專利名稱：一種銀杏內酯制劑的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物制劑的制備方法，更具體地說，涉及一種銀杏內酯K針劑的 制備方法。
背景技術：
目前，研究表明銀杏內酯可改善腦缺血狀態，對抗缺血性腦損傷，具有明確的腦保 護作用，另外，銀杏內酯為一類強特異性的PAF拮抗劑，可用于治療血瘀氣滯引起的缺血性 腦血管疾病。從銀杏葉中提取的多種有效成分中，銀杏內酯類為其重要成分；而在銀杏內酯 類中，銀杏內酯K(Ginkgc)Iide K，以下簡稱GK)是最近開始研究的生物活性內酯，因為原來 因其在植物含量較少，所以被人們忽視。目前，由于GK在銀杏葉中含量較低及分離純化較 困難等原因，故用混合內酯(含內酯A，B，C)做針劑的見有報道，本人通過化學半合成的方 法，得到大量GK單體化合物，所以GK單體制備針劑的國內尚未見報道。在國內外文獻中，未見GK的藥理研究，僅見有中國藥科大學樓鳳昌教授分離得到 過該化合物。
發明內容
本發明的目的在于提供一種簡便、效果好的銀杏內酯K針劑的制備方法。本發明的目的是通過如下措施來實現。選純品GK為原料藥，溶解于注射用的非水 溶劑-低分子量的聚乙二醇中，聚乙二醇可單獨使用，或與無水乙醇組成的混合溶劑使用； PEG與乙醇的比例(按體積計)可在1 9-9 1范圍，優選3 1-1 3，混合溶劑中可加 或不加助溶劑、表面活性劑，如吐溫類(吐溫80等)。可使GK溶液在稀釋注射時不易析出， 充分攪拌或超聲震蕩，進行后處理；所述的后處理是指過濾、灌封、滅菌、檢測，即得產品，使 用前稀釋于適量的等滲氯化鈉注射液中，搖勻、供靜脈注射使用。本發明的針劑相比現有銀杏內酯類藥物的如下優點溶解性較好，活性較高，質量 可控，化學性質穩定，制備工藝簡便，即將GK加選用的“溶劑”溶解，經過濾、灌封、滅菌，即 得。每毫升含10-20毫克GK的滅菌溶液。臨用前稀釋于適量的等滲氯化鈉注射液中，含 GK10-40毫克/100毫升，供靜脈滴注用。經藥效學實驗，對大鼠MCAO模型最低有效劑量為 2-8mg/kg/日，證明對心腦血管病有治療作用。銀杏內酯K注射液兩種溶媒對MCAO大鼠腦梗塞范圍的影響地點中國藥科大學中藥學院試驗材料一、藥物與試劑受試藥銀杏內酯K注射液按實施例1制得，大鼠用量8、4、aiig/kg/日。對照藥-金納多注射液德國威瑪舒培博士藥廠產品，每支5ml，每毫升含黃酮苷 0.8%ig，批號1047425，人用量為20_40ml/人/日，大鼠用量6. 7ml/kg/日。化學試劑 Fecl3.6H20(A.R.)，北京化工廠生產，用lmol/L鹽酸配制；紅四氮哇(TTC)，美國SIGMA公司生產，批號:100321o二、動物SD大鼠，雌雄兼用，體重220_250g，由中國藥科大學實驗動物中心提供，合格證 號=SCXK 10-12-0036。三、儀器MP2001-1型電子天平由上海第二天平儀器廠生產。FA1004N型電子天平由上 海精密科學儀器公司生產；臺式低速大容量離心機TDL-5型，江蘇省金壇市醫療儀器廠生 產；UV-2201紫外可見分光光度計由日本島津公司生產。四、方法與結果一、銀杏內酯K注射液對大腦中動脈血栓模型大鼠神經癥狀的影響(一)分組及給藥取健康大鼠，按性別體重隨機分為6組銀杏內酯K注射液(8、4、2mg/kg)劑量組 和金納多注射液陽性對照、模型對照組(以上各組η = 27，早13 $ 14或早14 $ 13只)以 及假手術對照組(n = 10)，雌雄各半。各組分別于造模前給藥，每組動物尾靜脈注射相應的 藥物溶液，各組給藥體積為1. 0ml/100g。每天給藥一次，連續7天，模型對照組和假手術對 照組給予等容量的生理鹽水。(二)模型制造術次給藥Ih后，用戊巴比妥鈉(約35mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，仰臥固定， 常規消毒皮膚，頸部正中切開，飩性分離左側頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)和頸內動脈 (ICA)。用動脈夾夾閉頸總動脈，于頸內動脈上近頸總動脈分叉處剪一“V”字形切口，將一魚 線(直徑0.30mm)沿頸內動脈緩慢插入至大腦中動脈(MCA) 口，略感阻力時停止(插入過 程中無阻力感)，插入長度約(18.5士0. 5)mm，結扎固定魚線。假手術組也同樣插線，但Imin 后立即拔出，除不阻斷大腦中動脈外，其余操作同手術組。銀杏內酯B注射液注射液組、金 納多注射液組在缺血即刻和MCAO后池分別給予相應劑量的銀杏內酯B注射液、金納多溶 液，假手術對照組和模型對照組在同一時間點僅給予等容積生理鹽水。術后回籠飼養(3只 /籠)，注意保暖。造模后每組選取20只動物繼續試驗。(三)行為檢測在術后 24h)，按 Bederson 等[Lundy EF. 501ik BS, Frank RS et alMorphometric evaluation of brain infarcts in rats and gerbils. J Pharamacol Method, 1986,16 201]的方法并加以改進，對動物進行行為評分。1.提鼠尾離開地面約一 尺，觀察前肢屈曲情況。如雙前肢對稱伸向地面，記為0分；如手術對側前肢出現肩屈曲、肘 屈曲、肩內旋或既有腕肘的屈曲又有內旋者，記為1分。2.將動物置于平滑地面上，分別推 雙肩向對側移動，檢查阻力。如雙側阻力對等且有力記0分；如向手術對側推動時阻力下降 者，記為1分。3.將動物兩前肢置一金屬網上，觀察兩前肢的肌張力。雙側肌張力對等且有 力者為0分；手術對側前肢肌張力下降記為1分。4.提鼠尾離開地面約一尺，動物有不停 地向手術對側旋轉者，記為1分。根據以上標準評分，滿分為4分，分數越高，動物的行為障 礙越嚴重。(四)結果分析對行為測試打分值進行組間比較，t檢驗。結果顯示，假手術組未見行為異常改變，MCAO模型組、銀杏內酯K的不同計量組在 術后24h均出現偏癱樣癥狀，主要表現為手術對側前肢內收，肩內旋，前肢肌張力下降，肩抗力下降。銀杏內酯K注射液各劑量組的大鼠在術后Mh，其神經癥狀均有不同程度的改 善，統計學處理，差異顯著(P < 0. 05)。(四)腦栓塞范圍測定造模后Mh，每組取10只大鼠斷頭取血取腦，去除嗅球、小腦，生理鹽水洗凈，濾紙 吸盡水分，-20°C冷藏IOmin后，將大腦沿冠狀面切成厚約5mm腦片，置紅四氮唑(TTC) 磷酸鹽緩沖液中37°C避光溫孵15min，洗去染色液，再用10 %中性甲醛溶液固定Mh，取出 稱總染重，然后切取栓塞區稱重，計算栓塞范圍。結果進行組間比較，t檢驗。結果見表1。栓塞范圍=栓塞區重/總染重X100%。表-1銀杏內酯K注射液對MCAO大鼠腦組織梗死面積的影響
組別劑量(mg/kg)例數梗死百分率(％)
MCAO 組-1224. 6±3.2銀杏內酯K注射液組8YZ**11.5 ± 2.1412#15.1 ± Li212*20.7 ±1.8金納多注射液組6\2**12.4 ± 2.假手術組—10—注與模型組比較，*P< 0. 05，**P < 0. 01(五)缺血區腦組織SOD、MDA測定造模后Mh，每組取10只大鼠斷頭處死，迅速取手術側皮質和側皮基底核0. 4g 左右，稱重，加冰冷生理鹽水研磨成10%組織勻漿，勻漿液在2000r/mi基底節η下離心 IOmin,取上清液_20°C冷藏。羥胺法測定S0D、TBA法測定MDA。結果進行組間比較，t檢驗。 結果見表2。表-2銀杏內酯B注射液對局灶性腦缺血大鼠腦組織SOD、MDA的影響
組別劑量(mg/kg)SOD 活性(U/ mgprot) MDA (nmol/mgprot)
模型對照組-1019. 44±92. 9910. 19±1. 33銀杏內酯K注射液組8699. 57±75. 49*8.16±1. 79*4658. 36 ±74. 48*8..28±1. 30*2627. 71 ±44. 17*8. 78±1. 59*金納多注射液組6654. 0± 122. 40*8.55±1.65*假手術組-506. 52±159. 207. 05±2. 37與模型組比較，*Ρ< 0. 05，**P < 0. 01結果顯示，術后Mh，除假手術組未見異常改變外，MCAO模型組、銀杏內酯K各給藥 組的大鼠均有不同程度梗塞灶、銀杏內酯K注射液各劑量組可明顯減少梗塞程度，與模型組相比具有顯著差異(P < 0.01)。結果顯示，術后Mh，大鼠腦組織SOD、MDA的變化明顯，銀杏內酯K注射液各劑量 組與MCAO模型組相比具有顯著差異(P<0. 05)。本發明表明，銀杏內酯K注射液可顯著減 少大鼠局灶性腩缺血的梗塞范圍，明顯提高腦組織中的SOD活性，明顯降低腦組織中MDA的 含量。銀杏內酯K注射液(8mg/kg)組對大鼠局灶性腦缺血的梗塞范圍的抑制作用更強一 些，說明銀杏內酯K對腦缺血的保護作用呈劑量依賴性。具體實施方法實施例1
GK40， OOOmgPEG -2001000 ml
制得1000支配制稱取GK置容器中，加入溶劑PEG，攪拌或超聲震蕩溶解，至全量，混合均勻； 經過濾、灌封、滅菌，即得。實施例2
GK20’ OOOmg
PEG - 3001000 ml
氣化鈉500g
注射用水適量制得 1000 瓶配制稱取GK置容器中，加入溶劑PEG，攪拌或超聲震蕩溶解，至全量，加注射用水 至100L，混合均勻；經過濾、灌封、滅菌，即得。實施例權利要求
1.一種銀杏內酯K針劑的制備方法，其特征在于包括以下順序步驟將銀杏內酯K原 料溶解于聚乙二醇中，聚乙二醇可單獨使用或與乙醇配成混合溶劑可加或不加表面活性 劑，充分攪拌，進行后需處理。
2.根據權利要求1所述針劑包括水針和輸液，制備輸液時需根據滲透壓適當添加氯化 鈉或者葡萄糖。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，聚乙二醇和乙醇混合使用時按體積 計比例為1 9-9 1，優選為1 3-3 1。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的注射用非水溶劑，是低分子量 聚乙二醇PEG-200、PEG-300、PEG-400和PEG-600中的一種或者幾種混合使用。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于表面活性劑，是吐溫-80或者斯盤中的 一種或者幾種混合使用。
全文摘要
本發明涉及一種銀杏內酯針劑的制備方法，該方法是把銀杏內酯K溶于聚乙二醇，加或不加乙醇成混合溶劑，加或不加表面活性劑，經攪拌或加熱，及后處理即得產品。本發明優點是工藝簡單、成本低廉、不需凍干設備，性質穩定，方便貯運，藥效可靠。本發明產品主要用于治療心腦血管病、高血壓、哮喘等疾病。
文檔編號A61K31/365GK102058578SQ20111000220
公開日2011年5月18日 申請日期2011年1月7日 優先權日2011年1月7日
發明者何盛江, 楊中林, 殷華峰, 馬舒偉 申請人:中國藥科大學