專利名稱：一種用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法
技術領域：
本發明屬于黃酮類化合物的制備技術領域，具體涉及蕎麥黃酮的制備方法。
背景技術：
黃酮類化合物是以2-苯基色原酮為基本母核的一類化合物，廣泛存在于植物中， 黃酮類化合物具有心血管系統活性、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化自由基、抗炎、鎮痛、保肝降壓、消炎、清熱解毒等多種生物活性，特別是具有抗自由基及抗癌、防癌的作用，所以黃酮類化合物在醫藥、食品、保健品等領域的應用具有廣闊的前景。因此，研究黃酮類化合物的提取、分離純化制備技術具有重要的經濟價值和實用價值。現有制備黃酮類化合物的方法，例如《農產品加工》2009年第5期中的“蕎麥粉中黃酮類化合物提取工藝的研究”一文中，公開的方法是采用乙醇浸提法提取蕎麥粉中的黃酮類化合物，其最佳工藝為以蕎麥粉為原料，用乙醇體積濃度75%的乙醇溶液為提取劑， 按料液比為1 30，在溫度80°C下提取9h，浸提蕎麥粉中的黃酮類化合物。該方法的主要缺點是①未分離氨基酸、多糖、蛋白質等大小分子雜質，導致產品中黃酮含量低，顏色深， 重新溶解時出現大量沉淀，產品質量差；②未對該制備過程中產生的廢液等進行回收再利用或無害化處理，污染環境；③原料利用率低，經濟效益差。又如《離子交換與吸附》2008年第M期中的“大孔吸附樹脂分離純化香椿葉總黃酮的研究”一文中，公開的方法是以香椿葉粉末為原料，以50 80%的乙醇為提取劑，先在70°C下提取2次，再用經預處理的X-5 大孔吸附樹脂對提取液進行吸附分離純化制得總黃酮。該方法的主要缺點是①大孔樹脂以極性相似原理進行吸附分離，選擇性不高，不能有效區分結構與黃酮差異大，但極性相近的雜質；②生產過程中的分離效率低，制得的產品純度低，需要用液相色譜或硅膠柱等進一步純化；③未對分離黃酮后的過柱液進行無害化處理，污染環境。
發明內容
本發明的目的是針對現有制備黃酮類化合物方法的不足，提供一種用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，具有工藝簡單，節約能源，無有害廢物排放，資源綜合利用率高，產品純度高等特點。本發明的原理是在堿性條件下，1,6-己二醇二縮水甘油醚可交聯殼聚糖微球及槲皮素的游離羥基反應，生成以醚鍵相連的反應性高分子，該反應性高分子以含有大量微孔結構的交聯殼聚糖微球為載體、以接枝的槲皮素為吸附官能團，利用槲皮素具有黃酮化合物基本母核、可與具有相同或相似結構的吸附質形成基于大JI-JI鍵疏水結合的特性， 實現對黃酮化合物的選擇性分離，再用洗脫劑洗脫吸附于該樹脂上的黃酮化合物，接著經過濃縮、干燥等處理，即可獲得高純度的黃酮化合物。實現本發明目的的技術方案是一種用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法先以蕎麥粉為原料制備出蕎麥黃酮提取液，再以殼聚糖為原料制備出接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂，然后用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂進行吸附，最后經洗脫、真空濃縮及凍干而得到蕎麥黃酮產品。其具體的方法步驟如下(1)制備蕎麥黃酮提取液以蕎麥粉為原料，按蕎麥粉的質量(g)乙醇體積濃度為40 60%的乙醇溶液體積(mL)的比為1 30 40的比例，先在蕎麥粉中加入乙醇溶液，在常溫下攪拌溶解2 4小時，然后再放置于離心機中，在轉速為6000 10000轉/分下，進行離心分離10 20 分鐘，分別收集離心清液和離心沉淀。對于收集的離心清液，即為制備蕎麥黃酮提取液，用于吸附分離蕎麥黃酮；對于收集的離心沉淀，送入閃蒸器中進行干燥，用于制備蕎麥淀粉。(2)制備接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂①制備交聯殼聚糖溶液第(1)步完成后，以殼聚糖為原料，按殼聚糖的質量(g)體積濃度為的鹽酸溶液的體積(mL)比為1 25 50的比例，先將殼聚糖溶解于鹽酸溶液中，形成殼聚糖溶液。再在攪拌條件下加入等體積的液體石蠟進行分散，制備出液體石蠟分散的殼聚糖溶液。 然后按殼聚糖的質量(g)體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積(mL)比為1 10 30 的比例，在液體石蠟分散的殼聚糖溶液中加入戊二醛溶液，進行交聯反應20 30分鐘，就制備出交聯反應殼聚糖溶液。②制備交聯殼聚糖微球第O)-①步完成后，將第O)-①步制備出的交聯反應殼聚糖溶液，先按致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質量比為1 0. 5 1的比例，在交聯殼聚糖溶液中加入致孔劑碳酸鈣粉末，攪拌混合均勻。然后再用稀氫氧化鈉溶液調節體系PH為9 10，再加熱升溫至60 70°C，并在60 70°C恒溫下反應2. 5 3. 5小時后，將反應溶液泵人抽濾機中，進行第一次抽濾，分別收集第一次抽濾渣和抽濾液。對于收集的第一次抽濾渣，先用等體積的溫度為50 60°C熱蒸餾水反復進行洗滌2 4次，除去殘留的液體石蠟，分別收集洗滌液和洗滌后的濾渣。對于收集的洗滌液，先與收集的第一次抽濾液合并后，再泵人離心機中，在轉速為2000 4000轉/分下，進行離心分離，分別收集上層液體石蠟和下層清液。對于收集的上層液體石蠟，可再次用于分散殼聚糖溶液；對于收集的下層清液，經生化處理達標后排放；對于收集的洗滌后的濾渣，先加入3 6倍體積的體積濃度為2 5 %的鹽酸溶液，在攪拌下溶解洗滌后濾渣中的碳酸鈣而形成混合液。然后將該混合液泵人抽濾機中，進行第二次抽濾，分別收集脫碳酸鈣濾過液和脫碳酸鈣濾渣。將收集的脫碳酸鈣濾過液泵人蒸發器中，在80 100°C下，進行蒸發濃縮，回收氯化鈣濃縮液，可再利用；對于收集的脫碳酸鈣濾渣，先用蒸餾水反復進行洗滌至洗滌液的PH值為6. 5 7. 5為止，分別收集洗滌液和洗滌后的碳酸鈣濾渣(即為制備出的交聯殼聚糖微球)。對于洗滌液經生化處理達標后排放。③制備接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂第O)-②步完成后，按第O)-②步制備出的交聯殼聚糖微球中的游離羥基1， 6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 5 15的比例，先將第 (2)-②步制備出的交聯殼聚糖微球加入槲皮素的質量濃度為0. 15 0. 25%的槲皮素蒸餾水溶液中，攪拌進行分散后，再用稀氫氧化鈉調節其pH為9. 5 11. 5，攪拌吸附50 60分鐘后升溫至70 95°C，然后加入1，6己二醇-二縮水甘油醚，恒溫反應2 4小時。反應完成后通過抽濾機進行抽濾，分別收集濾渣和濾液。對于收集的濾液，即為未反應的槲皮素和1，6己二醇-二縮水甘油醚，可再用于制備接枝槲皮素交聯殼聚糖吸附樹脂；對于收集的濾渣，先用3 5倍體積的蒸餾水洗滌，除去未參與接枝反應的槲皮素，然后再在60 80°C 下進行干燥直至恒重，就制備出接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂。(3)吸附蕎麥黃酮第O)-③步完成后，將第O)-③步制備出的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂裝入中壓層析柱中，先用與接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進行反沖，排出接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱中的氣泡后，再泵入第(1)步制備出的蕎麥黃酮提取液進行吸附， 直至過柱流出液中出現蕎麥黃酮時為止，收集過柱流出液(即為卸載蕎麥黃酮的過柱流出液)。吸附完成后，再次泵入與接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進行洗滌，洗滌夾雜于樹脂間的雜質，分別收集洗滌流出液和出吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱。對于收集的洗滌流出液與卸載蕎麥黃酮的過柱流出液合并后，先減壓蒸餾回收乙醇，再進行好氧處理，達標后排放。(4)洗脫蕎麥黃酮第C3)步完成后，在第( 步收集的吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱中，泵入乙醇體積濃度為85 95%的乙醇溶液進行洗脫，洗脫吸附于接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱上的蕎麥黃酮，直至洗脫流出液中無蕎麥黃酮時為止，乙醇洗脫液的流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱體積的3 5倍/小時。分別收集洗脫流出液和洗脫蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂。對于洗脫流出液，用于制備蕎麥黃酮凍干粉；對于洗脫蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂，用蒸餾水洗滌后可再次用于吸附蕎麥黃酮。(5)制備蕎麥黃酮凍干粉第(4)步完成后，將第(4)步收集的洗脫流出液，泵入真空濃縮裝置中，在真空度為-0. 6 -0. 9Mpa、溫度為75 90°C下，進行真空濃縮，直至濃縮液中無乙醇氣味時為止， 收集蕎麥黃酮濃縮液和蒸發液(即回收的乙醇)。對于回收的乙醇，調節其濃度后可再次用于提取蕎麥黃酮或洗脫蕎麥黃酮；對于收集的蕎麥黃酮濃縮液，先在_18°C的冰箱中預凍 5 6小時，然后再置于冷凍干燥機中，在溫度為-50 _60°C、真空度為25 501 的條件下，干燥M 30小時，就制備出純度為85 95%的蕎麥黃酮凍干粉。本發明采用上述技術方案后，主要有以下效果(1)本發明基于大π鍵間的疏水作用，直接從蕎麥黃酮粗提取物溶液中選擇性吸附黃酮，省去使用硅膠柱或液相色譜的純化工序，工藝簡單并且高效，獲得純度為85 95%的蕎麥黃酮凍干粉。(2)本發明使用常規的生產設備在溫和的條件下進行生產，操作簡便且易于控制， 因此生產成本低、能源消耗少。(3)本發明制備的接枝槲皮素交聯殼聚糖吸附樹脂可重復使用，再生效果好；對提取、洗脫蕎麥黃酮的乙醇進行了回收及回用，對卸載蕎麥黃酮的過柱流出液，進行了凈化處理，降低了生產成本且無“三廢”排放，是一種綠色環保的分離方法。本發明方法制備的產品，可廣泛應用于醫藥、保健、化妝品等行業中。在醫藥行業中，作為合成抗生素、抗腫瘤、降壓藥等的原料，或作為抗氧化、抗菌等功能性添加劑等。
具體實施方式
下面結合具體方式，進一步說明本發明。實施例1一種用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，具體步驟如下(1)制備蕎麥黃酮粗提取液以蕎麥粉為原料，按蕎麥粉的質量(g)乙醇體積濃度為40%的乙醇溶液體積 (mL)的比為1 30的比例，先在蕎麥粉中加入乙醇溶液，在常溫下攪拌溶解2小時，然后再放置于離心機中，在轉速為6000轉/分下，進行離心分離10分鐘，分別收集離心清液和離心沉淀。對于收集的離心清液，即為制備蕎麥黃酮提取液，用于吸附分離蕎麥黃酮；對于收集的離心沉淀，送入閃蒸器中進行干燥，用于制備蕎麥淀粉。(2)制備接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂①制備交聯殼聚糖溶液第(1)步完成后，以殼聚糖為原料，按殼聚糖的質量(g)體積濃度為的鹽酸溶液的體積(mL)比為1 25的比例，先將殼聚糖溶解于鹽酸溶液中，形成殼聚糖溶液。再在攪拌條件下加入等體積的液體石蠟進行分散，制備出液體石蠟分散的殼聚糖溶液。然后按殼聚糖的質量(g)體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積(mL)比為1 10的比例，在液體石蠟分散的殼聚糖溶液中加入戊二醛溶液，進行交聯反應20分鐘，就制備出交聯反應殼聚糖溶液。②制備交聯殼聚糖微球第O)-①步完成后，將第O)-①步制備出的交聯反應殼聚糖溶液，先按致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質量比為1 0.5的比例，在交聯殼聚糖溶液中加入致孔劑碳酸鈣粉末，攪拌混合均勻。然后再用稀氫氧化鈉溶液調節體系PH為9，再加熱升溫至60°C，并在60°C恒溫下反應2. 5小時后，將反應溶液泵人抽濾機中，進行第一次抽濾，分別收集第一次抽濾渣和抽濾液。對于收集的第一次抽濾渣，先用等體積的溫度為50°C熱蒸餾水反復進行洗滌2 次，除去殘留的液體石蠟，分別收集洗滌液和洗滌后的濾渣。對于收集的洗滌液，先與收集的第一次抽濾液合并后，再泵人離心機中，在轉速為2000轉/分下，進行離心分離，分別收集上層液體石蠟和下層清液。對于收集的上層液體石蠟，可再次用于分散殼聚糖溶液；對于收集的下層清液，經生化處理達標后排放；對于收集的洗滌后的濾渣，先加入3倍體積的體積濃度為2%的鹽酸溶液，在攪拌下溶解洗滌后濾渣中的碳酸鈣而形成混合液。然后將該混合液泵人抽濾機中，進行第二次抽濾，分別收集脫碳酸鈣濾過液和脫碳酸鈣濾渣。將收集的脫碳酸鈣濾過液泵人蒸發器中，在80°C下，進行蒸發濃縮，回收氯化鈣濃縮液，可再利用； 對于收集的脫碳酸鈣濾渣，先用蒸餾水反復進行洗滌至洗滌液的PH值為6. 5為止，分別收集洗滌液和洗滌后的碳酸鈣濾渣(即為制備出的交聯殼聚糖微球)。對于洗滌液經生化處理達標后排放。③制備接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂第O)-②步完成后，按第O)-②步制備出的交聯殼聚糖微球中的游離羥基1， 6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 5的比例，先將第⑵ 步制備出的交聯殼聚糖微球加入槲皮素的質量濃度為0. 15%的槲皮素蒸餾水溶液中，攪拌進行分散后，再用稀氫氧化鈉調節其PH為9. 5，攪拌吸附50分鐘后升溫至70°C，然后加入 1,6己二醇-二縮水甘油醚，恒溫反應2小時。反應完成后通過抽濾機進行抽濾，分別收集濾渣和濾液。對于收集的濾液，即為未反應的槲皮素和1，6己二醇-二縮水甘油醚，可再用于制備接枝槲皮素交聯殼聚糖吸附樹脂；對于收集的濾渣，先用3倍體積的蒸餾水洗滌，除去未參與接枝反應的槲皮素，然后再在60°C下進行干燥直至恒重，就制備出接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂。(3)吸附蕎麥黃酮第O)-③步完成后，將第O)-③步制備出的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂裝入中壓層析柱中，先用與接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進行反沖，排出接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱中的氣泡后，再泵入第(1)步制備出的蕎麥黃酮提取液進行吸附， 直至過柱流出液中出現蕎麥黃酮時為止，收集過柱流出液(即為卸載蕎麥黃酮的過柱流出液)。吸附完成后，再次泵入與接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進行洗滌，洗滌夾雜于樹脂間的雜質，分別收集洗滌流出液和吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱。對于收集的洗滌流出液與卸載蕎麥黃酮的過柱流出液合并后，先減壓蒸餾回收乙醇， 再進行好氧處理，達標后排放。(4)洗脫蕎麥黃酮第C3)步完成后，在第( 步收集的吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱中，泵入乙醇體積濃度為85%的乙醇溶液進行洗脫，洗脫吸附于接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱上的蕎麥黃酮，直至洗脫流出液中無蕎麥黃酮時為止，乙醇洗脫液的流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱體積的3倍/小時。分別收集洗脫流出液和洗脫蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂。對于洗脫流出液，用于制備蕎麥黃酮凍干粉；對于洗脫蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂，用蒸餾水洗滌后可再次用于吸附蕎麥黃酮。(5)制備蕎麥黃酮凍干粉第(4)步完成后，將第(4)步收集的洗脫流出液，泵入真空濃縮裝置中，在真空度為-0. 6Mpa、溫度為75°C下，進行真空濃縮，直至濃縮液中無乙醇氣味時為止，收集蕎麥黃酮濃縮液和蒸發液(即回收的乙醇)。對于回收的乙醇，調節其濃度后可再次用于提取蕎麥黃酮或洗脫蕎麥黃酮；對于收集的蕎麥黃酮濃縮液，先在_18°C的冰箱中預凍5小時，然后再置于冷凍干燥機中，在溫度為-50°C、真空度為25 的條件下，干燥M小時，就制備出純度為85%的蕎麥黃酮凍干粉。實施例2—種用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，同實施例1，其中第(1)步中，蕎麥粉的質量(g)乙醇體積濃度為50%的乙醇溶液體積(mL)的比為1 35，攪拌溶解3小時，離心機中在轉速為8000轉/分下，離心15分鐘。第O)-①步中，殼聚糖的質量(g)體積濃度為的鹽酸溶液的體積(mL)比為 1 35。殼聚糖的質量(g)體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積(mL)比為1 20，交聯反應25分鐘。第O)-②步中，致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質量比為1 0. 8。調節體系pH為9. 5， 升溫至65°C，并在65°C恒溫下反應3小時。用溫度為55°C熱蒸餾水洗滌3次。在洗滌后的濾渣中加入5倍體積的體積濃度為3. 5%的鹽酸溶液。蒸發器的溫度為90°C ；用蒸餾洗滌至洗滌液的PH值為7為止。第O)-③步中，交聯殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 10，加入槲皮素的質量濃度為0.20%的槲皮素蒸餾水溶液中，調節其PH為10，攪拌吸附55分鐘后升溫至80°C，恒溫反應3小時。用4倍體積的蒸餾水洗滌，在70°C下進行干燥直至恒重。第(4)步中，泵入乙醇體積濃度為90%的乙醇溶液，流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱體積的4倍/小時。第(5)步中，真空濃縮機的真空度為-0. 7Mpa、溫度為80°C。預凍5. 5小時，冷凍干燥機的溫度為45°C、真空度為40 ，干燥27小時。實施例3一種用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，同實施例1，其中第(1)步中，蕎麥粉的質量(g)乙醇體積濃度為60%的乙醇溶液體積(mL)的比為1 40，攪拌溶解4小時，離心機中在轉速為10000轉/分下，離心20分鐘。第O)-①步中，殼聚糖的質量(g)體積濃度為的鹽酸溶液的體積(mL)比為 1 50。殼聚糖的質量(g)體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積(mL)比為1 30，交聯反應30分鐘。第O)-②步中，致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質量比為1 1。調節體系PH為10，升溫至701，并在701恒溫下反應3.5小時。用溫度為60°C熱蒸餾水洗滌4次。在洗滌后的濾渣中加入6倍體積的體積濃度為5%的鹽酸溶液。蒸發器的溫度為100°C;用蒸餾洗滌至洗滌液的PH值為7. 5為止。第O)-③步中，交聯殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 15，加入槲皮素的質量濃度為0.25%的槲皮素蒸餾水溶液中，調節其PH為11.5，攪拌吸附50 60分鐘后升溫至95°C，恒溫反應4小時。用5倍體積的蒸餾水洗滌，在80°C下進行干燥直至恒重。第(4)步中，泵入乙醇體積濃度為95%的乙醇溶液，流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱體積的5倍/小時。第(5)步中，真空濃縮機的真空度為-0. 9Mpa、溫度為90°C。預凍6小時，冷凍干燥機的溫度為-60°C、真空度為50 ，干燥30小時。
權利要求
1. 一種用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，其特征在于具體方法步驟如下(1)制備蕎麥黃酮提取液以蕎麥粉為原料，按蕎麥粉的質量乙醇體積濃度為40 60%的乙醇溶液體積的比為Ig 30 40mL的比例，先在蕎麥粉中加入乙醇溶液，在常溫下攪拌溶解2 4小時，然后再放置于離心機中，在轉速為6000 10000轉/分下，進行離心分離10 20分鐘，分別收集離心清液和離心沉淀，將收集的離心沉淀選入閃蒸器中進行干燥；(2)制備接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂①制備交聯殼聚糖溶液第(1)步完成后，以殼聚糖為原料，按殼聚糖的質量體積濃度為的鹽酸溶液的體積比為Ig 25 50mL的比例，先將殼聚糖溶解于鹽酸溶液中；再在攪拌條件下加入等體積的液體石蠟進行分散；然后按殼聚糖的質量體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積比為Ig 10 30mL的比例，在液體石蠟分散的殼聚糖溶液中加入戊二醛溶液，進行交聯反應20 30分鐘；②制備交聯殼聚糖微球第O)-①步完成后，將第O)-①步制備出的交聯反應殼聚糖溶液，先按致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質量比為1 0.5 1的比例，在交聯殼聚糖溶液中加入致孔劑碳酸鈣粉末， 攪拌混合均勻；然后再用稀氫氧化鈉溶液調節體系pH為9 10，再加熱升溫至60 70°C， 并在60 70°C恒溫下反應2. 5 3. 5小時后，將反應溶液泵人抽濾機中，進行第一次抽濾， 分別收集第一次抽濾渣和抽濾液；對于收集的第一次抽濾渣，先用等體積的溫度為50 60°C熱蒸餾水反復進行洗滌2 4次，分別收集洗滌液和洗滌后的濾渣，對于收集的洗滌液，先與收集的第一次抽濾液合并后，再泵人離心機中，在轉速為2000 4000轉/分下，進行離心分離，分別收集上層液體石蠟和下層清液；對收集的下層清液，經生化處理達標后排放；對于收集的洗滌后的濾渣，先加入3 6倍體積的體積濃度為2 5%的鹽酸溶液，在攪拌下溶解洗滌后濾渣中的碳酸鈣而形成混合液；然后將該混合液泵人抽濾機中，進行第二次抽濾，分別收集脫碳酸鈣濾過液和脫碳酸鈣濾渣，將收集的脫碳酸鈣濾過液泵入蒸發器中，在80 100°C下，進行蒸發濃縮，回收氯化鈣濃縮液；對于收集的脫碳酸鈣濾渣，先用蒸餾水反復進行洗滌至洗滌液的PH值為6. 5 7. 5為止，分別收集洗滌液和洗滌后的碳酸鈣濾渣，即為制備出的交聯殼聚糖微球；對于洗滌液，經生化處理，達標后排放；③制備接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂第O)-②步完成后，按第O)-②步制備出的交聯殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 5 15的比例，先將第O)-② 步制備出的交聯殼聚糖微球加入槲皮素的質量濃度為0. 15 0. 25%的槲皮素蒸餾水溶液中，攪拌進行分散后，再用稀氫氧化鈉調節其pH為9. 5 11. 5，攪拌吸附50 60分鐘后升溫至70 95°C，然后加入1，6己二醇-二縮水甘油醚，恒溫反應2 4小時；反應完成后通過抽濾機進行抽濾，分別收集濾渣和濾液，對于收集的濾渣，先用3 5倍體積的蒸餾水洗滌，然后再在60 80°C下進行干燥直至恒重；(3)吸附蕎麥黃酮第O)-③步完成后，將第O)-③步制備出的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂裝入中壓層析柱中，先用與接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進行反沖，再泵入第(1)步制備出的蕎麥黃酮提取液進行吸附，直至過柱流出液中出現蕎麥黃酮時為止，收集過柱流出液，即為卸載蕎麥黃酮的過柱流出液，吸附完成后，再次泵入與接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進行洗滌，分別收集洗滌流出液和吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱，對收集的洗滌流出液與卸載蕎麥黃酮的過柱流出液合并后，先減壓蒸餾回收乙醇，再進行好氧處理，達標后排放；(4)洗脫蕎麥黃酮第(3)步完成后，在第C3)步收集的吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱中， 泵入乙醇體積濃度為85 95%的乙醇溶液進行洗脫，直至洗脫流出液中無蕎麥黃酮時為止，乙醇洗脫液的流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱體積的3 5倍/ 小時；分別收集洗脫流出液和洗脫蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂；(5)制備蕎麥黃酮凍干粉第⑷步完成后，將第⑷步收集的洗脫流出液，泵入真空濃縮裝置中，在真空度為-0. 6 -0. 9Mpa、溫度為75 90°C下，進行真空濃縮，直至濃縮液中無乙醇氣味時為止， 收集蕎麥黃酮濃縮液和蒸發液；對于收集的蕎麥黃酮濃縮液，先在_18°C的冰箱中預凍5 6小時，然后再置于冷凍干燥機中，在溫度為-50 _60°C、真空度為25 50 的條件下， 干燥M 30小時，就制備出純度為85 95%的蕎麥黃酮凍干粉。
2.按照權利要求1所述的一種用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，其特征在于第(1)步中，蕎麥粉的質量乙醇體積濃度為40%的乙醇溶液體積的比為Ig 30mL, 攪拌溶解2小時，離心機中在轉速為6000轉/分下，離心10分鐘；第O)-①步中，殼聚糖的質量體積濃度為的鹽酸溶液的體積比為Ig 25mL，殼聚糖的質量體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積比為Ig 10mL，交聯反應20分鐘；第O)-②步中，致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質量比為1 0.5，調節體系pH為9，升溫至 60°C，并在60°C恒溫下反應2. 5小時，用溫度為50°C熱蒸餾水洗滌2次，在洗滌后的濾渣中加入3倍體積的體積濃度為2%的鹽酸溶液，蒸發器的溫度為80°C，用蒸餾洗滌至洗滌液的 PH值為6. 5為止；第O)-③步中，交聯殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 5，加入槲皮素的質量濃度為0.15%的槲皮素蒸餾水溶液，調節其pH為9. 5，攪拌吸附50分鐘后升溫至70°C，恒溫反應2小時，用3倍體積的蒸餾水洗滌，在60°C下進行干燥直至恒重；第(4)步中，泵入乙醇體積濃度為85%的乙醇溶液，流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱體積的3倍/小時；第(5)步中，真空濃縮機的真空度為-0. 6Mpa、溫度為75°C，預凍5小時，冷凍干燥機的溫度為_50°C、真空度為25Pa，干燥M小時。
3.按照權利要求1所述的一種用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，其特征在于第(1)步中，蕎麥粉的質量乙醇體積濃度為50%的乙醇溶液體積的比為Ig 35mL, 攪拌溶解3小時，離心機中在轉速為8000轉/分下，離心15分鐘；第O)-①步中，殼聚糖的質量體積濃度為的鹽酸溶液的體積比為Ig 35mL，殼聚糖的質量體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積比為Ig 20mL，交聯反應25分鐘；第O)-②步中，致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質量比為1 0.8，調節體系pH為9. 5，升溫至65°C，并在65°C恒溫下反應3小時，用溫度為55°C熱蒸餾水洗滌3次，在洗滌后的濾渣中加入5倍體積的體積濃度為3. 5%的鹽酸溶液，蒸發器的溫度為90°C，用蒸餾洗滌至洗滌液的PH值為7為止；第O)-③步中，交聯殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 10的比例，加入槲皮素的質量濃度為0.20%的槲皮素蒸餾水溶液，調節其PH為10，攪拌吸附55分鐘后升溫至80°C，恒溫反應3小時，用4倍體積的蒸餾水洗滌，在70°C下進行干燥直至恒重；第(4)步中，泵入乙醇體積濃度為90%的乙醇溶液，流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱體積的4倍/小時；第(5)步中，真空濃縮機的真空度為-0. 7Mpa、溫度為80°C;預凍5. 5小時，冷凍干燥機的溫度為45°C、真空度為401 ，干燥27小時。
4.按照權利要求1所述的一種用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，其特征在于第(1)步中，蕎麥粉的質量乙醇體積濃度為60%的乙醇溶液體積的比為Ig 40mL, 攪拌溶解4小時，離心機中在轉速為10000轉/分下，離心20分鐘；第O)-①步中，殼聚糖的質量體積濃度為的鹽酸溶液的體積比為Ig 50mL，殼聚糖的質量體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積比為Ig 30mL，交聯反應30分鐘；第O)-②步中，致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質量比為1 1，調節體系PH為10，升溫至 700C，并在70°C恒溫下反應3. 5小時，用溫度為60°C熱蒸餾水洗滌4次，在洗滌后的濾渣中加入6倍體積的體積濃度為5%的鹽酸溶液，蒸發器的溫度為100°C，用蒸餾洗滌至洗滌液的PH值為7. 5為止；第O)-③步中，交聯殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 15，加入槲皮素的質量濃度為0.25%的槲皮素蒸餾水溶液， 調節其PH為11. 5，攪拌吸附50 60分鐘后升溫至95°C，恒溫反應4小時，用5倍體積的蒸餾水洗滌，在80°C下進行干燥直至恒重；第(4)步中，泵入乙醇體積濃度為95%的乙醇溶液，流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂柱體積的5倍/小時；第(5)步中，真空濃縮機的真空度為_0.9Mpa、溫度為90°C;預凍6小時，冷凍干燥機的溫度為_60°C、真空度為50Pa，干燥30小時。
全文摘要
一種用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，屬于黃酮類化合物的制備技術領域，本發明先以蕎麥粉為原料制備出含蕎麥黃酮提取液，再以殼聚糖為原料制備出接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂，然后用接枝槲皮素交聯殼聚糖樹脂進行吸附，最后經洗脫、真空濃縮及凍干而得蕎麥黃酮產品。本發明具有工藝簡單，節約能源，無有害廢物排放，資源綜合利用率高，產品純度高等特點。采用本發明方法制備出的產品，可廣泛應用于醫藥、保健、化妝品等行業中。在醫藥行業中，作為合成抗生素、抗腫瘤、降壓藥等的原料，或作為抗氧化、抗菌等功能性添加劑等。
文檔編號A61K36/70GK102172371SQ201110045489
公開日2011年9月7日 申請日期2011年2月25日 優先權日2011年2月25日
發明者周小華, 張 杰, 徐渙渙, 徐溢, 桑魯燕, 王永紅, 王穎麗 申請人:重慶大學