專利名稱：提升樹突棘密度的方法
技術領域：
本發明涉及提升神經元中樹突棘密度的方法。更具體地，本發明關注于通過抑制 DR6和/或p75來增加突觸以及治療認知疾病的方法。
背景技術：
被稱為DR6受體的TNFR家族成員(在文獻中也被稱為“TR9”;在文獻中也被稱為 TNF受體超家族成員21或TNFRSF21)已經被描述為具有四個胞外富含半胱氨酸基序和胞質死亡域結構的I類跨膜受體(Pan等，FEBS Lett. (FEBS通訊),431 =351-356(1998);同樣參見美國專利6，358，508 ;6，667，390 ;6，919，078 ;6，949，358)。據報道DR6在特定轉染細胞系中的過表達導致凋亡以及NF-kB和JNK兩者的激活(Pan等，FEBS Letters (FEBS通訊),431 :351-356(1998)) ο在DR6缺陷型小鼠模型中，在JNK激活中T細胞基本被破壞，而當用蛋白抗原攻擊 DR6 (-/-)小鼠時，發現它們的T細胞過量增殖并展示向Th2響應的深度極化(而Thl分化不受同樣的影響)(Zhao等，J. Exp. Med.(實驗醫學雜志)，194 :1441-1448 (2001))。據進一步報道，DR6的定向破壞導致在體外的增強的T輔助細胞2(Th2)分化(Zhao等，見上)。 DR6激動劑或拮抗劑在調節B細胞介導的病癥方面的多種用途在公布于2005年3月31日的US 2005/0069540中得到描述。DR6受體可以在調節OVA誘導小鼠哮喘模型中的氣道炎癥中起作用(Venkataraman 等，Immunol. Lett.(免疫學通訊)，106 :42-47 (2006))。使用實驗性自身免疫腦脊髓炎的髓鞘少突膠質糖蛋白(M0G(35-55))誘導模型，發現與野生型(WT) 同窩相比，DR6-/-小鼠對CNS疾病的發作和進展兩者都具有高度的耐受。因此，DR6可能與調節白細胞浸潤有關并且在實驗性自身免疫腦脊髓炎的誘導和進展中起作用(Schmidt 等，J. Immunol.(免疫學雜志)，175 :2286-2292 (2005))。雖然不同的TNF配體和受體家族成員已經被鑒定為具有不同的生物學活性和性質，但是幾乎沒有這種配體和受體被報道為涉及神經學相關功能。例如，于2004年8月26 日公布的W02004/071528描述了在鼠模型中抑制CD95 (Fas)配體/受體復合物以治療脊髓損傷。目前，Nikolaev等顯示APP的N端片段是DR6的配體(Nilolaev等(2009) Nature (自 M)457 =981-989)。神經細胞在突觸處彼此通訊,其在樹突上發生于“樹突棘”處。樹突棘是從樹突伸出并(通常)與軸突的單個突觸接觸的樹突的膜區域。在單個樹突上可能由數千個棘。棘從軸突接收興奮性和抑制性輸入兩者，然而，更通常的是興奮性輸入。接近樹突棘尖端的是被稱為突觸后密度區(PSD)的電子密度區。在此區域內的是被稱為PSD-95的結構蛋白， PSD-95是PSD的標志物。棘富含谷氨酸受體(例如，AMPA和NMDA受體)。據信其他受體諸如TrkB受體在棘存活中起一定作用。化學突觸連接神經元以形成能夠處理并儲存信息的功能回路。據認為這些連接的合適功能或穩定性的喪失是許多精神疾病和神經退行性疾病的基礎。發明概述本發明提供使患有認知或精神疾病的患者的樹突棘密度增加的方法，所述方法包括將有效量的DR6抑制劑和/或P75抑制劑給藥于患者。所述抑制劑可以是，例如，結合DR6 的表位并抑制DR6的功能的抗體，或者結合p75的表位并抑制p75的功能的抗體。抑制性抗DR6抗體的實例包括但不限于3F4. 4. 8、4B6. 9. 7、1E5. 5. 7和它們的抗原結合片段。同樣地，所述抗體可以是嵌合抗體或人源化抗體，諸如，例如嵌合或人源化3F4. 4. 8、4B6. 9. 7或 1E5. 5. 7或與3F4. 4. 8、4Β6· 9. 7或1Ε5. 5. 7結合相同表位的抗體。DR6的抑制劑減少或防止神經兀中的DR6信號傳導。本發明還提供在需要其的患者中治療認知或精神疾病的方法，所述方法包括鑒別患有與樹突棘減少相關的認知或精神疾病的患者并且將治療有效量的DR6拮抗劑和/或 ρ75拮抗劑給藥于患者。精神或認知疾病可以是,例如,雷特綜合征(Rett Syndrome)、圖雷特綜合征(Tourette syndrome)、自閉癥(autism)、精神分裂癥(schizophrenia)或脆性X 精神發育遲緩(fragile-X mental retardation)。抑制劑可以是,例如，結合DR6的表位并抑制DR6的功能的抗體,和/或結合p75的表位并抑制p75的功能的抗體。所述抗體可以是，例如，3F4. 4. 8、4B6. 9. 7、1E5. 5. 7或它們的抗原結合片段。所述抗體可以是嵌合或人源化抗體，諸如，例如，嵌合或人源化3F4. 4. 8、4Β6· 9. 7或1Ε5. 5. 7，或與3F4. 4. 8、4Β6· 9. 7或 1Ε5. 5. 7結合相同表位的抗體。本發明還提供在衰老過程中保持受試者認知的方法，所述方法包括將對于提升受試者的樹突棘密度有效的量的DR6和/或ρ75抑制劑給藥于受試者，從而保持所述受試者的認知。抑制劑可以是，例如，結合DR6的表位并抑制DR6的功能的抗體，和/或結合ρ75的表位并抑制Ρ75的功能的抗體。所述抗體可以是，例如，3F4. 4. 8、4B6. 9. 7、1E5. 5. 7或它們的抗原結合片段。所述抗體可以是嵌合或人源化抗體，諸如，例如，嵌合或人源化3F4. 4. 8、 4Β6. 9. 7或1Ε5. 5. 7，或與3F4. 4. 8、4Β6· 9. 7或1Ε5. 5. 7結合相同表位的抗體。因此，本發明提供DR6拮抗劑和/或ρ75拮抗劑在制備用于增加樹突棘密度以及治療患有與下降的樹突棘密度相關的認知或精神疾病的患者的藥物的用途。附圖
簡述圖I顯示通過子宮內電穿孔的皮層2/3興奮性神經元的定向標記。圖Α:將來自懷孕小鼠的Ε16胚胎暴露，并用 1μ I DNA注射到右側腦室中并施加電勢；圖8 :可以通過組織學觀察到層2/3興奮性神經元細胞體和它們的過程。用DsRedExpress和PSD-95-paGFP 共標記神經元；圖C :植入的顱窗；圖D :通過顱窗的光子顯微鏡圖像(第14天和第44天)。圖2顯示與對照動物相比，出生后60天的DR6+動物樹突棘密度和寬度的增加 (圖Α)。通過對同一組群內所有動物每個細胞的棘總數/樹突長度進行平均來計算密度。 總計28個細胞/8只動物被注釋為DR6-/-，相比26個細胞/7只動物被注釋為DR6+/-而 26個細胞/6只動物被注釋為DR6+/+(圖B)。將棘寬度和長度繪制成按照每個基因型分析的棘的整個群體的累積圖(圖C)。圖3 顯示在用 O μ g/ml N-APP (對照)(圖 A 和 B) ; I μ g/ml N-APP (圖 C) ;3 μ g/ml N-APP (圖 D) ； 10 μ g/ml N-APP (圖 E);以及 30 μ g/ml N-APP (圖 F)處理后培養中的 E16
皮層神經元。圖4顯示作為用1、3、10和30 μ g/ml N-APP處理的結果(與對照相比)的PSD95 點(puncta)的減少。圖5顯示N-APP誘導的PSD95點密度的降低依賴于DR6功能。當加入O. 1,0. 3、
I.O或3. Oug/ml N-APP (不帶酸性尾部)或全長N-APP (N-APPFL)后在未處理的神經元中的對照的百分比(點/IOOum)。用30ug/ml抗DR6. I抗體對一個組進行額外處理(如圖所
示)O發明詳述本文中描述或涉及的技術和方法通常能夠被本領域技術人員很好的理解并且被本領域技術人員使用常規方法所采用，諸如，例如，在Sambrook等，Molecular Cloning A Laboratory Manual (分子克隆實驗室手冊)第二版(1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press (冷泉港實驗室出版社)，Cold Spring Harbor, N. Y中所述的廣泛使用的分子克隆方法。除非另外說明，當適當時，通常根據制造商規定的方案和/或參數來進行涉及使用市售試劑盒和試劑的步驟。在描述本方法和測定前，要理解本發明不限于所述的特定方法、方案、細胞系、動物種或屬、構建體和試劑，因為這些當然可以不同。還要理解本文中所用的術語僅意在描述特定的實施方案，而不意欲限制本發明的范圍，本發明的范圍僅由所附權利要求限定。必須注意，當在本文中和所附權利要求中使用時，單數形式“一個(a)”、“一個 (an)”和“所述(the)”包括復數所指，除非文中另有清楚說明。因此，例如，述及“遺傳改變”包括多個這樣的改變，而述及“探針”包括述及一個或多個探針及其為本領域技術人員所知的等同物，諸如此類。將在說明書和所附權利要求中例舉的數字(例如氨基酸22-81、 1-354等)理解為被術語“約”修飾。本文中提及的所有出版物通過引用結合于此，以公開和描述與所引用的出版物相關的方法和/或材料。本文中引用的出版物因其在本申請的提交日之前的公開內容而被引用。不將此處的任何內容看作是承認本發明人沒有權利根據發明較早的優先權日或在先日而先于所述出版物。此外，實際公布日可以不同于顯示的那些并且需要獨立驗證。術語“淀粉狀前體蛋白”或“APP”包括由APP前mRNA (pre-mRNA)編碼的不同的多肽同種型，例如分別顯示在SEQ ID NO :3-5中的APP695、APP751和App770同種型(翻譯自APP前mRNA的可變剪接轉錄產物的同種型)，以及APP同種型的翻譯后加工部分。如在本領域中已知的，轉錄自APP基因的APP前mRNA經歷可變外顯子剪接以產生若干同種型(參見，例如 Sandbrink 等，Ann NY Acad. Sci.(紐約科學院學報)777 =281-287(1996)； 以及與PubMed NCBI蛋白位點登錄號P05067相關的信息)。此可變外顯子剪接產生三種主要的同種型695 (SEQ ID NO :3),751 (SEQ ID NO :4)和 770SEQ ID NO :5)氨基酸(參見，例如 Kang 等，Nature (自然)325 :733-736 (1987) ；Kitaguchi 等，Nature (自然)331 530-532(1988) ；Ponte 等，Nature (自然)331 :525-527(1988)；和 Tanzi 等，Nature (自然)331 :528-532(1988))。這些同種型中的兩個(App751和APP7J包含與絲氨酸蛋白酶抑制劑的Kunitz家族(KPI)高度同源并且被普遍表達的56個殘基的插入。相反，作為缺乏 KPI基序的較短的同種型，APP695在神經系統中(例如在神經元和膠質細胞中)的表達是占優勢的，并且因此其通常被稱為“神經元APP”(參見，例如Tanzi等，Science (科學)235 880-884 (1988) ;Neve 等，Neuron (神經兀)I :669-677 (1988);和 Haas 等，J. Neurosci.(神經科學雜志)11 :3783-3793(1991))。包括695、751和770的APP同種型經歷顯著的翻譯后加工事件(參見，例如 Esch 等 1990 Science (科學)248 :1122-1124 ;Sisodia 等 1990 Science (科學)248 :492-495)。例如，這些同種型中的每個被多種分泌酶和/或分泌酶復合物切割，該事件產生包括N端分泌多肽的APP片段，所述N端分泌多肽包含APP胞外域 (sAPPa和sAPPP)。通過a分泌酶或備選地通過β分泌酶的切割分別導致可溶N端APP 多肽(sAPP a和sAPP β )的產生和胞外釋放，以及對應的膜定位C端片段(C83和C99)的保留。隨后的通過Y分泌酶的對C83的加工產生Ρ3多肽。這是主要的分泌途徑并且是不生成淀粉狀蛋白的。備選地，早老蛋白/呆蛋白介導的Y-分泌酶對C99的加工釋放淀粉狀蛋白β多肽、淀粉狀蛋白40 (Α β 40)和淀粉狀蛋白-β 42 (Α β 42)(淀粉狀蛋白斑的主要成分)以及細胞毒C端片段，y-CTF(50)、Y-CTF(57)和y_CTF(59)。證據表明各種切割事件的相對重要性取決于細胞類型。例如，非神經元細胞優先通過在Aβ序列內切割APP的a -分泌酶途徑來加工APP，由此排除了 Αβ的形成(參見，例如Esch等1990 Science (科學)248 :1122-1124 ；Sisodia 等 1990 Science (科學)248 :492-495)。相反， 神經元細胞通過β -分泌酶途徑來加工大得多的部分的APP695,并且通過至少兩類酶的組合活性來產生完整的Αβ。在神經元細胞中，β-分泌酶在Aβ結構域的氨基端切割APP695, 釋放不同的N端片段(sAPPii)。此外，Y-分泌酶在羧基端的備選位點切割APP，產生40 個(Αβ 40)或42個氨基酸長(Αβ 42)的Αβ種類(參見,例如Seubert等1993 Nature (自然)361 :260-263 ；Suzuki 等 1994 Science (科學)264 :1336-1340 ；以及 Turner 等 1996 J. Biol. Chem.(生物化學雜志)271 =8966-8970)。據信營養剝奪引發BACE切割APP從而產生 IOOkDa的sAPPii，其經歷額外的一次或多次切割以產生 55kDa的羧基端片段(通過抗sAPP β抗體檢測)以及氨基端 35kDa片段(通過抗N-APP (多克隆抗體)檢測)，我們將其稱為“N-APP”。額外切割的位點是未知的，但是基于片段大小，預期是在APP “酸性”和 “E2”結構域之間的接合處(氨基酸286)附近；實際上，重組APP[1-286]位于 35kDa處， 并且與N-APP類似可以用抗N-APP (多)檢測。當在本文中使用時，術語“APP”、“APP蛋白”和“APP多肽”包括天然APP序列和APP 變體及其經加工的片段。這些術語包括表達在多種哺乳動物(包括人)中的APP。APP可以如在多種人體組織譜系中自然發生的那樣被內源性表達，或者可以通過重組或合成方法表達。“天然序列APP”包括具有與來源于自然的APP相同的氨基酸序列的多肽(例如695、 751和770同種型或它們經加工的部分)。因此，天然序列APP可以具有天然存在的來源于任何哺乳動物(包括人)的APP的氨基酸序列。這種天然序列APP可以分離自自然或者可以通過重組或合成方法制備。具體地，術語“天然序列APP”包括天然存在的經加工和/或分泌形式(例如，包含例如胞外結構域序列的可溶形式)，天然存在的變體形式(例如，可變剪接和/或經蛋白水解加工的形式)以及天然存在的等位變體。APP變體可以包括天然序列APP的片段或缺失突變體。在本發明的實施方案中有用的APP多肽包括以上以及以下非限制性實施例所述的那些。可以選擇示例性的形式以用于本發明的不同實施方案。在本發明的一些實施方案中，APP多肽包括全長APP同種型諸如分別顯示在SEQ ID NO :3_5中的APP695和/或APP751和/或APP77tl同種型。在本發明其他的實施方案中，APP多肽包括經翻譯后加工的APP的同種型，例如經歷分泌酶諸如α -分泌酶、β -分泌酶或Y -分泌酶切割的APP多肽(例如可溶N端片段，諸如sAPPa或sAPPii)。在本發明的相關實施方案中，可以選擇APP多肽以包括一個或多個特異性結構域諸如N端胞外域(參見，例如Quast等，FASEB J. 2003 ； 17 (12) :1739-41)、肝素結合結構域(參見,例如Ross john等,Nat. Struct. Biol.(自然-結構生物學)1999Apr ;6(4) :327-31)、銅 II 型(參見，例如 Hesse 等，FEBS Letters (FEBS 通訊)349 (I) :109-116 (1994))或Kunitz蛋白酶抑制劑結構域(參見，例如Ponte等， Nature (自然)；331 (6156) :525-7 (1988))。在本發明的一些實施方案中，APP多肽包括被觀察到包含由本文中公開的DR6拮抗劑(諸如抗體或DR6免疫粘附素)識別的表位的序列，例如APP695的氨基酸22-81 ;包含被單克隆抗體22C11結合的表位的序列(參見，例如 Hilbich 等，J. Biol. Chem.(生物化學雜志)268 (35) :26571-26577 (1993))。在本發明的某些實施方案中，APP多肽不包含一個或多個特異性結構域或序列， 例如，不包含Kunitz蛋白酶抑制劑結構域的APP多肽(例如APP695)，或不包含阿爾茨海默氏β淀粉狀蛋白(Α β )序列的APP多肽(例如sAPP β，其是不包含A β 40和/或A β 42序列的多肽)(參見，例如Bond等，J. Struct Biol.(結構生物學雜志)2003 Feb ；141(2) 156-70)。在本發明的其他實施方案中，用于本發明的實施方案的APP多肽包含一個或多個結構域或序列而不包含其他結構域或序列，例如這樣的APP多肽，其包含N端胞外域(或者其一部分，觀察到該部分被DR6拮抗劑諸如單克隆抗體22C11結合)但是不包含C端至一個或多個分泌酶切割位點的結構域或序列(諸如β淀粉狀蛋白(Αβ)序列(例如sAPPa 或 sAPP β))。術語“胞外結構域”、“胞外域”或“ECD”是指APP的形式，其基本沒有跨膜和胞質結構域。通常，可溶E⑶將具有低于I %的這種跨膜和胞質結構域，并且優選地將具有低于 O. 5%的這種結構域。要理解本發明的多肽的任何經鑒別的跨膜結構域是根據本領域中通常采用的用于鑒別所述類型的疏水結構域的標準來鑒別的。跨膜結構域的精確邊界可以變化，但是多半不超過在最初鑒別的結構域的任一端的大約5個氨基酸。在優選的實施方案中，ECD將由多肽的可溶、胞外結構域序列組成，其不含跨膜和胞質或胞內結構域(并且不與膜結合)。術語“ΑΡΡ變體”是指如以下限定的APP多肽，其與具有顯示在SEQ ID NO :3、4或 5中的氨基酸序列的人APP或其可溶片段或其可溶胞外結構域具有至少大約80 %，優選地至少大約 85%、86%、87%、88%、89%，更優選地至少大約 90%、91 %、92%、93%、94%，最優選地至少大約95 %、96 %、97 %、98 %或99 %氨基酸序列同一性。這種變體包括，例如，其中向APP的全長或成熟序列的N末端或C末端添加了一個或多個氨基酸殘基或從APP的全長或成熟序列的N末端或C末端缺失了一個或多個氨基酸殘基的APP多肽，或者其中向多肽的內部序列或結構域插入一個或多個氨基酸殘基或從多肽的內部序列或結構域缺失了一個或多個氨基酸殘基的APP多肽，包括來自其他物種的變體，但是排除天然-序列APP多肽。“DR6”或“DR6受體”包括在本領域中已知其多核苷酸和多肽序列的受體。Pan等已經描述了被稱為“DR6”或“TR9”的TNF受體家族成員的多核苷酸和多肽序列(Pan等， FEBS Lett. (FEBS 通訊)，431 :351-356 (1998);同樣參見美國專利 6，358，508 ;6，667，390 ;6，919，078 ;6，949，358)。人DR6受體是655個氨基酸的蛋白(SEQ ID NO : I)，其具有推定的信號序列(氨基酸1-41)、胞外結構域(氨基酸42-349)、跨膜結構域(氨基酸350-369)， 之后是胞質結構域(氨基酸370-655)。DR6的cDNA序列被以SEQ ID NO 2提供。當在本文中使用時，術語“DR6受體”包括天然序列受體和受體變體。這些術語包括表達在多種哺乳動物(包括人)中的DR6受體。DR6受體可以如在多種人體組織譜系中自然發生的那樣被內源性表達，或者可以通過重組或合成方法表達。“天然序列DR6受體”包括具有與來源于自然的DR6受體相同的氨基酸序列的多肽。因此，天然序列DR6受體可以具有天然存在的來源于任何哺乳動物(包括人)的DR6受體的氨基酸序列。這種天然序列DR6受體可以分離自自然或者可以通過重組或合成方法制備。具體地，術語“天然序列DR6受體”包括受體的天然存在的截短或分泌形式(例如，包含例如胞外結構域序列的可溶形式)，天然存在的變體形式(例如，可變剪接形式)和天然存在的等位變體。受體變體可以包括天然序列 DR6受體的片段或缺失突變體。術語“胞外結構域”或“ECD”是指DR6受體的形式，其基本沒有跨膜和胞質結構域。 通常，可溶E⑶將具有低于I %的這種跨膜和胞質結構域，并且優選地將具有低于O. 5%的這種結構域。要理解本發明的多肽的任何經鑒別的跨膜結構域是根據本領域中通常采用的用于鑒別所述類型的疏水結構域的標準來鑒別的。跨膜結構域的精確邊界可以變化，但是多半不超過在最初鑒別的結構域的任一端的大約5個氨基酸。在優選的實施方案中，ECD 將由多肽的可溶、胞外結構域序列組成，其不含跨膜和胞質或胞內結構域(并且不與膜結合)。術語“DR6變體”是指如以下限定的DR6多肽，其與具有顯示在SEQ ID NO :1中的推斷的氨基酸序列的人DR6或其可溶片段或其可溶胞外結構域具有至少大約80%，優選地至少大約 85%、86%、87%、88%、89%，更優選地至少大約 90%、91 %、92%、93%、94%，最優選地至少大約95 %、96 %、97 %、98 %或99 %氨基酸序列同一性。這種變體包括，例如，其中向SEQ ID NO :1的全長或成熟序列的N末端或C末端添加了一個或多個氨基酸殘基或從 SEQ ID NO 1的全長或成熟序列的N末端或C末端缺失了一個或多個氨基酸殘基的DR6多肽，或者其中向多肽的內部序列或結構域插入一個或多個氨基酸殘基或從多肽的內部序列或結構域缺失了一個或多個氨基酸殘基的DR6多肽，包括來自其他物種的變體，但是排除天然-序列DR6多肽多肽。通常，DR6變體包括包含SEQ ID NO :I的氨基酸1-349或42-349 并具有達到10個保守氨基酸置換的可溶形式的DR6受體。優選地，這種變體充當如以下所限定的DR6拮抗劑。術語“DR6拮抗劑”以最廣義使用，并且包括在體外、原位、體內或先體外后體內(ex vivo)，部分或完全阻斷、抑制或中和DR6受體與其同源配體(優選地，其同源配體APP)結合或在神經元細胞或組織中激活一種或多種胞內信號或胞內信號傳導途徑的能力的任何分子。例如，DR6拮抗劑可以部分或完全阻斷、抑制或中和DR6受體在神經元細胞或組織中激活導致神經元細胞或組織中的凋亡或細胞死亡的一種或多種胞內信號或胞內信號傳導途徑的能力。DR6拮抗劑可以通過多種機制來起部分或完全阻斷、抑制或中和DR6的作用，包括但不限于，通過阻斷、抑制或中和同源配體與DR6的結合，DR6和其同源配體(例如 APP)之間的復合物的形成，DR6受體的寡聚，DR6受體與異源共同受體之間的復合物的形成，同源配體與DR6受體/異源共同受體復合物的結合，或DR6受體、異源共同受體和其同源配體之間的復合物的形成。DR6拮抗劑可以以直接或間接方式發揮功能。本發明預期的 DR6拮抗劑包括但不限于APP抗體、DR6抗體、免疫粘附素、DR6免疫粘附素、DR6融合蛋白、 共價修飾形式的DR6、DR6變體及其融合蛋白，或DR6的更高級的寡聚體形式(二體、聚集體)或DR6的同源或異源聚合物形式，小分子諸如JNK信號級聯放大的藥理學抑制劑(包括Jun N端激酶JNK活性的小分子和肽抑制劑)，在信號轉導途徑中在JNK的上游發揮功能的蛋白激酶MLK和MKK活性的藥理學抑制劑，JNK與支架蛋白JIP-I結合的藥理學抑制劑， JNK與其底物諸如c-Jun或AP-I轉錄因子復合物結合的藥理學抑制劑，JNK介導的其底物 (諸如JNK結合結構域(JBD)肽)的磷酸化的藥理學抑制劑和/或JNK的底物結合結構域的磷酸化的藥理學抑制劑和/或包括JNK底物磷酸化位點的肽抑制劑，阻斷ATP與JNK結合的小分子，和阻斷底物與JNK結合的小分子。為確定DR6拮抗劑是否部分或完全阻斷、抑制或中和DR6受體在神經元細胞或組織中激活一種或多種胞內信號或胞內信號傳導途徑的能力，可以進行測定以評估DR6拮抗劑對例如多種神經元細胞或組織以及在體內模型中的作用。可以以已知的體外或體內測定形式來進行多種測定，諸如以下描述的或本領域中已知的以及在文獻中所述的。確定DR6 拮抗劑是否部分或完全阻斷、抑制或中和DR6受體在神經元細胞或組織中激活一種或多種胞內信號或胞內信號傳導途徑的能力的測定的一個實施方案包括在存在或不存在DR6拮抗劑或潛在的DR6拮抗劑(即目的分子)的情況下使DR6與APP結合；然后檢測在存在此 DR6拮抗劑或潛在的DR6拮抗劑的情況下對DR6與APP結合的抑制。通過“核酸”是意在包括任何DNA或RNA。例如，存在于組織樣品中的染色體核酸、 線粒體核酸、病毒核酸和/或細菌核酸。術語“核酸”包括雙鏈核酸分子中的一條或兩條鏈并且包括完整核酸分子的任何片段或部分。“基因”是指在編碼或轉錄蛋白或調節其他基因表達中具有功能作用的任何核酸序列或其部分。基因可以由負責編碼功能蛋白的所有核酸或僅由負責編碼或表達蛋白的核酸的一部分組成。核酸序列在外顯子、內含子、起始或終止區、啟動子序列、其他調節序列或基因的唯一相鄰區內可以包含遺傳異常。術語“氨基酸(amino acid) ”和“氨基酸(amino acids) ”是指所有天然存在的 L-α-氨基酸。此定義意在包括正亮氨酸、鳥氨酸和高半胱氨酸。氨基酸通過單個字母或三個字母的名稱來得以識別
權利要求
1.一種增加患有認知或精神疾病的患者的神經元中樹突棘密度的方法，所述方法包括向所述患者給藥有效量的DR6抑制劑或p75抑制劑。
2.權利要求I所述的方法，其中所述DR6抑制劑是與DR6的表位結合并抑制DR6的功能的抗體。
3.權利要求I所述的方法，其中所述P75抑制劑是與p75的表位結合并抑制p75的功能的抗體。
4.權利要求2所述的方法，其中所述抗體選自由3F4.4. 8、4B6. 9. 7、1E5. 5. 7以及其抗原結合片段組成的組。
5.權利要求4所述的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化的3F4.4. 8、4B6. 9. 7或 1E5. 5. 7，或與3F4. 4. 8、4Β6· 9. 7或1Ε5. 5. 7結合相同表位的抗體。
6.權利要求I所述的方法，其中所述DR6抑制劑減少或防止所述神經元中的DR6信號傳導。
7.權利要求I所述的方法，其中所述ρ75抑制劑減少或防止所述神經元中的ρ75信號傳導。
8.治療需要所述治療的患者的認知或精神疾病的方法,所述方法包括鑒別患有與樹突棘的減少相關的認知或精神疾病的患者，以及向所述患者給藥治療有效量的DR6拮抗劑或 Ρ75拮抗劑。
9.權利要求I或8所述的方法，其中所述精神或認知疾病選自由以下各項組成的組 雷特綜合征、圖雷特綜合征、自閉癥、精神分裂癥和脆性X精神發育遲緩。
10.權利要求8所述的方法，其中所述DR6抑制劑是與DR6的表位結合并抑制DR6的功能的抗體。
11.權利要求8所述的方法，其中所述ρ75抑制劑是與ρ75的表位結合并抑制ρ75的功能的抗體。
12.權利要求10所述的方法，其中所述抗體選自由3F4.4. 8、4Β6· 9. 7、1Ε5· 5. 7以及其抗原結合片段組成的組。
13.權利要求12所述的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化的3F4.4. 8、4Β6. 9. 7或 1Ε5. 5. 7，或與3F4. 4. 8、4Β6· 9. 7或1Ε5. 5. 7結合相同表位的抗體。
14.在衰老過程中維持受試者的認知的方法，所述方法包括將有效提升所述受試者中樹突棘密度的量的DR6抑制劑或ρ75抑制劑給藥于所述受試者，由此維持所述受試者的認知。
15.權利要求14所述的方法，其中所述DR6抑制劑是與DR6的表位結合并抑制DR6的功能的抗體。
16.權利要求15所述的方法，其中所述抗體選自由3F4.4. 8、4Β6· 9. 7、1Ε5· 5. 7以及其抗原結合片段組成的組。
17.權利要求16所述的方法，其中所述抗體是嵌合或人源化的3F4.4. 8、4Β6. 9. 7或 1Ε5. 5. 7，或與3F4. 4. 8、4Β6· 9. 7或1Ε5. 5. 7結合相同表位的抗體。
18.權利要求14所述的方法，其中所述ρ75抑制劑是與ρ75的表位結合并抑制ρ75的功能的抗體。
19.DR6拮抗劑在制備用于患有認知或精神疾病的患者的藥物中的用途，其中所述拮抗劑抑制DR6活性。
20.權利要求15所述的DR6拮抗劑的用途，其中所述DR6拮抗劑是結合DR6的表位的抗體。
21.權利要求16所述的DR6拮抗劑的用途，其中所述抗體選自由3F4.4. 8、4B6. 9. 7、 1E5. 5. 7以及其抗原結合片段組成的組。
22.權利要求16所述的DR6拮抗劑的用途，其中所述抗體是嵌合或人源化的3F4.4. 8、 4B6. 9. 7或1E5. 5. 7，或與3F4. 4. 8、4Β6· 9. 7或1Ε5. 5. 7結合相同表位的抗體。
23.ρ75拮抗劑在制備用于患有認知或精神疾病的患者的藥物中的用途，其中所述拮抗劑抑制Ρ75活性。
全文摘要
本發明涉及增加樹突棘密度的方法，將其作為保持或改善認知以及治療與減少的樹突棘形態學相關的疾病以及精神疾病諸如成癮和精神分裂癥或與受損的認知相關的疾病諸如自閉癥、雷特綜合征、圖雷特綜合征和脆性X綜合征的方法。
文檔編號A61P25/00GK102612374SQ201080051211
公開日2012年7月25日 申請日期2010年11月12日 優先權日2009年11月12日
發明者安納托利·尼古拉耶夫, 羅比·魏瑪, 達拉·Y·卡羅普, 馬克·泰西耶-拉維格涅 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司