專利名稱：含花楸提取物并含有硒和/或鋅添加的免疫刺激組合物的制作方法
含花楸提取物并含有硒和/或鋅添加的免疫刺激組合物
本發明涉及免疫刺激試劑，尤其涉及用于刺激免疫系統的含有硒和花楸提取物的組合物，以及含有這些成分的藥物組合物和營養組合物。
背景技術：
花楸(Aronia)屬于薔薇科落葉灌木。花楸屬中的多種花楸品種及雜交種已經為人們所知，例如黑果腺肋花楸(Aronia melanocarpa)，紅果腺肋花楸(Aronia arbutifolia)以及紫果腺肋花楸(Aronia χ primifolia)。花楸果實為小梨果類型，其果汁具有澀味并富含維生素C以及其他抗氧化劑。由于它們的果實具有明亮的色彩，所以花楸被用作飲料以及其他食品的著色劑， 例如US-P-6703056，WO 2005 058052和WO 2006 138419這些專利和專利申請中公開的實例。除此之外，花楸果的抗氧化性也引發了人們的興趣。例如，黑果腺肋花楸富含酚類化合物，特別是花青素，這些花青素主要位于花楸果表皮，它們使果漿和種子免受UV輻射。這些花青素使黑果腺肋花楸具有卓越的抗氧化能力。氧自由基吸收能力(ORAC)是反映一種化合物或提取物對抗氧化壓力的指標。花楸具有很高的ORAC值，因此其也被當作功能性食品或營養品，或作為它們的添加劑使用。例如專利申請US 2007 0020358公開了一種運動型飲料濃縮物，其含有用作營養成分的花楸。專利申請WO 2007 06 1900公開了一種功能性甜味劑組合物，其含有花楸提取物作為抗氧化劑，專利申請WO 2007 076857公開了一種含有花楸成分的咀嚼口香糖，其中花楸被用作抗氧化劑。進一步來說，此前的研究還發現花楸或其所含化合物可用于制備藥物組合物或營養組合物以及食品添加劑。例如，專利申請DE 10 2004 029 887A1公開了一種以花楸果渣中所含的花楸果皮提取物為原料的膳食補充劑，這樣的膳食補充劑被認為具有豐富的抗自由基保護因子。專利申請DE 10 2004 052 882A1公開了一種以特定選用的果實和豆類濃縮物為原料的膳食補充劑，其除了其它成分外還含有花楸果汁濃縮物。所述膳食補充劑被認為能夠增強免疫系統，其中闡明了這些成分的相互組合可以協同影響這些成分的效果。專利申請WO 2001 01553公開了含花楸果實提取物的食品添加劑可用于抑制環氧合酶介導的炎癥反應，也就是說公開了由于花楸提取物能夠在C0X-2活性和C0K-1活性之間優先抑制C0X-2的活性，從而具有抗炎癥反應的活性。專利申請DE 10 2005 046 474A1公開了使用花楸果皮提取物用于預防和治療細菌、真菌和/或炎癥疾病/癥狀。這種作用歸結于該提取物具有抗菌和抗真菌活性。該提取物對于免疫系統的直接作用并未被闡明。此外，專利申請WO 2002 005827公開了使用花楸提取物來制備治療腦癌的藥物，
并進一步公開了用于治療癌癥的營養組合物，其含有一種或者多種來自花楸的黃酮類化合物以及微量營養素硒和鋅。微量營養素為多種代謝過程所必需，例如可作為酶的輔基參與代謝，因此它們是食品中重要的成分。因此，如此前的研究表明，可以將微量營養素添加到不同種類的食品中例如添加到功能性食品中以取得或者改進特定的生理功能。對于免疫系統來說，研究表明微量營養素硒和鋅除影響其他生理功能外，還影響免疫狀態。其中硒是嗜中性粒細胞、巨噬細胞、NK細胞、T淋巴細胞以及一些其他免疫機制維持適當活性所必需的成分，如果人體對其攝入最不足會導致免疫系統能力減弱。而鋅元素對于酶、蛋白質以及轉錄因子來說是一種重要的離子，因此參與了機體多種功能也包括免疫反應。如上所述，現有技術已提到了花楸抽提物與至少一種微量營養素特別是與硒和 /或鋅的組合。但是，這通常是“偶然為之”。例如，專利申請WO 2005 058052和WO 2006 138419中公開了使用花楸作為著色劑，這些參考文獻教導了鋅和硒包含在穩定混合物用作食品。在其他一些實例中，現有技術教導的花楸提取物與硒和/或鋅元素的組合可以看做僅是產品的必然成分。例如，專利申請US 2007 0020358公開了一種運動型飲料，其使用了花楸因為其具有高的ORAC值，并添加了硒和鋅作為微量營養素。因此，現有技術并未教導將這些成分組合在一起以獲得特定的效果，這些效果的取得是因為這些成分之間的相互作用而引起。特別地，現有技術并未說明，通過選擇性地組合花楸提取物與硒和/或鋅可以獲得具有更好免疫刺激效果的組合物。雖然目前已發現了多種不同類型的免疫刺激劑，但是仍然需要一種具有更好效果的免疫刺激劑，特別是在當下，現代生活所帶來的環境壓力在持續增加，人類的免疫系統持續的暴露于各種各樣的壓力之下。天然試劑或者生物制劑相比于合成藥品通常更具優勢， 因為它們一方面更容易為病人或者消費者所接受，而另一方面其生產成本也更為低廉和經濟有效，特別是在使用植物提取物本身的時候，這種情況下甚至不需要進行任何化學合成和/或對有效化合物進行純化。
因此，綜上可知，具有更好免疫刺激效果的物質或者組合物仍然具有相當的需求。發明概述在為本發明所進行的廣泛研究中，發明人發現特定的微量營養素，即單獨的硒或者其與鋅的組合可以提高花楸提取物的效果。意外的發現，與僅含有天然花楸提取物的組合物相比，當向花楸提取物中加入特定含量的硒或者硒和鋅組合時可以提高巨噬細胞的活性。因為可以提高巨噬細胞的活性所以本發明的組合物特別適用于治療具有炎癥反應的疾病或癥狀，細菌感染，真菌感染，病毒感染，寄生蟲感染。因此上述的問題可通過使用含有至少約10 μ g/mg花楸提取物以及大約 0. 0001 μ g/mg至大約2. 0 μ g/mg硒的組合物來得以解決。應當知道這種情況下問題的解決是因為根據本發明向花楸提取物中添加了硒。換句話說，硒的含量或者硒和鋅組合的含量高于它們在花楸提取物中的天然含量范圍。本發明的一個實施方式中，該組合物進一步含有額外的鋅，其優選的濃度范圍是約 0. 0001mg/mg 至約 0. 5mg/mg。本發明另一實施方式中，該組合物進一步含有至少一種藥學上可接受的或者營養學上可接受的賦形劑或者賦形劑的組合。本發明另一實施方式中，該組合物被配制成藥物組合物，優選被配制成口服劑型例如適于經口、口腔含化、舌下、粘膜或者局部給藥的劑型。本發明另一實施方式中，該組合物被配制成營養組合物或者補充的營養組合物， 優選被配制成含有溶解或者懸浮形式的活性成分的溶液或者懸浮液，或者被配制成固體給藥形式例如片劑、膠囊、糖丸或者作為食品添加劑添加到日常食品中。
本發明的另一實施方式中，本發明的組合物用于制備藥物，優選用于治療炎癥疾病或癥狀，細菌感染，真菌感染，病毒感染，寄生蟲感染以及這些疾病和癥狀的組合。炎癥疾病或癥狀優選為與以下疾病相關的疾病或癥狀自身免疫疾病，炎癥性腸病，多發性硬化， 硬皮病，以及移植物抗宿主病相關的炎癥疾病或癥狀。
圖1和2顯示，評估花楸提取物對于小鼠單核巨噬細胞白血病細胞系RAW264. 7中巨噬細胞活性的最佳濃度。可以觀察到當濃度高于約40 μ g/ml的時候會降低巨噬細胞的活性。圖3顯示，硒對于RAW264. 7細胞系中巨噬細胞的免疫刺激活性。可以觀察到當濃度高于大約8 μ g/ml的時候將會降低巨噬細胞的活性。圖4顯示，本發明組合物的免疫刺激作用與所添加的硒濃度的關系，該免疫刺激作用通過檢測RAW264. 7細胞系中巨噬細胞的活性來確定。該組合物所含的花楸提取物的濃度為 4. 875 μ g/ml。發明詳述本發明公開了一種含有花楸提取物與微量營養素硒的組合物。該組合物還可以進一步含有微量營養素鋅，該組合物可用于刺激免疫系統。根據本發明，花楸提取物可以是來自一種藥學上和營養學上可接受的花楸種，或者是藥學上/營養學上可接受的不同花楸種的混合。可使用的花楸種包括但不限于，黑果腺肋花楸，紅果腺肋花楸以及紫果腺肋花楸。本發明的一個優選實施方式中，使用的是黑果腺肋花楸。花楸提取物可取自整個果實或者果實的某些部分。例如，可以用果渣作為原料來制備。花楸提取物的制備可以使用本領域技術人員所公知的任何適宜方法來進行。該提取物可以通過鮮果、干果或者果汁來制備。如有需要，可以對提取物中的一種或者多種特定活性化合物進行選擇性的富集。花楸提取物的制備方法屬于本領域技術人員的常規技術。制備花楸提取物的適宜方法可參照例如專利DE102004029887和DE102005046474所公開的內容。但是應當知道的是，理論上每種植物提取物的制備方法都可以根據常規知識進行適當的變化以獲取本發明的花楸提取物。分離植物原料的常規提取方法可以參見例如專利 FR2892933 以及 Ljubuncic P.等人的文獻(J. Ethnopharmacol.，Oct 3,101 (1-3) (2005)， 153-61)中所公開的內容。花楸提取物可以使用整個果實作為起始原料來制備。果實用溫度在30至50°C之間的水進行沖洗，優選40°C，然后使用例如菊粉酶優選果糖酶進行酶解處理，以獲得部分裂解的或完全裂解的細胞。適用的酶以及適宜的反應條件為本領域技術人員所公知。擠壓獲得殘留物然后使用亞硫酸鉀水溶液(濃度約10-30w/v)在室溫條件下(約21-24°C )提取 1-3小時。所得的提取物使用果膠降解酶例如果膠酶pectinex或pectinol進行處理，反應的PH值約為3-4，優選pH值為3，處理時間為0. 5至2小時。之后通過真空蒸餾處理提取物，蒸餾溫度為大約40-58°C，優選為45-50°C，最終得到的花楸提取物中水分殘留量為大約 30-40w/w。可選地，花楸提取物也可以通過乙醇萃取的方法來制備或者以干提取物進行制備。本發明組合物中花楸提取物的濃度范圍為至少約10 μ g/mg至約990 μ g/mg,優選約20 μ g/mg至約950 μ g/mg。更優選約40 μ g/mg至約900 μ g/mg。更優 選的濃度范圍為約50 μ g/mg至約800 μ g/mg。進一步優選的濃度范圍為約60 μ g/mg至約800 μ g/mg。最優選的花楸提取物的濃度范圍是約80 μ g/mg至約800 μ g/mg。在一個優選的實施方式中，本發明的液體組合物所含的花楸提取物的濃度范圍為約10 μ g/mg至約200 μ g/mg,更優選的濃度范圍為約60 μ g/mg至約150 μ g/mg,最優選的為約 80 μ g/mg。在另一個優選的實施方式，本發明的固體或者干燥組合物所含的花楸提取物的濃度范圍為約100 μ g/mg至約990 μ g/mg,更優選為約300 μ g/mg至約800 μ g/mg,進一步優選為約400 μ g/mg至約700 μ g/mg,最優選為約600 μ g/mg。這里所給出的濃度值是指花楸提取物在本發明組合物中的最終濃度，也就是給予病人或者患者的濃度。本發明組合物中還含有微量營養素硒。本發明的一個實施方式中，該組合物含有花楸提取物和微量營養素硒和鋅的組合。含有微量元素在此是指，除花楸提取物中已經存在的微量營養素外，額外添加的所述微量營養素。花楸提取物尤其是來自黑果腺肋花楸的提取物，天然地含有4mg/kg鋅元素和大約20 μ g/kg硒元素。應當知道的是，這些天然含量的數值可以隨著所用的果實以及生長條件而變化。經認證實驗室進行的分析表明，這樣的花楸提取物中這兩種金屬元素的含量如下 (精確度士20% )表 1.
權利要求
1.一種組合物，其含有至少約10 μ g/mg花楸提取物以及約0. OOO1 μ g/mg至約 2. 0 μ g/mg 硒。
2.根據權利要求1的組合物，其進一步含有額外的鋅。
3.根據權利要求2的組合物，其所含鋅的濃度為約0.0001mg/g至約0. 5mg/mg。
4.根據前述任一項權利要求的組合物，其中該組合物進一步含有至少一種藥學上或者營養學上可接受的賦形劑或者它們的混合物。
5.根據權利要求4的組合物，其中該組合物被配制成藥物組合物。
6.根據權利要求5的組合物，其被配制成用于經口/ 口服、口腔含服、舌下、粘膜或局部給藥的劑型。
7.根據權利要求4的組合物，其中該組合物被配制成營養組合物或者補充的營養組合物。
8.根據權利要求7的組合物，其被配制成含有溶解形式或懸浮形式的活性成分的可消化的溶液或者懸浮液，或者被配制成固體給藥形式，例如片劑、膠囊、糖丸或者作為食品添加劑添加到日常食品中。
9.根據權利要求1-5中任一項的組合物用于制備藥品。
10.根據權利要求9中任一項的組合物，其用于治療炎癥疾病或癥狀，細菌感染，真菌感染，病毒感染，寄生蟲感染以及它們的組合。
11.根據權利要求10的組合物，其中所述炎癥疾病或癥狀與以下疾病有關自身免疫疾病，炎癥性腸病，眼部炎癥性疾病，多發性硬化，硬皮病，移植物抗宿主病。
12.根據權利要求11的組合物，其中所述炎癥疾病選自以下組成的組克羅恩病，結腸炎，骨關節炎和類風濕關節炎，僵直性脊柱炎，銀屑病關節炎，成人斯蒂爾病，葡萄膜炎，韋格納肉芽腫，白塞病，干燥綜合征，結節病以及結膜炎。
全文摘要
本發明涉及一種組合物，其含有至少約10μg/mg花楸提取物以及約0.0001μg/mg至約2.0μg/mg硒。該組合物可以進一步含有作為額外微量營養素的鋅。該組合物可以被配制成藥物組合物或者營養組合物。
文檔編號A61K33/04GK102421446SQ201080020195
公開日2012年4月18日 申請日期2010年5月6日 優先權日2009年5月12日
發明者J·貝伊特, K·艾斯曼 申請人:烏爾薩法姆藥物有限責任公司