專利名稱：苦丁茶提取物在制備降低肝臟甘油三酯含量的藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及苦丁茶提取物的一種新的藥理用途，尤其涉及苦丁茶提取物在制備降低肝臟甘油三酯含量的藥物中的用途，屬于苦丁茶提取物的藥理用途領域。
背景技術：
苦丁茶是中國民間的一種常用植物代用茶，也是一種傳統的藥用植物，其性味苦、甘、性寒。中國各地所用苦丁茶基原植物有20余種，主要有冬青科枸骨(Zlex.comutaLindl),大葉冬青(Zlex. lati-folia Thumb, ex Muary),苦丁茶冬青(ZlexKudingcha C. J. Tseng)，木禪科粗壯女貞(L. robustum Blume),日本女毛貞(L. japonicumThunb. var. pubescens Koidz)和序梗女貞(L. pedunculare Rhed)等。
張敬杰等報道了粗壯女貞的醇提取物或水提取物能夠有效降低血中的甘油三酯及總膽固醇含量(張敬杰等.粗壯女貞藥理作用初探.中國民族民間醫藥雜志.2004年總第69期.241-243)。高南南等報道了紫莖女貞能夠有效降低動物血清中的甘油三酯及總膽固醇以及肝臟中的丙二醛含量(高南南，楊潤梅，賀震旦，屠宴會，彭勇，肖培根.紫莖女貞總苷對膳食誘導大鼠高脂血癥的影響.中藥材.第32卷第7期.2009年7月)。迄今為止，尚無苦丁茶能夠降低肝臟中甘油三酯含量的藥理作用的報道。
發明內容
本發明首先所要解決的技術問題是提供苦丁茶提取物的一種新的藥理用途。本發明所要解決的技術問題是通過以下技術方案來實現的本發明通過大量的實驗發現，苦丁茶醇提取物或水提取物能夠有效降低高血脂癥模型動物肝臟中的甘油三酯含量，從而可將苦丁茶醇提取物或水提取物制備成治療脂肪肝或降低肝臟甘油三酯含量的藥物。文獻中雖然報道了粗壯女貞醇提取物能夠有效降低血中甘油三酯含量，但是不能由此推測粗壯女貞醇提取物就一定能夠降低肝臟甘油三酯含量，因為藥物降低血中甘油三酯含量與降低肝臟甘油三酯含量沒有必然的相關性禁食狀態下動物體內血中甘油三酯主要存在于由肝臟合成分泌的極低密度脂蛋白中，由附著在外周組織血管內皮的脂蛋白脂肪酶水解而被清除，藥物可通過影響肝臟甘油三酯合成、極低密度脂蛋白合成及分泌或其清除過程的各個環節發揮降低血中甘油三酯含量的作用。而肝臟甘油三酯含量取決于肝臟甘油三酯合成、極低密度脂蛋白合成及分泌情況，因此能夠降低血清中甘油三酯含量的藥物如果不是作用于肝臟甘油三酯合成、極低密度脂蛋白合成及分泌環節，就對肝臟中甘油三酯含量影響不大。本發明通過大量的動物實驗最終才發現苦丁茶醇提取物或水提取物具有確切的降低高血脂癥模型動物肝臟中的甘油三酯含量的藥理作用。本發明中所述的苦丁茶可以是冬青科枸骨(Zlex. comuta Lindl),大葉冬青(Zlex. lati-folia Thumb, ex Muary),苦丁茶冬青(Zlex KudingchaC. J. Tseng),木禪科粗壯女貞(L. robustum Blume)，日本女毛貞(L. japonicumThunb. var. pubescens Koidz)或序梗女貞(L. pedunculare Rhed)等，更優選為粗壯女貞(L. robustum B Iume)。其中，所述的苦丁茶醇提取物可以通過商業途徑購買得到，也可參考以下方法制備得到將苦丁茶用60-95%乙醇回流提取；提取液濃縮，加入水混懸，靜置；取上清液過濾，濾液濃縮，干燥，即得。本發明人通過實驗發現，采用下述方式提取得到苦丁茶醇提取物具有最優的降低肝臟中甘油三酯含量的藥理功效將苦丁茶葉以95%乙醇加熱回流提取3次，第一次回流時間為2小時，第二次和第三次回流時間為I. 5小時，合并提取液，并經減壓濃縮得乙醇提取物；取乙醇提取物加入水混懸，靜置，取上清液過濾，濾液減壓濃縮，取濃縮液進行噴霧干燥，即得。所述的苦丁茶醇水提取物可以通過商業途徑購買得到，也可以參考以下方法提取 得到將苦丁茶葉用水煎煮提取；提取液濃縮成稠膏，干燥，即得。本發明所要解決的另一個技術問題是提供一種治療脂肪肝或降低肝臟甘油三酯含量的藥物組合物，該藥物組合物由有效量的苦丁茶醇或水提取物與藥學上可接受的載體、賦型劑或稀釋劑配合而成。根據不同的給藥方法，本發明藥物組合物可以含有O. 1% -99%重量，優選10-60%重量的苦丁茶醇或水提取物。其中，可以向苦丁茶醇或水提取物中加入制備不同劑型時所需的各種輔料和藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑后，以常規的中藥制劑方法制備成任何一種適宜的臨床制劑，例如可以是注射劑(粉針、凍干粉針、水針、輸液等)、口服制劑(片劑、口服液、顆粒齊U、膠囊劑、軟膠囊或滴丸)等；其中，所述的輔料可以是抗氧絡合劑、填充劑、骨架材料等；所述的藥學上可接受的載體是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖酐、氯化鈉、葡萄糖酸鈣或磷酸鈣中的一種或幾種。
圖I粗壯女貞醇提取物(總苷)給藥劑量與肝細胞脂肪變評分相關結果。
具體實施例方式下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和范圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發明的保護范圍內。實驗例I一、實驗材料實驗動物=Wistar大鼠，3 ,體重160_180g，SPF級，60只，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證編號SCXK (京)2006-0009。受試藥品粗壯女貞醇提取物(總苷)，為淡黃色干粉狀，易溶于水。4°C冰箱保存，用時用蒸餾水配至所需濃度。粗壯女貞醇提取物(總苷)的制備取粗壯女貞干葉lOOOg，以95%乙醇加熱回流提取3次，第一次回流時間為2小時，第二次和第三次回流時間為I. 5小時，合并提取液，并經減壓濃縮得乙醇提取物540g。取乙醇提取物加入水混懸，靜置2小時，取上清液過濾，如此進行三次，合并上清濾液，經減壓濃縮，取濃縮液進行噴霧干燥，得粗壯女貞總苷(得率8% )。二、實驗方法Wistar大鼠，隨機分為6組，分別為正常對照組、高脂模型組、陽性對照貝特組(O. 3g/kg)、粗壯女貞醇提取物(總苷)I. 2、0. 6及O. 3g/kg劑量組。正常對照組飼以基礎飼料，高脂模型組及各給藥組飼以高脂飼料[配方為1%膽固醇，0.3%豬膽鹽，10%豬油，余為基礎飼料]。造模一周后開始給藥，陽性對照貝特組ig. 10ml/kg濃度為3%的吉非羅齊，粗壯女貞醇提取物(總苷)I. 2,0. 6及O. 3g/kg劑量組分別ig. 10ml/kg濃度分別為12%、6%及3%的粗壯女貞醇提取物(總苷)，連續3周。三、實驗結果I、肝脂結果 模型組大鼠肝臟CHO及TG含量都較正常對照組大鼠有所升高，差異有顯著性意義。陽性藥吉非羅齊對肝臟CH0、TG都有明顯的降低作用，與模型組大鼠比較差異有顯著性意義。粗壯女貞醇提取物(總苷)各劑量對肝臟TG含量也有明顯的降低作用，與模型組大鼠比較差異有顯著性意義。表I粗壯女貞醇提取物(總苷)對高脂血癥大鼠肝脂的影響η = 10)
肝 CHO (mg/g) 肝 TG (mg/g)
正常16.57±5.688.43±1.37
模型96.33 ±21.04aa28.86±9.04aa陽性藥 0.3g/kg30.94±3.33**16.64±6.00**
粗壯女貞醇提取物 1.2g/kg97.24±14.7720.58 + 4.82*
粗壯女貞醇提取物 0.6g/kg89.12 + 27.0021.25±5.55*
粗壯女貞醇提取物 0.3g/kg85.95±26.4518.22±5.21**2、病理結果觀察結果(I)大體形態肉眼觀察大體標本的正常形態及其病變特征(表I)。以肉眼觀察病灶的大小、顏色、質地、形狀、表面光澤、切面紋理等大體特征。肝脂肪變性肝臟出現以混濁腫脹為主的損傷性病變，肝體積腫大，色淡黃或紅黃相間，包膜緊張，邊緣鈍，切面有油膩感。表2各組給藥大體病理變化匯總表
Μη肝脂肪變
_性
正常組10O高臟組10 10
陽性藥物組10 10
粗壯女貞醇提取物0.3g/kg 10 10粗壯女貞醇提取物0.6g/kg 10 10粗壯女貞醇提取物1.2g/kg 10 10
(2)組織結構低倍顯微鏡下，肝臟有肝小葉和匯管區組成。(3)病理改變肝脂肪變性為肝細胞細胞質內出現脂肪滴，早期為微小的脂肪空泡(小滴脂變)，且常常因大量脂滴的積聚把肝細胞核壓向一側成半月形(大滴脂變)。根據本實驗脂肪變性程度，分為①輕度脂肪變⑴肝細胞脂肪變性占肝小葉的比例> 1/3，病變評分為I分。②中度脂肪變(++):肝細胞脂肪變性占肝小葉的比例> 1/2，病變評分為2分。卡方檢驗比較發生率的組間差別，以P < O. 05為有統計學差異。給藥劑量和病變評分進行線性回歸。a.正常組HE染色肝細胞索排列有序，中央靜脈區、匯管區組織結構正常；未見肝 細胞水腫、脂肪變性和壞死。b.高脂模型組HE染色肝細胞索排列紊亂，肝細胞及細胞核大小不一致，見廣泛肝細胞水腫和彌漫性小滴脂變；并可見脂肪空泡。匯管區多見淋巴細胞浸潤灶。c.陽性藥物組5例動物與模型組病變相似，改善不明顯。5例動物肝細胞水腫較模型組減輕，小滴脂變范圍有所減少；d.粗壯女貞醇提取物(總苷)O. 3g/kg 5例動物與模型組病變相似，改善不明顯。肝細胞水腫較模型組減輕，小滴脂變范圍有所減少。e.粗壯女貞醇提取物(總苷)O. 6g/kg 4例動物與模型組病變相似，改善較明顯。肝細胞水腫較模型組減輕，小滴脂變范圍減少。f.粗壯女貞醇提取物(總苷)1.2g/kg:3例動物與模型組病變相似，改善明顯。肝細胞水腫較模型組減輕，小滴脂變范圍減少明顯。表3各組給藥組織病變匯總表
權利要求
1.苦丁茶提取物在制備治療脂肪肝或降低肝臟甘油三酯含量的藥物中的用途。
2.按照權利要求I所述的用途，其特征在干所述苦丁茶包括冬青科枸骨(Zlex.comuta Lindl),大葉冬青(Zlex. lati-folia Thumb, ex Muary),苦丁 茶冬青(ZlexKudingcha C. J. Tseng)，木禪科粗壯女貞(L. robustum Blume),日本女毛貞(L. japonicumThunb. var. pubescens Koidz)或序梗女貝(L. pedunculare Rhed)。
3.按照權利要求I或2所述的用途,其特征在于所述苦丁茶是粗壯女貞(L.robustumB 丄ume)ο
4.按照權利要求I所述的用途，其特征在于所述的苦丁茶提取物是苦丁茶醇提取物或水提取物。
5.按照權利要求4所述的用途，其特征在于，所述苦丁茶醇提取物的制備方法包括將苦丁茶葉用60-95%こ醇回流提取；提取液濃縮，加入水混懸，靜置；取上清液過濾，濾液濃縮，干燥，即得。
6.按照權利要求5所述的用途，其特征在于，苦丁茶醇提取物的制備方法包括將苦丁茶葉以95%こ醇加熱回流提取3次，第一次回流時間為2小時，第二次和第三次回流時間為I. 5小時，合并提取液，并經減壓濃縮得こ醇提取物；取こ醇提取物加入水混懸，靜置，取上清液過濾，濾液減壓濃縮，取濃縮液進行噴霧干燥，即得。
7.按照權利要求4所述的用途，其特征在于，所述苦丁茶水提取物的制備方法包括將苦丁茶葉用水煎煮提取；提取液濃縮成稠膏，干燥，即得。
8.一種治療脂肪肝或降低肝臟甘油三酯含量的藥物組合物，其特征在于由治療上有效量的苦丁茶醇或水提取物與藥學上可接受的載體組成。
全文摘要
本發明公開了苦丁茶提取物在制備降低肝臟甘油三酯含量的藥物中的用途。本發明通過大量的實驗發現，苦丁茶醇提取物或水提取物能夠有效降低高脂血癥模型動物肝臟中的甘油三酯含量，從而可將苦丁茶醇提取物或水提取物制備成治療脂肪肝或降低肝臟甘油三酯含量的藥物。
文檔編號A61K127/00GK102670672SQ20111005978
公開日2012年9月19日 申請日期2011年3月11日 優先權日2011年3月11日
發明者彭勇, 楊潤梅, 肖培根, 高南南 申請人:中國醫學科學院藥用植物研究所