應被制備為如果應用到眼睛上時每次給藥可以傳遞至少 50μ g透明質酸，并且如果用于口腔時每次給藥可以傳遞至少Img透明質酸。用于口部給藥的制劑應當比用于眼睛上的這些制劑的濃度更高，這是因為口腔中被治療的面積更大。這里所述化合物的個體劑量一般為約0. OOlmg/天至16，OOOmg/天，更典型地為約 0. 05mg/天至8000mg/天，并且最典型地為約0. Img/天至4000mg/天。在用個體體重進行表述時(假定平均體重為80kg)，典型的劑量范圍為約0. 00001至200mg/kg/天，更典型地為約0. 0006至100mg/kg/天，并且最典型地為約0. 001至50mg/kg/天。同樣，被傳遞軛合物的體積將根據給藥部位而變化。如果被傳遞到眼睛中，則該體積優選地小于2ml、小于lml、小于0. 5ml、小于0. 25ml、小于0. lml、小于0. 05ml、小于0. 025ml、或更低。如果被傳遞到口腔中，則該體積可以更大，特別是如果該軛合物是在大體積制劑如漱口劑中被傳遞時更是如此。或者，如果該軛合物以噴霧劑的形式被傳遞到口腔中，則該體積將可以是眼睛給藥體積的規模。可以以任何方式將該軛合物給藥于個體，但是，優選的方式與被治療的情況和癥狀有關。例如，當用于治療干眼癥狀時，該軛合物被給藥于眼睛。當用來治療口干燥癥狀時， 該軛合物被給藥到口腔中。當被口給藥時，該軛合物將被直接傳遞到口腔中(在一些情況中包括咽喉區域)而不是被傳遞到胃或胃腸道的其它區域中。其它給藥途徑非限制性地包括鼻內給藥、氣管內給藥、吸入給藥、陰道給藥、直腸給藥、局部給藥、關節內給藥、和靜脈內給藥。根據病癥和給藥方式，該化合物將在不同的容器、基質或制劑中被提供。例如，并如這里更詳細描述的那樣，對用于口部應用而言，該化合物可以以舌下片、橡皮糖、漱口劑、 牙膏、糖果、凝膠、薄膜等等形式被給藥；對于眼睛應用而言，可以為滴眼管中的滴眼劑、眼睛軟膏、眼睛凝膠、眼睛填塞物、隱形眼鏡或眼內透鏡上的涂層的形式、隱形眼鏡儲存中的溶液或清洗溶液等等形式；對于局部應用而言，可以為洗劑、軟膏、凝膠、乳膏、噴霧、薄織物、藥簽、擦拭物等等形式；對于關節內給藥而言，可以為關節內傳遞的可注射溶液等等形式；對于血管應用而言，可以為位于醫學裝置上的涂層、可注射溶液等等形式；對于陰道或直腸應用而言，可以為軟膏、塞子、栓劑、粘膜粘著制劑等等形式。本發明的軛合物可以以各種適于眼睛給藥的組合物和物理形式給藥于患有干眼的個體。用于眼睛給藥的組合物必需可以與眼睛的環境相容，至少在PH、鹽組分和濃度方面與之相容。這些組合物不應當刺激眼睛。可以以各種物理形式給藥于眼睛的組合物非限制性地包括液體溶液、眼用軟膏或凝膠、或眼睛填塞物如棉拭子。液體溶液方便地在滴眼管的幫助下被給藥并且可以在滴眼管瓶中被提供。滴眼管瓶是一種包括用于從容器中取出液體的滴眼管的容器。其可以是玻璃或塑料的，并且其大小可以根據液體體積以及其保存期的不同而不同。不包含防腐劑如眼用防腐劑的溶液的保存期一般較短，因此，通常被制備成較小體積。因此，在一些重要的實施方案中，該組合物是在包含最多0. 5ml體積或5. Oml體積的滴眼管小瓶中被提供的。后面的這些實施方案相當于單次應用或單周應用單位，并且其任選地不包含眼用防腐劑。可以在試劑盒中提供多個該類體積的瓶(例如，用吹-填-封方法制備的小瓶)，所說的試劑盒可任選地包含一種外殼如盒或袋、或襯墊如薄板紙或塑料襯墊。如這里所述的這樣，所說的試劑盒可以包含用于說明組合物的應用的使用說明，如此處所概括。該組合物還可以在常用于眼睛護理并且可以通過商業途徑獲得的溶液中被提供。 例如，可以將該組合物與隱形眼鏡溶液，如隱形眼鏡清潔液、隱形眼鏡儲存液、或用于隱形眼鏡佩戴者的滴眼劑混合在一起。隱形眼鏡溶液在現有技術中是已知的并且通常指的是用于儲存或清潔隱形眼鏡的溶液、或隱形眼鏡佩戴者所用的溶液如滴眼劑或人工淚液制劑。 當一起被提供給隱形眼鏡佩戴者時，該組合物可以降低角膜和隱形眼鏡之間的摩擦。該組合物還可以以薄膜的形式被提供，并且該類膜可以被涂布到隱形眼鏡上，例如，可以由隱形眼鏡制造商將其涂布到隱形眼鏡上，以在沒有干眼或眼睛刺激的情況下延長隱形眼鏡的使用。同樣，該組合物可以被包含在隱形眼鏡被商品化地提供在其中的溶液中。
該組合物同樣可以被制備成眼用凝膠或軟膏的形式，如現有技術中公知的這些形式。用于眼睛給藥的組合物可以包含在眼用溶液、凝膠等等中已經描述過或者已知存在于眼淚中的其它物質。一個實例是已知存在于眼淚中的溶菌酶。在一些涉及眼睛給藥的實施方案中，可以對該組合物進行處理以消除顏色(從而使得該溶液澄清無色)。或者，希望為該組合物增加顏色或改變其顏色，特別是如果用顏色來確認該組合物是傳遞到眼睛的組合物時更是如此。在一些實施方案中，眼用組合物不包含防腐劑，而是過濾滅菌(例如，用0.22 μ m 濾器過濾)并將其以單次應用量進行包裝。因此，在一些情況中，本發明的組合物可以被制備和/或包裝成使用量的單位。使用量的單位是一次給藥或一天給藥、一周給藥、一個月給藥或一段更長時間給藥所需的數量。使用數量的單位優選地是一次給藥或最多幾天給藥 (但是小于一周)所需的數量。用單位使用包裝來防止溶液的污染，這是因為其減少了個體必需接觸溶液的次數。本發明的軛合物同樣可以以用于口部和頰給藥的各種組合物和物理形式被給藥于患有口干燥的個體。術語“ 口部”和“頰”在這里可以互換使用，指的是口部，包括嘴唇、牙齒、口腔、舌頭、腭、和咽喉上部區域。用于口部或頰給藥的組合物必需與口腔的環境相容。 與用于傳遞到眼睛的制劑相比，對口部或頰傳遞制劑的要求通常較低。但是，味道和氣味方面的考慮對于口或頰制劑而言很重要，而且對于眼用制劑而言可能是最不重要的。在優選的實施方案中，不管其物理形式如何，該組合物被傳遞和保留在口腔中。因此，該組合物優選地以可以留在口中不被攝取到胃腸道中的形式如錠劑、噴霧、橡皮糖、舌下片、漱口劑、口部凝膠、牙膏、粘膜粘附貼劑等等的形式被提供。當口部傳遞時，該軛合物與口部粘膜(包括舌下粘膜)進行接觸。“粘膜”指的是粘液性膜。這里所用的“口部粘膜”指的是嘴和上咽喉區域的粘膜。“舌下”指的是舌頭下面的口腔區域。一種適宜的口用形式是舌下片。舌下片將軛合物傳遞到舌下粘膜上。這里所用的 “片劑”指的是通過壓縮或模塑制備的藥物劑型。舌下片是用于放置在舌下的扁平小片，并被設計成可以迅速，幾乎瞬時崩解并將軛合物釋放到舌下粘膜上。術語“崩解”指的是破碎開。本發明的舌下片優選地在5分鐘內，并且更優選地在2分鐘的時間內崩解釋放軛合物。 然后所釋放的軛合物可以通過口腔中存在的內源性轉谷氨酰胺酶的作用結合到口部粘膜上。口部傳遞制劑的其它形式包括錠劑、橡皮糖和可溶解的薄膜。口用制劑還可以以液體形式存在。該液體可以以噴霧或滴劑的形式被給藥到包括所選擇的區域如舌下區域的整個口腔內。可以用適于口給藥或舌下給藥的標準噴霧瓶或滴瓶將本發明的噴霧劑和滴劑進行給藥。該液體制劑優選地被盛放在噴霧瓶、細霧化瓶、或氣霧劑容器中以使得易于進行口腔給藥。可以將液體制劑盛放在被定刻度的滴瓶或噴霧瓶中以將預定數量的組合物傳遞到口腔中。具有定刻度的噴霧器或滴瓶在現有技術中是已知的。本發明的軛合物還可以被制備成口部凝膠。作為一個實例，該軛合物可以在在一種粘膜粘附的非水溶性凝膠中被給藥。該凝膠是由至少一種水不溶性的烷基纖維素或羥基烷基纖維素、揮發性非水性溶劑、和軛合物制得的。雖然可以加入生物粘附性聚合物，但其并不是必需的。一旦該凝膠與粘膜表面相接觸，主要由于揮發性或非水性溶劑的蒸發而形成一種粘性膜。該凝膠保留在粘膜表面上的能力與其薄膜稠度和所存在的不溶性組分有關。可以通過噴霧、浸漬、或用手指或藥簽直接敷用來將該凝膠應用到粘膜表面。本發明的軛合物還可以被制備成漱口劑或牙膏形式。在需要的情況中，傳遞制劑可以包含矯味劑、著色劑和/或香料。矯味劑、著色劑和/或香料有助于改善使用者對該組合物的接受性。矯味劑是為一種沒有味道的制劑提供味道的物質、增強之前存在味道但是味道較弱的制劑的味道的物質、或掩蓋之前存在的令人不愉快的味道或將其變為更適口的味道的物質。矯味劑在現有技術中是已知的并且可以從許多供應商那里通過商業途徑獲得，所說的供應商如Warner-Jenkinson Company, he。矯味劑的實例包括薄荷提取物、葉粉或油；留蘭香提取物、葉粉或油；冬青油；香草提取物；歐芹；牛至油；月桂葉油；丁香油；鼠尾草油； 黃樟油；梓檬油；橙油；茴香油；苯甲醛；杏仁油；樟腦；雪松葉油；馬郁蘭油；cintronella oil ；熏衣草油；芥子油；松油；松針油；迷迭香油；百里香油；肉桂葉油；薄荷醇；香芹酮； 茴香腦；丁香酚；水楊酸甲酯；檸檬烯；繳花烴；正-癸醇；香茅醇；α -松油醇；乙酸甲酯；醋酸香茅酯；甲基丁香酚；桉樹腦；芫荽醇；eyktl Iinalool ；香草醛；百里酚；pellira oil ；冬綠油；桉樹油；咖啡因、酒石酸氫鉀、乳酸、蘋果酸、谷氨酸單鈉、亞硝酸鹽、山梨醇等等。在該制劑用于頰或口部給藥的情況中，最希望使用矯味劑。矯味劑還包括甜味劑(即， 增甜劑)如阿司帕坦、乙酰舒泛、糖精、葡萄糖、果糖、環己基氨基磺酸鈉、斯替維苷、新橙皮苷雙氫查耳酮、甘草甜素、紫蘇糖、索馬汀、天冬氨酰基苯基丙氨酸甲酯、對-甲氧基肉桂醛等等。同樣，著色劑是為沒有顏色的制劑提供顏色的物質、增強之前存在顏色但是顏色較弱的制劑的顏色的物質、或掩蓋或改變之前存在但是可能令人不愉快的顏色的物質。著色劑還包括可以將一種顏色的制劑轉化成無色制劑的物質。著色劑在現有技術中是已知的并且可以購自矯味劑的供應商如上面所列的這些供應商。眼用以及口用制劑都希望使用著色劑。適宜著色劑的實例是二氧化鈦。適宜的口用著色劑包括FD&C藍#1、FD&C黃#5 和#10、FD&C紅#3和#40 ；焦糖色或粉末(#冊439)、巧克力色光(#05349)、綠色淀混合物 (#09236)、kowet 二氧化鈦(#03970)、黃色液體色(#0040 、和亞硝酸鹽。香料是為無嗅制劑提供氣味(即，香味)的物質、增強之前存在香味但是香味弱的制劑的香味的物質、或掩蓋之前存在但是可能令人不愉快的香味的制劑的香味的物質。香料還包括可以將有味的制劑轉化成沒有氣味的制劑的物質。香料在現有技術中是已知的并且可以購自矯味劑供應商如上面所列的這些供應商那里。香料的實例包括天然香料如草花、草藥、樹花或植物提取物，和人造香料。眼用以及口用制劑都希望使用香料。適宜舌下片的實例是根據下面的配方來進行制備的透明質酸和聚賴氨酸軛合物(制備成為每片Img軛合物)；甘露醇USP (DC級)31. 5mg;微晶纖維素40. 35mg;羥乙酸淀粉鈉 NF 2. 6mg ；糖精鈉，USP 0. 5mg ；香料 S. D.薄荷，FCC 0. 75mg ；magnasweet MM 188M 0. 5mg ；香草香料 #8000. 2mg ；D&C 黃 #10,鋁色淀 0. 2mg ；硬脂酸鎂，NF 0. 5mg ；aerosil 2000. 4mg。適宜舌下片的另一個實例是按照下面的配方制備的透明質酸和聚賴氨酸軛合物(被制備成每片Img軛合物)；甘露醇30. 30mg ；微晶纖維素(FMC) 4. 00 34. OOmg ；羥乙酸淀粉鈉(EXPLS TABMendell) 2. 60 ；硬脂酸鎂NF 0. 50mg ；糖精鈉(Mallinckrodt) 2. OOmg ；阿司中白坦(Neutrasweet) 4. OOmg ；薄荷(Virginia Dare HF82 SD #517)0. 40mg ；香草(Virginia Dare800 NAT)0. 30mg；MAFCO magnasweet 188M 0. 25mg ；prosweet #560(MM54)0. 75mg ；巧克力香料 #682 2· OOmg ;D&C 黃 #10。本領域技術人員將意識到易于對這些制劑進行變化。應當清楚地是，可以向本發明的制劑中加入其它組分，包括其本身對于個體而言具有治療作用或是有益的組分。例如， 本發明的口用制劑可以包含維生素或氟化物，并且如現有技術中公知的那樣，眼用制劑可以包含治療劑如治療青光眼的藥。在上面的制劑中，甘露醇、糖精鈉、薄荷、magnasweet和香草是能掩蓋所說軛合物味道或者至少提供美好的味道的矯味劑。刪除該矯味劑不會犧牲功效。但是，患者的順從性可能會更差。可以改變矯味劑以適應個體需要和味覺。用D&C黃作為著色劑。可以容易地刪除著色劑或代之以其它染料。硬脂酸鎂和Aerosil-200是用于將片劑從壓片設備中釋放出來的潤滑劑。根據制造過程，可以對這些成分進行替代或將其完全取消。微晶纖維素、 甘露醇和羥乙酸淀粉鈉提供了片核。纖維素和淀粉促進了核成分的結合并且促進了存在水分時片劑的崩解。可以改變這些成分的相對數量以調整片劑的崩解。對所有組分數量進行稱重，并將除甘露醇和Avicel之外的所有成分都用80目不銹鋼篩篩分。將這些物質在大小適宜的聚乙烯袋中混合約5分鐘，然后將其轉移到適宜的混合器，如Hi混合器中。將所需數量的甘露醇和Avicel用40目不銹鋼篩篩分并將其加入到該具有其它成分的1 混合器中。將該混合物在該Hi混合器中混合10分鐘，然后將其卸載。對該混合物樣品的效能和其它決定品質的標準進行檢查。在叩擊100次的基礎上用堆密度裝置在該混合物上測量堆密度。用指定的沖進行壓片，將該混合物壓縮成片重為80mg 的片劑。通過將一片片劑放置在舌下來將該片劑進行給藥。使該片劑崩解并釋放然后會附著在口部粘膜上的包含透明質酸的軛合物。可以用蒸餾滅菌來制備口用溶液，其可以根據下面的配方來進行制備透明質酸和聚賴氨酸軛合物(被制備成每次給藥提供lmg/ml軛合物)；氯化鈉0. 9% ；和苯扎氯銨 0. 1至0.2%。該制劑代表了可以通過滴劑、或以細煙霧形式被給藥的口用溶液，但是其并不限于其該給藥途徑。本領域技術人員將容易地意識到易于對該制劑進行變化。在上面的配方中，用氯化鈉來使該溶液等滲。對于使用者而言，該類溶液更舒服； 但是，如果需要的話，可以不使用氯化鈉。還是在上面的配方中，用苯扎氯銨作為防腐劑。但是，在某些實施方案中，優選地使用略微高滲例如高于^OmOsm的配方，以使該軛合物本身或與其它荷電化合物一起保持非絡合形式。在這里對這些實施方案進行了詳細描述。還可以用粘膜粘附裝置或系統來完成口服給藥。這種類型的優選系統是這些在應用后可以自然侵蝕的系統。適宜的可生物侵蝕的粘膜粘附裝置或系統的一個實例是BEMA ， 其可以被制備成凝膠、盤或薄膜并且可以被用于任何粘膜表面上。可生物侵蝕的粘膜粘附裝置是使得可以將活性物質傳遞到粘膜表面如口或陰道粘膜上的以聚合物為基礎的系統。可生物侵蝕的粘膜粘附裝置一般包含一種可以采取許多形式的膜。在一個優選的實施方案中，該可生物侵蝕的粘膜粘附裝置是一種半柔軟的小盤形式。在形成后，可以將可生物侵蝕的粘膜粘附裝置如BEMA 盤用軛合物浸滲。將這些裝置粘附在粘膜表面，如嘴、陰道、 直腸、或肛門的粘膜表面上。因為該膜是生物侵蝕性的，所以其中所包含的軛合物被釋放出來并附著在鄰近的粘膜上。因為該盤基本溶解于粘膜表面的水分中，所以不需要除去該盤。 可生物侵蝕的粘膜粘附裝置的一個優點是將釋放到周圍的組織或腔中而不粘附到粘膜上的軛合物最小化。一般而言，該膜(例如盤形式)僅有一側粘附在粘膜表面上。對于應用到陰道或肛門的應用而言，其建議將該裝置(例如盤)卷起，然后將其插入到所說的腔中， 特別注意該裝置粘性側的位置。可以特定地合成該可生物侵蝕的粘膜粘附裝置以控制該裝置中軛合物的保留時間、生物侵蝕動力學(并從而控制活性物質的釋放時間和速率)、該裝置的味道(特別適于口服給藥的情況)、以及形狀和盤的厚度。可生物侵蝕的粘膜粘附系統和裝置可以由Atrix Laboratories (Fort Collins, Colorado), Epic Therapeutics, Inc. , Takeda Chemical Industries. Ltd. , ALZA Corp., 和 Alkermes Control Therapeutics, Inc.通過商業途徑獲得。可以參考 US 5, 650, 173 ； 5，656，297 ；5，679，377 ；5，800，832 ；5，888，533 ；5，955，097 ；5，962，006 ；6，103，266 ； 6，110，503 ；6，156，331 ；6，159，498 ；6，261，584 ；6，265，389 ；6，267，981 ；6，268，053 ； 6，275，728 ；和 6，290，984 等等。該軛合物可為該裝置的0. 001至30重量％并且更優選地為0. 005至20重量％之間。在該BEMA 盤中還可以存在其它組分，包括增塑劑、矯味劑(口服應用優選)、香料(例如香料)、著色劑、和防腐劑。這些后面的組分可以加入到該盤粘性層和非粘性層的任何一種中或者二者中都加入。該盤可以采取各種形狀或大小。該盤的厚度可以為0.05mm至1mm，或0. Imm至 5mm，膠粘層或非膠粘層中的任何一種占總厚度的10至90%。如這里所述的這樣，可以用任何數目的適宜溶劑或溶劑組合對該軛合物進行制備以將其裝載到BEMA 盤上，所說的溶劑和溶劑組合非限制性地包括單獨使用或組合使用的水、甲醇、乙醇、或低級烷基醇如異丙可以用任何數目公知的現有技術來完成盤的制備，所說的現有技術非限制性地包括膜浸漬、膜涂布、薄膜鑄塑、自旋涂布(spin coating)、或噴霧干燥。該盤的兩層可以一起形成或者可以分別形成然后使之彼此接觸。該盤可以被成形成橢圓形、正方形、和矩形，但是并不僅限于這些形式。本發明的組合物可以在可藥用載體中被給藥，所說的可藥用載體通常包含可藥用濃度的鹽、緩沖劑、防腐劑、可相容的載體、助劑、和任選的其它治療劑。術語“可藥用的載體”指的是一種或多種適于給藥于個體的可相容的固體或液體填充劑、稀釋劑或包封物質。 術語“載體”表示天然或合成的有機和/或無機成分，其可結合活性成分以有助于個體應用。該藥物組合物的組分還能以其中沒有將會損害所需的藥學功效的相互作用的方式與本發明的軛合物和組合物混合以及彼此混合。可藥用的載體在現有技術中是已知的。該載體的形式將隨著給藥部位的不同而不同。但是，該載體必需適用于轉谷氨酰胺酶活性。雖然轉谷氨酰胺酶傾向于在微堿性PH(例如6. 5至9的pH)環境下發揮功效， 但是特別是對于眼睛給藥而言，這一點可能不合適。因此，必需通過增加鹽濃度來抵銷轉谷氨酰胺酶的這種PH依賴性。還必需確保透明質酸和連接分子不會彼此離子復合至使得連接分子難以接近轉谷氨酰胺酶和/或使透明質酸不能發揮增濕劑功效的程度。在最大轉谷氨酰胺酶活性、透明質酸和連接分子之間的最小離子相互作用、以及受影響表面或組織最低刺激的基礎上來確定PH和鹽濃度。與轉谷氨酰胺酶活性相容的適宜防腐劑包括kathon和尼泊金甲酯。與轉谷氨酰胺酶活性相容的適宜去污劑和/或表面活性劑包括hampene led、吐溫20、chemophor RH-40、和DC190。與轉谷氨酰胺酶活性相容的適宜濕潤劑包括丙二醇、丁二醇、和glucacam E-20。應當避免的防腐劑包括glydant、Dowicil 200、BTC 2125M、和碘代乙酰胺。應當避免的去污劑和/或表面活性劑包括Bioterge AS-40、CTAB、monomate CPA40、和SDS。透明質酸以及其它被給藥的化合物可以以本身的形式(凈品)或其可藥用鹽的形式被給藥。當用于藥品時，該鹽應當是可藥用的，但是可以方便地用不可藥用的鹽來制備其可藥用的鹽。該類鹽非限制性地包括這些由下面的酸制備的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、 磷酸、馬來酸、醋酸、水楊酸、對-甲苯磺酸、酒石酸、枸櫞酸、甲磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、 萘-2-磺酸、和苯磺酸。該類鹽還可以被制備成堿金屬鹽或堿土金屬鹽，如羧酸基團的鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。適宜的緩沖劑包括醋酸和鹽(1-2%W/V)；枸櫞酸和鹽(1-3%W/V)；硼酸和鹽(0. 5-2. 5 % w/v)；以及磷酸和鹽(0. 8-2 % w/v)。適宜的防腐劑包括苯扎氯銨 (0. 003-0. 03% w/v)；氯丁醇(0. 3-0.9% w/v)；尼泊金酯類(0. 01-0. 25% w/v)和硫柳汞 (0. 004-0. 02% w/v)。該藥物組合物還可以包含適宜的固體或膠化相載體或賦形劑。該類載體或賦形劑的實例非限制性地包括碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠、和聚合物如聚
乙二醇。適宜的液體或固態藥物制劑形式有，例如，用于吸入的水溶液或生理鹽水溶液、微囊化、encochleated、被涂布到極微小金顆粒上、被包含在脂質體中、被噴灑、氣霧劑、用于植入到皮膚中的丸劑、或被干燥到尖銳的物體上以擦刻到皮膚中的物質。該藥物組合物還包括顆粒、粉末、片劑、包衣片、(微)膠囊、栓劑、糖漿、乳劑、混懸液、乳膏、滴劑或具有活性化合物的拖延釋放的制劑，在這些制劑中通常使用上述賦形劑和添加劑和/或輔助劑如崩解劑、粘合劑、包衣劑、膨脹劑、潤滑劑、矯味劑、增甜劑或增溶劑。該藥物組合物適用于各種藥物傳遞系統。對于用于藥物傳遞的本發明方法的綜述可參見Langer，Science 249 1527-1533，1990，其在這里被引入作為參考。該組合物可以方便地存在于單位劑型中并且可以用藥學現有技術中任何眾所周知的方法來進行制備。所有的方法都包括將化合物與組成一種或多種配合劑的載體放到一起的步驟。一般而言，該組合物可以通過將該化合物與液體載體、分割得很細的固體載體、 或液體載體和分割得很細的固體載體均勻仔細進行混合，然后，如果需要的話將其成形成產品來進行制備。液體劑量單位有小瓶或安瓿。固體劑量單位有片劑、膠囊、膜和栓劑。重要地是，該載體必需適用于其所接觸的機體組織或表面。正如本領域普通技術人員公知的那樣，適用于眼睛給藥的載體需要對眼睛的刺激性極小，并且優選地對眼睛沒有刺激性。眼睛或眼用制劑在藥學現有技術中是公知的，并且本領域技術人員可以參考 ReminRton‘ s Pharmaceuticals來作為該類載體組成的指導。
眼用制劑可以采取液體形式，如溶液、乳劑、分散體形式，和半固體形式如凝膠和軟膏。眼用制劑可以包含或不包含眼用防腐劑。眼用防腐劑在現有技術中是已知的。因為細菌感染是給藥于眼睛的物質的最常見的副作用，所以該類防腐劑一般是抗生素。眼用防腐劑的實例包括有機汞制劑(例如，硝酸苯汞、醋酸苯汞、硼酸苯汞、硫柳汞( Merthiolate ,Lilly))；季銨化合物(例如，苯扎氯銨)、芐索氯銨、氯化十六烷基吡啶億、聚季輪-l(POLYQUAD))；對羥基苯甲酸酯；和被取代的醇以及苯酚類物質(例如，氯丁醇、氯丁醇/苯乙醇)。其它適宜的防腐劑包括尼泊金甲酯和尼泊金丙酯。如現有技術中公知的那樣，還可以通過過濾或加熱對這里所提供的制劑進行滅菌。眼用制劑還可包含等滲劑、緩沖劑、防腐劑(如上所述)、稀釋劑、穩定劑、螯合劑、 增稠劑等等。等滲劑的實例包括氯化鈉、硼酸、枸櫞酸鈉等等。緩沖劑的實例包括硼酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑等等。眼用制劑的PH應被維持在5-8的范圍內。稀釋劑的實例包括蒸餾水或無菌水或生理鹽水(對于水性制劑而言)、和植物油、液體石蠟、礦物油、丙二醇、和對-辛基十二烷醇(對于非水性制劑而言)。穩定劑的實例包括亞硫酸鈉和丙二醇。適宜螯合劑的一個實例是EDTA鈉。增稠劑的實例包括甘油、羧甲基纖維素、和羧乙烯基聚合物。可以包含在眼用制劑中的其它組分包括山梨酸、磷酸二氫鈉、硼酸鈉、氫氧化鈉、 氯化鉀、氯化鈣、甘油、溶菌酶等等。對于口部給藥而言，該類載體使得本發明的化合物可以被制備成舌下或頰吸收片、丸劑、糖錠劑、膠囊、液體、凝膠、膜、糖漿、膏劑、混懸液等等。口部制劑還包括牙膏、粉末、液體牙膏、托牙洗劑、漱口劑、托牙洗劑、口香糖、糖果、和其它食品。用于口部應用的藥物制劑可以以固體賦形劑的形式獲得，任選地將所得的混合物進行研磨，如果需要的話，然后在加入適宜的助劑后對顆粒混合物進行加工，得到片劑或糖錠劑核。適宜的賦形劑特別是填充劑如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇、或山梨醇；纖維素制劑，例如，玉米淀粉、小麥淀粉、 稻谷淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和 /或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要的話，可以加入崩解劑，如交聯聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或藻酸或其鹽如藻酸鈉。該口部制劑還任選地在鹽水或緩沖液中進行制備以中和內部的酸性情況，但是當組合物在口腔中被吸收時這一點的關鍵性沒有當其在胃腸道時被吸收那么關鍵。可以為糖錠劑核提供適宜的包衣。為此，可以使用濃的糖溶液，所說的溶液可以任選地包含阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波普凝膠、聚乙二醇、和/或二氧化鈦、 漆溶液、以及適宜的有機溶劑或溶劑混合物。可以向該片劑或糖錠劑包衣中加入染料或顏料以標明或描繪活性化合物劑量的不同組合。口用的藥物制劑包括由明膠制成的推入-配合的膠囊以及由明膠和增塑劑如甘油或山梨醇制成的密封的軟膠囊。該推入-配合的膠囊可以包含與填充劑如乳糖、粘合劑如淀粉、和/或潤滑劑如滑石粉或硬脂酸鎂以及任選的穩定劑混合在一起的活性成分。在軟膠囊的情況中，可以將活性化合物溶解或混懸于適宜的液體，如脂肪油、液體石蠟、或液體聚乙二醇中。此外，還可以加入穩定劑。還可以使用制備成用于口部給藥的微球。在現有技術中已經對該類微球進行了明確定義。用于口部給藥的所有制劑都應是適于該類給藥的劑量。對于頰給藥而言，該組合物可以采取用常規方式制備的片劑或錠劑形式。
適用于口部制劑的防腐劑如抗菌劑包括百里酚、薄荷醇、tricrosan,4-己基間苯二酚、苯酚、桉樹腦、苯甲酸、苯甲酰過氧化物、尼泊金丁酯、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、水楊
酰胺等等。用于口部制劑如牙膏等等的增稠劑包括羧基乙烯基聚合物、角叉菜膠、羥乙基纖維素、天然樹膠如刺梧桐樹膠、黃原膠、阿拉伯膠、黃蓍膠等等。口部制劑還包含濕潤劑，所說的潤濕劑非限制性地如甘油、山梨醇、木糖醇、聚乙
二醇、丙二醇等等。如果所說的制劑是牙膏或牙齒清潔劑，則其還可包含摩擦劑如硅酸鹽如干凝膠、 水凝膠、氣凝膠、碳酸鈣或碳酸鎂、磷酸鈣、氧化鋁及其水合物、硅酸鋁鹽、硅酸鎂和鋯等等。 這些制劑還可以包含氟化物，和抗結石劑如鋅鹽、堿金屬焦磷酸鹽等等。對于通過吸入給藥的制劑而言，本發明所用的化合物可以方便地以氣溶膠噴霧劑的形式在使用適宜的推進劑的情況下由加壓包裝或噴霧器進行給藥，所說的推進劑例如， 二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適宜氣體。在加壓氣霧劑的情況中，可以通過提供一種用于傳遞計量數量的閥來確定劑量單位。用于吸入器或吹入器的例如明膠膠囊和藥筒可以被制備成包含化合物和適宜粉末基質如乳糖或淀粉的粉末混合物。被給藥到鼻腔中的化合物還可以被制備成凝膠或滴鼻劑。對于局部給藥而言，該化合物可以以適于外表面的任何標準制劑的形式被提供。 例如，如果希望將化合物應用于皮膚，則其可以以軟膏、洗劑、噴霧、凝膠、薄織物、擦拭物 (例如用于處理尿布疹)等等的形式被提供。對于應用到嘴唇的應用而言，該化合物可以以唇香脂或唇膏的形式被提供。作為另一個實例，如果該化合物用于頭發，則其可以以噴霧、 香波、頭發固定劑如噴發劑、凝膠或摩絲等等的形式被提供。對于應用到指甲上的應用而言，該化合物可以以指甲拋光劑或其它指甲護理產品的形式被提供。雖然并不優選，但是在一些情況中，如果制備的目的是為了進行全身給藥，則該化合物可以被全身給藥。可以通過推注或連續注射來進行胃腸外給藥。注射用制劑可以以單位劑型，例如位于安瓿或具有所加入的防腐劑的多劑量容器中的形式存在。該組合物可以采取諸如位于油性或水性制劑中的混懸液、溶液或乳劑之類的形式，并且可以包含制備物質如混懸劑、穩定劑和/或分散劑。用于胃腸外給藥的藥物制劑包括水溶性形式活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的混懸液可以被制備為適宜的油性注射混懸液。適宜的親脂性溶劑或基質包括脂肪油如芝麻油或合成的脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯、或脂質體。水性注射混懸液可包含能增加混懸液粘度的物質如羧甲基纖維素鈉、山梨醇、或葡聚糖。該混懸液還可任選地包含適宜的穩定劑或可增加化合物的溶解度從而使得可以制備高濃度溶液的物質。或者，該活性化合物可以為在使用前用適宜基質如無菌無熱源的水重組的粉末形式。該化合物可以被制備為直腸或陰道組合物如栓劑(包括塞子)或保留灌腸劑，例如包含常規栓劑基質如可可豆脂或其它甘油酯的制劑。還可以使用陰道灌洗制劑。還可以用粘膜粘附膜如這里所詳細描述的這些物質來進行粘膜給藥。在一些涉及陰道給藥的實施方案中，其希望提供位于可以暫時增加陰道環境pH的基質中的組合物，暫時增加陰道環境的PH是為了促進軛合物通過陰道轉谷氨酰胺酶連接到陰道粘膜上的過程。這種pH的增加不需要長期持續，但是希望其僅長至足以將有效量的軛合物連接到所說的組織上。作為一個實例，可以通過使用可以提供6. 5至9的局部pH的粘膜粘附盤、栓劑、或灌洗溶液來控制 pH。除之前所描述的制劑外，該化合物還可以被制備成儲庫制劑。可以用適宜的聚合物或疏水性物質(例如在可接受的油中的乳劑)或離子交換樹脂來制備該類長期起作用的制劑，或者可以將其制備為微溶性衍生物例如微溶的鹽的形式。可以用緩釋裝置將本發明的組合物進行給藥，所說的緩釋裝置例如可生物侵蝕的粘膜粘附系統，如這里所述的這些系統以及現有技術中眾所周知的這些系統。其它傳遞系統包括定時釋放、延遲釋放或緩釋傳遞系統。該類系統可以避免化合物的重復給藥、增加個體和醫師的方便性。可以獲得許多類型的釋放傳遞系統，并且這些系統對于本領域普通技術人員而言是公知的。其包括以聚合物為基質的系統如聚(丙交酯-乙交酯)、草酸酯共聚物(copolyoxalates)、聚己內酯、聚酰胺酯(polyesteramides)、 聚原酸酯、聚羥基丁酸、和聚酐類。在例如US 5，075，109中對包含藥物的上述聚合物的微囊進行了描述。傳遞系統還包括非聚合物系統，其有包括留醇如膽固醇、膽固醇酯和脂肪酸或天然脂肪如單_、 二 _、和三-甘油酯的液體；水凝膠釋放系統；sylastic系統；肽基礎的系統；蠟包衣；使用常規粘合劑和賦形劑的壓制片；部分熔凝的植入物等等。特定的實例非限制性地包括(a)侵蝕系統，本發明的形式以一種位于基質內的形式被包含在其中如US4，452，775、 4，675，189、和5，736，152所述的這些形式，和(b)擴散系統，其中活性組分可以以控釋速率從聚合物散布出來，如可參見US3，854，480、5，133，974和5，407，686的描述。此外，可以使用以泵為基礎的硬體傳遞系統，其中的一些適于植入。緩釋組合物可以以例如凝膠、軟膏、乳膏、或貼劑(例如經皮貼劑或粘膜貼劑，如 BEMA 盤)的形式局部應用。作為一個實例，可以將可生物侵蝕的緩釋顆粒單獨應用到體表，或者可以將其在軟膏、凝膠或乳膏中應用到體表。局部給藥包括給藥于皮膚表面和粘膜表面。可以通過唇膏、唇護理物例如唇香脂、唇皰疹軟膏；防曬軟膏；口部凝膠如用于口瘡 (例如輻射或化療誘導的口瘡)的那些凝膠；漱口劑；牙膏；吸入劑；表面貼劑等等形式來完成向粘膜表面的傳遞。或者，其可以被植入。在優選的實施方案中，所說的緩釋裝置是可生物侵蝕的或可生物降解的。在其它優選的實施方案中，該緩釋裝置以本發明可生物侵蝕的粘膜粘附裝置 (例如BEMA )的優選形式被粘附在其所應用的表面(例如，皮膚或粘膜)上。現有技術同樣具有該類裝置。根據一些方面，本發明的組合物可以以試劑盒的形式被提供。正如這里所用的這樣，當該組合物在試劑盒中被提供時，有意的將該組合物包裝或包含在第一個容器(例如瓶)中，然后將該容器再包裝在第二個容器(如箱、卡紙盒、或袋)中。在任何一種情況中， 希望都包括該組合物的使用說明。該類說明可以被直接提供在第一個容器(即，直接收藏該組合物的容器)的外表面標簽上，或可以位于第二個容器(即收藏第一個容器的容器) 的外表面標簽上。或者，該使用說明可以獨立于任何一個容器地被提供，如例如可以在位于第二個容器中的獨立的紙張上被提供。該使用說明將非限制性地包含諸如單劑量傳遞的數量、對于給定的間隔而言不能超過的最大數量(例如最大日劑量)、給藥方法和給藥部位、 被治療的個體以及不能用該制劑治療的個體、禁忌癥、以及該制劑的活性和無活性成分之類的信息。 下面的實施例是為了進行說明而不是要對本發明的范圍進行限制。
實施例實施例1通過還原性胺化進行的聚(L-賴氨酸)與透明質酸的軛合簡介聚賴氨酸(PLL)與透明質酸(HA)的共軛是以透明質酸末端糖殘基的醛基與聚賴氨酸的氨基形成希夫氏堿的能力為基礎的。所形成的希夫氏堿不穩定并且易于通過水解而被反轉。可以用許多還原劑來將希夫氏堿轉化成穩定的仲胺。氰基硼氫化鈉(sodium cyanoborohydrate)可以最好地促進該還原反應，這是因為這種試劑對希夫氏堿的反應性
高而對醛基的反應性低。
權利要求
1.一種包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物、以及游離透明質酸的組合物，其中所說的游離透明質酸和軛合物是以至少2的摩爾比存在的，所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
2.如權利要求1所述的組合物，其中所說的連接分子是天然的聚賴氨酸。
3.如權利要求1所述的組合物，其中所說的透明質酸是天然的透明質酸。
4.如權利要求1所述的組合物，其中所說的透明質酸是選自透明質酸可藥用的鹽、透明質酸酯、和硫酸化的透明質酸的透明質酸衍生物。
5.如權利要求1所述的組合物，其中所說的摩爾比選自至少2.0和至少4. 0。
6.如權利要求1所述的組合物，其中所說的組合物是以選自滴眼劑、隱形眼鏡溶液、眼用軟膏、眼睛填塞物、和隱形眼鏡的形式被提供的。
7.如權利要求1所述的組合物，其中該組合物是以選自舌下片、漱口劑、牙膏、糖果、和口部凝膠的形式被提供的。
8.如權利要求1所述的組合物，其中所說的透明質酸具有至少100，000的分子量。
9.如權利要求1所述的組合物，其中所說的軛合物具有高于1.0的負電荷正電荷比。
10.如權利要求1所述的組合物，其還包含可藥用的載體。
11.如權利要求1所述的組合物，其還包含選自矯味劑、著色劑和香料的物質。
12.如權利要求1所述的組合物，其中所說的軛合物具有至少90%的重量比。
13.如權利要求1所述的組合物，其還包含精氨酸或氟化物。
14.如權利要求1所述的組合物，其中所說的連接分子是非絡合的。
15.一種包含共價連接到是轉谷氨酰胺酶的底物的連接分子上的透明質酸的藥物組合物，其中所說的連接分子是非絡合的，并且具有至少兩個相連的賴氨酸。
16.一種在滴眼劑瓶中包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物的組合物，其中所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
17.一種包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物、和選自矯味劑、著色劑和香料組成的組的物質的組合物，所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
18.—種在包含氟化物的載體中包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物的組合物，其中所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
19.一種包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物的舌下片形式的組合物，其中所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
20.權利要求1、15、16、17、18或19所述的組合物在制備治療特征為干燥的病癥的藥物中的用途。
21.一種包含透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物、以及有效量的游離透明質酸的藥物組合物，其中所說的游離透明質酸和軛合物是以至少2的摩爾比存在的，所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
22.透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物在制備治療或預防干眼或干眼風險的藥物中的用途，其中所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
23.透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物在制備治療或預防口腔干燥的藥物中的用途，其中所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
24.透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物在制備治療或預防關節不適的藥物中的用途，其中所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
25.透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物在制備治療或預防過度凝血的藥物中的用途，其中所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
26.透明質酸和是轉谷氨酰胺酶底物的連接分子的軛合物在制備治療或預防皺紋的藥物中的用途，其中所說的連接分子具有至少兩個相連的賴氨酸。
27.如權利求22、23、對、25或沈所述的用途，其中所說的軛合物用量小于每天 0. 05μ g/kg。
全文摘要
本發明提供了一種用于治療特征為干燥的病癥的組合物，所說的病癥包括干眼和口干燥。該組合物通常包含透明質酸和聚賴氨酸的軛合物。用轉谷氨酰胺酶，優選內源性轉谷氨酰胺酶將這些軛合物連接到受影響的機體組織或表面上。
文檔編號A61K9/107GK102178692SQ20111007127
公開日2011年9月14日 申請日期2003年7月3日 優先權日2002年7月3日
發明者D·津格曼, R·帕薩, Y·斯維肯 申請人:派瑞克科學公司