專利名稱：長春堿類藥物的熱敏脂質體制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及脂質體制劑，具體涉及包含長春堿類藥物的熱敏脂質體制劑，及其制備方法。
背景技術：
長春堿類抗腫瘤藥物是從夾竹桃科植物長春花中分離得到的具有抗癌活性的一類生物堿。屬細胞周期特異性抗腫瘤藥，其作用機理是通過阻滯細胞有絲分裂過程中的微管形成，使細胞分裂停止于有絲分裂中期，臨床主要用于治療惡性淋巴瘤、絨毛膜上皮癌、中晩期食管癌、晩期非小細胞肺癌和乳腺癌等。目前我國上市劑型有靜脈注射液、凍干粉針，但是該藥物靜脈注射后，毒副作用比較大，常見神經毒性和血液毒性，靜脈炎，局部皮膚壞死等癥狀。 美國的Inex申請專利(US2009/0041834A1)將此類藥物制備成脂質體，經研究表明此種抗腫瘤藥物制備成脂質體后，可以延長體內循環時間，增強靶向性，降低毒副作用。但其制備的脂質體與以前的劑型相比，并未明顯地提高療效。因此，需要研制ー種靶向性強的脂質體，可以在不増加藥物劑量的情況下，延長藥物的半衰期，提高藥物的抗腫瘤效果，減少藥物的毒副作用，增強藥物的臨床應用性。例如，可以根據長春堿類藥物的特性設計并制備包含此類藥物的熱敏脂質體，以進ー步提高該類藥物的臨床療效。
發明內容
長春堿類藥物是ー種兩性弱堿類藥物，根據此性質可以考慮采用pH主動載藥的方式進行制備此類藥物的脂質體制劑。在本發明中，發明人根據長春堿類藥物的特性，通過大量的實驗摸索，制備了包含該類藥物的熱敏脂質體制劑，制備方法先進合理，包封率高，穩定性好，不易泄露，提高了該類藥物的臨床療效。本發明的ー個方面涉及ー種長春堿類藥物的熱敏脂質體制劑，其包含長春堿類藥物、熱敏磷脂和任選的長循環材料，其中熱敏磷脂和長循環材料的摩爾比為50 50 92 8，優選為70 30 92 8，更優選為80 20 92 8 ;長春堿類藥物與空白脂質體的重量比為I : 10 I : 100，優選為I : 10 I : 50，更優選為I : 20 I : 30。在本發明中，所述長春堿類藥物包含長春堿、長春新堿、長春地辛、長春瑞濱、長春氟寧、脫水長春堿、長春甘酷、長春西醇、長春羅新、長春倍酷、長春羅定。在本發明的ー個實施方案中，所述長春堿類藥物為長春瑞濱。其中所述的熱敏磷脂選自相變溫度在35 80°C之間的磷脂酰膽堿、氫化卵磷月旨、磷脂酰こ醇胺和磷脂酰甘油中的至少ー種，獲得的熱敏磷脂或其組合物的相變溫度在37-50°C之間，優選為在39-45°C之間。其中所述的長循環材料選自聚こニ醇化磷脂酰こ醇胺、聚こニ醇、吐溫、芐澤、PEG化磷脂、PEG化聚己內酷、PEG化聚こ交酯丙交酯、PEG化聚乳酸、伯洛沙姆、聚氧こ烯脂肪酸酯類、聚氧こ烯脂肪酸醚和聚氧こ烯甲基蓖麻油醚中的至少ー種，優選為聚こニ醇化磷脂酰こ醇胺，例如平均分子量為2000的聚こニ醇-氫化大豆磷脂酰こ醇胺(HSPE-mPEG2000)、平均分子量為5000的聚こニ醇-氫化大豆磷脂酰こ醇胺(HSPE-mPEG5000)或平均分子量為2000的聚こニ醇-ニ硬脂酰基磷脂酰こ醇胺(DSPE-mPEG2000)。 根據本發明的熱敏脂質體制劑，其粒徑分布范圍是30-500nm，優選為50_200nm。
根據本發明的熱敏脂質體制劑，其包封率為60. O % 99. 9 %，優選為90. O % 99. 9%。本發明的另一方面涉及ー種藥物組合物，其包含本發明的熱敏脂質體制劑，以及藥學可接受的載體。 本發明的另一方面涉及本發明的熱敏脂質體制劑的制備方法，其包括以下步驟(I)制備空白脂質體將熱敏磷脂、長循環材料的混合物溶于有機溶劑中，得到磷脂溶液。蒸成薄膜。在薄膜中加入緩沖液，水化20 60min，脫氣，得到多層脂質體溶液。多層脂質體溶液通過擠壓過聚碳酸酯膜，得到粒徑在30-500nm，優選為50_200nm的空白脂質體溶液；所述有機溶劑為選自こ醇、甲醇、三氯甲烷、ニ氯甲烷、異丙醇等易揮發的有機溶劑中的ー種或兩種以上的混合溶劑；(2)制備載藥脂質體在空白脂質體中加入長春堿類藥物，混合均勻，25 50°C下用堿溶液調節脂質體溶液的外相PH值至6. O 8. 5，10 60min內完成載藥，得到長春堿類藥物的熱敏脂質體制劑的溶液。其中步驟(I)中所述的緩沖液為O. IM O. 5M的檸檬酸鹽緩沖液、酒石酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液，其PH值為3. O 6. 0，優選為O. 2M O. 3M的檸檬酸鹽緩沖液、酒石酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液，pH值為3. O 4. O。本發明的再一方面涉及本發明的熱敏脂質體制劑在制備抗腫瘤藥物中的用途。下面更進一歩地描述本發明。本發明的使用的各種術語和短語具有本領域技術人員公知的一般含義，即便如此，本發明仍然希望在此對這些術語和短語作更詳盡的說明和解釋，提及的術語和短語如有與公知含義不一致的，以本發明所表述的含義為準。本發明提供了一種長春堿類藥物的熱敏脂質體制劑，其特征在于該脂質體為含長春堿類抗腫瘤藥物的、具有在適宜溫度以上發生相變而可以快速釋放藥物的熱敏特點；其包含長春堿類藥物、熱敏磷脂和任選的長循環材料，其中熱敏磷脂和長循環材料的摩爾比為50 50 92 8，優選為70 30 92 8，更優選為80 20 92 8 ;長春堿類藥物與空白脂質體的重量比為I : 10 I : 100，優選為I : 10 I : 50，更優選為I : 20 I 30。本發明的長春堿類藥物的熱敏脂質體，包括單純的熱敏脂質體和長循環熱敏脂質體。當制劑組成中含有長循環材料時即為長循環熱敏脂質體。本發明的長春堿類藥物的熱敏脂質體，其熱敏溫度(即相變溫度，脂質體從凝膠態向液晶態轉變的溫度)范圍為35-50°C，優選37-48°C，優選39_45°C，優選39_42°C。在本發明中，其中所述的熱敏磷脂選自相變溫度在35 80°C之間的磷脂酰膽堿、氫化卵磷脂、磷脂酰こ醇胺和磷脂酰甘油中的至少ー種，獲得的熱敏磷脂或其組合物的相變溫度在上述熱敏溫度之間。所述磷脂酰膽堿選自飽和或不飽和的磷脂酰膽堿，優選為飽和的磷脂酰膽堿，例如為ニ硬脂酰基磷脂酰膽堿，ニ棕櫚酰磷脂酰膽堿。所述氫化卵磷脂選自氫化的天然磷脂，例如為氫化大豆磷脂或氫化蛋黃卵磷脂。所述磷脂酰こ醇胺選自飽和或不飽和的磷脂酰こ醇胺，優選為飽和的磷脂酰こ醇胺，例如為氫化大豆磷脂酰こ醇胺，ニ硬脂酰基磷脂酰こ醇胺。所述磷脂酰甘油選自飽和或不飽和的磷脂酰甘油，優選為飽和的磷脂酰甘油，例如為ニ硬脂酰基磷脂酰甘油。在本發明中，選取熱敏磷脂中的ー種或數種進行組合，使組合后的熱敏磷脂組合物達到上述相變溫度。在本發明的一個實施方案中，所述熱敏磷脂為DPPC和MSPC ;在本發明的一個實施方案中，所述熱敏磷脂為DPPC和DSPG ;在本發明的一個實施方案中，所述熱敏磷脂為DPPC、DSPG和MSPC。在本發明的一個實施方案中，所述的熱敏脂質體制劑包含
DPPC890重量份
DSPE-mPEG2000 80 重量份MSPC30重量份
長春瑞濱26或30重量份在本發明的一個實施方案中，所述的熱敏脂質體制劑包含
DPPC770重量份
DSPE-mPEG2000200 重量份
DSPG30重量份
長春瑞濱30重量份在本發明的一個實施方案中，所述的熱敏脂質體制劑包含
DPPC700重量份
DSPE-mPEG2000200 重量份
MSPC20重量份
DSPG80重量份
長春瑞濱30重量份在本發明中，由于長春堿類藥物屬于弱堿性藥物，采用pH梯度主動載藥法制備，包封率達到90. O 99. O %。發明的有益效果本發明根據長春堿類藥物的特性設計并制備了熱敏脂質體制劑和長循環熱敏脂質體制劑，其具有以下特點(2)本發明的長循環熱敏脂質體具有在體內循環時間長，靶向性好，可以在加熱條件下迅速釋放藥物于加熱部位的特性。(3)本發明采用薄膜分散和主動載藥法制備脂質體，穩定性好，不易泄露，克服了現有技術中長春堿類脂質體易泄露、穩定性差的問題。(4)本發明根據長春堿類藥物的特性采用pH梯度主動載藥法制備，包封率高，可達到 90. O 99. 0%。實驗結果表明，本發明的熱敏脂質體與普通注射劑和普通脂質體相比，腫瘤抑制效果明顯提高；與普通脂質體相比，靶向性更好，在加熱的條件下，藥物釋放快且量大，具有良好的臨床應用前景。
圖I長春瑞濱長循環熱敏脂質體的DSC2水浴溫度對長春瑞濱長循環熱敏脂質體釋藥量的影響。 圖3水浴溫度和加熱時間對長春瑞濱長循環熱敏脂質體釋藥量的影響。
具體實施例方式下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發明，而不應視為限定本發明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規產品。實施例I長春瑞濱長循環熱敏脂質體制劑的制備(I)空白脂質體的制備需要的藥品與試劑ニ棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、DSPE_mPEG2000、單硬酯酰磷酯酰膽堿(MSPC)，檸檬酸，檸檬酸三鈉、碳酸鈉、雙蒸水。表I
權利要求
1.一種長春堿類藥物的熱敏脂質體制劑，其包含長春堿類藥物、熱敏磷脂和任選的長循環材料，其中熱敏磷脂和長循環材料的摩爾比為50 50 92 8，優選為70 30 92 8，更優選為80 20 92 8 ;長春堿類藥物與空白脂質體的重量比為I : 10 I 100，優選為I : 10 I : 50，更優選為I : 20 I : 30。
2.權利要求I的熱敏脂質體制劑，其中所述長春堿類藥物為長春堿、長春新堿、長春地辛、長春瑞濱、長春氟寧、脫水長春堿、長春甘酷、長春西醇、長春羅新、長春倍酷、長春羅定，優選為長春瑞濱。
3.權利要求I的熱敏脂質體制劑，其中所述的熱敏磷脂選自相變溫度在35 80°C之間的磷脂酰膽堿、氫化卵磷脂、磷脂酰こ醇胺和磷脂酰甘油中的至少ー種，獲得的熱敏磷脂或其組合物的相變溫度在37-50°C之間，優選為在39-45°C之間。
4.權利要求I的熱敏脂質體制劑，其中所述的長循環材料選自聚こニ醇化磷脂酰こ醇胺、聚こニ醇、吐溫、芐澤、PEG化磷脂、PEG化聚己內酷、PEG化聚こ交酯丙交酷、PEG化聚乳酸、伯洛沙姆、聚氧こ烯脂肪酸酯類、聚氧こ烯脂肪酸醚和聚氧こ烯甲基蓖麻油醚中的至少ー種，優選為聚こニ醇化磷脂酰こ醇胺，例如平均分子量為2000的聚こニ醇-氫化大豆磷脂酰こ醇胺(HSPE-mPEG2000)、平均分子量為5000的聚こニ醇-氫化大豆磷脂酰こ醇胺(HSPE-mPEG5000)或平均分子量為2000的聚こニ醇-ニ硬脂酰基磷脂酰こ醇胺(DSPE-mPEG2000)。
5.權利要求1-4任一項的熱敏脂質體制劑，其粒徑分布范圍是30-500nm，優選為50_200nmo
6.權利要求1-5任一項的熱敏脂質體制劑，其包封率為60.0%-99.9%，優選為90. 0% 99. 9%。
7.藥物組合物，其包含權利要求1-6任一項的熱敏脂質體制劑，以及藥學可接受的載體。
8.權利要求1-6任一項的熱敏脂質體制劑的制備方法，其包括以下步驟 (1)制備空白脂質體將熱敏磷脂、長循環材料的混合物溶于有機溶劑中，得到磷脂溶液。蒸成薄膜。在薄膜中加入緩沖液，水化20 60min，脫氣，得到多層脂質體溶液。多層脂質體溶液通過擠壓過聚碳酸酯膜，得到粒徑在30-500nm，優選為50 200nm的空白脂質體溶液； (2)制備載藥脂質體在空白脂質體中加入長春堿類藥物，混合均勻，25 50°C下用堿溶液調節脂質體溶液的外相PH值至6. O 8. 5，10 60min內完成載藥，得到長春堿類藥物的熱敏脂質體制劑的溶液。
9.權利要求8的制備方法，其中步驟(I)中所述的緩沖液為O.IM O. 5M的檸檬酸鹽緩沖液、酒石酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液，其pH值為3. O 6. O ;優選為O. 2M O. 3M的檸檬酸鹽緩沖液、酒石酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液，PH值為3. O 4. O。
10.權利要求1-6的熱敏脂質體制劑在制備抗腫瘤藥物中的用途。
全文摘要
本發明涉及長春堿類藥物的熱敏脂質體制劑及其制備方法。所述熱敏脂質體制劑包含長春堿類藥物、熱敏磷脂和任選的長循環材料，其中熱敏磷脂和長循環材料的摩爾比為70∶30～92∶8；長春堿類藥物與空白脂質體的重量比為1∶10～1∶50。本發明采用pH梯度主動載藥法，包封率可達到90.0％～99％。本發明的脂質體制劑具有熱敏性，在腫瘤組織局部加熱時，可使該脂質體被動靶向腫瘤部位，同時釋放大量藥物，提高療效，降低全身的毒副作用。
文檔編號A61P35/00GK102688193SQ20111007127
公開日2012年9月26日 申請日期2011年3月24日 優先權日2011年3月24日
發明者張慧, 梅興國 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所