肺炎球菌疫苗及其用途的制作方法

專利名稱：肺炎球菌疫苗及其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及新的肺炎球菌疫苗。本發明還涉及使用所述新的肺炎球菌疫苗給對象、特別是免疫功能受損對象進行抗肺炎球菌感染的疫苗接種。
背景技術：
肺炎球菌性疾病是全世界的主要公共健康問題。由肺炎球菌所引起的感染是全世界發病率和死亡率的主要起因。肺炎、發熱性菌血癥和腦膜炎是侵入性肺炎球菌性疾病的最常見表現形式，而呼吸道內的細菌擴散可導致中耳感染、竇炎或復發性支氣管炎。與侵入性疾病相比，非侵入性的表現形式通常不那么嚴重，但是卻更相當地多見。雖然肺炎球菌性疾病很重要，關于疾病負擔(disease burden)的信息仍很缺乏， 特別是對于發展中國家。這部分地是由于在肺炎的情況中獲得病因診斷的固有問題。然而， 基于可用的數據，急性呼吸道感染每年估計使二百六十萬的5歲以下兒童死亡。肺炎球菌引起超過一百萬的此類死亡，其中大部分發生在發展中國家，在發展中國家肺炎球菌可能是嬰兒早期最重要的病原體。在歐洲和美國，肺炎球菌性肺炎是最常見的社區獲得性細菌性肺炎，估計每年在100000成人中影響大約100人。發熱性菌血癥和腦膜炎的相應數字分別為每100000中15-19人和每100000中1_2人。這些表現形式中一或多種的風險在嬰兒和老年人以及免疫受損的任何年齡的人群中要高得多。即使在經濟發達的地區，侵入性肺炎球菌性疾病也帶來高死亡率；對于患有肺炎球菌性肺炎的成人死亡率平均為10% -20%, 而其在高風險群體中可超過50%。肺炎迄今為止是全世界肺炎球菌性死亡的最常見原因。肺炎球菌性疾病的病原物質，肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae，肺炎球菌)是革蘭氏陽性的包膜球菌，被多糖莢膜所包圍。此莢膜的組成中的差異使得可以在大約90種莢膜類型之間進行血清學區分，其中某些經常與肺炎球菌性疾病相關，其它的則很少相關。侵入性肺炎球菌感染包括肺炎、腦膜炎和發熱性菌血癥；常見的非侵入性表現形式是中耳炎、竇炎和支氣管炎。肺炎球菌對于重要的抗微生物劑如青霉素、頭孢菌素和大環內酯類的抗性是嚴重的且快速增長的世界性問題。與嚴重肺炎球菌性疾病升高的風險相關的病癥包括年齡極端(嬰兒、老年人)和由于任何原因而免疫功能受損，包括但不限于HIV感染、其它慢性病毒感染、鐮刀狀細胞貧血、糖尿病、癌癥和癌癥治療、吸煙、慢性器官衰竭、器官移植和免疫阻抑治療。進來對重要抗生素的普遍微生物抗性的發展以及免疫功能受損人群數目的增加突出了對更有效的肺炎球菌疫苗的迫切需求。目前疫苗接種的一些缺點包括需要若干次加強以實現保護、保護性抗體產生中的延遲、疫苗無應答者(non-responder)的普及(這對于免疫受損的個體尤其是個問題)、 抗原和疫苗生產的成本(這在新的綴合的肺炎球菌疫苗的開發中是非常顯著的限制)、具有低親和性的弱保護性抗體、抗體效價隨時間降低。本發明的新肺炎球菌疫苗的目標是至少部分地克服某些此類缺點。特別是涉及給免疫功能受損對象進行疫苗接種以抗肺炎球菌感染。
發明概述在第一方面，本發明涉及新的肺炎球菌疫苗，其中所述疫苗包含一或多種綴合至載體蛋白的肺炎球菌(pneumoccal)多糖抗原作為抗原以及Toll-樣受體9 (TLR9)的激動劑作為佐劑。在另外的方面，本發明涉及包含一或多種綴合至載體蛋白的肺炎球菌多糖抗原作為抗原以及TLR-9激動劑作為佐劑的肺炎球菌疫苗用于給免疫功能受損對象進行疫苗接種的用途。在一方面中，本發明涉及本文所公開的任何肺炎球菌疫苗，其用于給免疫功能受損對象進行疫苗接種，優選本文公開的任何免疫功能受損對象。在另外的方面，本發明涉及本文所公開的任何肺炎球菌疫苗用于給免疫功能受損對象、優選本文所公開的任何免疫功能受損對象進行疫苗接種的用途。在另外的方面，本發明涉及本文所公開的任何疫苗用于對肺炎鏈球菌感染所引起的疾病進行預防和治療，優選在免疫功能受損對象中進行。在另外的方面，本發明涉及針對肺炎鏈球菌感染所引起的疾病而免疫對象、優選是本文所公開的任何免疫功能受損對象的方法，包括給所述對象施用免疫保護性劑量的本文所公開的任何疫苗。在另外的方面，本發明涉及本文所公開的任何疫苗在制備藥物中的用途，所述藥物用于預防和治療肺炎鏈球菌感染所引起的疾病，優選在免疫功能受損對象中進行。在另外的方面，本發明涉及本文所公開的任何肺炎球菌疫苗以及本文所公開的至少一種TLR-9激動劑。在另外的方面，本發明涉及本文所公開的任何肺炎球菌疫苗以及本文所公開的至少一種TLR-9激動劑，其用于對本文所公開的任何免疫功能受損對象進行疫苗接種。 本發明的Tol 1-樣受體9激動劑(TLR-9激動劑)在本發明的實施方案中，用于本發明的TLR-9激動劑是CpG寡核苷酸。如本文所用的CpG寡核苷酸是指免疫刺激性CpG寡脫氧核苷酸(CpG 0DN)，因此除非另有指明，這些術語可互換使用。免疫刺激性CpG寡脫氧核苷酸含有一或多個免疫刺激性CpG基序(其是未甲基化的胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸)，任選地存在于某些優選堿基背景之中。所述CpG 免疫刺激性基序的甲基化狀況通常是指二核苷酸中的胞嘧啶殘基。含有至少一個未甲基化的CpG 二核苷酸的免疫刺激性寡核苷酸是含有5'未甲基化的胞嘧啶通過磷酸鍵連接3' 鳥嘌呤的寡核苷酸，并且其通過結合至Toll-樣受體9 (TLR-9)激活免疫系統。在另一實施方案中，免疫刺激性寡核苷酸可含有一或多個甲基化的CpG 二核苷酸，其將通過TLR9激活免疫系統但卻不像該一或多個CpG基序未甲基化時那么強。CpG CpG免疫刺激性寡核苷酸可包含一或多個回文序列，所述回文序列繼而可包圍所述CpG 二核苷酸。CpG寡核苷酸已在多個授權的專利、公開的專利申請、和其它出版物中描述，包括美國專利6，194，388 ； 6，207，646 ；6，214，806 ；6，218，371 ；6，239，116 和 6，339，068。已鑒別出不同類的CpG免疫刺激性寡核苷酸。這些是指A、B、C和P類，并在下文中有更詳細描述。本發明的方法包括使用這些不同類的CpG免疫刺激性寡核苷酸。任何所述類可以經E修飾，這增強了其效力。E修飾可以是鹵素取代5'端核苷酸； 此類取代的例子包括但不限于溴-尿苷或碘-尿苷取代。E修飾還可以包括對5'端核苷酸的乙基-尿苷取代。“A類” CpG免疫刺激性寡核苷酸功能性的特征在于從漿細胞樣樹突細胞(pDC)誘導高水平的干擾素-α (IFN-α)的能力并且誘導NK細胞激活，卻對B細胞激活具有最小的影響。結構上來說，該類通常在5'和3'末端具有穩定化的聚-G序列。其也具有含回文磷酸二酯CpG 二核苷酸的至少6個核苷酸的序列，例如但并非必然地，其含有下列六聚體回文序列之一 GACGTC、AGCGCT或AACGTT，由Yamamoto及其同事所描述。Yamamoto S et al. J. Immunol 148 :4072-6 (1992)。A類CpG免疫刺激性寡核苷酸以及該類的示例性序列已在 U. S. Non-Provisional Patent Application Serial No. 09/672, 126 以及公開的 PCT 申請PCT/US00/26527(W0 01/22990)中描述，二者均提交于2000年9月27日。在一個實施方案中，本發明的“A類” CpG寡核苷酸具有如下核酸序列 5' GGGGACGACGTCGTGGGGGGG 3' (SEQ ID NO :1)。一些A-類寡核苷酸的非限制性例子包括5' G*G*G_G_A_C_G_A_C_G_T_C_G_T_G_ G*G*G*G*G*G 3' (SEQ ID NO :2)；其中*是指硫代磷酸酯鍵而_是指磷酸二酯鍵。“B類” CpG免疫刺激性寡核苷酸功能性的特征在于激活B細胞和pDC的能力， 除了在誘導IFN-α和NK細胞激活中相對較弱。結構上來說，該類通常可以用硫代磷酸酯連接(linkage)來完全穩定化，但是其也可以具有一或多個磷酸二酯連接，優選在所述 CpG基序的胞嘧啶和鳥嘌呤之間，在這種情況中該分子被稱為是半軟的(semi-soft)。在一個實施方案中，用于本發明的TLR-9激動劑是至少由下式表示的B類CpG寡核苷酸 5' X1X2CGX3X4Y，其中XI、X2、X3和X4是核苷酸。在一個實施方案中，\是腺嘌呤、鳥嘌呤或胸腺嘧啶。在另一實施方案中，&是胞嘧啶、腺嘌呤或胸腺嘧啶。在另一實施方案中，用于本發明的TLR-9激動劑是至少由下式表示的B類CpG寡核苷酸5' N1X1X2CGX3X4N2S'，其中X1^j3和&是核苷酸而N是任何核苷酸并且N1和N2 是每個由約0-25個N所組成的核酸序列。在一個實施方案中，X1X2是選自下組的二核苷酸 GpT、GpG、GpA、ApA、ApT, ApG, CpT, CpA、CpG, TpA、TpT 和 TpG ；并且 X3X4 是選自下組的二核苷酸TpT、ApT、TpG、ApG、CpG、TpC、ApC、CpC、TpA、ApA 和 CpA。優選 X1X2 是 GpA 或 GpT 并且Χ3Χ4是ΤρΤ。在另外的實施方案中，X1或\或者二者均為嘌呤并且或&或者二者均為嘧啶或者W是GpA并且\或&或者二者均為嘧啶。在一個優選的實施方案中，X1X2是選自下組的二核苷酸TpA、ApA、ApC、ApG和GpG。在另一個實施方案中，X3)(4是選自下組的二核苷酸TpT、TpA、TpG、ApA、ApG、GpA和CpA。在另一實施方案中，X1X2是選自下組的二核苷酸TpT、TpG、ApT, GpC, CpC, CpT, TpC、GpT和CpG ；X3是選自下組的核苷酸=A和T，并且 X4核苷酸，但是當X1X2是TpC、GpT或CpG時，X3X4不是TpC、ApT或ApC0在另一個優選實施方案中，所述CpG寡核苷酸具有序列5' TCN1TX1X2CGX3X4 3'。 在一些實施方案中，本發明的CpG寡核苷酸包括選自下組的:GpT、GpG、GpA和ApA以及選自下組的X3X4 :TpT、CpT和TpC。本發明的B類CpG寡核苷酸序列是以上所廣泛描述的那些以及在如下公開的那些公開的PCT專利申請PCT/US95/01570和PCT/US97/19791，以及美國專利6，194，388、 6，207，646,6, 214，806,6, 218，371,6, 239，116 和 6，339，068。示例性的序列包括但不限于后者的申請和專利中所公開的那些。在一個實施方案中，本發明的“B類” CpG寡核苷酸具有下述核酸序列
5'TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT 3‘(SEQ ID NO :3)、或
5'TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT 3‘(SEQ ID NO :4)、或
5'TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT3' (SEQ ID NO5)、或
5'TCGTCGTTTCGTCGTTTTGTCGTT3' (SEQ ID NO6)、或
5'TCGTCGTTTTGTCGTTTTTTTCGA3' (SEQ ID NO7)。
在任何這些序列中，所有的連接可以都是硫代磷酸丨酯鍵。在另--實施方案中，在任
何這些序列中，一或多個連接可以是磷酸二酯，優選在所述CpG基序的"C"和"G"之間而使之成為半軟的CpG寡核苷酸。在任何這些序列中，乙基-尿苷或鹵素可以取代5' T； 鹵素取代的例子包括但不限于溴-尿苷或碘-尿苷取代。一些B-類寡核苷酸的非限制性例子包括5'3‘ (SEQ ID NO :8)、或5'3‘ (SEQ ID NO :9)、或5'3‘ (SEQ ID NO 10)、 或5'3‘ (SEQ ID NO 11)、 或5 ‘ T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*T*T*T*C*G*A 3 ‘ (SEQ ID NO 12)‘其中*是指硫代磷酸酯鍵。“C類”CpG免疫刺激性寡核苷酸功能性的特征在于激活B細胞和NK細胞以及誘導 IFN-α的能力。結構上來說，該類通常包括具有一或多個B類-類型免疫刺激性CpG基序的區域、以及富含GC的回文序列或者臨近-回文序列的區域使得該分子形成二級(例如莖環)或三級(例如二聚體)類型的結構。一些此類寡核苷酸具有傳統的“刺激性”CpG序列和“富含GC”或“B細胞中和”基序。這些組合基序寡核苷酸具有免疫刺激作用，其介于與傳統的B類CpG寡核苷酸相關的作用(即B細胞激活和樹突細胞(DC)激活的強誘導)和與A 類CpG ODN相關的作用(S卩IFN-α和NK細胞激活的強誘導但卻對B細胞和DC激活有相對弱的誘導)之間。Krieg AM et al. (1995)Nature 374:546-9 ；Ballas ZK et al. (1996) J Immunol 157 :1840-5 ；Yamamoto S et al. (1992)J Immunol 148:4072-6。C類的組合基序免疫刺激性寡核苷酸可以具有完全穩定化的(例如全都是硫代磷酸酯)、嵌合的(磷酸二酯中心區域)或半軟的(例如CpG基序內磷酸二酯)骨架。該類已在美國專利申請US 10/224,523 (2002年8月19日提交)中描述。C類CpG寡核苷酸的一個刺激性結構域或基序由下式所定義5' X1DCGHX2 3'。 D是除了 C以外的核苷酸。C是胞嘧啶。G是鳥嘌呤。H是除了 G以外的核苷酸。&和)(2 是0-10核苷酸長的任何核酸序列。&可包括CG，在這種情況下優選在緊接此CG之前有T。 在一些實施方案中，DCG是TCG。&優選長度為0-6個核苷酸。在一些實施方案中，&不含有任何聚-G或聚-A基序。在另外的實施方案中，所述免疫刺激性寡核苷酸在5'末端或在3'末端具有聚-T序列。如本文所用，“聚-A”或“聚-T”分別是指4個或更多個連續的 A或T的延伸，例如5' AAAA 3'或5' TTTT 3'。如本文所用，“聚-G末端”是指4個或更多個連續的G的延伸，例如5' GGGG 3'，發生在核酸的5'末端或3'末端。如本文所用，“聚-G寡核苷酸”是指具有式5' X1X2GGGX3X4S'的寡核苷酸，其中&、&、&和&是核苷酸并且優選\和\的至少一個是G。B細胞刺激性結構域按照此式的一些優選設計包括 TTTTTCG、TCG、TTCG、TTTCG、TTTTCG、TCGT、TTCGT、TTTCGT、TCGTCGT。C類CpG寡核苷酸的第二個基序被稱為P或N并且位于緊接&的5'處或緊接\ 的3'處。N是B細胞中和序列，其起始于CGG三核苷酸并且長度至少為10個核苷酸。B細胞中和基序包括至少一個CpG序列，其中該CG之前為C或之后為G (Krieg AM et al. (1998) Proc Natl Acad Sd USA 95 :12631-12636)或者是含 CG 的 DNA 序列(其中該 CG 的 C 被甲基化)。中和基序或序列在存在于非刺激性基序中時具有某種程度的免疫刺激性能力，但當存在于其它的免疫刺激性基序的背景中時會降低其它基序的免疫刺激性潛力。P是富含GC的回文序列，含有至少10個核苷酸長的序列。如本文所用，“回文結構”和等價的“回文序列”是指倒轉重復序列，即如 ABCDEE' D' C' B' A'的序列，其中A和A' ,B^PB'等是能夠形成通常的Watson-Crick 堿基對的堿基。如本文所用，“富含GC回文序列”是指具有至少三分之二 G和C的堿基組成的回文序列。在一些實施方案中，富含GC的結構域優選是在“B細胞刺激性結構域”的3'處。在 10個堿基長的富含GC回文序列的情況中，該回文序列因而含有至少8個G和C。在12個堿基長的富含GC回文序列的情況中，該回文序列也含有至少8個G和C。在14-聚體的富含GC回文序列的情況中，該回文序列的至少10個堿基是G和C。在一些實施方案中，所述富含GC的回文序列完全由G和C構成。在一些實施方案中，所述富含GC的回文序列具有至少81% G和C的堿基組成。在此類的10個堿基長的富含GC回文序列的情況下，該回文序列因而完全由G和C構成。在此類的12個堿基長的富含GC回文序列的情況下，優選該回文序列的至少10個堿基(83% ) 是G和C。在一些優選的實施方案中，12個堿基長的富含GC回文序列完全由G和C所構成。 在14-聚體的富含GC回文序列的情況中，該回文序列的至少12個堿基(86%)是G和C。 在一些優選的實施方案中，14個堿基長的富含GC回文序列完全由G和C所構成。富含GC 回文序列的C可以是未甲基化的或者它們可以是甲基化的。通常此結構域具有至少3個C和G，更優選每種4個，更優選每種5個或更多。此結構域中的G和C的數目不必是相同的。優選排列所述G和C從而它們能夠形成自身互補雙鏈體或回文序列，如CCGCGCGG。這可以由A或T中斷，但是優選該自身互補性至少部分地保留，例如在基序CGACGTTCGTCG或CGGCGCCGTGCCG中那樣。當互補性未保留時，優選非互補的堿基對是TG。在優選的實施方案中，不是該回文序列的部分不超過3個連續堿基，優選不超過2個，最優選只有1個。在一些實施方案中，所述富含GC回文序列包括至少一個 CGG三聚體、至少一個CCG三聚體、或至少一個CGCG四聚體。在另外的實施方案中，所述富含 GC 回文序列不是 CCCCCCGGGGGG 或 GGGGGGCCCCCC、CCCCCGGGGG 或 GGGGGCCCCC。所述富含GC區域的至少一個G可以被肌苷(I)所取代。在一些實施方案中，P包括超過一個的I。在某些實施方案中，所述免疫刺激性寡核苷酸具有下式之一 5' NX1DCGHX2 3 ‘、5 ‘ X1DCGHX2N 3 ‘、5 ‘ PX1DCGHX2 3 ‘、5 ‘ X1DCGHX2P 3 ‘、5 ‘ X1DCGHX2PX3 3 ‘、5' X1DCGHPX3 3'、5' DCGHX2PX3 3'、5' TCGHX2PX3 3'、5' DCGHPX3 3'或 5' DCGHP3'。本發明提供了其它由式5' N1PyGN2P 3'所定義的免疫刺激性寡核苷酸。N1是任何1-6個核苷酸長的序列。Py是嘧啶。G是鳥嘌呤。N2是任何0-30個核苷酸長的序列。P 是含有至少10個核苷酸長的序列的富含GC回文序列。N1和N2可含有超過50%的嘧啶，更優選超過50%的T。N1可以包括CG，在這種情況下優選在緊接此CG之前有T。在一些實施方案中，N1PyG是TCG，最優選TCGN2，其中N2不是G0N1PyGN2P可以包括一或多個肌苷(I)核苷酸。N1中的C或G可以被肌苷所代替， 但是CpI優選于IpG。對于肌苷取代如IpG，最佳活性可以通過使用“半軟的”或嵌合的骨架來實現，其中IG或CI之間的連接是磷酸二酯。m可以包括至少一個Cl、TCI、IG或TIG基序。在某些實施方案中，N1PyGN2是選下組的序列TTTTTCG、TCG、TTCG、TTTCG、TTTTCG、 TCGT、TTCGT、TTTCGT 和 TCGTCGT。在一個實施方案中，本發明的“C類” CpG寡核苷酸具有如下核酸序列5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO 13)，或5' TCGTCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO 14)，或5' TCGGACGTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO 15)，或5' TCGGACGTTCGGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO 16)，或5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO 17)，或5' TCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO 18)，或5' TCGACGTTCGGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO 19)，或5' TCGCGTCGTTCGGCGCCG 3' (SEQ ID NO :20)，或5' TCGCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO :21)，或5' TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO :22)，或5' TCGTCGTTTTCGGCGGCCGCCG 3‘ (SEQ ID NO :23)，或5' TCGTCGTTTTACGGCGCCGTGCCG 3‘ (SEQ ID NO :24)或5' TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCGT 3' (SEQ ID NO :25)。在任何這些序列中，所有的連接可以都是硫代磷酸酯鍵。在另一實施方案中，在任何這些序列中，一或多個連接可以是磷酸二酯，優選在所述CpG基序的“C”和“G”之間，使之成為半軟的CpG寡核苷酸。C-類寡核苷酸的一些非限制性例子包括5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :26)，或5' T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :27)，或5' T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :28)，或5' T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :29)，或5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :30)，或5'3‘ (SEQ ID NO :31)，或5' T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :32)，或
5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :33)，或5' T*C_G*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :34)，或5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*C*G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO 35)，或5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*G*C*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO 36)，或5' T*OG*T*C_G*T*T*T*T*A*C_G*G*C*G*OC_G*T*G*OOG 3‘ (SEQ ID NO 37)， 或5'3‘ (SEQ ID NO 38)其中*是指硫代磷酸酯鍵而_是指磷酸二酯鍵。在任何這些序列中，乙基-尿苷或鹵素可以取代5' T ；鹵素取代的例子包括但不限于溴-尿苷或碘-尿苷取代。“P類” CpG免疫刺激性寡核苷酸已經在W02007/095316中描述并且特征在于其含有形成雙鏈體的區域，如例如在5'和3'末端或其附近的完全或者不完全的回文序列，使得它們有潛力形成更加高度有序的結構如連環體(concatamer)。這些稱作P-類寡核苷酸的寡核苷酸在某些情況下具有能力誘導比C-類高得多的水平的IFN-α分泌。P-類寡核苷酸具有能力自發地在體外和/或在體內自組裝成連環體。對于這些分子的運作方法不局限于任何特定的理論，一種潛在的假說是此種特性賦予了 P-類寡核苷酸在某些免疫細胞內更加高度地交聯TLR9的能力，與前述類別的CpG寡核苷酸相比，誘導了不同的免疫激活模式。在一個實施方案中，用于本發明的TLR-9激動劑是含有5 ‘ TLR激活結構域和至少兩個回文區域的P類CpG寡核苷酸，一個回文區域是長度至少6個核苷酸的5 ‘回文區域并且直接或通過間隔區連接至長度至少8個核苷酸的3'回文區域，其中該寡核苷酸包括至少一個YpR 二核苷酸。在一個實施方案中，所述寡核苷酸不是T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_ G*G*OG*C_G*OG*OC*G (SEQ ID NO :27)。在一個實施方案中，P類CpG寡核苷酸包括至少一個未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一實施方案中，TLR激活結構域是TCG、TTCG、TTTCG、 TYpR, TTYpR, TTTYpR, UCG、UUCG, UUUCG, TTT 或 TTTT。在另一個實施方案中，TLR 激活結構域在5'回文區域內。在另一實施方案中，TLR激活結構域緊接在5'回文區域的5'處。 在另一個實施方案中，5'回文區域長度至少是8個核苷酸。在另一實施方案中，3'回文區域長度至少是10個核苷酸。在另一實施方案中，5'回文區域長度至少是10個核苷酸。在另一個實施方案中，3'回文區域包括未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一實施方案中，3'回文區域包括兩個未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一實施方案中，5'回文區域包括未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一個實施方案中，5'回文區域包括兩個未甲基化的CpG 二核苷酸。 在另一實施方案中，5'和3'回文區域具有至少25的雙鏈體穩定性值(duplex stability value)。在另一實施方案中，5'和3'回文區域具有至少30的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，5'和3'回文區域具有至少35的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，5' 和3'回文區域具有至少40的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，5'和3'回文區域具有至少45的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，5'和3'回文區域具有至少50的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，5'和3'回文區域具有至少55的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，5'和3'回文區域具有至少60的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中， 5'和3'回文區域具有至少65的雙鏈體穩定性值。
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在一個實施方案中，兩個回文區域直接相連。在另一實施方案中，兩個回文區域經由3' -3'連接相連。在另一實施方案中，兩個回文區域重疊一個核苷酸。在另一個實施方案中，兩個回文區域重疊兩個核苷酸。在另一實施方案中，兩個回文區域不重疊。在另一實施方案中，兩個回文區域由間隔區連接。在一個實施方案中，所述間隔區是具有1-50個核苷酸長度的核酸。在另一實施方案中，所述間隔區是具有1個核苷酸長度的核酸。在另一實施方案中，所述間隔區是非核苷酸間隔區。在一個實施方案中，非核苷酸間隔區是D-間隔區。在另一實施方案中，非核苷酸間隔區是接頭。在一個實施方案中，所述寡核苷酸具有式5' XP1SP2T 3'，其中X是TLR激活結構域，P1是回文序列，S是間隔區，P2是回文序列， T是0-100核苷酸長度的3'尾。在一個實施方案中，X是TCG、TTCG或TTTCG。在另一實施方案中，T長度是5-50個核苷酸。在另一個實施方案中，T長度是5-10個核苷酸。在一個實施方案中，S是具有1-50個核苷酸長度的核酸。在另一實施方案中，S是具有1個核苷酸長度的核酸。在另一實施方案中，S是非核苷酸間隔區。在一個實施方案中，非核苷酸間隔區是D-間隔區。在另一實施方案中，非核苷酸間隔區是接頭。在另一實施方案中，所述寡核苷酸不是反義寡核苷酸或核酶。在一個實施方案中，P1是富含A和T的。在另一實施方案中，P1包括至少4個T。在另一實施方案中，P2是完全的回文序列。在另一實施方案中， P2是富含G-C的。在另一個實施方案中，P2是CGGCGCXACGCCG，其中&是T或不存在。在一個實施方案中，所述寡核苷酸包括至少一個硫代磷酸酯連接。在另一實施方案中，所述寡核苷酸的所有核苷酸間的連接是硫代磷酸酯連接。在另一實施方案中，所述寡核苷酸包括至少一個磷酸二酯樣連接。在另一實施方案中，所述磷酸二酯樣連接是磷酸二酯連接。在另一實施方案中，親脂性基團綴合至所述寡核苷酸。在一個實施方案中，所述親脂性基團是膽固醇。在一個實施方案中，用于本發明的TLR-9激動劑是具有5' TLR激活結構域和至少兩個含互補性的區域的P類CpG寡核苷酸，所述兩個含互補性的區域即5'和3'含互補性的區域，每個含互補性的區域長度為至少8個核苷酸并且直接或者通過間隔區互相連接，其中所述寡核苷酸包括至少一個嘧啶-嘌呤(YpR) 二核苷酸，并且其中至少一個含互補性的區域不是完全的回文序列。在一個實施方案中，所述寡核苷酸包括至少一個未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一實施方案中，TLR激活結構域是TCG、TTCG, TTTCG, TYpR, TTYpR, 1"1"^ 1 、肌6、皿06，、而肌6、1"17或1717。在另一實施方案中，TLR激活結構域在5 ‘含互補性的區域內。在另一實施方案中，TLR激活結構域緊接在5'含互補性的區域的5'處。在另一實施方案中，3'含互補性的區域長度為至少10個核苷酸。在另一個實施方案中，5'含互補性的區域長度為至少10個核苷酸。在一個實施方案中，3'含互補性的區域包括未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一實施方案中，3'含互補性的區域包括兩個未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一個實施方案中，5'含互補性的區域包括未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一實施方案中，5'含互補性的區域包括兩個未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一實施方案中， 含互補性的區域包括至少一個核苷酸類似物。在另一實施方案中，含互補性的區域形成分子內雙鏈體。在一個實施方案中，分子內雙鏈體包括至少一個非-Watson Crick堿基對。在另一實施方案中，非-Watson Crick堿基對是G-T、G-A、G-G或C-A。在一個實施方案中，含互補性的區域形成分子間雙鏈體。在另一實施方案中，至少一個分子間雙鏈體包括至少一個非-Watson Crick堿基對。在另一實施方案中，非-Watson Crick堿基對是G-T、G-A、G-G或C-A。在另一個實施方案中，含互補性的區域含有錯配。在另一個實施方案中，含互補性的區域含有兩個錯配。在另一實施方案中，含互補性的區域含有插入核苷酸(intervening nucleotide)。在另一實施方案中，含互補性的區域含有兩個插入核苷酸。在一個實施方案中，5'和3'含互補性的區域具有至少25的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，5'和3'含互補性的區域具有至少30的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，5'和3'含互補性的區域具有至少35的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，所述含互補性的區域具有至少40的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，所述含互補性的區域具有至少45的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，所述含互補性的區域具有至少50 的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，所述含互補性的區域具有至少55的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，所述含互補性的區域具有至少60的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，所述含互補性的區域具有至少65的雙鏈體穩定性值。在另一實施方案中，兩個含互補性的區域直接相連。在另一實施方案中，兩個回文區域經由3' -3'連接相連。在另一個實施方案中，兩個含互補性的區域重疊一個核苷酸。 在另一實施方案中，兩個含互補性的區域重疊兩個核苷酸。在另一實施方案中，兩個含互補性的區域不重疊。在另一實施方案中，兩個含互補性的區域由間隔區連接。在另一實施方案中，間隔區是具有1-50個核苷酸長度的核酸。在另一實施方案中，間隔區是具有1個核苷酸長度的核酸。在一個實施方案中，間隔區是非核苷酸間隔區。在另一實施方案中，非核苷酸間隔區是D-間隔區。在另一個實施方案中，非核苷酸間隔區是接頭。在一個實施方案中，P-類寡核苷酸具有式5' XNSPT 3'，其中X是TLR激活結構域，N是不完全的回文序列，P是回文序列，S是間隔區，T是長度為0-100個核苷酸的3' 尾。在另一實施方案中，X是TCG、TTCG或TTTCG。在另一實施方案中，T長度為5_50個核苷酸。在另一實施方案中，T長度為5-10個核苷酸。在另一實施方案中，S是具有1-50個核苷酸長度的核酸。在另一實施方案中，S是具有1個核苷酸長度的核酸。在另一實施方案中，S是非核苷酸間隔區。在另一實施方案中，非核苷酸間隔區是D-間隔區。在另一實施方案中，非核苷酸間隔區是接頭。在另一實施方案中，所述寡核苷酸不是反義寡核苷酸或核酶。在另一實施方案中，N是富含A和T的。在另一實施方案中，N包括至少4個T。在另一實施方案中，P是完全的回文序列。在另一實施方案中，P是富含G-C的。在另一實施方案中，P是CGGCGCXACGCCG，其中&是T或不存在。在另一實施方案中，所述寡核苷酸包括至少一個硫代磷酸酯連接。在另一實施方案中，所述寡核苷酸的所有核苷酸間的連接都是硫代磷酸酯連接。在另一實施方案中，所述寡核苷酸包括至少一個磷酸二酯-樣連接。在另一實施方案中，磷酸二酯-樣連接是磷酸二酯連接。在另一實施方案中，親脂性基團綴合至所述寡核苷酸。在一個實施方案中，親脂性基團是膽固醇。在一個實施方案中，本發明的“P類”CpG寡核苷酸具有下述核酸序列 5' TCGTCGACGATCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :39)。在所述序列中，所有的連接可以都是硫代磷酸酯鍵。在另一實施方案中，一或多個連接可以是磷酸二酯，優選在所述CpG基序的“C”和“G”之間，使之成為半軟的CpG寡核苷酸。在任何這些序列中，乙基-尿苷或鹵素可以取代5' T ；鹵素取代的例子包括但不限于溴-尿苷或碘-尿苷取代。P-類寡核苷酸的非限制性例子包括5' T*C_G*T*C_G*A*C_G*A*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :40)其中*是指硫代磷酸酯鍵而_是指磷酸二酯鍵。在一個實施方案中，本文公開的CpG寡核苷酸的所有核苷酸間的連接都是磷酸二酯鍵(“軟的”寡核苷酸，如PCT申請W02007/(^6190所述)。在另一實施方案中，本發明的 CpG寡核苷酸被賦予了對降解的抗性(例如經穩定化)。“經穩定化的寡核苷酸”是指對體內降解(例如經外切-或內切-核酸酶)具有相對抗性的寡核苷酸。核酸穩定化可以經由骨架修飾來實現。具有硫代磷酸酯連接的寡核苷酸提供了最大活性并且保護該寡核苷酸不受細胞內外切-或內切-核酸酶的降解。所述免疫刺激性寡核苷酸可以具有嵌合骨架，其具有磷酸二酯和硫代磷酸酯連接的組合。用于本發明目的的嵌合骨架是指部分穩定化的骨架，其中至少一個核苷酸間連接是磷酸二酯或磷酸二酯-樣的，并且其中至少一個其它核苷酸間連接是穩定化的核苷酸間連接，其中所述至少一個磷酸二酯或磷酸二酯-樣連接以及所述至少一個穩定化的連接是不同的。當磷酸二酯連接優先位于所述CpG基序內時，此類分子被稱為“半軟的”，如PCT申 it W02007/026190 所述。其它經修飾的寡核苷酸包括磷酸二酯、硫代磷酸酯、甲基磷酸酯、甲基硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯和/或P-乙氧基連接的組合。由于經報道硼烷磷酸酯(boranophosphonate)連接相對于磷酸二酯連接穩定，用于骨架的嵌合性質的目的時，硼烷磷酸酯連接根據背景可以被劃分為磷酸二酯-樣的或者是經穩定化的。例如，根據本發明的嵌合骨架在一些實施方案中可以包括至少一個磷酸二酯(磷酸二酯或磷酸二酯-樣)連接和至少一個硼烷磷酸酯(經穩定化的)連接。在另外的實施方案中，根據本發明的嵌合骨架可以包括硼烷磷酸酯(磷酸二酯或磷酸二酯-樣) 和硫代磷酸酯(經穩定化的)連接。“經穩定化的核苷酸間連接”意指與磷酸二酯核苷酸間連接相比對體內降解(例如經外切-或內切-核酸酶)相對具有抗性的核苷酸間連接。優選的經穩定化的核苷酸間連接包括但不限于硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基磷酸酯和甲基硫代磷酸酯。其它經穩定化的核苷酸間連接包括但不限于肽、烷基、脫磷(dephospho)以及其它如上所述的。經修飾的骨架如硫代磷酸酯可以由自動化的技術利用氨基磷酸酯或H-磷酸酯化學來合成。芳基-和烷基-磷酸酯可以如例如美國專利4，469，863所述制備；而烷基磷酸三酯(其中帶電的氧部是烷基化的，如美國專利5，023，243和歐洲專利092，574所述)可以通過自動化的固相合成利用商業可購的試劑來制備。用于進行其它DNA骨架修飾和取代的方法已有描述。Uilmann E et al. (1990)Chem Rev 90:544 ；GoodchiId J(1990)Bioconjugate Chem 1:165。用于制備嵌合寡核苷酸的方法也是已知的。例如授予Wilmarm et al.的專利已經描述了此類技術。混合的骨架修飾的ODN可以如PCT申請W02007/026190所述合成。本發明的寡核苷酸也可包括其它修飾。這些包括非離子DNA類似物，如烷基-和芳基-磷酸酯(其中帶電的磷酸酯氧被烷基或芳基所代替)、磷酸二酯和烷基磷酸三酯，其中帶電的氧部分被烷基化。在一端或兩端含有二醇的核酸如四乙二醇或六乙二醇也顯示出對核酸酶降解具有實質上的抗性。所述CpG寡核苷酸的大小(即沿著該寡核苷酸長度的核苷酸殘基的數目)也對該寡核苷酸的刺激性活性有貢獻。為了促進攝取入細胞內，本發明的CpG寡核苷酸優選具有最小6個核苷酸殘基的長度。如果存在足夠的免疫刺激性基序，任何大小大于6個核苷酸的寡核苷酸(甚至長度為許多1Λ)都能夠誘導免疫應答，因為較大的寡核苷酸在細胞內降解。在某些實施方案中，所述CpG寡核苷酸長度為6-100個核苷酸，優選長度為8-30個核苷酸。在重要的實施方案中，本發明的核酸和寡核苷酸不是質粒或表達載體。在一個實施方案中，本文公開的CpG寡核苷酸包含取代或修飾，如在 W02007/026190的段落134-147所描述的堿基和/或糖中。在一個實施方案中，本發明的CpG寡核苷酸經化學修飾。化學修飾的例子為本領域技術人員所已知，并且在例如 Uhlmann E. et al. (1990)，Chem. Rev. 90 :543，S. Agrawal, Ed. , Humana Press, Totowa, USA 1993 ；Crooke, ST. et al. (1996)Annu. Rev. Pharmacol Toxicol. 36 :107-129 ；和 Hunziker J. et al.，(1995)，Mod. Synth. Methods 7 :331-417 中描述。本發明的寡核苷酸可以具有一或多個修飾，其中與天然DNA或RNA所組成的相同序列的寡核苷酸相比，每個修飾位于特定的磷酸二酯核苷間橋和/或位于特定的β -D-核糖單位和/或位于特定的天然核苷堿基位置。在本發明的一些實施方案中，含有CpG的核酸可以依據本領域技術人員已知的方法簡單地與免疫原性載體混合(參見例如W003/0M480)。在本發明具體的實施方案中，本文所公開的任何疫苗包含2 μ g-100mg的CpG寡核苷酸，優選0. lmg-50mg的CpG寡核苷酸，優選0. 2mg-10mg的CpG寡核苷酸，優選0. 3mg-5mg 的CpG寡核苷酸，優選0. 3mg-5mg的CpG寡核苷酸，更優選0. 5-2mg的CpG寡核苷酸，更優選 0. 75-1. 5mg的CpG寡核苷酸。在優選的實施方案中，本文所公開的任何疫苗包含大約Img 的CpG寡核苷酸。肺炎球菌疫苗本發明的肺炎球菌疫苗通常包含綴合莢膜糖抗原，其中所述糖源自至少7種血清型的肺炎鏈球菌。肺炎鏈球菌莢膜糖的數目范圍可以從7種不同的血清型(或“V”，價 (valence))到23種不同的血清型(23v)。在一個實施方案中，有7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20、21、22或23種不同的血清型。在一個實施方案中，有10或11種不同的血清型。在一個實施方案中，有7或13種不同的血清型。所述莢膜糖抗原如下文所述綴合至載體蛋白。在本發明的另一實施方案中，疫苗可包含綴合的肺炎鏈球菌糖和未綴合的肺炎鏈球菌糖。優選糖血清型的總數目少于或等于23。例如，疫苗可包含7種綴合的血清型和16 種未綴合的糖。在另一實施方案中，疫苗可包含13種綴合的血清型和10種未綴合的糖。以類似的方式，疫苗可分別包含8、9、10、11、12、13、14、15或16種綴合的糖和15、14、13、12、 11、10、9、8或7種未綴合的糖。1.在一個實施方案中，本發明的疫苗包含來自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F 的綴合的肺炎鏈球菌糖。2.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1點之外包含來自血清型1的綴合的肺炎鏈球菌糖。3.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1或2點之外包含來自血清型5的綴合的肺炎鏈球菌糖。4.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2或3點之外包含來自血清型7F的綴合的肺炎鏈球菌糖。5.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3或4點之外包含來自血清型 3的綴合的肺炎鏈球菌糖。6.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4或5點之外包含來自血清型6A的綴合的肺炎鏈球菌糖。7.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5或6點之外包含來自血清型19A的綴合的肺炎鏈球菌糖。8.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6或7點之外包含來自血清型22F的綴合的肺炎鏈球菌糖。9.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7或8點之外包含來自血清型15的綴合的肺炎鏈球菌糖。10.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8或9點之外包含來自血清型8的綴合的肺炎鏈球菌糖。11.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9或10點之外
包含來自血清型12F的綴合的肺炎鏈球菌糖。12.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11點之
外包含來自血清型2的綴合的肺炎鏈球菌糖。13.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12
點之外包含來自血清型9N的綴合的肺炎鏈球菌糖。14.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或
13點之外包含來自血清型IOA的綴合的肺炎鏈球菌糖。15.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13或14點之外包含來自血清型IlA的綴合的肺炎鏈球菌糖。16.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14或15點之外包含來自血清型IlA的綴合的肺炎鏈球菌糖。17.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15或16點之外包含來自血清型17F的綴合的肺炎鏈球菌糖。18.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、16或17點之外包含來自血清型20的綴合的肺炎鏈球菌糖。19.在另一實施方案中，本發明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、16、17或18點之外包含來自血清型33F的綴合的肺炎鏈球菌糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含來自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F的綴合的肺炎鏈球菌糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含來自血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、 18C、19A、19F和23F的綴合的肺炎鏈球菌糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含來自血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F 和23F的綴合的肺炎鏈球菌糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含來自血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、 19F和23F的綴合的肺炎鏈球菌糖。
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在優選的實施方案中，所述莢膜糖抗原綴合至獨立地選自下組的載體蛋白TT、 DT、CRM197、TT 的片段 C、PhtD、PhtDE 融合體(特別是 WO 01/98334 和 WO 03/54007 中描述的那些)、脫毒肺炎球菌溶血素和蛋白D。在優選的實施方案中，所述莢膜糖抗原綴合至選自下組的載體蛋白DT(白喉毒素)、TT (破傷風類毒素)或TT的片段C、CRM197(白喉毒素的非毒性但卻抗原性等同的變體)、其它 DT 點突變體，如 CRM176、CRM228、CRM 45 (Uchida et al J. Biol. Chem. 218 ； 3838-3844,1973) ；CRM 9、CRM 45、CRM 102、CRM 103 和 CRM 107 以及其它由 Nicholls 和 Youle 在 Genetically Engineered Toxins, Ed :Frankel, Maecel Dekker Inc,1992 中描述的突變；Glu-148的缺失或突變至Asp、Gln或Ser和/或Ala 158至Gly和其它US 4709017 或 US 4950740 中公開的突變；Lys 516、Lys 526,Phe 530 和 / 或 Lys 534 中至少一或多個殘基的突變和其它US 5917017或US 6455673中公開的突變；或者US 5843711 中公開的片段，肺炎球菌肺炎球菌溶血素(Kuo et al (1995) Infect Immun 63 ；2706-13), 包括以某些方式脫毒的 ply,例如 dPLY-GMBS (W0 04081515，PCT/EP2005/010258)或 dPLY-formol, PhtX，包括 PhtA、PhtB、PhtD、PhtE (PhtA、PhtB、PhtD 或 PhtE 的序列在 WO 00/37105或WO 00/39299中公開)和Pht蛋白的融合體例如PhtDE融合體、PhtBE融合體、 Pht A-E (W0 01/98334、WO 03/54007、W02009/000826)，OMPC (腦膜炎球菌外膜蛋白-通常提取自腦膜炎奈瑟氏菌(N.meningitides)血清組B-EP0372501)，PorB(來自腦膜炎奈瑟氏菌)，PD(流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)蛋白D-參見例如EP 0 594 610B) 或者其免疫學功能等價物，合成肽(EP0378881、EP0427347)，熱休克蛋白(W0 93/17712、 WO 94/03208)，百日咳蛋白(W0 98/58668、EP0471 177)，細胞因子，淋巴因子，生長因子或激素(W0 91/01146)，包含來自各種病原體所衍生的抗原的多個人CD4+T細胞表位的人工蛋白(Falugi et al (2001)Eur J Immunol 31 ;3816_3824)如 N19 蛋白(Baraldoi et al (2004) Infect Immun 72 ；4884-7)肺炎球菌表面蛋白 PspA(W) 02/091998)，鐵攝取蛋白 (W0 01/72337)，艱難梭菌(C. difficile)的毒素 A 或 B(W0 00/61761)。在一個實施方案中，所述莢膜糖抗原綴合至DT(白喉類毒素)。在另一實施方案中，所述莢膜糖抗原綴合至TT (破傷風類毒素)。在另一實施方案中，所述莢膜糖抗原綴合至TT的片段C。在另一實施方案中，所述莢膜糖抗原綴合至PD (流感嗜血桿菌蛋白D-參見例如EP 0 594 610B)。在優選的實施方案中，本發明的莢膜糖抗原綴合至CRM197蛋白。所述CRM197蛋白是白喉毒素的無毒形式，但在免疫學上與白喉毒素不可區別。CRM197是由經非產毒性噬菌體β 197tM-感染的白喉桿菌(C. diphtheriae)產生的，所述β 19是通過對產毒性β 棒狀噬菌體進行亞硝基胍誘變產生的(Uchida, Τ. et al. 1971，Nature New Biology 233 8-11)。CRM197蛋白具有與白喉毒素相同的分子量但卻在結構基因中與其因單個堿基的變化(鳥嘌呤至腺嘌呤)而有差異。此單個堿基的變化引起成熟蛋白中的氨基酸取代(谷氨酸取代為甘氨酸)并消除了白喉毒素的毒性特性。CRM197蛋白是用于糖的安全有效的T-細胞依賴性載體。關于CMR197的其它細節以及其生產可在例如US 5，614，382中找到。在一個實施方案中，如果組合物中2或更多種糖的蛋白載體是相同的，所述糖可綴合至蛋白載體的同一分子(載體分子具有2種更多的不同糖綴合至其上)[參見例如WO04/083251]。或者所述糖可以每種獨立地綴合至蛋白載體的不同分子(每個蛋白載體分子僅僅具有一種類型的糖綴合至其上)。在所述實施方案中，莢膜糖即所述地獨立綴合至載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的莢膜糖抗原來自不同的肺炎鏈球菌血清型并且綴合至一或多種載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22或23種不同血清型莢膜糖綴合物，其中CRM 197是載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、 20,21,22或23種不同血清型莢膜糖綴合物，其中蛋白D是載體蛋白。在一個實施方案中，來自血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、 158、17卩、18(、19六、19卩、20、22卩、23卩或33卩的糖綴合至蛋白D。在一個實施方案中，來自血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、 15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 或 33F 的糖綴合至 CRM197。在一個實施方案中，來自至少血清型1和3、1和4、1和5、1和6A、1和6B、1和7、 1 禾口 9V、1 禾口 14、1 禾口 22F、1 禾口 23F、3 禾口 4、3 禾口 5、3 禾口 6A、3 禾口 6B、3 禾口 7F、3 禾口 9V、3 禾口 14、3 和 22F、3 禾口 23F、4 禾口 5、4 禾口 6A、4 禾口 6B、4 禾口 7F、4 禾口 9V、4 禾口 14、4 禾口 22F、4 禾口 23F、5 禾口 6A、 5 禾口 6B、5 禾口 7F、5 禾口 9V、5 禾口 14、5 禾口 22F、5 禾口 23F、6A 禾口 6B、6A 禾口 7F、6A 禾口 9V、6A 禾口 14、6A 和 22F、6A 禾口 23F、6B 禾口 7F、6B 禾口 9V、6B 禾口 14、6B 禾口 22F、6B 禾口 23F、7F 禾口 9V、7F 禾口 14、7F 和 22F、7F 和 23F、9V 和 14、9V 和 22F、9V 和 23F、14 和 22F、14 和 23F 或 22F 和 23F 的糖綴合至 CRM197。在一個實施方案中，來自至少血清型1、3和4 ；1,3和5 ；1,3和6A ；1,3和6B ；1,3 禾口 7F ；1、3 禾口 9V ；1、3 禾口 14 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 5 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 9V ；3、4 禾口 14 ；4、5 禾口 7F ； 4、5 禾口 9V ；4、5，禾口 14 ；5、7F 禾口 9V ；5、7F 禾口 14 ；7F、9V 禾口 14 ； 1、3、4 禾口 5 ；3、4、5 禾口 7F ；4、5、7F 和 9V ；4、5、7F 禾口 14 ；4、5、9V 禾口 14 ；4、7F、9V 禾口 14 ；5、7F、9V 禾口 14 ；或 4、5、7F、9V 禾口 14 的糖綴合至CRM197。在一個實施方案中，來自至少血清型1和3、1和4、1和5、1和6A、1和6B、1和7、 1 禾口 9V、1 禾口 14、1 禾口 22F、1 禾口 23F、3 禾口 4、3 禾口 5、3 禾口 6A、3 禾口 6B、3 禾口 7F、3 禾口 9V、3 禾口 14、3 和 22F、3 禾口 23F、4 禾口 5、4 禾口 6A、4 禾口 6B、4 禾口 7F、4 禾口 9V、4 禾口 14、4 禾口 22F、4 禾口 23F、5 禾口 6A、 5 禾口 6B、5 禾口 7F、5 禾口 9V、5 禾口 14、5 禾口 22F、5 禾口 23F、6A 禾口 6B、6A 禾口 7F、6A 禾口 9V、6A 禾口 14、6A 和 22F、6A 禾口 23F、6B 禾口 7F、6B 禾口 9V、6B 禾口 14、6B 禾口 22F、6B 禾口 23F、7F 禾口 9V、7F 禾口 14、7F 和 22F、7F 和 23F、9V 和 14、9V 和 22F、9V 和 23F、14 和 22F、14 和 23F 或 22F 和 23F 的糖綴合至蛋白D。在一個實施方案中，來自至少血清型1、3和4、1、3和5、1、3和6A ；1,3和6B ；1,3 禾口 7F ；1、3 禾口 9V ；1、3 禾口 14 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 5 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 9V ；3、4 禾口 14 ；4、5 禾口 7F ； 4、5 禾口 9V ；4、5，禾口 14 ；5、7F 禾口 9V ；5、7F 禾口 14 ；7F、9V 禾口 14 ； 1、3、4 禾口 5 ；3、4、5 禾口 7F ；4、5、7F 和 9V ；4、5、7F 禾口 14 ；4、5、9V 禾口 14 ；4、7F、9V 禾口 14 ；5、7F、9V 禾口 14 ；或 4、5、7F、9V 禾口 14 的糖
綴合至蛋白D。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含7種不同血清型莢膜糖綴合物，其中CRM 197是載體蛋白。
在一個實施方案中，本發明的疫苗包含7種不同血清型莢膜糖綴合物，其中蛋白D 是載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含10種不同血清型莢膜糖綴合物，其中CRM 197是載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含10種不同血清型莢膜糖綴合物，其中蛋白 D是載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含11種不同血清型莢膜糖綴合物，其中CRM 197是載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含11種不同血清型莢膜糖綴合物，其中蛋白 D是載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含13種不同血清型莢膜糖綴合物，其中CRM 197是載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含13種不同血清型莢膜糖綴合物，其中蛋白 D是載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含23種不同血清型莢膜糖綴合物，其中CRM 197是載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含23種不同血清型莢膜糖綴合物，其中蛋白 D是載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含綴合至蛋白D的來自血清型4、6B、9V、14、 18CU9F 和 23F 的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含綴合至CRM197的來自血清型4、6B、9V、14、 18CU9F 和 23F 的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含綴合至蛋白D的來自血清型1、3、4、5、6A、 6B、7F、9V、14、18C、19A、19F 和 23F 的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含綴合至CRM197的來自血清型1、3、4、5、6A、 6B、7F、9V、14、18C、19A、19F 和 23F 的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含綴合至蛋白D的來自血清型1、4、5、6B、7F、 9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含綴合至CRM197的來自血清型1、4、5、6B、 7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含綴合至蛋白D的來自血清型1、3、4、5、6B、 7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含綴合至CRM 197的來自血清型1、3、4、5、 6B、7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含綴合至蛋白D的來自血清型1、2、3、4、5、 6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 和 33F 的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含綴合至CRM 197的來自血清型1、2、3、4、5、 6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 和 33F 的糖。在一個實施方案中，發明的疫苗包含綴合至蛋白D的來自血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F的糖，綴合至破傷風類毒素(TT)的來自血清型18C的糖和綴合至白喉類毒素 (DT)的來自血清型19F的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含綴合至破傷風類毒素(TT)的來自血清型 1、4、5、7F、9V、19F和23F的糖和綴合至白喉類毒素(DT)的來自血清型3、14、18C和6B的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含獨立綴合至蛋白D的來自血清型1、4、5、 6B、7F、9V、14和23F的糖、綴合至破傷風類毒素(TT)的來自血清型18C的糖和綴合至白喉類毒素(DT)的來自血清型19F的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含獨立綴合至破傷風類毒素(TT)的來自血清型1、4、5、7F、9V、19F和23F的糖和綴合至白喉類毒素(DT)的來自血清型3、14、18C和6B 的糖。術語“糖”在本說明書全文中可以表示多糖或寡糖并且包括這兩者。肺炎鏈球菌的莢膜多糖包含重復的可含有達8個糖殘基的寡糖單位。對于關鍵的肺炎鏈球菌血清型的寡糖單位的綜述參見 JONES，Christopher. Vaccines based on the cell surface carbohydrates of pathogenic bacteria. An. Acad. Bras. Cienc,June 2005,vol. 77,no. 2, p. 293-324Table II ISSN 0001-3765。本發明的莢膜糖抗原由本領域技術人員已知的標準技術所制備。通常，多糖綴合物通過分別的過程制備并配制成單劑量配制物。例如，在一個實施方案中，使每種肺炎球菌多糖血清型在基于大豆的培養基中生長。繼而通過離心、沉淀、超離心和柱層析純化各個多糖。將純化的多糖經化學活化以使得該糖能夠與載體蛋白反應。一旦被活化，分別將每種莢膜多糖綴合至載體蛋白以形成糖綴合物。在一個實施方案中，將每種莢膜多糖綴合至相同的載體蛋白。在此實施方案中，通過還原性胺化來實現綴合。多糖的化學活化以及隨后的綴合至載體蛋白是通過常規手段完成的。參見例如美國專利4，673，574和4，902，506。在將莢膜多糖綴合至載體蛋白后，通過多種技術純化該多糖-蛋白綴合物(相對于該多糖-蛋白綴合物的量被富集)。這些技術包括濃縮/滲濾操作、沉淀/洗脫、柱層析、 和深度過濾(cbpth filtration)。參見例如 US2007/0184072 或 W02008/079653。在將各個糖綴合物純化后，將它們調配以配制本發明的疫苗。本發明的免疫原性組合物的配制可以使用本領域已知的方法來實現。例如，可以將各個肺炎球菌綴合物與生理學可接受的載體(vehicle)配制來制備所述組合物。此類載體的例子包括但不限于水、緩沖鹽水、多元醇 (例如甘油、丙二醇、液體聚乙二醇)和葡萄糖溶液。每劑疫苗中綴合物的量是經選擇的量，該量在典型的受接種者中誘導免疫保護性反應而無顯著地不良副作用。此種量會根據使用哪種具體的免疫原以及如何將其呈遞而變化。在一個實施方案中，每劑包含0. 1-1000 μ g的每種糖或糖-蛋白綴合物，優選2-100 μ g， 最優選4-40 μ g。在一個實施方案中，每劑包含0. 1-20 μ g、1-10 μ g或者1-5 μ g的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗含有0. 1-20 μ g、0. 5-10 μ g的劑量的每種肺炎鏈球菌莢膜糖；0. 5-5μ g或1-5μ g的糖。在一個實施方案中，莢膜糖可以以不同的劑量存在，例如一些莢膜糖可按大約或精確的2μ g的劑量存在或者一些莢膜糖可按大約或精確的4yg的劑量存在。
在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為2 μ g，只有6B的劑量為 4μ g0在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為4 μ g，只有6B的劑量為 8 μ g0在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為6 μ g，只有6B的劑量為 12 μ g0在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為8 μ g，只有6B的劑量為 16 μ g0在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19FJP 23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為2 μ g， 只有6B的劑量為4 μ g。在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19FJP 23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為4 μ g， 只有6B的劑量為8 μ g。在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19FJP 23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為6 μ g， 只有6B的劑量為12 μ g。在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19FJP 23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為8 μ g， 只有6B的劑量為16 μ g。在本發明具體的實施方案中，本文公開的疫苗含有5-500 μ g、優選10-200 μ g、更優選20-100 μ g的CRM197載體蛋白。在本發明具體的實施方案中，本文公開的疫苗含有20-50 μ g、優選20-40 μ g、更優選25-30 μ g、更優選大約觀或四μ g的CRM 197載體蛋白。在本發明具體的實施方案中，本文公開的疫苗含有40-100 μ g、優選40-80 μ g、更優選50-60 μ g、更優選大約57或58 μ g的CRM197載體蛋白。在本發明具體的實施方案中，本文公開的疫苗含有氯化鈉和/或琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。在一個實施方案中，用于本文的肺炎球菌疫苗是US2007/0184072中公開的7_價的綴合的肺炎球菌疫苗O^revenar)或者13-價的綴合的肺炎球菌疫苗-Prevenar 13)。 7-價I^revenar含有獨立綴合至CRM197的來自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖。 13-價 Prevenar 含有獨立綴合至 CRM197 的來自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、 19AU9F 和 23F 的糖。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含獨立綴合至蛋白D的來自血清型1、4、5、 6B、7F、9V、14和23F的糖、綴合至破傷風類毒素(TT)來自血清型18C的糖和綴合至白喉類毒素(DT)的來自血清型19F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為lyg，只有4、18C 和19F的劑量為3 μ g。在本發明具體的實施方案中，所述疫苗含有5-500 μ g、優選7-100 μ g 的蛋白D載體蛋白，2-200 μ g、優選4-50 μ g的破傷風類毒素(TT)載體蛋白和1-100 μ g、 優選2-25 μ g的白喉類毒素(DT)載體蛋白。在本發明具體的實施方案中，所述疫苗含有
9-16μ g的蛋白D載體蛋白、5-10 μ g的破傷風類毒素(TT)載體蛋白和3-6 μ g的白喉類毒素(DT)載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含獨立綴合至蛋白D的來自血清型1、4、5、 6B、7F、9V、14和23F的糖、綴合至破傷風類毒素(TT)來自血清型18C的糖和綴合至白喉類毒素(DT)的來自血清型19F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為2 μ g，只有4、 18C和19F的劑量為6 μ g。在本發明具體的實施方案中，所述疫苗含有10-1000 μ g、優選 14-200 yg的蛋白D載體蛋白，4-400 μ g、優選8-100 μ g的破傷風類毒素(TT)載體蛋白和
2-200yg、優選4-50yg的白喉類毒素(DT)載體蛋白。在本發明具體的實施方案中，所述疫苗含有18-32 μ g的蛋白D載體蛋白、10-20 μ g的破傷風類毒素(TT)載體蛋白和6_12yg 的白喉類毒素(DT)載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含獨立綴合至蛋白D的來自血清型1、4、5、 6B、7F、9V、14和23F的糖、綴合至破傷風類毒素(TT)的來自血清型18C的糖和綴合至白喉類毒素(DT)的來自血清型19F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為3yg，只有4、 18C和19F的劑量為9 μ g。在本發明具體的實施方案中，所述疫苗含有15-1500 μ g、優選 21-300 μ g的蛋白D載體蛋白，6-600 μ g、優選12-150 μ g的破傷風類毒素(TT)載體蛋白和
3-300μ g、優選6-75 μ g的白喉類毒素(DT)載體蛋白。在本發明具體的實施方案中，所述疫苗含有27-48 μ g的蛋白D載體蛋白、15-30 μ g的破傷風類毒素(TT)載體蛋白和9_18 μ g 的白喉類毒素(DT)載體蛋白。在一個實施方案中，本發明的疫苗包含獨立綴合至蛋白D的來自血清型1、4、5、 6B、7F、9V、14和23F的糖、綴合至破傷風類毒素(TT)的來自血清型18C的糖和綴合至白喉類毒素(DT)的來自血清型19F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為4yg，只有4、 18C和19F的劑量為12 μ g。在本發明具體的實施方案中，所述疫苗含有20-2000 μ g、優選
的蛋白D載體蛋白，8-800μβ、優選16-200 μ g的破傷風類毒素(TT)載體蛋白和4-400yg、優選S-IOOyg的白喉類毒素(DT)載體蛋白。在本發明具體的實施方案中， 所述疫苗含有36-64 μ g的蛋白D載體蛋白、20-40 μ g的破傷風類毒素(TT)載體蛋白和的白喉類毒素(DT)載體蛋白。在本發明具體的實施方案中，本文所公開的疫苗含有氯化鈉緩沖液作為賦形劑。在一個實施方案中，用于本文的肺炎球菌疫苗是以商品名Synflorix 銷售的
10-價的綴合的肺炎球菌疫苗。另外的佐劑在一些實施方案中，本文所公開的肺炎球菌疫苗在本文所公開的至少一種TLR-9 激動劑之外還包含至少一種、兩種或三種佐劑。術語“佐劑”是指增強對抗原的免疫應答的化合物或混合物。抗原可以主要作為遞送體系、主要作為免疫調節劑或具有強的此二種特性。適宜的佐劑包括適用于哺乳動物包括人類的那些。已知可用于人類的適宜的遞送體系類型佐劑的例子包括但不限于鋁(例如磷酸鋁、硫酸鋁或氫氧化鋁)、磷酸鈣、脂質體、水包油乳液如MF5W4. 3% w/v角鯊烯、0. 5% w/v聚山梨醇酯80 (Tween 80)、0. 5% w/v山梨醇酐三油酸酯(Span 85))、油包水乳液如 Montanide和聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)(PLG)微顆粒或納米顆粒。已知可用于人類的適宜的免疫調節類型佐劑的例子包括但不限于來自Aquilla 樹的樹皮的皂苷提取物0!S21、Quil A)、TLR4激動劑如MPL (單磷酰脂質A)、3DMPL(3_0_脫酰基MPL)或GLA-AQ、LT/CT突變體、細胞因子如各種白細胞介素(例如IL_2、IL-12)或 GM-CSF 等等。已知可用于人類的適宜的免疫調節類型佐劑(具有遞送和免疫調節特性)的例子包括但不限于 ISCOMS(參見例如 Sj0lander et al. (1998) J. Leukocyte Biol. 64 713 ；W090/03184, W096/11711, WO 00/48630，W098/36772, W000/41720, W006/134423 和 W007/026190)或者GLA-EM，其是TLR4激動劑和水包油乳液的組合。對于包括但不限于動物實驗的獸醫應用，可以使用弗氏完全佐劑(CFA)，弗氏不完全佐劑(IFA)，Emulsigen，N-乙酰基-胞壁酰基-L-蘇氨酰基-D-異谷氨酰胺(thr_MDP)， N-乙酰基-正-胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-異谷氨酰胺(CGP 11637，稱作正-MDP)，N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-異谷氨酰基-L-丙氨酸-2- (Γ -2' - 二棕櫚酰-sn-甘油-3-羥基磷酰氧基)-乙胺(CGP 19835A,稱作MTP-PE)和RIBI，其在2%角鯊烯/Tween 80乳液中含有提取自細菌的三種成分單磷酰脂質A、海藻糖二霉菌酸酯和細胞壁骨架 (MPL+TDM+CWS)。用于增強本文公開的肺炎球菌疫苗效力的其它示例性佐劑包括但不限于 (1)水包油乳液配制物(有或沒有其它特定的免疫刺激性物質如胞壁酰肽(見下文) 或細菌細胞壁成分)，如例如(a) SAF，含有10%角鯊烯、0.4% Tween 80、5%普流尼克 (pluronic)-封閉的聚合物L121，和thr_MDP，經微流化成亞微粒乳液或經渦旋產生較大顆粒大小的乳液；以及(b)RIBI 佐劑體系(RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton, MT)含有2%角鯊烯、0.2% Tween 80、和一或多種細菌細胞壁成分如單磷酰脂質A(MPL)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和細胞壁骨架(CWS)，優選MPL+CWS (DET0X ) ； (2)皂苷佐劑，如QS21、 STIMULON (Cambridge Bioscience, Worcester, ΜΑ) 、Abisco (I sconova, Sweden)或 ^ Iscomatrix (Commonwealth Serum Laboratories, Australia), bJ 1 il!M 5 所產生的顆粒如ISCOMs (免疫刺激性復合物)，該ISCOMS可以沒有額外的去污劑例如 W000/07621 ；(3)弗氏完全佐劑(CFA)和弗氏不完全佐劑(IFA) ； (4)細胞因子，如白細胞介素(例如 IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12 (W099/44636)等)，干擾素(例如干擾素Y)，巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)，腫瘤壞死因子(TNF)等；(5)單磷酰脂質A(MPL) 或3-0-脫酰基MPL(3dMPL)(參見例如GB-2220221、EP-A-0689454)，任選在與肺炎球菌糖使用時基本不存在鋁(參見例如W000/56358) ； (6) 3dMPL與例如QS21和/或水包油乳液的組合(參見例如EP-A-0835318、EP-A-0735898、EP-A-0761231) ； (7)聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯(參見例如W099/52549) ； (8)與辛苯昔醇組合的聚氧乙烯山梨聚糖酯表面活性劑 (W001/21207)或者與至少一種額外的非離子型表面活性劑如辛苯昔醇組合的聚氧乙烯烷基醚或酯表面活性劑(W001/21152) ； (9)皂苷和免疫刺激性寡核苷酸(例如CpG寡核苷 Μ ) (W000/62800) ； (10)免疫刺激物和金屬鹽的顆粒(參見例如W000/23105) ； (11)皂苷和水包油乳液例如W099/11241 ； (12)皂苷(例如QS21)+3dMPL+IM2 (任選地+固醇)，例
30如TO98/57659 ； (13)其它作為免疫刺激物用以增強所述組合物效力的物質。胞壁酰肽包括N-乙酰基-胞壁酰-L-蘇氨酰基-D-異谷氨酰胺(thr-MDP)、N-25乙酰基-正-胞壁酰-L-丙氨酰基-D-異谷氨酰胺(正-MDP)、N-乙酰基-胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-異谷氨酰基-L-丙氨酸-2-(1' -2' -二棕櫚酰-sn-甘油-3-羥基磷酰氧基)-ZKMTP-PE)寸。在優選的實施方案中，本文公開的肺炎球菌疫苗包含鋁、氫氧化鋁、磷酸鋁或硫酸鋁作為本文所公開的至少一種TLR-9激動劑佐劑的額外佐劑。在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為2 μ g，只有6B的劑量為 4 μ g，進一步包含0. 5mg的磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為4 μ g，只有6B的劑量為 8 μ g，進一步包含Img的磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為6 μ g，只有6B的劑量為 12 μ g，進一步包含1. 5mg的磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為8 μ g，只有6B的劑量為 16 μ g，進一步包含aiig的磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為2 μ g， 只有6B的劑量為4 μ g，進一步包含0. 5mg的磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為4 μ g， 只有6B的劑量為8 μ g，進一步包含Img的磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為6 μ g， 只有6B的劑量為12 μ g，進一步包含1. 5mg的磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。在本發明具體的實施方案中，疫苗含有獨立綴合至CRM197的來自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為8 μ g， 只有6B的劑量為16 μ g，進一步包含1. 5mg的磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。在一個實施方案中，所述肺炎球菌疫苗是7-價綴合的肺炎球菌疫苗(ft~eVenar) 或13-價綴合的肺炎球菌疫苗，如US2007/0184072所述(13vPnC)。免疫功能受損對象在本發明優選的實施方案中，要用本發明的疫苗進行疫苗接種的對象是免疫功能
31受損對象。優選所述免疫功能受損對象是哺乳動物，如貓、綿羊、豬、馬、牛、狗或人。在最優選的實施方案中，所述對象是人。免疫功能受損個體通常定義為對感染性物質的攻擊形成正常體液或細胞防衛的能力減弱或降低的人。在本發明的實施方案中，要用所述肺炎球菌疫苗進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有疾病或病癥，所述疾病和病癥削弱免疫系統并導致不足以防護或治療肺炎球菌性疾病的抗體應答。在一個實施方案中，所述疾病是原發免疫缺陷病。優選所述原發免疫缺陷病選自下組合的T-和B-細胞免疫缺陷、抗體缺陷、明顯綜合征(well-defined syndrome)、免疫失調疾病、吞噬細胞病、先天免疫缺陷、自身炎癥性疾病和補體缺陷。在一個實施方案中，所述組合的T-和B-細胞免疫缺陷選自下組Y c缺乏、JAK3 缺乏、白細胞介素7受體α鏈缺乏、CD45缺乏或⑶3 δ/⑶3 ε缺乏、RAG 1/2缺乏、DCLRE1C 缺乏、腺苷脫氨酶(ADA)缺乏、網狀細胞發育不全、Omerm綜合征、IV類DNA連接酶缺乏、 ⑶40配體缺乏、⑶40缺乏、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)缺乏、II類MHC缺乏、⑶3 γ缺乏、⑶8 缺乏、ΖΑΡ-70缺乏、ΤΑΡ-1Λ缺乏和Winged螺旋缺乏。在一個實施方案中，所述抗體缺陷選自下組X-連鎖無丙種球蛋白血癥、btk缺乏、Bruton無丙種球蛋白血癥、μ-重鏈缺乏、I 5缺乏、Iga缺乏、BLNK缺乏、胸腺瘤伴免疫缺陷、常見可變免疫缺陷(CVID)、ICOS缺乏、CD19缺乏、TACI (TNFRSF13B)缺乏、BAFF受體缺乏、AID缺乏、UNG缺乏、重鏈缺失、κ鏈缺乏、分離的IgG亞類缺乏、IgA伴IgG亞類缺乏、選擇性免疫球蛋白A缺乏、在正常B細胞和正常Ig濃度針對特定抗原的特異性抗體缺乏、嬰幼兒短暫性低丙種球蛋白血癥(THI)。在一個實施方案中，所述明顯綜合征選自下組Wiskott-Aldrich綜合征、毛細血管擴張性共濟失調、共濟失調樣綜合征、Nijmegen斷裂綜合征、Bloom綜合征、DiGeorge綜合征(當與胸腺缺陷相關時)、軟骨毛發發育不良、Schimke綜合征、2型Hermansky-Pudlak 綜合征、高-IgE綜合征、慢性皮膚粘膜念珠菌病。在一個實施方案中，所述免疫失調疾病選自下組=Chediak-Higashi綜合征、2型 Griscelli綜合征、穿孔素(perforin)缺乏、MUNC 13D缺乏、突觸融合蛋白11缺乏、X-連鎖淋巴增殖綜合征、自身免疫淋巴增殖綜合征如Ia型(CD95缺陷)、lb型(Fas配體缺陷)、 2a型(CASP10缺陷)、2b型(CASP8缺陷)、APECED(自身免疫多內分泌病變伴念珠菌病和外胚層營養不良)和IPEX(免疫失調多內分泌病變腸病變X-連鎖綜合征)。在一個實施方案中，所述吞噬細胞病選自下組ELA2缺乏(伴有脊髓發育不良)、 GFIl缺乏(伴有T/B淋巴減少)、G-CSFR缺乏(G-CSF-無應答),Kostmann綜合征、周期性中性粒細胞減少癥、X-連鎖中性粒細胞減少癥/脊髓發育不良、1、2和3型白細胞粘附缺乏、RAC2缺乏、β -肌動蛋白缺乏、局限性青少年牙周炎、Papillon-Lefevre綜合征、特異性顆粒缺乏、Shwachman-Diamond綜合征、慢性肉芽腫疾病X_連鎖的和常染色體的形式、嗜中性葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏、IL-12和IL-23 β 1鏈缺乏、IL_12p40缺乏、干擾素、受體1缺乏、干擾素Y受體2缺乏和STATl缺乏O種形式)。在一個實施方案中，所述先天免疫缺乏選自下組少汗性外胚層發育不良、NEMO 缺乏、IKBA缺乏、IRAK-4缺乏、WHIM綜合征(疣、低丙種球蛋白血癥、感染、先天性骨髓粒細胞缺乏癥(myleokathexis))和疣狀表皮發育不良。
在一個實施方案中，所述自身炎癥性疾病選自下組家族性地中海熱、TNF受體相關周期性綜合征(TRAPS)、高-IgD綜合征(HIDS)、CIAS1-相關疾病、Muckle-Wells綜合征、 家族性寒冷自身炎癥性綜合征、新生兒多系統炎性疾病、PAPA綜合征(化膿性不育關節炎、 膿皮病壞疽、痤瘡)和Blau綜合征。在一個實施方案中，所述補體缺陷選自下組Clq缺乏(狼瘡樣綜合征、類風濕病、 感染)、Clr缺乏(同前)、C4缺乏(同前)、C2缺乏(狼瘡樣綜合征、脈管炎、多肌炎、化膿感染)、C3缺乏(復發性化膿感染)、C5缺乏(奈瑟氏菌感染、SLE)、C6缺乏(同前)、C7缺乏(同前、脈管炎)、CSa和C8b缺乏(同前)、C9缺乏(奈瑟氏菌感染)、Cl-抑制劑缺乏 (遺傳性血管水腫)、因子I缺乏(化膿感染)、因子H缺乏(溶血性尿毒綜合征、膜增生性腎小球腎炎)、因子D缺乏(奈瑟氏菌感染)、備解素缺乏(奈瑟氏菌感染)、MBP缺乏(化膿感染)和MASP2缺乏。在一個實施方案中，所述自身炎癥性疾病選自下組Cl、C2、C3和 C4缺乏。在本發明的一個實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有影響免疫系統的疾病，其中所述疾病是獲得性免疫缺陷病。獲得性免疫缺陷可由若干因素引起，包括細菌或病毒感染(如HIV)、癌癥(如白血病或骨髓瘤)，其它慢性病還有衰老、營養不良或各種(如糖皮質激素，化療藥物治療。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有選自下組的疾病HIV-感染、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDQ、癌癥、慢性心臟病或肺病、充血性心臟衰竭、糖尿病、慢性肝病、酒精中毒、肝硬化、腦脊液漏(spinal fluid leaks)、心肌病、慢性支氣管炎、肺氣腫、慢性阻塞性肺病(COPD)、脾功能障礙(如鐮刀狀細胞病)、脾功能缺失 (無脾)、惡性血液病、白血病、多發性骨髓瘤、霍奇金病、淋巴瘤、腎衰竭、腎病綜合征和哮喘。在具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有選自下組的疾病脾功能障礙(如鐮刀狀細胞病)、脾功能缺失(無脾)、白血病、多發性骨髓瘤、霍奇金病和淋巴瘤。在優選的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有HIV-感染或獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)。在具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有HIV-感染或獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)并且在進行治療，所述治療由如下組成接受至少一種選自下組的抗反轉錄病毒藥物非核苷反轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和核苷類似物反轉錄酶抑制劑(例如阿巴卡韋(abacavir)。在具體的實施方案中，所述治療由接受至少3種藥物組成所述藥物屬于至少兩類選自下組的抗反轉錄病毒藥物非核苷反轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和核苷類似物反轉錄酶抑制劑(例如阿巴卡韋)。在具體的實施方案中，所述治療由如下所組成接受至少兩種核苷類似物反轉錄酶抑制劑加上蛋白酶抑制劑或非核苷反轉錄酶抑制劑。在具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有HIV-感染或獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)并且在進行高活性抗反轉錄病毒治療(HAART)。在一個實施方案中，所述HAART由3種藥物方案組成，其包括非核苷反轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和/ 或核苷類似物反轉錄酶抑制劑(例如阿巴卡韋)或者由2種藥物方案組成，其包括非核苷反轉錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑的組合。在具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有HIV-感染或獲得性免疫缺陷綜合征(AIDQ并且未進行高活性抗反轉錄病毒治療(HAART)或者未進行抗反轉錄病毒治療，或者所述對象從未暴露于抗反轉錄病毒藥物。在具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是非病毒血性HIV感染患者。在另一實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是病毒血性HIV感染患
者ο在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有結核病或性傳播疾病，例如梅毒或肝炎。在本發明的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有營養不良。在本發明的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有衰老。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是55歲或更老的成年人，更優選65歲或更老的成年人。在一個實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是70 歲或更老的成年人、75歲或更老的成年人或者80歲或更老的成年人。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象在接受降低機體對感染的抗性的藥物或者治療。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象在接受選自下組的藥物化療(例如癌癥藥物)、緩解疾病抗風濕藥物、器官移植后的免疫阻抑藥物和糖皮質激素。在本發明的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象在接受選自下組的口服免疫阻抑藥物他克莫司(tacrolimus) (Prograf)、霉酚酸嗎乙酯(CellC印t)、西羅莫司(sirolimus) (Rapamune)、強的松、環抱菌素(cyclosoporine) (Neoral, Sandimmune, Gengraf)和硝基咪唑硫嘌呤(Imuran)。在一個實施方案中，免疫功能受損對象在接受至少 2種或3種所述口服免疫阻抑藥物。在本發明的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象在接受選自下組的免疫阻抑藥物依維莫司(Everolimus)、霉酚酸、皮質類固醇(如強的松龍或氫化可的松)、 單克隆抗-IL-2Ra受體抗體(如巴利昔單抗或達克珠單抗)、抗胸腺細胞球蛋白(ATG)和抗淋巴細胞球蛋白(ALG)。在一個實施方案中，免疫功能受損對象在接受至少2種或3種所述免疫阻抑藥物。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象已經進行了器官移植或者骨髓移植或耳蝸植入。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象已經進行了放射治療。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是吸煙者。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有哮喘并經口服皮質類固醇療法治療。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是阿拉斯加本地人或美洲印第安人。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象具有低于5X IO9個細胞每升的白細胞計數(白細胞(leukocyte)計數)、或者低于4X IO9個細胞每升、或者低于3X IO9個細胞每升、或者低于2X IO9個細胞每升、或者低于1 X IO9個細胞每升、或者低于0. 5X IO9個細胞每升、或者低于0. 3X IO9個細胞每升、或者低于0. 1 X IO9個
細胞每升。白細胞計數(白細胞計數)血液中白細胞(WBC)的數目。WBC通常被測量為CBC(全血液計數)的部分。白細胞是血液中的抗感染細胞并且與已知為紅細胞 (erythrocyte)的(攜氧)紅細胞不同。有不同類型的白細胞，包括中性粒細胞(多形核白細胞；PMN)、桿狀白細胞(稍微不成熟的中性粒細胞)、T-型淋巴細胞(Τ細胞)、Β-型淋巴細胞(B細胞)、單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞。所有類型的白細胞都在所述白細胞計數中體現出來。白細胞計數的正常范圍通常在每立方毫米血液4，300-10, 800個細胞之間。這也可以稱作是白細胞計數并且可以用國際單位表示為4. 3-10. 8X IO9個細胞每升。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有中性粒細胞減少癥。在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象具有低于 2X IO9個細胞每升的中性粒細胞計數、或者低于1 X IO9個細胞每升、或者低于0. 5Χ IO9個細胞每升、或者低于0. 1 X IO9個細胞每升、或者低于0. 05X IO9個細胞每升。低白細胞計數或者“中性粒細胞減少癥”是這樣的病癥，其特征在于循環血液中異常低水平的中性粒細胞。中性粒細胞是一種特定的白細胞，其輔助預防和抵抗感染。癌癥患者經受中性粒細胞減少癥的最常見的原因是化療的副作用。化療誘導的中性粒細胞減少癥提高了患者感染的風險并中斷癌癥治療。血液中的中性粒細胞越少則患者會越長時間持續沒有足夠的中性粒細胞，從而患者更加易于發展出細菌或真菌感染。中性粒細胞是抗細菌防衛機制的主要成分。在中性粒細胞計數降至低于1. 0、0. 5和0. 1 X 109/L時，威脅生命的感染的頻率分別迅速地從10%升至 19%和 28%o在本發明具體的實施方案中，要進行疫苗接種的免疫功能受損對象具有低于500/ mm3的CD4+細胞計數、或者低于300/mm3的CD4+細胞計數、或者低于200/mm3的CD4+細胞計數、低于100/mm3的CD4+細胞計數、低于75/mm3的CD4+細胞計數、或者低于50/mm3的CD4+ 細胞計數。⑶4細胞測試通常被報道為mm3中的細胞數目。正常的⑶4計數在500-1600之間， 而⑶8計數在375-1100之間。⑶4計數在具有HIV的人中劇烈地降低。在本發明實施方案中，本文所公開的任何免疫功能受損對象是人類男性或人類女性。方案在一些情況中，需要少至一劑的本發明的疫苗，但是在某些情況中，如較嚴重的免疫缺陷的狀況，可以提供第二、第三、或第四劑。在一個實施方案中，初始劑量在第0天提供，并以約2-約M周范圍的間隔提供一或多次加強，優選以4-8周的間隔給藥。在一個實施方案中，初始劑量在第0天提供并在約 3個月后提供加強。如實施例部分所示，目前疫苗接種的一些缺點可以用本發明的疫苗來克服。特別
35是本發明的疫苗可以降低所需的疫苗接種的次數用以實現血清保護、加快血清轉換、可能允許暴露后疫苗接種、降低無應答者的比例、降低所需的抗原量、提高抗體親和力和保護活性和/或導致更持久的抗體水平。這些優點在治療免疫功能受損患者時尤其令人感興趣。
實施例^MM 1.在HIV-感染的成人中對Toll-樣等體9-激動棄IK乍為佐劑的肺炎球菌瘡苗梓種的免瘡應答已進行了 96例HIV感染患者的II期研究。目標主要目標 在CpG 7909組對對照組中比較疫苗高應答者的數目-疫苗高應答者定義為對于 7種肺炎球菌血清型中的至少5種有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/mL (通過定量的IgG測
量)O次要目標·比較對于有或沒有CpG 7909的肺炎球菌疫苗接種的定量(功能性)抗體應答·評價CpG 7909作為肺炎球菌疫苗佐劑的安全性和耐受·分析在肺炎球菌疫苗接種后肺炎球菌載體狀況中的變化主要評估參數效力主要的特異性抗莢膜抗體(7種血清型)的定量測量次要的特異性抗莢膜抗體(肺炎球菌血清型6B、14、19F和23F)的功能活性；不良的并且嚴重的不良事件的數目和強度；肺炎球菌咽部建群(pharangyal colonization) 中的微生物變化，基準⑶4-計數和s⑶163的測量安全性/耐受性不良事件(AE)；嚴重不良事件(SAE)；實驗室測試(血液學、臨床化學即病毒負載 (HIV RNA)和CD4-計數)；體檢。研究設計安慰劑-對照的、隨機的、雙盲研究。總樣本量96個參與者(每組48 個)。測試藥物和配制物配制在PBS緩沖液中的CpG 7909 (合成的Toll-樣受體9_激動劑)。CPG 7909 是序列為 5' -TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3 ‘ (SEQ ID NO 5)的 B-類 CpG ODN并且已用完全的硫代磷酸酯骨架合成。測試藥物劑量Img CpG 7909 (100 μ 1)與每種肺炎球菌疫苗接種混合。對照具有每種肺炎球菌疫苗的100 μ 1中性PBS緩沖液(與測試藥物在顏色和粘
度上一致)。施用途徑肌肉注射。知情雙盲研究。分組登記隨機；將有資格的患者以1 1的比例隨機化的接受有或沒有CpG 7909的肺炎球菌疫苗接種。免疫
根據廠商描述將疫苗保存在其初始容器中并在免疫前即刻與佐劑(CpG 7909或安慰劑)混合。根據對象的意愿在左側或右側的上三角肌進行免疫。對每個參與者實驗的期限從第一次疫苗接種至最后的隨訪共10個月。對象從研究中退出從分析的角度，從研究中“退出”是指沒有回來進行計劃中預計的結論性訪問的任何對象。從退出/最后聯絡的日期起，當對于對象沒有進行研究程序、沒有進行隨訪并且沒有收集進一步的信息時，則此對象符合從研究中“退出”的條件。退出者沒有被替換。對象從研究產物退出從研究產物退出是指沒有接受完整治療的任何對象，即從退出日期起沒有進一步施用計劃的劑量。從研究產物退出的對象可以不必須從研究中退出，因為如果在計劃中有安排則可以進行進一步的研究程序或者隨訪(安全性或者免疫原性)。包括在案例報告表中的數據·生日、性別、種族、身高、體重、研究編號·對象報告的不良事件包括起始點和期限(至消退的時間)·在體檢期間的陽性發現·病歷 在研究期間于研究外所接受的其它疫苗接種·在研究期間內常規用藥的任何變化·在研究/第一次疫苗接種的開始之前在對象中所表現出的預先存在的病癥或跡象和/或癥狀·在研究期間內的所有實驗室發現參與者加入標準1)使用倫理委員會許可的參與者信息單和知情同意表按照地方監管和倫理實踐來提供書面知情同意和授權聲明。2)年齡> 18周歲的男性或女性參與者。
3) HIV-血清陽性個體參與者排除標準1)由陽性尿液β _hCG(若為女性)所確定的懷孕。2)參與者在試驗期間不愿意使用可靠的避孕方法。生育控制的可靠方法包括藥理學避孕藥，包括口服、腸胃外和經皮遞送；有殺精子劑的避孕套；有殺精子劑的隔膜；手術絕育；陰道環；子宮內裝置；禁欲和絕經后期(若為女性)。3)目前正在哺乳(若為女性)。4)最近的 CD4 計數< 200X IO6 細胞/μ L5)若處于HAART (定義為至少3種抗反轉錄病毒劑，包括蛋白酶抑制劑或NNRTI， 即雙汰芝300/150mgX2+施多寧600mgX 1最少6個月)病毒負載(HIV RNA) > 50拷貝/ ml ο6)先前曾加入此研究。
7)由首席研究者判斷會妨礙研究目標評價的任何醫學、精神病學、社會學或職業狀況或其它責任(如嚴重的酒精濫用、嚴重的藥物濫用、癡呆)。8)不能遵從計劃方案9)在加入前5年或更短期內有肺炎球菌疫苗接種10)在此研究期間計劃參與其它疫苗接種過程通過加入/排除標準的同意的參與者加入本研究。在進行免疫前抽取用于基準參數測量的血液樣品。經隨機選擇，將參與者以1 1分配至兩種研究方案之一·實驗組2劑的7-價綴合物肺炎球菌疫苗接種(I^revenar ffyeth) +Img CpG 7909 (第O天)，2劑的7-價綴合物肺炎球菌疫苗接種(Prevenar ffyeth) +Img CpG 7909 (第 90 天)和 1 劑的 23-價多糖疫苗(Pneumo Novum Sanofi Pasteur MSD) +Img CpG 7909 (第 270 天)·對照組2劑的7-價綴合物肺炎球菌疫苗接種(I^revenar ffyeth) +100 μ 1的安慰劑(第O天)，2劑的7-價綴合物肺炎球菌疫苗接種1的安慰劑(第 90天)和 1 劑的 23-價多糖疫苗(Pneumo Novum (g), SanofiPasteur MSD)+100 μ 1 的安慰劑(day 270)。由醫師進行血液樣品抽取和隨訪，包括體檢和病歷、AE (不良事件)/SAE (嚴重不良事件)的登記、在本研究外的疫苗接種歷史以及任何其它可與CRF中的文檔相關的信息。 在第300天進行結論性拜訪。返回進行結論性拜訪或者在此計劃中預見可進行結論性聯系的對象被認為是完成了此研究。疫苗和測試藥物/安慰劑注射所有對象在第0、90和270天進行給藥。所有的免疫都在右臂或左臂(根據參與者的偏好)的三角肌中完成。·在第0和90天研究參與者接受一次雙劑量I^revenar 1. 0ml+0. Iml測試藥物 (CpG 7909)/安慰劑的肌內注射。在兩種情況中，注射入臂部的體積都是1.1ml。·在第 270 天參與者接受一次 0. 5ml Pneumo Novum+0. Iml 測試藥物(CpG7909)/ 安慰劑的肌內注射。在所有情況中，注射入臂部的體積都是1. Iml0研究者和參與者不知道施用的是實驗或對照注射。每個注射產品的體積和外觀都是相同的。主要效力參數和抗體應答的分析本研究能夠在肺炎球菌疫苗高應答者中檢測實驗組和對照組之間的差異，所述疫苗高應答者定義為對于7種肺炎球菌血清型中的至少5種有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ mL(通過定量的IgG測量)。本研究不能檢測肺炎或者確認的侵入性/非侵入性肺炎球菌性疾病的發病率的差異。這將需要非常大量的參與者和更長的隨訪期。對肺炎球菌疫苗接種的免疫應答的最常用的測量是血清型特異性抗莢膜抗體的定量檢測。最近的數據表明可以通過加入22F吸收步驟來改善此方法的特異性；由此去除低親和力的交叉反應抗體。定量的血清型特異性 IgG 測量由 Matens Serum lnstitut (SSI)，Copenhagen，Denmark 使用加入了 22F吸收步驟的ELISA來完成。SSI對于治療分配不知情。
次要效力參數和抗體應答的分析測量血清型特異性抗莢膜抗體的定量的量并不會給出抗體功能性的任何信息。這可以通過流式細胞術調理吞噬測定法來測量并對于抗體調理以及促進殺死侵入性肺炎球菌的能力給出間接信息。使用流式細胞術調理吞噬測定法來完成定性分析，所述測定法測量血清型特異性抗體的功能性(調理吞噬)活性(OPA)。簡言之在OPA緩沖液中從10 μ 1測試血清進行 8次二倍稀釋。將含有IXlO5的每種目標肺炎球菌血清型或肺炎球菌多糖綴合珠的多細菌或多珠懸浮液的20 μ 1等分試樣加入到每個孔，并將平板在37°C以水平搖動QOOrpm) 溫育一小時。此后，將來自3至4周大的幼兔血清的20 μ 1無菌血清(Pel-Freez，Brown Deer, Wis.)加入每個孔，除了 HL60細胞對照孔(其接受20 μ 1的OPA緩沖液。在37°C搖動(在軌道搖動器上200rpm)溫育20min后，將30 μ 1經洗滌的HL60多形核白細胞(PMN) Ο.5μ104/πι1)加入每個孔，得到1 4的效應物對靶的比例(對于每種靶類型)。最終孔體積是80 μ 1，系列稀釋的第一個孔含1 8的最終稀釋度。繼而將該平板于37°C搖動溫育60min。將另外的80 μ 1 OPA緩沖液加入到每個孔以提供足夠的體積用于流式細胞術分析并將孔內容物轉移至微滴定管(Bio-Rad，Hercules, Calif.)。每平板可測定達12種血清樣品，包括質量控制樣品。通過Flow Applications, Inc, III，USA51來完成流式分析。肺炎球菌承載(CARRIAGE)肺炎球菌疫苗接種可影響肺炎球菌的咽部承載。肺炎球菌咽部建群也可以影響對肺炎球菌疫苗接種的免疫應答。因此在肺炎球菌疫苗接種之前和之后確定攜帶者 (carrier)狀況是很重要的。使用 BBL 培養物交換(BBL culture swap) (Becton Dickson Microbiology Systems, Cockeysville, MD, USA)經口腔測試了后咽部中的口咽建群。 用個體研究ID數字來標記樣品，在幾小時內冷凍于-20°C并隨后運至Matens Serum hstitut，在該處進行分離、培養和血清分型。這在第0天進行并在第270天的隨訪期間再次進行。不良事件(AE):AE是臨床研究對象中的任何不利醫學事件，與醫藥產品的使用有短暫關聯，無論認不認為與該醫藥產品相關。因此AE可以是任何不利的和非故意的跡象(包括異常的實驗室發現)、癥狀或疾病(新的或者惡化的)，其與醫藥產品的使用有短暫關聯。在本研究中，根據Common Toxicity Criteria 2.0 版來將 AE 分級。嚴重不良事件(SAE)定義在臨床試驗期間發生的不良事件是與參與者中使用的醫藥產品關聯的任何不期望的體驗。當參與者的結果如下時，則該事件是嚴重的并將報告給監管部門1.死亡2.威脅生命3.入院治療(起初或拖延的)4.殘疾5.需要介入以防止永久性損傷或傷害6.先天性病癥/異常(對于懷孕的婦女)
疑似意外嚴重不良事件反應(SUSAR)定義在本研究期間發生的疑似意外嚴重不良事件反應(SUSAR)并且要進行報告·該事件必須是SAE。·該事件必須有某種程度的可能性是對施用的藥物的不良反應。該不良反應必須是意料之外的，也就是說，在研究者的手冊中未曾預見的(對于未經許可的醫藥產品)。數據評估用于目標評估的標準在實驗疫苗組(+CpG 7909)和對照疫苗組(+安慰劑)之間對比了所有的終末點。分研究(substudy)在兩個(未隨機化的)治療組(處于HAART對非HAART)中比較了終末點。主要終末點在用I^revenar第二次疫苗接種后6個月。·肺炎球菌疫苗高應答者定義為對于7種肺炎球菌血清型中的至少5種有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml (通過定量的IgG測量)次要終末點免疫原性在用I^revenar第一次疫苗接種后3個月。·肺炎球菌疫苗高應答者定義為對于7種肺炎球菌血清型中的至少5種有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml (通過定量的IgG測量)·血清型6B、14、19F和23F的調理吞噬活性表示為效價·血清型-特異性抗體應答定義為2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml·血清型-特異性抗體應答定義為IgG水平的變化在用I^revenar第二次疫苗接種后6個月。·血清型6B、14、19F和23F的調理吞噬活性表示為效價·血清型-特異性抗體應答定義為2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml·血清型-特異性抗體應答定義為IgG水平的變化在用Pneumo Novum疫苗接種后1個月。·肺炎球菌疫苗高應答者定義為對于7種肺炎球菌血清型中的至少5種有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml (通過定量的IgG測量)·血清型6B、14、19F和23F的調理吞噬活性表示為效價·血清型-特異性抗體應答定義為2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml·血清型-特異性抗體應答定義為IgG水平的變化 用標準酶免疫測定法對于血清型1、4、7F、9V、14、18C和19F的幾何平均抗體濃度咽部建群在用I^revenar第二次疫苗接種后6個月。·有肺炎球菌建群的個體的數目抗體應答的預報因子在基準處。·在用ft~eVenar第二次疫苗接種后6個月對于疫苗應答的風險因子，
40
次要終末點在所有對象中反應原性和安全性分析人群安全性人群接受了至少一次疫苗接種的所有患者。·在每次疫苗接種劑量后4天(第0至第3天)期間引發的和一般性癥狀的發生·在每次疫苗接種后達1個月非引發癥狀的發生·在本研究期間CD4計數和病毒負載的變化通過體檢、不良事件(根據common toxicity criteria 2. 0版)、實驗室測試、和 HIV控制參數(HIV RNA和⑶4-計數)來評估安全性。統計分析基準特征通過Marm-Whitney秩和檢驗(連續變量)和x 2檢驗(二分和分類變量)來評估第0天研究組之間的差異。主要終末點在用ft~evenar第二次疫苗接種后6個月高應答者的普遍性比率(比較2個疫苗接種方案組(有/無CpG 7909))已通過X2檢驗進行評估。計劃了通過年齡所調節的泊松回歸模型、處于基準的CD4細胞計數和處于基準的HAART (HAART對非HAART)。次要終末點通過X2檢驗進行了研究組之間終末點的對比。計劃了對適當潛在混雜數據 (confounder)進行調整的泊松回歸(二分終末點)或線性回歸(連續終末點)。對于在用ft~eVenar第二次疫苗接種后6個月實現高疫苗接種應答(分類為高應答者)的風險因子將通過多變量泊松回歸來評估。安全性數據安全性數據已被列出并通過X 2檢驗進行對比。估計的樣品大小意向處理(Intention-to-treat，ITT)群體所有隨機化的參與者對主要終末點計算了樣品大小(在用ft~eVenar第二次疫苗接種后6個月高應答者的普遍性比率(比較2個疫苗接種方案組))。將I類錯誤和II類錯誤的概率設定為· I類錯誤概率(α ) = 0. 05 (雙側)。· II類錯誤概率(β) 二化加丨冪二^日=0.80)。 主要終末點疫苗高應答者的比例(定義為對于7種肺炎球菌血清型中的至少5 種有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml)。· N是每組中需要的參與者的數目。對照\CpG0.500.550.600.650.700.2039292318150.2558413124190.3093614231240.35170966243310.40388173976242假設對照疫苗組中的普遍性為30%而實驗疫苗組的普遍性為60%，則需要每組 42個參與者的樣品大小來檢測由泊松回歸所評估的普遍性中的差異。預期的中途缺失百分比設定為10%。因此，本研究需要總共94個對象。依照監管部門所建議的途徑，計算了免疫應答差異的雙側95%置信區間(Cl)。t施仿Il 2 :TLR9_佐劑化的肺炎球菌瘡苗在感染HIV的成人中的免,瘡原t牛禾Π安Φ 件。隨機化的、雙盲的、安慰劑-對照實驗的結果進行了實施例1中所描述的臨床試驗。該研究是安慰劑-對照II期實驗，將患有HIV的人員隨機化用雙劑的PCV(肺炎球菌綴合物疫苗)(Prevnar) 士 Img CpG 7909在第0和第3個月以及用單劑的PPV (肺炎球菌多糖疫苗)士 Img CpG 7909在第9個月進行疫苗接種。免疫原性和安全性在第0、3、4、9 和10個月評估。主要終末點在第9個月與疫苗高應答者成比例，所述疫苗高應答者定義為對于7種PCV血清型中的至少5種有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml (通過ELISA的定量 IgG, Statens Serum Institute, Copenhagen, Denmark)。結果如表1所示，包括了 96個參與者。在48個參與者的每組中38個處于ART。表1在加入時的基準特征
權利要求
1.一種肺炎球菌疫苗，其包含至少一種綴合的莢膜糖肺炎球菌抗原和至少一種TLR-9 激動劑作為佐劑。
2.權利要求1的肺炎球菌疫苗，其中所述至少一種TLR-9激動劑包含CpG寡核苷酸、優選為本文公開的任何CpG寡核苷酸或由其所組成。
3.權利要求2的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸是A、B、C或P類CpG免疫刺激性寡核苷酸。
4.權利要求3的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸是B類CpG免疫刺激性寡核苷酸，優選是本文所公開的任何B類CpG寡核苷酸。
5.權利要求3的肺炎球菌疫苗，其中所述A、B、C或P類的CpG寡核苷酸在5'端包含 E修飾。
6.權利要求4的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸具有選自下組的核酸序列5 ‘ TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT 3 ‘ (SEQ ID N0:3)、5 ‘ TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT 3 ‘ (SEQ ID N0:4)、5 ‘ TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT 3 ‘ (SEQ ID NO :5)、 5 ‘ TCGTCGTTTCGTCGTTTTGTCGTT 3 ‘ (SEQ ID NO 6)和 5 ‘ TCGTCGTTTTGTCGTTTTTTTCGA 3' (SEQ ID NO :7)。
7.權利要求4的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸選自下組5'3' (SEQ ID NO8)、或5'3' (SEQ ID NO:9)、或5'(SEQIDNO :10)、或5'(SEQIDNO:11)、或5'(SEQIDNO:12)/其中*是指硫代磷酸酯鍵。
8.權利要求3或5的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸是C類CpG免疫刺激性寡核苷酸，優選是本文所公開的任何C類CpG寡核苷酸。
9.權利要求8的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸具有選自下組的核酸序列 5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO: 13)，5' TCGTCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :14)， 5' TCGGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :15)， 5' TCGGACGTTCGGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :16)， 5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :17)， 5' TCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :18)， 5' TCGACGTTCGGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :19)， 5' TCGCGTCGTTCGGCGCCG 3' (SEQ ID NO :20)， 5' TCGCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :21). 5' TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :22)， 5' TCGTCGTTTTCGGCGGCCGCCG 3' (SEQ ID NO :23)， 5' TCGTCGTTTTACGGCGCCGTGCCG 3' (SEQ ID NO :24)禾口 5' TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCGT 3' (SEQ ID NO :25)。
10.權利要求8的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸選自下組5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO 26)， 5' T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO 27)， 5' T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO 28)， 5' T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :29)， 5'3' (SEQ ID NO :30)，5' T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G^>G*C_G*OG^>OG 3' (SEQ ID NO :31)， 5' T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :32)， 5' T*C_G*C_G*G*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :33)， 5' T*C_G*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :34)， 5'3' (SEQ ID NO 35),5'3' (SEQ ID NO :36)，5' T*C*G*T*C_G*T*T*T*T*A*C_G*G*C*G*C*C_G*T*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :37)禾口 5'3' (SEQ ID NO 38)其中*是指硫代磷酸酯鍵并且_是指磷酸二酯鍵。
11.權利要求3或5的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸是P類CpG免疫刺激性寡核苷酸，優選是本文所公開的任何P類CpG寡核苷酸。
12.權利要求11的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸具有核酸序列 5' TCGTCGACGATCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :39)。
13.權利要求11的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸是5' T*C_G*T*C_G*A*C_G*A*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ 10而40)，其中*是指硫代磷酸酯鍵并且_是指磷酸二酯鍵。
14.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸的核苷酸間連接是磷酸二酯、硫代磷酸酯、甲基磷酸酯、甲基硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、P"乙氧基或其組I=I O
15.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中所述至少一種CpG寡核苷酸是6至 100個核苷酸長，或優選8至30個核苷酸長。
16.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含0.2mg至IOmg的CpG寡核苷酸，優選大約Img的CpG寡核苷酸。
17.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中所述綴合的莢膜糖肺炎球菌抗原源自至少7種血清型的肺炎鏈球菌(S. pneumoniae)。
18.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含來自7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22或23種不同血清型的肺炎鏈球菌的莢膜糖抗原。
19.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含來自11、7或13種不同血清型的肺炎鏈球菌的莢膜糖抗原。
20.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中所述莢膜糖抗原獨立地綴合至本文所述的任何一種載體蛋白。
21.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含來自血清型4、6B、9V、14、18C、19F 和23F的綴合的肺炎鏈球菌糖。
22.權利要求20的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型1的綴合的肺炎鏈球菌糖。
23.權利要求21-22任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型5的綴合的肺炎鏈球菌糖。
24.權利要求21-23任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型7F的綴合的肺炎鏈球菌糖。
25.權利要求2114任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型3的綴合的肺炎鏈球菌糖。
26.權利要求21-25任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型6A的綴合的肺炎鏈球菌糖。
27.權利要求2146任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型19A的綴合的肺炎鏈球菌糖。
28.權利要求21-27任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型22F的綴合的肺炎鏈球菌糖。
29.權利要求21- 任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型15的綴合的肺炎鏈球菌糖。
30.權利要求21- 任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型8的綴合的肺炎鏈球菌糖。
31.權利要求21-30任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型12F的綴合的肺炎鏈球菌糖。
32.權利要求21-31任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型2的綴合的肺炎鏈球菌糖。
33.權利要求21-32任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型9N的綴合的肺炎鏈球菌糖。
34.權利要求21-33任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型IOA的綴合的肺炎鏈球菌糖。
35.權利要求21-34任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型1IA的綴合的肺炎鏈球菌糖。
36.權利要求21-35任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型17F的綴合的肺炎鏈球菌糖。
37.權利要求21-36任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型20的綴合的肺炎鏈球菌糖。
38.權利要求21-37任一項的肺炎球菌疫苗，其另外包含來自血清型33F的綴合的肺炎鏈球菌糖。
39.權利要求1-20任一項的肺炎球菌疫苗，其包含來自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和 23F的綴合的肺炎鏈球菌糖。
40.權利要求1-20任一項的肺炎球菌疫苗，其包含來自血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、 14、18C、19A、19F和23F的綴合的肺炎鏈球菌糖。
41.權利要求1-20任一項的肺炎球菌疫苗，其包含來自血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、 18CU9F和23F的綴合的肺炎鏈球菌糖。
42.權利要求1-20任一項的肺炎球菌疫苗，其包含來自血清型1、3、4、5、68、7 、抓、14、18CU9F和23F的綴合的肺炎鏈球菌糖。
43.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中所述莢膜糖抗原綴合至載體蛋白，所述載體蛋白獨立地選自下組TT、DT、CRM197、TT的片段C、WrtD、PhtDE融合體、脫毒肺炎球菌溶血素和蛋白D。
44.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中所有莢膜糖抗原均獨立地綴合至相同的載體蛋白。
45.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中所述莢膜糖抗原綴合至DT(白喉類毒素)O
46.權利要求1-44任一項的肺炎球菌疫苗，其中所述莢膜糖抗原綴合至TT(破傷風類毒素)O
47.權利要求1-44任一項的肺炎球菌疫苗，其中所述莢膜糖抗原綴合至TT的片段C。
48.權利要求1-44任一項的肺炎球菌疫苗，其中所述莢膜糖抗原綴合至蛋白D。
49.權利要求1-44任一項的肺炎球菌疫苗，其中所述莢膜糖抗原綴合至CRM197蛋白。
50.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中來自血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、 9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 或 33F 的糖綴合至蛋白 D。
51.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中來自血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、 9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 或 33F 的糖綴合至 CRM 197。
52.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中來自至少血清型1和3、1和4、1和 5、1 禾口 6A、1 禾口 6B、1 禾口 7、1 禾口 9V、1 禾口 14、1 禾口 22F、1 禾口 23F、3 禾口 4、3 禾口 5、3 禾口 6A、3 禾口 6B、3禾口 7F、3 禾口 9V、3 禾口 14、3 禾口 22F、3 禾口 23F、4 禾口 5、4 禾口 6A、4 禾口 6B、4 禾口 7F、4 禾口 9V、4 禾口 14、4禾口 22F、4 禾口 23F、5 禾口 6A、5 禾口 6B、5 禾口 7F、5 禾口 9V、5 禾口 14、5 禾口 22F、5 禾口 23F、6A 禾口 6B、6A 禾口 7F、6A 禾口 9V、6A 禾口 14、6A 禾口 22F、6A 禾口 23F、6B 禾口 7F、6B 禾口 9V、6B 禾口 14、6B 禾口 22F、6B 禾口 23F、7F 和 9V、7F 和 14、7F 和 22F、7F 和 23F、9V 和 14、9V 和 22F、9V 和 23F、14 和 22F、14 和 23F或22F和23F的糖綴合至CRM197。
53.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中來自至少血清型1、3和4;1、3和5 ； 1、3 禾口 6A ；1、3 禾口 6B ；1、3 禾口 7F、1、3 禾口 9V ；1、3 禾口 14 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 5 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 9V ；3、4 禾口 14 ；4、5 禾口 7F ；4、5 禾口 9V ；4、5、禾口 14 ；5、7F 禾口 9V ；5、7F 禾口 14 ；7F、9V 禾口 14 ；1、3、 4 禾口 5 ；3、4、5 禾口 7F ；4、5、7F 禾口 9V ；4、5、7F 禾口 14 ；4,5,9V 禾口 14 ；4、7F、9V 禾口 14 ；5、7F、9V 禾口 14 ；或4、5、7F、9V和14的糖綴合至CRM197。
54.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中來自至少血清型1和3、1和4、1和 5、1 禾口 6A、1 禾口 6B、1 禾口 7、1 禾口 9V、1 禾口 14、1 禾口 22F、1 禾口 23F、3 禾口 4、3 禾口 5、3 禾口 6A、3 禾口 6B、3禾口 7F、3 禾口 9V、3 禾口 14、3 禾口 22F、3 禾口 23F、4 禾口 5、4 禾口 6A、4 禾口 6B、4 禾口 7F、4 禾口 9V、4 禾口 14、4禾口 22F、4 禾口 23F、5 禾口 6A、5 禾口 6B、5 禾口 7F、5 禾口 9V、5 禾口 14、5 禾口 22F、5 禾口 23F、6A 禾口 6B、6A 禾口 7F、6A 禾口 9V、6A 禾口 14、6A 禾口 22F、6A 禾口 23F、6B 禾口 7F、6B 禾口 9V、6B 禾口 14、6B 禾口 22F、6B 禾口 23F、7F 和 9V、7F 和 14、7F 和 22F、7F 和 23F、9V 和 14、9V 和 22F、9V 和 23F、14 和 22F、14 和 23F或22F和23F的糖綴合至蛋白D。
55.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中來自至少血清型1、3和4;1、3和5； 1、3 禾口 6A ；1、3 禾口 6B ；1、3 禾口 7F ；1、3 禾口 9V ；1、3 禾口 14 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 5 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 9V ；3、4 禾口 14 ；4、5 禾口 7F ；4、5 禾口 9V ；4、5、禾口 14 ；5、7F 禾口 9V ；5、7F 禾口 14 ；7F、9V 禾口 14 ；1、3、·4 禾口 5 ；3、4、5 禾口 7F ；4、5、7F 禾口 9V ；4、5、7F 禾口 14 ；4,5,9V 禾口 14 ；4、7F、9V 禾口 14 ；5、7F、9V 禾口 14 ；或者4、·5、7F、9V和14的糖綴合至蛋白D。
56.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含獨立綴合至蛋白D的、來自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。
57.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含獨立綴合至CRM197的、來自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。
58.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含獨立綴合至蛋白D的、來自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F 和 23F 的糖。
59.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含獨立綴合至CRM197的、來自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F 和 23F 的糖。
60.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含獨立綴合至蛋白D的、來自血清型 1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。
61.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含獨立綴合至CRM197的、來自血清型 1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。
62.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含來自血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、 14、18C、19F和23F的獨立綴合至蛋白D的糖。
63.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含獨立綴合至CRM197的、來自血清型 1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。
64.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含獨立綴合至蛋白D的、來自血清型 1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 和 33F 的糖。
65.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含獨立綴合至CRM197的、來自血清型 1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 和 33F的糖。
66.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含獨立綴合至蛋白D的來自血清型 1、4、5、6B、7F、9V、14和23F的糖、綴合至破傷風類毒素(TT)的來自血清型18C的糖和綴合至白喉類毒素(DT)的來自血清型19F的糖。
67.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含獨立綴合至破傷風類毒素(TT)的來自血清型1、4、5、7F、9V、19F和23F的糖和獨立綴合至白喉類毒素(DT)的來自血清型3、 14U8C和6B的糖。
68.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中每劑疫苗中綴合物的量為0.1至 1000 μ g的每種糖-蛋白綴合物，優選2至100 μ g、最優選4至40 μ g。
69.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其中每劑包含0.1至20 μ g、1至10 μ g或 1至5μ g的糖。
70.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其以0.1-20 μ g、0. 5-10 μ g、0. 5-5 μ g或 1-5 μ g糖的劑量含有每種肺炎鏈球菌莢膜糖。
71.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F* 23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為2 μ g，只有6B的劑量是4μ g。
72.權利要求1-70中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為4 μ g，只有6B的劑量是8μ g。
73.權利要求1-70中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為6 μ g，只有6B的劑量是12 μ g。
74.權利要求1-70中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為8 μ g，只有6B的劑量是16 μ go
75.權利要求1-70中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為 21^，只有68的劑量是4 μ g。
76.權利要求1-70中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為 41^，只有68的劑量是8 μ g。
77.權利要求1-70中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為 6口8，只有68的劑量是121^。
78.權利要求1-70中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為 8口8，只有68的劑量是16 μ g。
79.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有5-500μ g、優選10-200 μ g、更優選20-100 μ g的CRM197載體蛋白。
80.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有20-50μ g、優選20-40 μ g、更優選 25-30 μ g、更優選大約觀或四μ g的CRM 197載體蛋白。
81.權利要求1-79中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有40-100μ g、優選40-80 μ g、更優選50-60 μ g、更優選大約57或58 μ g的CRM 197載體蛋白。
82.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有氯化鈉和/或琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。
83.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其在本文所公開至少一種TLR-9激動劑佐劑之外還包含至少1種、2種或3種佐劑。
84.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其另外還包含本文所公開的任何另外的佐劑。
85.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其包含鋁、氫氧化鋁、磷酸鋁或硫酸鋁作為所述至少一種TLR-9激動劑佐劑之外的佐劑。
86.前述權利要求中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F* 23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為2 μ g，只有6B的劑量是4 μ g，其另外含有0. 5mg磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。
87.權利要求1-85中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型~4、6B、9V、14、18C、19F* 23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為4 μ g，只有6B的劑量是8 μ g，其另外含有Img磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。
88.權利要求1-85中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為6 μ g，只有6B的劑量是12 μ g，其另外含有1. 5mg磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。
89.權利要求1-85中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為8 μ g，只有6B的劑量是16 μ g，其另外含有ang磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。
90.權利要求1-85中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為2 μ g，只有6B的劑量是4 μ g，其另外含有0. 5mg磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。
91.權利要求1-85中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為4 μ g，只有6B的劑量是8 μ g，其另外含有Img磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。
92.權利要求1-85中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為g，只有6B的劑量是12 μ g，其另外含有1. 5mg磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。
93.權利要求1-85中任一項的肺炎球菌疫苗，其含有獨立綴合至CRM197的來自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每種肺炎鏈球菌莢膜糖的劑量為g，只有6B的劑量是16 μ g，其另外含有aiig磷酸鋁，和任選存在的氯化鈉和琥珀酸鈉緩沖液作為賦形劑。
94.前述權利要求任一項的肺炎球菌疫苗，其用于預防或治療由肺炎鏈球菌感染所引起的疾病。
95.權利要求1-93任一項中的肺炎球菌疫苗，其用于預防或治療免疫功能受損對象中由肺炎鏈球菌感染所引起的疾病。
96.權利要求1-93中任一項的肺炎球菌疫苗在制備藥物中的用途，所述藥物用于預防或治療由肺炎鏈球菌感染所引起的疾病。
97.權利要求1-93中任一項的肺炎球菌疫苗在制備藥物中的用途，所述藥物用于預防或治療免疫功能受損對象中由肺炎鏈球菌感染所引起的疾病。
98.權利要求1-93中任一項的肺炎球菌疫苗用于對免疫功能受損對象進行疫苗接種的用途。
99.針對由肺炎鏈球菌感染所引起的疾病而免疫對象的方法，其包括給所述對象施用免疫保護性劑量的權利要求1-93中任一項的疫苗。
100.針對由肺炎鏈球菌感染所引起的疾病而免疫免疫功能受損對象的方法，其包括給所述對象施用免疫保護性劑量的權利要求1-93中任一項的疫苗。
101.權利要求95的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97或98的用途、或者權利要求100 的方法，其中所述免疫功能受損對象是本文所公開的任何免疫功能受損對象。
102.權利要求95的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97或98的用途、或者權利要求100的方法，其中所述免疫功能受損對象是哺乳動物，如貓、綿羊、豬、馬、牛、狗、大鼠、小鼠或人。
103.權利要求95的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97或98的用途、或者權利要求100 的方法，其中所述免疫功能受損對象是人。
104.權利要求95或103的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98或103的用途、或者權利要求100或103的方法，其中所述免疫功能受損對象患有影響免疫系統的疾病。
105.權利要求104的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104的用途、或者權利要求104的方法，其中所述疾病是本文公開的任何原發免疫缺陷病。
106.權利要求104的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104的用途、或者權利要求104的方法，其中所述疾病是獲得性免疫缺陷病、優選本文所公開的任何獲得性免疫缺陷病。
107.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中所述疾病選自下組細菌或病毒感染(如HIV)、癌癥(如白血病或骨髓瘤)、其它慢性病，還有衰老、營養不良、或各種(如糖皮質激素、化療)藥物治療。
108.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中所述疾病選自下組HIV-感染、獲得性免疫缺陷綜合征 (AIDQ、癌癥、慢性心臟病或肺病、充血性心臟衰竭、糖尿病、慢性肝病、酒精中毒、肝硬化、 腦脊液漏、心肌病、慢性支氣管炎、肺氣腫、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、脾功能障礙(如鐮刀狀細胞病)、脾功能缺失(無脾)、惡性血液病、白血病、多發性骨髓瘤、霍奇金病、淋巴瘤、腎衰竭、腎病綜合征和哮喘。
109.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中所述疾病選自下組脾功能障礙(如鐮刀狀細胞病)、脾功能缺失(無脾)、白血病、多發性骨髓瘤、霍奇金病和淋巴瘤。
110.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中所述疾病是HIV-感染或者獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)。
111.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有HIV-感染或獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)并在進行治療，所述治療由如下組成接受至少一種選自下組的抗反轉錄病毒藥物非核苷反轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和核苷類似物反轉錄酶抑制劑 (例如阿巴卡韋)。
112.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有HIV-感染或獲得性免疫缺陷綜合征(AIDQ并在進行治療，所述治療由接受至少3種藥物所組成，所述3種藥物屬于至少兩類選自下組的抗反轉錄病毒藥物非核苷反轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和核苷類似物反轉錄酶抑制劑(例如阿巴卡韋)。
113.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有HIV-感染或獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)并在進行治療，所述治療由如下所組成接受至少兩種核苷類似物反轉錄酶抑制劑加上蛋白酶抑制劑或非核苷反轉錄酶抑制劑。
114.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有HIV-感染或獲得性免疫缺陷綜合征(AIDQ并且在進行高活性抗反轉錄病毒治療(HAART)，優選由3種藥物的方案組成，該方案包括非核苷反轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和/或核苷類似物反轉錄酶抑制劑(例如阿巴卡韋)，或者由2種藥物的方案組成，該方案包括非核苷反轉錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑的組合。
115.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有HIV-感染或獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)并且未進行高活性抗反轉錄病毒治療(HAART)、或者未進行抗反轉錄病毒治療、或者所述對象從未暴露于抗反轉錄病毒藥物。
116.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是非病毒血性HIV感染
117.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是病毒血性HIV感染患者ο
118.權利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者權利要求104或106的用途、或者權利要求104或106的方法，其中所述疾病是結核病或性傳播疾病，例如梅毒或肝炎。
119.權利要求95、101-118中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-118中任一項的用途、或者權利要求100-118中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有營養不良。
120.權利要求95、101-119中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-119中任一項的用途、或者權利要求100-119中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是陽歲或者更老的成年人，更優選是65歲或者更老的成年人。
121.權利要求95、101-120中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-120中任一項的用途、或者權利要求100-120中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是70歲或者更老、75歲或者更老或80歲或者更老的成年人。
122.權利要求95、101-121中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-121中任一項的用途、或者權利要求100-121中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象在接受降低機體對感染的抗性的藥物或治療，特別是選自下組的藥物化療(例如癌癥藥物)、疾病改性抗風濕藥物物、器官移植后的免疫阻抑藥物和糖皮質激素。
123.權利要求95、101-122中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-122 中任一項的用途、或者權利要求100-122中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象在接受選自下組的口服免疫阻抑藥物他克莫司(Prograf)、霉酚酸嗎乙酯 (CellC印t)、西羅莫司(Rapamune)、強的松、環孢菌素(Neoral，Sandimmune,Gengraf)和硝基咪唑硫嘌呤(Imuran)。
124.權利要求95、101-123中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-123中任一項的用途、或者權利要求100-123中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象在接受選自下組的免疫阻抑藥物依維莫司、霉酚酸、皮質類固醇(如強的松龍或氫化可的松)、單克隆抗-IL-2RCI受體抗體(如巴利昔單抗或達克珠單抗)、抗胸腺細胞球蛋白(ATG)和抗淋巴細胞球蛋白(ALG)。
125.權利要求95、101-1 中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-1 中任一項的用途、或者權利要求100-124中任一項的方法，其中所述免疫功能受損對象已經進行了器官移植、或骨髓移植或耳蝸植入。
126.權利要求95、101-125中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-125中任一項的用途、或者權利要求100-125中任一項的方法，其中所述免疫功能受損對象已經進行了放療。
127.權利要求95、101-1沈中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-1沈中任一項的用途、或者權利要求100-126中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是吸煙者。
128.權利要求95、101-127中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-127中任一項的用途、或者權利要求100-127中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有哮喘并經口服皮質類固醇療法治療。
129.權利要求95、101-1 中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-1 中任一項的用途、或者權利要求100-128中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象是阿拉斯加本地人或美洲印第安人。
130.權利要求95、101-1四中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-1四中任一項的用途、或者權利要求100-129中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象具有低于5X IO9個細胞每升的白細胞計數、或者低于4X IO9個細胞每升、或者低于3X IO9個細胞每升、或者低于2X IO9個細胞每升、或者低于1 X IO9個細胞每升、或者低于0. 5X IO9個細胞每升、或者低于0. 3X IO9個細胞每升、或者低于0. IXlO9個細胞每升。
131.權利要求95、101-130中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-130中任一項的用途、或者權利要求100-130中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象患有中性粒細胞減少癥。
132.權利要求95、101-131中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-131中任一項的用途、或者權利要求100-131中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象具有低于2X IO9個細胞每升的中性粒細胞計數、或者低于1 X IO9個細胞每升、或者低于0. 5X IO9個細胞每升、或者低于0. IXlO9個細胞每升、或者低于0. 05X IO9個細胞每升。
133.權利要求95、101-132中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-132中任一項的用途、或者權利要求100-132中任一項的方法，其中要進行疫苗接種的免疫功能受損對象具有低于500/mm3的CD4+細胞計數、或者低于300/mm3的CD4+細胞計數、或者低于200/mm3的CD4+細胞計數、低于100/mm3的CD4+細胞計數、低于75/mm3的CD4+細胞計數、或者低于50/mm3的⑶4+細胞計數。
134.權利要求95、101-133中任一項的肺炎球菌疫苗、或者權利要求97、98、101-133中任一項的用途、或者權利要求100-133中任一項的方法，其中本文所公開的免疫功能受損對象是人類男性或者人類女性。
全文摘要
本發明涉及新的肺炎球菌疫苗。本發明還涉及使用所述新的肺炎球菌疫苗給對象、特別是免疫功能受損對象進行抗肺炎球菌感染的疫苗接種。
文檔編號A61K39/39GK102413838SQ201080019071
公開日2012年4月11日 申請日期2010年3月17日 優先權日2009年4月30日
發明者A·M·克里格, H·C·申海德爾, H·L·戴維斯, L·厄斯特高, N·洛澤, O·S·瑟高 申請人:科勒制藥集團有限公司