用于治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環糊精包合物的制作方法

專利名稱：用于治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環糊精包合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種抗腫瘤藥物組合物，特別涉及一種左旋棉酚及其醋酸鹽的環糊精 包合物。
背景技術：
棉酚(Gossypol)，CAS號303-45-7，是一種黃色的酚類化合物，由左旋棉酚和右旋 棉酚兩種光學異構體組成。天然棉酚存在于錦葵科棉屬植物棉花的種子、葉、莖及根部等器 官中。棉酚的殺精作用已為人們所熟知，可以作為男性節育藥使用。目前已有醋酸棉酚 口服制劑上市，作為男用避孕藥或用于治療婦科疾病，包括子宮內膜異位癥、月經過多或失 調等。中國專利200510022777.9(申請人沈陽藥科大學，公開號CN1827117，授權公告日 期2009年12月16日)公開了一種用于治療婦科疾病的醋酸棉酚緩釋片劑將醋酸棉酚加 入緩釋材料形成緩釋制劑避免出現“峰谷”現象，用于解決“峰谷”現象。近年來研究發現，棉酚對各種腫瘤細胞具有廣泛的殺傷作用，如子宮肌瘤、前列腺 癌、結腸癌、肺癌、肝癌、喉癌、頭頸部腫瘤和膠質瘤等。進一步的研究表明，左旋棉酚是棉酚 的有效成分，而右旋棉酚不僅無效，甚至會引發不良反應。因此，單一的左旋棉酚或左旋棉 酚醋酸鹽的抗腫瘤效果優于棉酚或棉酚醋酸鹽。常溫下，左旋棉酚易溶于乙醇、丙酮、三氯甲烷等有機溶劑，亦溶于油脂，但不溶于 水。其中大部分有機溶劑對人體毒性較大，不適于作為藥物載體，很難制成注射制劑。左旋 棉酚醋酸鹽也難溶于水。因此，與棉酚用于節育及婦科疾病的制劑相同，目前處于研發階段 的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽用于抗腫瘤的制劑也是采用口服固體制劑。然而，研究表明，棉酚在大鼠體內的口服生物利用度可達86%左右，在小鼠體內的 口服生物利用度則僅為14. 3%左右。左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽的口服生物利用度也較 低。因此，左旋棉酚制成口服固體制劑作為抗腫瘤藥物并不理想。處于臨床試驗階段的左 旋棉酚制劑AT-101是左旋棉酚醋酸鹽的普通速釋片劑，為達到有效的血藥濃度，設計的人 體每日使用劑量已高達20mg 80mg。此外，棉酚在高溫、高濕等條件下不穩定，40°C下放置10天即會出現顯著的減少； 與水分接觸時穩定性會降低，高濕環境下棉酚含量會快速下降。因此左旋棉酚及左旋棉酚 醋酸鹽的制劑需要盡可能控制和降低水分含量或與水隔絕，才能保證其穩定性。雖然片劑 水分含量低于液體制劑，但是，由于左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽的熱不穩定性，在片劑的制 備工藝下，如需保持左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽的穩定性，制劑中殘留的水分仍會較多。因此，需要研發左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽的生物利用度高且穩定性強的藥物制 劑。降低左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽制劑中的水分含量是提高其穩定性的途徑之一，而目 前除片劑外，尚無其它劑型的左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽的藥物制劑研發成功。環糊精包合物是將藥物分子包藏于環糊精分子空穴內形成的超微囊狀包合物。將 藥物制備成環糊精包合物有利于提高藥物的溶解性、穩定性和生物利用度，并掩蓋藥物的不良氣味和降低刺激性。但是環糊精包合物技術中，沒有一個通用的方法適合所有的藥物，需要根據環糊 精和藥物的溶解度、投料比例、設備條件、包合溫度和時間等選擇合適的制備方法，需要采 用正交優選設計、均勻設計、單因素輪換法等試驗設計方法找出試驗方案和最佳工藝條件。 其環糊精包合物的產率和穩定性也是制約環糊精包合物發展的主要因素。文獻報道顯示 (王齊放，修銳，趙哲，郭晶，蘇德森.聚維酮和聚乙二醇對吡羅昔康- β -環糊精包合的影 響.沈陽藥科大學學報.2000，17 ) J40-312.)，聚維酮和聚乙二醇4000可提高吡羅昔 康- β -環糊精包合物的穩定性和包和率，但所采用的吡羅昔康- β -環糊精包合物制備方 法為研磨法和振蕩混合，溫度為室溫，研究顯示在環糊精包合物的凍干或噴霧干燥等工藝 中其穩定作用較低，而且聚維酮和聚乙二醇4000濃度在3 5g/L范圍外會出現穩定作用 不理想或藥物釋放過緩等問題。中國專利200510026877. 9 (專利權人上海艾力斯醫藥科 技有限公司，授權公告號CN100508969C)公開了一種紫杉烷的羥丙基_ β _環糊精包合物， 采用聚維酮作為穩定劑，但凍干過程額外需要加入甘露醇等膨松劑以保持凍干粉的飽滿和 復溶性。

發明內容
針對以上現有技術，本發明的目的之一是提供一種生物利用度高、穩定性強、載藥 量大的用于治療腫瘤的左旋棉酚及其醋酸鹽的包合物，具體地說是一種用于治療腫瘤的左 旋棉酚及其醋酸鹽的環糊精包合物及其膠囊劑和注射用凍干粉制劑。本發明的另一目的是提供一種適于規模化生產的治療腫瘤的左旋棉酚及其醋酸 鹽的環糊精包合物的制備方法。為實現上述目的，本發明采用的技術方案為一種治療腫瘤的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環糊精包合物，由左旋棉酚或左旋 棉酚醋酸鹽、聚乙二醇和羥丙基-β-環糊精組成，所述聚乙二醇為聚乙二醇1500或聚乙 二醇2000中的一種，優選聚乙二醇2000 ；所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與聚乙二醇的 質量比為1 (0. 3 1.2)，優選1 (0. 5 1.0)，最優選1 (0. 6 0. 8)。所述羥丙 基-β -環糊精的平均取代度為4. 6 6. 5，優選5. 1 5. 8 ；所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸 鹽與羥丙基-β-環糊精的質量比為1 (7. 0 12.0)，優選1 (7.0 10.0)。所述治療腫瘤的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環糊精包合物的制備方法，包括以 下步驟1)將羥丙基-β -環糊精、聚乙二醇和左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽按規定比例加 入到少量無水乙醇中，每Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽無水乙醇用量為2 6ml，然后加入 水定容，配制成每200ml 300ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪 拌5小時，分裝于西林瓶，半壓塞；2)凍干a、預凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_40°C _30°C，維持冷凍5小時；b、一次干燥抽真空至101 70Pa，然后以8 °C /小時的升溫速度升溫 至-12°C _5°C，恒溫干燥6小時；C、二次干燥一次干燥后，以12°C /小時的升溫速度升溫至35°C 45°C，恒溫干燥2小時。所述步驟1)中，每Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽所需無水乙醇用量為細1，然后 加入水定容配制成每140ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液。所述步驟2) a中，預凍過程中預凍溫度為_32°C。所述步驟2) b中，一次干燥過程中抽真空至201 40Pa，升溫至_8°C。所述步驟2) c中，二次干燥過程中升溫至40°C。一種包含所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環糊精包合物的藥物制劑添 加醫學上可接受的常規藥用輔料后，制成膠囊劑或注射用凍干粉。本發明的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環糊精包合物也可以采用研發、噴霧干燥 法、自然干燥法、加熱干燥法等方法制備。制備的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環糊精包合物可直接裝分裝于西林瓶作為 注射用凍干粉使用，也可直接分裝于膠囊制成膠囊劑或與醫學上可接受的載體壓片制備成 片劑。本發明所用的術語“平均取代度”為描述羥丙基-環糊精性質常用的指標，其 涵義及測定方法是本領域技術人所公知的。本發明人通過采用正交優選設計、單因素輪換法等試驗設計方法篩選發現，以平 均取代度5. 1 5. 8的羥丙基- β -環糊精包合左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽效果顯著優于 其它環糊精及環糊精衍生物。并且本發明人在處方篩選及工藝研究中意外的發現，聚乙二 醇1500或聚乙二醇2000，尤其是聚乙二醇2000，在較寬的濃度范圍和溫度范圍內均可顯著 提高包合物的產率及穩定性，對各種左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽環糊精包合物的制備方法 均有廣泛的適用性，采用凍干工藝制備的凍干粉外形飽滿不宜塌陷，復溶效果好。此外，羥 丙基- β -環糊精和聚乙二醇1500或聚乙二醇2000在本發明的配比下對左旋棉酚或左旋 棉酚醋酸鹽具有意想不到的增溶作用，可顯著提高左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽在水中的溶 解度，顯著提高載藥量，并且可減少有機溶劑的用量。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步的解釋。應當理解的是，以下實施例僅用于解 釋本發明，而不是限制本發明的保護范圍。實施例1制備左旋棉酚的環糊精包合物配方為左旋棉酚5g聚乙二醇20003. 5g羥丙基-β -環糊精(平均取代度為5. 4) 40. 5g步驟如下1)將羥丙基-β -環糊精、聚乙二醇2000和左旋棉酚按規定比例加入到少量無水 乙醇中，每Ig左旋棉酚無水乙醇用量為細1，然后加入水定容，配制成每140ml含Ig左旋棉 酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪拌5小時，分裝于西林瓶，半壓塞；2)凍干a、預凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_32°C，維持冷凍5小時；
5
b、一次干燥抽真空至20Pa，然后以8°C /小時的升溫速度升溫至_8°C，恒溫干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以12°C /小時的升溫速度升溫至40°C，恒溫干燥2小 時，即得。將所制的藥物粉末分裝于膠囊即得左旋棉酚-羥丙基-β -環糊精包合物膠囊劑。實施例2制備左旋棉酚醋酸鹽的環糊精包合物配方為左旋棉酚醋酸鹽5g聚乙二醇15003. Og羥丙基-β -環糊精(平均取代度為5. 7) 50g步驟如下1)將羥丙基-β-環糊精、聚乙二醇1500和左旋棉酚醋酸鹽按規定比例加入到 少量無水乙醇中，每Ig左旋棉酚醋酸鹽無水乙醇用量為:3ml，然后加入水定容，配制成每 160ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪拌5小時，分裝于西林瓶，半
壓塞；2)凍干a、預凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_40°C，維持冷凍5小時；b、一次干燥抽真空至40Pa，然后以8°C /小時的升溫速度升溫至_12°C，恒溫干 燥6小時；C、二次干燥一次干燥后，以12°C /小時的升溫速度升溫至40°C，恒溫干燥2小 時，即得。將所制的藥物粉末分裝于西林瓶作為注射用凍干粉。實施例3制備左旋棉酚醋酸鹽的環糊精包合物配方為左旋棉酚醋酸鹽5g聚乙二醇20003. Og羥丙基-β -環糊精(平均取代度為5. 5) 45g步驟如下1)將羥丙基-β-環糊精、聚乙二醇2000和左旋棉酚醋酸鹽按規定比例加入到 少量無水乙醇中，每Ig左旋棉酚醋酸鹽無水乙醇用量為細1，然后加入水定容，配制成每 180ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪拌5小時，分裝于西林瓶，半
壓塞；2)凍干a、預凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_32°C，維持冷凍5小時；b、一次干燥抽真空至30Pa，然后以8°C /小時的升溫速度升溫至_12°C，恒溫干 燥6小時；C、二次干燥一次干燥后，以12°C /小時的升溫速度升溫至40°C，恒溫干燥2小 時，即得。將所制的藥物粉末分裝于西林瓶作為注射用凍干粉。
實施例4制備左旋棉酚的環糊精包合物配方為左旋棉酚5g聚乙二醇20002. 5g羥丙基- β -環糊精(平均取代度為6. 2) 45g步驟如下1)將羥丙基-β -環糊精、聚乙二醇2000和左旋棉酚按規定比例加入到少量無水 乙醇中，每Ig左旋棉酚無水乙醇用量為6ml，然后加入水定容，配制成每IOOml含Ig左旋棉 酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪拌5小時，分裝于西林瓶，半壓塞；2)凍干
a、預凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_32°C，維持冷凍5小時；
b、一次干丨燥抽真空至20Pa，然后以8°C /小時的升溫速度升溫至_12°C，恒溫干燥6小‘時；
C、二次干丨燥一次干燥后，以12°C /小時的升溫速度升溫至32°C，恒溫干燥2小時，即得。
將所制的藥物粉末分裝于膠囊作為膠囊劑。
實施例5 丨隱定性考察
實施例1-4制備的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環糊精包合物制劑各3份，分別
置光照(4500士500) lx、高溫(50士》°C及高濕(70士幻條件下放置60天，分別于第10天、 30天及60天時取樣，觀察其外觀性狀有無變化，干燥失重及主藥含量。主藥含量測定方 法如下以重蒸氯仿為溶劑，配制質量濃度為0. 2mg/ml的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽對照 品及樣品溶液，分別以自動定量點樣器點樣30 μ 1于聚酰胺板。于20°C下，以正己烷-氯 仿-冰醋酸(80 20 7)為展開劑上行展開1.25小時，采用紫外法在364. 5nm處測定左 旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的含量。各制劑外觀性狀、干燥失重、主藥含量等無顯著變化。實施例6生物利用度考察KM小鼠30只，4周齡，雌性，18 20g，隨機分為5組，每組6只，其中四組分別 灌胃或尾靜脈注射給予實施例1-4制備的制劑，其中膠囊劑去除膠囊殼溶于生理鹽水后 灌胃給藥，凍干粉溶于生理鹽水后注射給藥，另1組灌胃給予左旋棉酚混懸液或左旋棉酚 醋酸鹽混懸液，給藥劑量均為IOmg/只，給藥前及給藥后第30分鐘、1小時、3小時、12小 時、M小時、36小時采血，置抗凝采血管中，3000r/min離心取血漿，血漿中左旋棉酚或左 旋棉酚醋酸鹽的含量測定采用文獻(Abou-Donia MB, Othman MA, Obih P. Interspecies comparison ofpharmacokinetic profile and bioavailability of(+/-)-gossypol in male Fischer-344 rats and maleB6C3F mice. Toxicology, 1989,55 (1-2) :37-51.)報道 的方法。左旋棉酚混懸液和左旋棉酚醋酸鹽混懸液的生物利用度分別為16. 9%和22. 4%0 實施例1-4制備的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環糊精包合物制劑制劑的生物利用度見 下表1 表 權利要求
1.一種治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環糊精包合物，其特征在于由左旋棉酚 或左旋棉酚醋酸鹽、聚乙二醇和羥丙基-β-環糊精組成，所述聚乙二醇為聚乙二醇1500 或聚乙二醇2000中的一種，所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與聚乙二醇的質量比為 1 (0.3 1. ，所述羥丙基-β-環糊精的平均取代度為4. 6 6. 5，所述左旋棉酚或左 旋棉酚醋酸鹽與羥丙基-β-環糊精的質量比為1 (7.0 12.0)。
2.根據權利要求1所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環糊精包合物，其特征在 于所述聚乙二醇為聚乙二醇2000。
3.根據權利要求1所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環糊精包合物，其特征在 于所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與聚乙二醇的質量比為1 (0. 5 1. 0)。
4.根據權利要求1所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環糊精包合物，其特征在 于所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與聚乙二醇的質量比為1 (0. 6 0. 8)。
5.根據權利要求1所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環糊精包合物，其特征在 于所述羥丙基-β -環糊精的平均取代度為5. 1 5. 8。
6.根據權利要求1所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環糊精包合物，其特征在 于所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與羥丙基-β-環糊精的質量比為1 (7.0 10.0)。
7.—種權利要求1-6中任一項所述的治療腫瘤的左旋棉酚其醋酸鹽的環糊精包合物 的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)將羥丙基-β-環糊精、聚乙二醇和左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽按規定比例加入到 無水乙醇中，每Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽所需無水乙醇用量為2 6ml，然后加入水 定容，配制成每IOOml 200ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪拌 5小時，分裝于西林瓶，半壓塞；2)凍干a、預凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_40°C _30°C，維持冷凍5小時；b、一次干燥抽真空至10 70Pa，然后以8°C /小時的升溫速度升溫 至-12°C _5°C，恒溫干燥6小時；c、二次干燥一次干燥后，以12°C/小時的升溫速度升溫至35°C 45°C，恒溫干燥2小 時，即得。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于所述步驟1)中，每Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽所需無水乙醇用量為細1，然后加入 水定容配制成每140ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液；所述步驟2)a中，預凍過程中預凍溫度為-32°C ；所述步驟2)b中，一次干燥過程中抽真空至201 40Pa，升溫至_8°C ；所述步驟^c中，二次干燥過程中升溫至40°C。
9.一種包含權利要求1-6中任一項所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環糊精 包合物的藥物制劑，其特征在于添加醫學上可接受的常規藥用輔料后，制成膠囊劑或注射 用凍干粉。
全文摘要
本發明公開了一種治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環糊精包合物，由左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽、聚乙二醇和羥丙基-β-環糊精組成，所述聚乙二醇為聚乙二醇1500或聚乙二醇2000中的一種，所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與聚乙二醇的質量比為1∶(0.3～1.2)，所述羥丙基-β-環糊精的平均取代度為4.6～6.5，所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與羥丙基-β-環糊精的質量比為1∶(7.0～12.0)。本發明的產品具有生物利用度高、穩定性強、載藥量大等優點。
文檔編號A61K9/48GK102138916SQ20111005133
公開日2011年8月3日 申請日期2011年3月3日 優先權日2011年3月3日
發明者厲保秋 申請人:山東弘立醫學動物實驗研究有限公司