包含他汀類藥物的植物提取物及其制備技術和用途的制作方法

專利名稱：包含他汀類藥物的植物提取物及其制備技術和用途的制作方法
技術領域：
本發明一般涉及含他汀類藥物的植物提取物。本發明還涉及獲得這類提取物的方法及其用途。背景草藥輔助品為公知的且已應用于輔助傳統飲食和醫療方案。通常這類輔助品為提取物的形式，認為所述提取物提供了包括預防和治療疾病在內的健康和醫療益處。已知用于制備提取物的許多植物合成了在維持人類健康方面有用的化學品。然而，盡管增加了這類提取物的使用，但對植物藥物相互作用的了解仍處于初始階段。對這類 相互作用的了解的缺失能導致不良反應，所述不良反應能危及生命或為最壞的情況，即致命O此外，未完全確定這類提取物的準確組成，因為這類的許多植物提取物可包含能不利地影響個體中藥物動力學的化合物。例如，常見的植物提取物為紅曲米。該提取物具有許多用途，包括食品著色以及作為米酒的成分。近來，紅曲米提取物已用于降低酯類和膽固醇水平。然而，紅曲米的已知提取物包含大量的污染物。因此，一種或多種這些污染物的去除將有利于增加消費者對提取物的準確含量的信心以及向監管當局提供關于提取物組成的精確數據。亟需提供具有減少量的污染物的植物提取物，其克服或至少改善一個或多個上述缺點。亟需提供具有減少量的污染物的植物提取物，所述污染物對個體中藥物的藥物動力學具有副作用。概述根據第一方面，提供了包含一種或多種他汀類藥物且基本不含極性化合物的植物提取物。根據第二方面，提供了包含一種或多種他汀類藥物且基本不含影響個體中藥物的藥物動力學的極性化合物的植物提取物。根據第三方面，提供了制備提取物的方法，其包括從植物材料中除去極性化合物的步驟，其中所述植物材料包含一種或多種他汀類藥物。根據第四方面，提供了制備植物提取物的方法，其包括從所述植物提取物中除去影響個體中藥物的藥物動力學的一種或多種極性化合物的步驟。有利地，從植物提取物中除去一種或多種極性化合物基本上減少了不利的或不需要的藥物-草藥相互作用。本公開的方法的另一優點是提供了在植物提取物中的一致有效量的一種或多種他汀類藥物。根據第五方面，提供了包含第一方面或第二方面的植物提取物以及藥物可接受的載體的組合物。
根據第六方面，提供了包含第一方面或第二方面的植物提取物以及藥物可接受的載體的劑型。根據第七方面，提供了第一方面或第二方面的植物提取物在制備用于治療或預防高血脂的藥物中的用途。根據第八方面，提供了第一方面或第二方面的植物提取物在制備用于降低個體中膽固醇的藥物中的用途。根據第九方面，提供了包含第一方面或第二方面的植物提取物以及使用說明的包裝的劑型。根據第十方面，提供了第一方面或第二方面的植物提取物 在制備用于抑制個體中
3-羥基-3-甲基戊二酰-輔酶A(HMG-CoA)還原酶的藥物中的用途。根據第十一方面，提供了制備植物提取物的方法，其依次包括下列步驟從植物材料中除去一種或多種毒素；從植物材料中除去一種或多種極性化合物；從植物材料中形成提取物。定義下列為一些可幫助理解本發明的描述的定義。這些旨在作為一般定義且不應以任何方式將本發明的范圍限制于這些單獨的術語，而是為了更好地理解下列描述所提出。除非上下文另有需要或作出相反的具體聲明，本文以單數形式引用的本發明的整數、步驟或成分，步驟或成分清楚地包含所引用的整數、步驟或成分的單數和復數形式二者。在本說明書中，除非上下文另有需要，詞語“包含(comprise)”或諸如“包含(comprises) ”或“包含(comprising) ”的變體將理解為意味著包含所述步驟或成分或整數或者步驟或成分或整數的組合，而不排除任何其它的步驟或成分或整數或者成分或整數的組合。因此，在本說明書的上下文中，術語“包含(comprising)”表示“主要包含，但不必須僅僅包含”。本領域技術人員應意識到本文所描述的發明易受變動和更改的影響，除了具體描述的那些。應理解本發明包括所有這類變動和更改。本發明還包括在本說明書中單獨或共同地涉及或指出的所有步驟、特征、組成和化合物，以及任何和所有的組合或任何兩種或多種的所述步驟或特征。術語“藥物動力學”被廣泛解釋為包括在人類或動物體中給予的藥物的作用。該術語特別地涉及藥物吸收、分配、代謝和排泄；作用的開始；效果的持續時間；生物轉化；藥物的代謝物的效能和排泄途徑。在本說明書的上下文中的術語“極性化合物(polar compound) ”、“極性化合物(polar compounds) ”及其語法變體是指作為整體具有非零偶極矩的植物提取物中的化合物，典型地為有機化合物。在本說明書的上下文中的術語“天然存在的”是指在植物材料中天然存在的諸如他汀類藥物的化合物。術語“植物材料”被廣泛解釋為包括植物領域、菌類領域和藻類的所有成員。植物材料可包括植物材料的固體團或提取液。
在本公開的上下文中，術語“給藥(administering) ”及其包括“給藥(administer) ”和“給藥(administration) ”的術語的變體包括通過適當方法向有機體或表面接觸、涂覆、遞送或提供本發明的化合物或組合物。在本公開的上下文中，術語“治療”涉及任何和所有的用途，其以任何方式治療疾病狀態或癥狀、預防疾病的形成或用其它方法預防、阻礙、阻滯或改變疾病或其它不期望癥狀的發展。
在本說明書的上下文中，術語“治療有效量”包括充足但無毒量的本公開的化合物或組合物以提供期望的治療效果。需要的精確量將根據諸如治療的物種、個體的年齡和一般的病情、治療的病情的嚴重性、給予的特定制劑、給藥方式等因素在個體與個體間變化。因此，不可能指定確切的“有效量”。然而，對于給定的情況，可以僅使用實驗途徑由本領域技術人員確定適當的“有效量”。在本說明書的上下文中，術語“個體”包括人類和社會、經濟或研究重要的任何物種的個體，其包括但不限于綿羊屬動物、牛科動物、馬科動物、豬科動物、貓科動物、犬科動物、靈長目動物(包括人類和非人類靈長目動物)、嚙齒目動物、鼠科動物、山羊屬動物、兔屬動物和鳥綱動物的成員。本文所用的“劑型”是指適合作為用于待治療的個體的單一劑量的物理離散單位；計算包含預定量的植物提取物的各個單位以結合所需的藥物載體來產生期望的治療效果。可以配制植物提取物以便以可接受的劑量單位與合適的藥物可接受的載體一起以有效量來便利且有效地給藥。當組合物包含輔助活性成分時，通過參考所述成分的常用給藥劑量和方式來確定劑量。詞語“藥物可接受的載體”旨在包含溶劑、分散介質、涂層、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延緩劑(absorption delaying agent)等。這類介質和試劑在藥物活性物質中的用途在本領域中公知。除了任何常規介質或試劑與化合物不相容，可預期它們在治療組合物以及治療和預防的方法中的用途。詞語“基本上”不排除“完全地”，例如，“基本上不含” Y的組合物可以完全不含Y。另外，組合物仍可含1%至10%的Y。若需要，可從本發明的定義中忽略詞語“基本上”。如本文所用，在制劑組分濃度的上下文中的術語“約”通常表示規定值的+/-5 %，更通常表示規定值的+/_4%，更通常表示規定值的+/-3%，更通常表示規定值的+/-2%，甚至更通常表示規定值的+/-I%，以及甚至更通常表示規定值的+/-0. 5%。在本公開中，可能以范圍形式公開某些實施方案。應理解范圍形式的描述僅為了便利和簡潔，并且不應解釋為對公開范圍的范圍的不可改變的限制。因此，范圍描述應認為已具體公開了所有可能的子范圍以及該范圍內的單個數值。例如，諸如從I至6的范圍描述應認為已具體公開了諸如I至3、I至4、I至5、2至4、2至6、3至6等子范圍以及諸如I、
2、3、4、5和6的該范圍內的單個數值。這適用于不考慮范圍的幅度。本文還可寬泛地和概括地描述某些實施方案。落在一般公開內容內的各個較窄的種類和子種類也形成了本公開的一部分。這包括從一般種類中除去任何主題的具有附帶條件或相反限制的實施方案的一般描述，而不管所刪除的材料是否在本文具體詳述。任選實施方案的公開現將公開包含一種或多種他汀類藥物的植物提取物的示例性且非限制性的實施方案。植物提取物基本上不含影響個體中藥物的藥物動力學的極性化合物。在一個實施方案中，一種或多種他汀類藥物為天然存在的他汀類藥物且可選自洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀和美伐他汀。優選地，一種或多種洛伐他汀選自一種或多種莫那呵啉。在優選的實施方案中，一種或多種莫那呵啉選自莫那呵啉K、莫那呵啉J、莫那呵啉L和莫那呵啉M。優選地，一種或多種莫那呵啉選自莫那呵啉K和莫那呵啉J。在最優選的實施方案中，莫那呵啉為莫那呵啉K0在另一個實施方案中，莫那呵啉K以每克植物提取物約O. Olmg至500mg、約O. Img至 400mg、約 0. 2mg 至 300mg、約 O. 2mg 至 200mg、約 O. 2mg 至 lOOmg、約 O. 2mg 至 50mg、約O. 2mg至25mg、約O. 2mg至10mg、約O. 2mg至5mg和約O. 2mg至2mg的量存在于植物提取物中。優選地，莫那呵啉K以每克提取物O. 2mg至Img的量存在于植物提取物中。在另一實施方案中，植物提取物為微生物發酵的產物。優選地，在微生物發酵中使用的微生物為紫紅曲霉(Monascus purpureus)。或者,在微生物發酵中使用的微生物選自紅色紅曲霉(Monascus rubber)和叢毛紅曲霉(Monascus pilosus)。在一個實施方案中，從屬于禾本科的植物中提取植物提取物。在優選實施方方案中，植物為選自玉米、大米、小麥、大麥、高粱、小米、燕麥、黑麥、黑小麥和蕎麥的谷類植物。或者，植物選自豆科。在優選實施方案中，植物為選自菜豆屬的豆科植物。優選地，豆科植物可選自菜豆(P. vulgaris)、P. filiformis、紅花菜豆(P. coccineus)、棉豆(P. Iunatus)、P. maculatus 和寬葉菜豆(P. acutifolius)。在另一優選實施方案中，谷類植物為大米。優選地，大米為紅曲米。在另一實施方案中，從真菌中提取植物提取物。優選地，真菌為側耳屬真菌。優選地，側耳屬真菌為平菇。在一個實施方案中，從所述提取物中除去至少50%的極性化合物。優選地，從所述提取物中除去至少60%或至少70%或至少80%或至少90%的極性化合物。最優選地，從所述提取物中除去至少95%的極性化合物。或者，植物提取物中每克植物提取物除去的極性化合物可多達0. 26g。在一個實施方案中，植物提取物具有少于30%重量比的極性化合物，優選少于25%重量比的極性化合物，優選少于20%重量比的極性化合物，優選少于15%重量比的極性化合物,優選少于10 %重量比的極性化合物，優選少于5 %重量比的極性化合物，優選少于4 %重量比的極性化合物，優選少于3 %重量比的極性化合物，優選少于2 %重量比的極性化合物,優選少于I %重量比的極性化合物,優選少于0. 5%重量比的極性化合物。還提供了制備提取物的方法，其包括從植物材料中除去極性化合物的步驟，其中所述植物材料包含一種或多種他汀類藥物。還提供了制備提取物的方法，其包括從包含一種或多種他汀類藥物的植物材料中除去影響個體中藥物的藥物動力學的一種或多種極性化合物的步驟。在一個實施方案中，植物材料為固體植物物質。在另一實施方案中，植物材料的尺寸為約0. Icm至1cm、約0. 2cm至0. 9cm,和O. 3cm至0. 9cm。優選地,植物材料的尺寸為O. 3cm至O. 9cm。在一個實施方案中，在制備提取物之前可研磨植物材料。 優選地，研磨的植物材料的粒徑為約O. Imm至2mm、約O. 2mm至1mm、約O. 3mm至1mm、約O. 4mm至Imm,和約O. 5mm至1mm。優選地，研磨的植物材料的粒徑為O. 5mm至1mm。在任選的實施方案中，在制備提取物之前可超聲波處理研磨的植物材料。在一個實施方案中，所述方法還包括在除去所述一種或多種極性化合物的步驟之前從植物材料中除去一種或多種包括桔霉素和單寧酸在內的毒素的步驟。在一個實施方案中，通過將植物材料暴露在選擇來溶解所述一種或多種毒素的溶劑中來除去所述一種或多種毒素。在一個實施方案中，用于溶解所述一種或多種毒素的溶劑為弱酸性，即用于溶解所述一種或多種毒素的溶劑的PH為約5至小于7，更優選為約6至小于7，還更優選為約6. 5至小于7。優選地，溶劑包含鹽，例如堿金屬的有機鹽。示例性的鹽可選自磷酸鈉、乙酸鈉和碳酸氫鈉。此外，在所述溶劑中還存在有機酸以溶解所述一種或多種毒素。有機酸優選為羧酸。最優選地，羧酸為乙酸。鹽溶液的合適濃度選自O. 05M、0. 1M、0. 15M和O. 2M。優選地，鹽溶液包含O. IM的乙酸鈉。乙酸優選為O. 5%的溶液。在優選實施方案中，所用鹽溶液的量選自O. 5ml/g、lml/g、l. 5ml/g、2ml/g、2. 5ml/g、3ml/g、3. 5ml/g、4ml/g、4. 5ml/g、5ml/g、5. 5ml/g、6ml/g、6. 5ml/g、7ml/g、7. 5ml/g、8ml/g、8. 5ml/g、9ml/g、9. 5ml/g和lOml/g的植物材料。優選地，所用鹽溶液的量為4ml/g的植物材料。在一個實施方案中，在20°C至60°C的溫度下進行將植物材料暴露于包含一種或多種鹽和有機酸的溶液中的步驟約8至36小時。最優選地，暴露植物材料持續約8小時至34小時、約10小時至32小時、約12小時至30小時、約14小時至28小時、約16小時至26小時、約18小時至26小時、約20小時至26小時，和約22小時至26小時。在最優選的實施方案中，將植物材料暴露于包含一種或多種鹽和有機酸的溶液中12小時。在另一實施方案中，在20°C至60°C的溫度下,將植物材料暴露于包含一種或多種鹽和有機酸的溶液中。優選地，在選自21°C至55°C、22°C至50°C、23°C至45°C、24°C至40°C、25°C至35°C、25°C至30°C的溫度下暴露植物材料。在最優選的實施方案中，在23°C的溫度下，將植物材料暴露于包含一種或多種鹽和有機酸的溶液中12小時。優選地，提取物具有每克紅曲米提取物少于500 μ g、更優選少于450 μ g、更優選少于400 μ g、更優選少于350 μ g、更優選少于更優選少于300 μ g、更優選少于250 μ g、更優選少于200 μ g、更優選少于150 μ g、更優選少于100 μ g的桔霉素。在最優選的實施方案中，提取物的桔霉素水平為每克紅曲米提取物332 μ g至133 μ g的桔霉素。在一個實施方案中，一旦已經除去一種或多種毒素，在20°C至60°C的溫度下，將植物材料暴露于水溶液中約8小時至36小時以除去一種或多種極性化合物。最優選地，將植物材料暴露于水溶液中約8小時至34小時、約10小時至32小時、約12小時至30小時、約14小時至28小時、約16小時至26小時、約18小時至26小時、約20小時至26小時，和約22小時至26小時。在最優選的實施方案中，將植物材料暴露于水溶液中12小時。在另一實施方案中，在20°C至60°C的溫度下將植物材料暴露于水溶液中。優選在21°C至 55°C、22°C至 50°C、23°C至 45°C、24°C至 40°C、25°C至 35°C、25°C至 30°C 的溫度下將植物材料暴露于水溶液中。在最優選的實施方案中，在23°C的溫度下將植物材料暴露于水溶液中12小時。在優選實施方案中，所用水溶液的量為O. 5ml/g、lml/g、l. 5ml/g、2ml/g、2. 5ml/g、3ml/g、3. 5ml/g、4ml/g、4. 5ml/g、5ml/g、5. 5ml/g、6ml/g、6. 5ml/g、7ml/g、7. 5ml/g、8ml/g、8. 5ml/g、9ml/g、9. 5ml/g和lOml/g的植物材料。優選地，所用水溶液的量為4ml/g的植物材料。在最優選的實施方案中，水溶液為水。有利地，該步驟不僅除去極性化合物而且除去存在于植物材料中的任何殘留的鹽溶液。
期望不被任何特定理論所限制，應相信在植物提取物中存在的一種或多種極性化合物通過抑制個體中的某些酶來干擾給予的藥物的藥物動力學。認為這些酶包括但不限于包括1A2、2C9和3A4亞型在內的細胞色素P450以及p_糖蛋白。p_糖蛋白為具有廣泛底物特異性的ATP-依賴性流出泵。P-糖蛋白運送各種底物穿過細胞膜，所述底物包含諸如秋水仙堿、他克莫司和奎尼丁的藥物；諸如依托泊苷、阿霉素和長春堿的化學治療劑；月旨質、類固醇、異生物質、多肽、膽紅素、諸如地高辛的強心苷、免疫抑制劑、諸如地塞米松的糖皮質激素以及諸如蛋白酶抑制劑和非核苷逆轉錄酶抑制劑的HIV-I型抗逆轉錄病毒治療齊U。因此，極性化合物的除去降低了不利的藥物-草藥相互作用的發生率。 因此，在優選的實施方案中，一種或多種極性化合物通過與細胞色素P450和P-糖蛋白的相互作用來影響給予的藥物的藥物動力學。期望不受任何特定理論的限制，認為極性化合物通過結合細胞色素P450和/或P-糖蛋白來影響給予的藥物的藥物動力學。在另一實施方案中，所述方法還包括從所述固體植物材料中形成液體提取物的步驟。優選地，一旦已除去一種或多種極性化合物，在20°C至50°C的溫度下將植物材料暴露于有機溶液中約8小時至36小時。最優選地，將植物材料暴露于有機溶劑中約8小時至34小時、約10小時至32小時、約12小時至30小時、約14小時至28小時、約16小時至26小時、約18小時至26小時、約20小時至26小時以及約22小時至26小時。在最優選的實施方案中，將植物材料暴露于有機溶液中12小時。在另一實施方案中，在20°C至50°C的溫度下將植物材料暴露于有機溶液中。優選在21°C至50°C、22°C至45°C、23°C至40°C、24°C至35°C、25°C至30°C的溫度下將植物材料暴露于有機溶液中。在最優選的實施方案中，在25 °C的溫度下將植物材料暴露于有機溶液中12小時。在優選實施方案中，所用有機溶液的量為O. 5ml/g、lml/g、l. 5ml/g、2ml/g、2. 5ml/g、3ml/g、3. 5ml/g、4ml/g、4. 5ml/g、5ml/g、5. 5ml/g、6ml/g、6. 5ml/g、7ml/g、7. 5ml/g、8ml/g、8. 5ml/g、9ml/g、9. 5ml/g和lOml/g的植物材料。優選地，所用有機溶液的量為4ml/g的植物材料。在一個實施方案中，有機溶液選自醇、醚、齒仿、酮和亞烷基二醇。優選地，有機溶液包含易于水混合的有機化合物。在水中，有機溶液可包含至少50%的有機化合物。優選地，在水中，有機溶液包含至少70%的有機化合物。在優選的實施方案中，有機溶液為醇。最優選地，醇為70%的乙醇在其它優選的實施方案中，所述方法包括從液體提取物中分離植物材料以及將液體提取物的溶劑蒸發以形成干燥植物提取物的步驟。優選地，使用旋轉式蒸發器蒸發提取液。可優選采用攪動以增加提取法的效率。可在提取法多個步驟中的一個步驟進行攪動。優選地，由超聲處理來提供攪動。 在另一個實施方案中，提供了包含本公開的植物提取物以及藥物可接受的載體的組合物。在又一個實施方案中，提供了包含本公開的植物提取物以及藥物可接受的載體的劑型。根據本公開，可單獨給予植物提取物。另外，可給予提取物以作為包含至少一種本發明植物提取物的藥物制劑、營養制劑、獸醫制劑、農業制劑或工業制劑。可以與其它已知治療結合的形式使用植物提取物，所述治療包括抗真菌治療、抗生素、化學治療劑等。例如在默克索引(Merck Index)中的An Encyclopaedia ofChemicals (化學百科全書),Drugs and Biologicals (藥物和生物制品),第12版,1996中列舉的合適的制劑，其全部內容以引用的方式并入本文。包括本發明植物提取物的活性劑的組合可以為協同作用的。給藥的方便方式包括口服給藥、吸入、經皮應用、局部乳膏或凝膠或粉末、或者直腸給藥。優選地，口服給予提取物。根據給藥途徑，可使用材料涂覆制劑和/或提取物以使化合物免受可使化合物治療活性失活的酶、酸和其它天然條件的作用。本領域技術人員已知諸如腸溶衣的這類涂層。還可在甘油、液體聚乙二醇及其混合物以及油中制備植物提取物的分散體。在通常的貯存和使用條件下，藥物制劑可包含防腐劑以防止微生物的生長。在一個實施方案中，例如使用惰性稀釋劑或可同化的食用載體來口服給予植物提取物。還可將植物提取物和其它成分封閉在硬殼或軟殼明膠膠囊中、壓縮成為片劑或直接加入個體的飲食中。對于口服治療給藥，可將植物提取物并入賦形劑，并且以可吸收片劑、口含片、錠劑、膠囊、酏劑、懸浮液、糖衆、糯米紙(wafer)等的形式使用。適當地，這類組合物或制劑可包含至少I %重量比的植物提取物。或者，植物提取物的組合物和制劑當然可以變化，例如可方便地為劑量單位重量的約2%至約90%、約5%至約80%、約10%至約75%、約15%至約65%、約20%至約60%、約25%至約50%、約30%至約45%或約35%至約45%。在治療有用的組合物中的植物提取物的量為將獲得的合適劑量的量。輔助活性化合物還可并入本發明的組合物中。在一個實施方案中，載體可為可口服給予的載體。藥物組合物的另一種形式為配制為適于口服給藥的腸溶顆粒劑、片劑或膠囊劑的劑型。本發明的范圍內還包括緩釋劑型。片劑、錠劑、丸劑、膠囊劑等還能包含諸如黃蓍膠(gum gragacanth)、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠的粘合劑；諸如磷酸二鈣的賦形劑；諸如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸等的崩解劑；諸如硬脂酸鎂的潤滑劑；以及諸如蔗糖、乳糖或糖精的甜味劑或者諸如薄荷、鹿蹄草油或櫻桃香料的調味劑。當劑量單位形式為膠囊劑時，其除了上述類型的材料之外還能包含液體載體。可存在各種其他的材料作為涂層或另外修飾劑量單位的物理形式。例如，能使用紫膠、糖或二者涂覆片劑、丸劑或膠囊劑。糖漿劑或酏劑能包含類似物、作為甜味劑的蔗糖、作為防腐劑的對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯、染料和諸如櫻桃或橙子味的調味劑。當然，在制備任何劑量單位形式中使用的任何材料應為藥物純凈的且在所用的量中為基本無毒的。此外，能將類似物并入緩釋的制劑和劑型。優選地，藥物組合物還可包含合適的緩沖劑以將酸解降到最低。本領域技術人員已知合適的緩沖劑且其包括但不限于磷酸鹽、檸檬酸鹽、碳酸鹽及其混合物。可以進行本發明藥物組合物的單獨給藥或多重給藥。本領域技術人員應能夠通過常規實驗測定植物提取物和/或組合物的有效無毒劑量水平以及給藥方式。此外，使用常規療程確定試驗能確定最優化療程，例如你對于限定的天數每天給予的植物提取物或組合物的劑量數，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。通常，每24小時植物提取物的有效劑量可為約O. OOOlmg至約IOOOmg每kg體重；適當地為約O. OOlmg至約750mg每kg體重；約O. Olmg至約500mg每kg體重；約O. Img至約500mg每kg體重；約O. Img至約250mg每kg體重；或者約I. Omg至約250mg每kg體重。更合適地，每24小時的有效劑量可為約I. Omg至約200mg每kg體重；約I. Omg至約IOOmg每kg體重；約I. Omg至約50mg每kg體重；約I. Omg至約25mg每kg體重；約5. Omg至約50mg每kg體重；約5. Omg至約20mg每kg體重；或者約5. Omg至約15mg每kg體重。提供了本公開植物提取物在制備用于治療或預防高血脂的藥物中的用途。提供了本公開植物提取物在制備用于減少個體中膽固醇的藥物中的用途。提供了本公開植物提取物在制備用于減少個體中膽固醇的藥物中的用途。提供了本公開植物提取物在制備用于抑制個體中3-羥基-3-甲基戊二酰-輔酶A(HMG-CoA)還原酶的藥物中的用途。還提供了包含本公開的植物提取物以及使用說明的包裝的劑型。附圖
簡述附圖示例了公開的實施方案并用來解釋公開的實施方案的原理。然而，應當理解設計附圖僅為了示例的目的而不作為限制本發明的定義。圖Ia圖示在除去極性化合物之前紅曲米提取物的HPLC曲線。圖Ib為在除去極性化合物之后按照本公開的方法獲得的干燥紅曲米提取物的HPLC曲線；圖2圖示使用紅曲米提取物的細胞色素P450抑制研究的結果；圖3圖示極性化合物對P-糖蛋白的活性與負對照(NaVO4)的結果。圖4圖示使用紅曲米提取物的P-糖蛋白活性測試的結果；圖5圖示使用紅曲米提取物使用戊脈安的CaC0-2吸收研究的結果；以及圖6圖示使用紅曲米提取物使用戊脈安的動物吸收研究的結果。
實施例通過參考具體的實施例將更詳細地進一步描述包括最佳實施方式和比較例在內的本發明的非限制性實施例，其不應被解釋為以任何方式限制本發明的范圍。
實施例I紅曲米(RYR)的發酵制備方法I.在23°C下，將大米(Oryza sativa var. Japonica)浸泡在水(4ml/g)中 I 小時。2.然后在100°C下將大米保持在烘箱中2小時。3.然后添加 5% (w/w)的紫紅曲霉(M. purpureus)。4.然后在24°C至30°C下，每兩天使用物理攪拌撫育大米，持續7天至14天。實施例2提取方法I.在23°C下，將全部紅曲米(RYR)暴露于O. IM的乙酸鈉(4ml/g的紅曲米)中12小時。使用該步驟從RYR中除去桔霉素和其它毒素。然后通過在濾紙或粗棉布上過濾來除去鹽溶液。2.然后在23°C下，將RYR提取物暴露于水(4mg/l的紅曲米)中12小時。該步驟除去了來自上述步驟I的RYR制劑中的極性化合物和任何殘留的鹽溶液。然后通過在濾紙或粗棉布上過濾來除去鹽溶液。3.最后，23°C下，最終提取步驟使用70%的乙醇(4ml/g的紅曲米)12小時以產生富集的莫那呵啉K RYR提取物。最終提取詳述桔霉素水平為O. 3 μ g/g至O. 7 μ g/g的紅曲米提取物。通過提取方法除去的極性化合物的百分比約為94. 5%。在圖I中顯示了干燥的提取物的高效液相色譜(HPLC)的色譜分析。HPLC的條件為3 μ m孔徑柱；兩種溶劑，溶劑A為O. 01%甲酸以及溶劑B為100%乙腈；7ml/min的流速；梯度流量使得在O分鐘時溶劑A為97%且在50分鐘時溶劑B為100%。在O分鐘至10分鐘的面積內的峰將表示在干燥的提取物中極性化合物的百分比。如能在圖Ia的HPLC色譜分析中所見，RYR材料在使用水進行處理之前包含由165896201所標示的面積所示的極性部分。圖Ib說明RYR在使用水進彳丁處理之后具有由9534468所標不的面積所不的基本上減少的極性部分(如圖Ib上紅線所示)。在該面積中鋒的缺失表示從R材料中除去了極性化合物。這表示約95%的極性化合物在使用水進行處理之后已從RYR材料中被除去。莫那呵啉K (洛伐他汀)水平為O. 5mg/g至2mg/g的紅曲米提取物。實施例3對RYR提取物的藥物動力學確認細胞色素(CYP)P_450抑制研究使用CYP1A2A、CYP2C9 和 CYP3A4 活性測試(CYP1A2、CYP2C9 和 CYP3A4 P450-Glo ,Promega),其采用為甲蟲突光素衍生物的產生突光(Iuminogenic)的P450探針底物,所述底物為用于熒光素酶的底物。衍生物不是用于熒光素酶的底物，但是由CYP轉化至熒光素， 其反過來與熒光素酶反應以產生與P450活性直接成正比的可檢測量的光。在白色不透明96孔板(Costar)中以不同的濃度(I. 25mg/ml、2. 5mg/ml和5mg/ml，處理的藥物)使用20 μ I的無水熒光素(未處理的對照)、柚皮素(CYP抑制劑，負對照)或RYR水提取物處理CYP膜。在37°C下，將板預孵育10分鐘，然后通過添加NADPH再生溶液啟動反應，并且在37°C下孵育20分鐘。然后停止反應，并且通過向所有孔添加ATP檢測試劑開始發光檢測，并且由Infinite F200型酶標儀(Tecan)測量所有樣品的發光。CYP活性測試中觀察到的發光信號與酶活性直接成正比。來自未處理的CYP反應的凈信號表示總的CYP活性。添加100 μ g/ml的柚皮素(CYP抑制劑)作為實驗的負對照。用于與測試化合物(RYR水提取物)反應的未處理CYP反應的平均凈信號的變化說明由化合物調節CYP活性。測試化合物的發光信號高于未處理的樣品，說明該化合物能增加CYP活性；發光信號低于未處理樣品，意味著該化合物能抑制CYP的活性。結果(圖2)說明RYR水提取物誘發CYP1A2、CYP2C9和CYP3A4的抑制。EYS-NYP產物說明了非常低的CYP活性抑制，所述EYS-NYP產物為除去極性化合物后獲得的RYR提取物。P-糖蛋白(P-Ct))活性研究使用酶試劑盒Pgp-Glo 檢驗系統(Promega，美國)分析RYR水提取物對Ρ-gp活性的影響。該檢驗測定化合物對細胞膜部分中重組人類P-gp的影響，并且該測試依賴于螢火蟲熒光素酶的光產生反應的ATP依賴性。首先使用P-gp孵育ATP，然后停止P-gp ATP酶反應并且測定剩余的未代謝ATP作為熒光素酶產生的發光信號。發光中P-gp依賴性減少反映了由P-gp消耗ATP，因此信號降低越大，P-gp活性越高。因此，包含刺激P-gp ATP酶的化合物的樣品將具有比未處理樣品顯著更低的信號。P-gp、反應混合物和ATP檢測試劑的制備按照制造商的操作說明。以不同濃度(I. 25mg/ml、2. 5mg/ml和5mg/ml)制備20 μ I的RYR水提取物，分別將戊脈安(正對照，O. 5mM)和Na3VO4 (P-gp抑制劑，O. 25mM)加入白色不透明96孔板(具有透明平底，Costar Inc.，NY)。然后將P-gp加入包含測試化合物的孔中，并且在37°C下孵育5分鐘。通過添加Mg-ATP溶液開始反應，在37°C下孵育96孔板40分鐘。然后停止反應，通過向所有孔添加ATP檢測試劑開始發光測定，并且在InfiniteF200型酶標儀(Tecan，奧地利)上檢測產生的發光。在P-gp活性檢驗中，通過將未處理樣品(基底的)和用RYR水提取物處理的樣品與Na3VO4 (原釩酸鈉)處理的對照進行比較來檢測RYR水提取物對Pgp ATP酶活性的影響(參見圖3)。Na3VO4為P-gp的選擇性抑制劑，且用Na3VO4處理的樣品不具有P_gp ATP酶活性。在缺少Na3VO4時，能檢測到基底的和藥物刺激的P-gp ATP酶活性。在Na3VO4存在時的ATP消耗歸因于存在于膜制劑中的較少的非P-gp ARP酶活性。在Na3VO4處理的樣品和未處理的樣品間發光信號的差異代表基底P-gp ATP酶活性，而在Na3VO4處理的樣品和使用測試化合物(RYR水提取物)處理的樣品間發光型號的差異代表在測試化合物存在時的P-gp ATP酶活性。如圖4中所示，RYR水提取的添加顯著提高了 P-gp活性并且活化作用是劑量依賴性的。這些結果意味著RYR水提取物包含P-gp底物，當使用P-gp膜對其進行孵育時，由P-gp消耗ATP，并且當與Na3VCM處理的樣品進行比較時，觀察到發光的強烈變化。EYS-NYP產物表明P-gP活性的較低活化，這意味著通過所述方法有效地除去了能影響P-gp活性的RYR中的化合物。
CaCo-2吸收檢驗使用胰島素/EDTA收集為90%至100%匯合的燒瓶，使用含血清的培養基中和并且離心分離。在由接種基礎培養基(Basal Seeding medium) (BD Biosciences)和Mito+Serum Extender(BD Biosciences)組成的無血清培養基中再懸浮細胞團塊(cellpel let)，并以6 X IO5細胞/cm2將該細胞團塊接種在6孔插入式細胞培養皿(Cell CultureInserts) (Corning, NY)中。嵌入物包含具有膠原I型的聚酯0. 4 μ m微孔膜。在實驗中，在接種后24小時使用腸上皮細胞分化培養基(Enterocytes Differentiation medium) (BDBiosciences)替換接種培養基，這需要使用分化培養基，此后每48小時替換培養基，并且在37°C、95%相對濕度和5% CO2中保持細胞。在Enterocytes分化培養基中孵育三天之后，用于滲透性研究的CaCo-2單層準備就緒。使用跨上皮電阻(TEER)值大于300 Ω cm2的生理學和形態學完備的CaCo_2細胞單層進行研究。 含IOmM HEPES的Han緩沖液改進了用于這些研究的運輸培養基。頂部和基底外側的格的PH值均為7. 5。在所有實驗之前，使用緩沖液洗滌各個單層兩次并測量TEER，從而保證單層的完整。在缺少以及存在測試化合物的情況下測量戊脈安從頂部至基底外側(A至B)的運輸。使用的戊脈安的濃度為ΙΟΟμΜ，這遠低于其 60μΜ的Kni值。在該測試中，將測試化合物的濃度選擇為10 μ Μ。所述研究通過向單層側面的頂部(Α至B傳送)或基底外側(B至A傳送)添加適當量的含地高辛的緩沖液開始。頂部和基底外側的格的體積分別為1.6ml和2. 8ml，并且以10 μ M的濃度向單層的兩側添加測試化合物(作為抑制劑)。然后在37°C下孵育單層3小時。在孵育期間分別在O分鐘、10分鐘、30分鐘、60分鐘、90分鐘、120分鐘和180分鐘從基底外側格采集樣品以及在O分鐘從頂部格采集樣品，并且由HPLC分析戊脈安濃度。在存在和缺少測試化合物的情況下，計算戊脈安從A至B的滲透系數(Peff)。在RYR水提取物對酶水平的影響的調查(P-gp和CYP檢驗)之后，采用CaCo_2吸收檢驗以分析RYR水提取物在細胞水平中的影響。針對CaCo-2細胞單層的體外研究對預測人體內腸滲透性是有價值的手段。在實驗中，以各種濃度(20mg/ml和50mg/ml,處理的藥物)將50μ I的I X PBS (對照)或RYR水提取物添加到具有100 μ g/ml戊脈安的組織培養皿的頂部格中。從校準曲線(數據未示出)中計算從基底外側和頂部格采集的樣品的濃度，通過測量從注射戊脈安基準(259 μ g/ml、125 μ g/ml、30 μ g/ml、15 μ g/ml、7. 5 μ g/ml和3μ g/ml)獲得的峰面積構成所述校正曲線，并且回歸分析線性方程為y =27043x-11153(r2 = 0.098)。在CaCo-2研究中，RYR水提取物增加了戊脈安的凈吸收量(2倍)。然而，EYS-NYP產物(按照公開的方法制備的)示出與對照類似的結果。這說明所述方法能在RYR中有效地除去影響個體中藥物的藥物動力學的極性化合物(圖5)。動物研究從新加坡國立大學(NUS, Singapore)的動物屋購買重為200g至270g的雄性Sprague-Dawley大鼠。按照機構指導護理大鼠。在具有調溫(25°C )的暗/光(12小時/12小時)控制循環下的常規條件中飼養動物。將八只大鼠分配為兩組(2X4只動物)，每個組進行四次試驗。使用Iml的100mg/ml RYR極性提取物(預處理組)或Iml的鹽水(對照組)預處理大鼠30分鐘，然后口服給予動物10mg/kg的戊脈安。使用克他命和甲苯噻嗪(二者均為100mg/ml)麻醉大鼠。在藥物給予之后，在O分鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘、240分鐘、360分鐘和480分鐘從頸靜脈將血液樣品收集入I. 5ml的埃彭道夫管中，并且立即進行13000rpm的離心2分鐘。將透明的血漿層轉移至清潔的管中，然后添加等體積的乙腈以從樣品中除去蛋白質。在具有渦流的暫短混合后，以13000rpm離心樣品2分鐘，將上清液轉移至HPLC瓶中，然后通過HPLC分析它們的戊脈安含量。通過參考由無藥物合并的大鼠血漿樣品構成的戊脈安校正曲線將未知樣品的峰面積比轉換為濃度。
RYR水提取物的添加顯著提高了動物模型中戊脈安的吸收。在30分鐘的時點上，藥物處理的動物中戊脈安的水平表明其吸收比對照組和已除去極性化合物的RYR提取物(EYS-NYP樣品)高約I. 6倍(圖6)。總結公開的方法說明有效除去了影響個體中藥物的藥物動力學的一種或多種極性化合物。在上述實施例中，已說明了一種或多種極性化合物顯著增加戊脈安的攝入。戊脈安為苯基烷基胺類的L型鈣通道阻斷劑。其用于治療高血壓、心絞痛、心律失常。戊脈安用藥過量的癥狀包括低的血壓(低血壓)、緩慢的心率(心動過緩)、不規則心律(心律失常)和肺部流體。因此，該不期望的藥物-草藥相互作用對于嘗試通過降低脂質和膽固醇來改善心血管健康而服用RYR提取物的個體而言是潛在的生命威脅。應用應清楚本發明的各種其它修改和改變對于閱讀前述公開之后的本領域技術人員而言是顯而易見的，而沒有背離本發明的精神和范圍，其旨在將所有這樣的修改和改變包括在附屬權利要求的范圍內。
權利要求
1.植物提取物，其包含一種或多種他汀類藥物且基本不含極性化合物。
2.植物提取物，其包含一種或多種他汀類藥物且基本不含影響個體中藥物的藥物動力學的極性化合物。
3.如權利要求I或2所述的植物提取物，其中所述一種或多種他汀類藥物為選自洛伐他<汀、辛伐他汀、普伐他汀和美伐他汀的天然存在的他汀類藥物。
4.如前述權利要求中任一權利要求所述的植物提取物，其中所述植物提取物為微生物發酵的產物。
5.如前述權利要求中任一權利要求所述的植物提取物，其中所述植物提取物提取自屬于禾本科的植物。
6.如權利要求5所述的植物提取物，其中所述植物為選自玉米、大米、小麥、大麥、高粱、小米、燕麥、黑麥、黑小麥和蕎麥的谷類植物。
7.如權利要求6所述的植物提取物，其中所述谷類植物為大米。
8.如權利要求7所述的植物提取物，其中所述大米為紅曲米。
9.如權利要求I至4中任一權利要求所述的植物提取物，其中所述植物選自豆科。
10.如權利要求9所述的植物提取物，其中所述植物為來自菜豆屬的豆科植物，所述植物選自菜豆(P. vulgaris)、P. filiformis、紅花菜豆(P. coccineus)、棉豆(P. Iunatus)、P. maculatus 和寬葉菜豆(P. acutifolius)。
11.如權利要求I至4中任一權利要求所述的植物提取物，其中所述植物提取物提取自側耳屬真菌。
12.如權利要求11所述的植物提取物，其中所述側耳屬真菌為平菇。
13.如權利要求I至12中任一權利要求所述的植物提取物，其中所述一種或多種洛伐他汀選自一種或多種莫那呵啉。
14.如權利要求13所述的植物提取物，其中所述一種或多種莫那呵啉選自莫那呵啉K、吳那呵琳J、吳那呵琳L和吳那呵琳M。
15.如權利要求14所述的植物提取物，其中所述莫那呵啉為莫那呵啉K。
16.如權利要求15所述的植物提取物，其中所述莫那呵啉K以每克提取物約0.2mg至Img的量存在于所述植物提取物中。
17.如前述權利要求中任一權利要求所述的植物提取物，其中從所述提取物中除去至少80%的所述極性化合物。
18.如權利要求中17所述的植物提取物，其中從所述提取物中除去至少95%的所述極性化合物。
19.制備提取物的方法，其包括從植物材料中除去極性化合物的步驟，其中所述植物材料包含一種或多種他汀類藥物。
20.制備提取物的方法，其包括從包含一種或多種他汀類藥物的植物材料中除去影響個體中藥物的藥物動力學的一種或多種極性化合物的步驟。
21.如權利要求19或20所述的方法，其中所述植物材料為固體植物物質。
22.如權利要求19至21中任一權利要求所述的方法，其還包括在除去所述一種或多種極性化合物的步驟之前從所述植物材料中除去一種或多種毒素的步驟。
23.如權利要求22所述的方法，其中通過將所述植物材料暴露于被選為溶解所述一種或多種毒素的溶劑中來除去所述一種或多種毒素。
24.如權利要求23所述的方法，其中所述用于溶解所述一種或多種毒素的溶劑為弱酸性的。
25.如權利要求24所述的方法，其中所述用于溶解所述一種或多種毒素的溶劑的pH為約5至小于7。
26.如權利要求25所述的方法，其中所述溶劑包含堿金屬的鹽。
27.如權利要求26所述的方法，其中所述鹽選自磷酸鈉、乙酸鈉和碳酸氫鈉。
28.如權利要求23至27中任一權利要求所述的方法，其中在所述用于溶解所述一種或多種毒素的溶劑中還存在有機酸。
29.如權利要求28所述的方法，其中所述有機酸為羧酸。
30.如權利要求22至29中任一權利要求所述的方法，其中所述除去毒素的步驟包括除去桔霉素的步驟。
31.如權利要求21至30中任一權利要求所述的方法，其中所述方法包括將所述固體植物材料暴露于水溶液中以去除所述極性化合物的步驟。
32.如權利要求31所述的方法，其中在20°C至60°C的溫度下將所述固體植物材料暴露于水溶液中，持續8至36小時。
33.如權利要求21至32中任一權利要求所述的方法，其包括從所述固體植物材料中形成液體提取物的步驟。
34.如權利要求33所述的方法，其中所述形成液體提取物的步驟包括將所述固體植物材料暴露于有機溶液的步驟。
35.如權利要求34所述的方法，其中所述有機溶液選自醇、醚、鹵仿、酮和亞烷基二醇。
36.如權利要求34或35所述的方法，其中所述有機溶液包含易與水混合的有機化合物。
37.如權利要求34至36中任一權利要求所述的方法，其中所述有機溶液在水溶劑中包括至少50%的有機化合物。
38.如權利要求34至37中任一權利要求所述的方法，其中所述有機溶液在水溶劑中包括至少70%的有機化合物。
39.如權利要求33至38中任一權利要求所述的方法，其包括下列步驟 將所述植物材料與所述液體提取物分離；以及 蒸發所述液體提取物的溶劑以形成干燥的植物提取物。
40.如權利要求19至39中任一權利要求所述的方法，其中所述一種或多種他汀類藥物為選自洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀和美伐他汀的天然存在的他汀類藥物。
41.如權利要求19至40中任一權利要求所述的方法，其中所述提取物為微生物發酵的產物。
42.如權利要求19至41中任一權利要求所述的方法，其中從屬于禾本科的植物中提取所述提取物。
43.如權利要求42所述的方法，其中所述植物為選自玉米、大米、小麥、大麥、高粱、小米、燕麥、黑麥、黑小麥和蕎麥的谷類植物。
44.如權利要求43所述的方法，其中所述谷類植物為大米。
45.如權利要求44所述的方法，其中所述大米為紅曲米。
46.如權利要求19至41中任一權利要求所述的方法，其中所述植物選自豆科。
47.如權利要求46所述的植物提取物，其中所述植物為來自菜豆屬的豆科植物，所述植物選自菜豆(P. vulgaris)、P. f iliformis、紅花菜豆(P. coccineus)、棉豆(P. lunatus)、P. maculatus 和寬葉菜豆(P. acutifolius)。
48.如權利要求19至41中任一權利要求所述的方法，其中從側耳屬真菌中提取所述提取物。
49.如權利要求48所述的方法，其中所述側耳屬真菌為平菇。
50.如權利要求40至49中任一權利要求所述的方法，其中所述一種或多種洛伐他汀選自一種或多種莫那呵啉。
51.如權利要求50所述的方法，其中所述一種或多種莫那呵啉選自莫那呵啉K、莫那呵琳J、吳那呵琳L和吳那呵琳M。
52.如權利要求51所述的方法，其中所述莫那呵啉為莫那呵啉K。
53.如權利要求51或52所述的方法，其中所述莫那呵啉K以每克提取物約0.2mg至Img的量存在于所述提取物中。
54.如權利要求19至53中任一權利要求所述的方法，其中從所述提取物中除去至少80 %的所述極性化合物。
55.如權利要求54所述的方法，其中從所述提取物中除去至少95%的所述極性化合物。
56.組合物，其包含權利要求I至18中任一權利要求所述的植物提取物以及藥物可接受的載體。
57.劑型，其包含權利要求I至18中任一權利要求所述的植物提取物以及藥物可接受的載體。
58.權利要求I至18中任一權利要求所述的植物提取物在制備用于治療或預防高血脂的藥物中的用途。
59.權利要求I至18中任一權利要求所述的植物提取物在制備用于降低個體中膽固醇的藥物中的用途。
60.權利要求I至18中任一權利要求所述的植物提取物在制備用于抑制個體中3-羥基-3-甲基戊二酰-輔酶A(HMG-CoA)還原酶的藥物中的用途。
61.包裝的劑型，其包含權利要求I至18中任一權利要求所述的植物提取物以及使用說明。
全文摘要
提供了包含一種或多種他汀類藥物且基本不含影響個體中藥物的藥物動力學的極性化合物的植物提取物。還提供了制備提取物的方法，其包括從包含一種或多種他汀類藥物的植物材料中除去影響個體中藥物的藥物動力學的極性化合物的步驟。
文檔編號A61K36/48GK102625705SQ201080024948
公開日2012年8月1日 申請日期2010年4月8日 優先權日2009年4月8日
發明者馮偉度, 李文堅, 梁伯豪, 羅慶明, 蘇布拉馬尼阿姆·庫魯薩邁 申請人:余仁生國際有限公司, 南洋理工學院