專利名稱：一種病毒性疫苗大規模生產的純化方法
技術領域：
本發明是對傳統病毒性疫苗純化工藝的改進，提供一種病毒性疫苗大規模生產 的純化方法，可用于多種病毒的純化處理，屬于生物技術領域。
背景技術：
病毒純化，即應用各種物理、化學方法，以不使病毒受損傷和失活為前提，去 除宿主細胞組分等非病毒雜質，提純出高純度濃縮的病毒樣品。病毒提純是開發高質量 疫苗的前提條件，另外病毒微細形態結構的研究、病毒抗原蛋白的分離提純、病毒化學 成分及其遺傳物質一DNA或RNA的詳細研究都需要高純度的病毒樣品。一種好的病毒 抗原純化工藝可以有效去除病毒培養過程中所帶來的雜蛋白、宿主細胞DNA、內毒素、 及其它雜質，并且具有很好的病毒抗原回收率及純度。傳統的病毒類疫苗純化采用蔗糖密度梯度超速離心純化工藝，該工藝需要大 型離心設備，價格高，上樣量少，花費時間長，去除宿主細胞DNA效果也不理想，不適 合疫苗產業化的要求；親和層析方法雖然分離蛋白純度高，但其對分離條件較嚴格，相 對處理能力低，特別是由于易在表層形成蛋白膠質層，阻礙后期樣品滲透，同樣不適合 大規模生產需要。采用常規的凝膠過濾層析雖然其條件溫和、重復性好、便于產業化，在疫苗 純化工藝中被廣泛采用，但去除雜蛋白和DNA效果并不明顯，所以在疫苗制備純化工藝 中只能作為輔助手段。離子交換柱層析去除宿主細胞DNA效果較為理想，但其去除雜蛋白效果沒有疏 水層析效果好。其工作機理主要是利用病毒、雜蛋白和DNA的等電點不同，通過改變緩 沖液濃度的辦法，收集病毒，其操作簡單，對病毒作用溫和，可反復上樣，上樣量大， 適合疫苗產業化的要求
目前國內對于Vero細胞等傳代細胞的宿主殘余細胞DNA，嚴格限制在每劑小于 IOOpg,遠遠小于WHO和歐盟藥典標準即小于IOng水平，因此應用傳統的疫苗工藝很難 達到我們國家藥典標準，因此，需要對疫苗純化工藝進行創新研究。目前除重組疫苗以外尚無文獻報道使用疏水層析方法純化傳統病毒性疫苗。
發明內容
本發明提供了一種病毒性疫苗大規模生產的純化方法，克服了傳統疫苗現有純 化技術的缺陷，具有純化效果好、重復性好、便于疫苗產業化的特點。本發明病毒性疫苗純化方法的技術方案，包括下面步驟
1)采用細胞培養技術收獲的病毒抗原；
2)取PhenylSepharose 6 Fast Flow (Low Sub)疏水層析介質，按與水例為4 1，充
分攪拌后裝填于層析柱中；
3)用(U-0.5MNaOH溶液，沖洗層析柱，至液體流出為PH8 14，保存1_24小時；4)用注射用水沖洗層析柱至中性為止；5)用10-40%硫酸銨，0.01-0.05MPB緩沖液平衡層析柱1_4個體積；6)將疫苗稀釋成含10-40%硫酸銨的濃度，與平衡液硫酸銨濃度一致，上樣；7)上樣后繼續用平衡液沖洗至基線；8)用PB緩沖液、注射用水或0.01-0.2MTris-HCL洗脫收集疫苗抗原；9)收集的洗脫峰樣品用凝膠層析或超濾除鹽，并進行相應指標測定。
所述病毒抗原為一種有包膜或無包膜病毒如甲1型流感病毒、甲3型流感病 毒、乙型流感病毒、H5N1流感病毒、腎綜合癥出血熱病毒、狂犬病病毒、甲型肝炎病 毒，可以在滅活之前或滅活后進行純化。
病毒抗原在純化前可以用離心、0.45-2.5 μ m濾芯澄清過濾，然后用100-500KD超濾膜進行濃縮。
本發明的積極效果是利用疏水層析方法去除宿主細胞DNA和雜蛋白。疏水 柱層析采用低吸附疏水層析介質進行純化，主要是利用病毒在一定硫酸銨濃度下，充分 暴露其疏水性，從而使其能夠結合在層析柱上，而部分雜蛋白由于疏水性弱，殘余宿主 細胞DNA不具有疏水性，不能結合，所以流穿出來，這樣就可以達到去除雜蛋白及宿主 細胞DNA目的，其中雜蛋白去除率在90%以上，宿主細胞殘余DNA含量達到500]Dg左 右。本發明提供了一種創新性的病毒性疫苗純化方法，該方法純化效果好、重復性好、 適宜于規模化疫苗制備。經疏水層析后宿主細胞殘余DNA在500pg/ml左右，再輔以離 子交換等純化方法可以達到國家藥典標準。
圖1為甲1型流感疫苗宿主細胞殘余DNA含量圖譜； 圖2為甲3型流感疫苗宿主細胞殘余DNA含量圖譜；圖3為乙型流感宿主細胞殘余DNA含量圖譜； 圖4為H5N1流感疫苗宿主細胞殘余DNA含量圖譜； 圖5為狂犬病疫苗宿主細胞殘余DNA含量圖譜； 圖6為腎綜合癥出血熱疫苗宿主細胞殘余DNA含量圖譜。
具體實施例方式通過以下實施例進一步舉例描述本發明，并不以任何方式限制本發明，在不背離本 發明的技術解決方案的前提下，對本發明所作的本領域普通技術人員容易實現的任何改 動或改變都將落入本發明的權利要求范圍之內。
實施例1將甲1型流感毒種，A/Solomon/3/06 (H1N1)-JVR-HS,來源于英國NIBSC，代次 E8C3接種于經洗液沖洗的Vero單層細胞，143代，37°C吸附1_4小時，棄吸附液，補加含 胰酶1-6 μ g/ml的普通培養基，33-35°C繼續培育，當病變達+++_++++時收獲細胞上清 液，經4500轉離心、0.45μιη濾芯過濾、100_500kd膜包超濾濃縮，即為待純化的甲1型流感病毒抗原。
取柱層析膠PhenylSepharose6 Fast Flow (Low Sub)，按與水例為 4:1，充分攪拌后裝填于層析柱中，柱體積為2000ml。
用0.5MNa()H溶液，以一定流速沖洗層析柱，至液體流出為PH8-14.0為止， 保存2-M小時，用注射用水沖洗層析柱至中性為止，用10-40%硫酸銨，0.02MPB緩沖 液平衡層析柱1-4個體積，將疫苗加入一定濃度硫酸銨并最終含10-40%硫酸銨的濃度， 與平衡液硫酸銨濃度一致，上樣體積以流穿峰達到一定高度時結束，以含有10-40%硫酸 銨，0.02MPB緩沖液平衡層析柱1-4個體積，上樣后繼續用平衡液沖洗至基線，然后用 PB緩沖液洗脫收集疫苗抗原，經分子篩凝膠過濾后分別測定血凝素含量、內毒素、蛋白 質含量、血凝滴度、宿主殘余DNA含量等。方法同上，采用注射用水洗脫收集洗脫峰 后，進行各項檢測。
血凝素含量測定采用單向免疫擴散試驗檢測血凝素含量將抗原參考品和供試品分別加入到含有抗體參考品的1.5%瓊脂糖凝膠板上，孔徑為 3mm，每孔為ΙΟμ ，20_25°C放置至少18小時左右。用PBS浸泡1小時后，干燥、染 色、脫色。準確測量抗原參考品和供試品形成的沉淀環直徑，以抗原參考品形成的沉淀 環直徑對其相應抗原濃度作直線回歸，求得直線回歸方程，代入樣品的沉淀環直徑，即 可得到樣品的血凝素含量。
宿主細胞殘余DNA測定采用地高辛標記檢測法，利用與標準參考DNA比較確定殘余DNA含量。
蛋白含量測定采用Lowrry法，進行測定。
PB緩沖液洗脫結果注射用水洗脫結果 甲1型流感抗原回收率85.6% 89.2% 蛋白去除率 92.5% 90.4%內毒素含量 原倍合格原倍合格宿主細胞殘余 DNA 含量 500pg/0.5ml500pg/0.5ml甲1型流感疫苗宿主細胞殘余DNA含量圖譜見圖1 ；結論利用疏水柱層析純化后，甲1型抗原回收率在85%以上，宿主殘余DNA含量 在5OOpg左右。
實施例2將甲 3 型流感毒種，A/wisconsin/67/2005 (H3N》-,NYMC_161,來源于 NIBSC，代次EltlC3接種于經洗液沖洗的Vero單層細胞，145代，37°C吸附1_4小時，棄吸附液，補 加含胰酶1-6 μ g/ml的普通培養基，33-35°C繼續培育，當病變達+++-++++時收獲細胞 上清液，經4500轉離心、0.45 μ m濾芯過濾、100_500kd膜包超濾濃縮，即為待純化的甲3型流感病毒抗原。
取柱層析膠PhenylSepharose6 Fast Flow (Low Sub)，按與水例為 4:1，充分攪拌后裝填于層析柱中，柱體積為2000ml。
用0.5MNa()H溶液，以一定流速沖洗層析柱，至液體流出為PH8-14.0為止， 保存2-M小時，用注射用水沖洗層析柱至中性為止，用10-40%硫酸銨，0.02MPB緩沖 液平衡層析柱1-4個體積，將疫苗加入一定濃度硫酸銨并最終含10-40%硫酸銨的濃度， 與平衡液硫酸銨濃度一致，上樣體積以流穿峰達到一定高度時結束，以含有10-40%硫 酸銨，0.02MPB緩沖液平衡層析柱1-4個體積，上樣后繼續用平衡液沖洗至基線，然后用PB洗脫收集疫苗抗原，經分子篩凝膠過濾后分別測定血凝素含量、內毒素、蛋白質含 量、血凝滴度、宿主殘余DNA含量等。方法同上，采用Tris-HCL緩沖液洗脫收集洗脫 峰后，進行各項檢測。血凝素含量測定采用單向免疫擴散試驗檢測血凝素含量
將抗原參考品和供試品分別加入到含有抗體參考品的1.5%瓊脂糖凝膠板上，孔徑為 3mm，每孔為1Ομm，20-25°C放置至少18小時左右。用PBS浸泡1小時后，干燥、染 色、脫色。準確測量抗原參考品和供試品形成的沉淀環直徑，以抗原參考品形成的沉淀 環直徑對其相應抗原濃度作直線回歸，求得直線回歸方程，代入樣品的沉淀環直徑，即 可得到樣品的血凝素含量。宿主細胞殘余DNA測定采用地高辛標記檢測法，利用與標準參考DNA比較
確定殘余DNA含量。蛋白含量測定采用Lowrry法，進行測定。PB緩沖液洗脫結果 Tris-HCL緩沖液洗脫結果 甲3型流感抗原回收率87.6%91.2%
蛋白去除率93.5%90.4%
內毒素含量 原倍合格原倍合格
宿主細胞殘余 DNA 含量 500pg/0.5ml500pg/0.5ml
甲3型流感疫苗宿主細胞殘余DNA含量圖譜見圖2 ；
結論利用疏水柱層析純化后，甲3型抗原回收率在87%以上，宿主殘余DNA含 量在500pg左右。實施例3
將乙型流感毒種，B/Malaysia/2506/2004,來源于英國NIBSC，代次E5C3接種于經洗 液沖洗的Vero單層細胞，143代，37°C吸附1_4小時，棄吸附液，補加含胰酶1_6 μ g/ml 的普通培養基，33-35°C繼續培育，當病變達+++_++++時收獲細胞上清液，經4500轉離 心、0.45 μ m濾芯過濾、100-500kd膜包超濾濃縮，即為待純化的乙型流感病毒抗原。取柱層析膠PhenylSepharose6 Fast Flow (Low Sub)，按與水例為 4:1，充分攪拌 后裝填于層析柱中，柱體積為2000ml。用0.5MNa()H溶液，以一定流速沖洗層析柱，至液體流出為PH8-14.0為止， 保存2-24小時，用注射用水沖洗層析柱至中性為止，用10-40%硫酸銨，0.02MPB緩沖 液平衡層析柱1-4個體積，將疫苗加入一定濃度硫酸銨并最終含10-40%硫酸銨的濃度， 與平衡液硫酸銨濃度一致，上樣體積以流穿峰達到一定高度時結束，以含有10-40%硫酸 銨，0.02MPB緩沖液平衡層析柱1-4個體積，上樣后繼續用平衡液沖洗至基線，然后用 PB緩沖液洗脫收集疫苗抗原，經分子篩凝膠過濾后分別測定血凝素含量、內毒素、蛋白 質含量、血凝滴度、宿主殘余DNA含量等。血凝素含量測定采用單向免疫擴散試驗檢測血凝素含量
將抗原參考品和供試品分別加入到含有抗體參考品的1.5%瓊脂糖凝膠板上，孔徑為 3mm，每孔為ΙΟμ ，20-25°C放置至少18小時左右。用PBS浸泡1小時后，干燥、染 色、脫色。準確測量抗原參考品和供試品形成的沉淀環直徑，以抗原參考品形成的沉淀 環直徑對其相應抗原濃度作直線回歸，求得直線回歸方程，代入樣品的沉淀環直徑，即可得到樣品的血凝素含量。 宿主細胞殘余DNA測定采用地高辛標記檢測法，利用與標準參考DNA比較
確定殘余DNA含量。蛋白含量測定采用Lowrry法，進行測定。純化結果
乙型流感抗原回收率85.0%
蛋白去除率 90.2%
內毒素含量 原倍合格
宿主細胞殘余DNA含量500pg/0.5ml
乙型流感宿主細胞殘余DNA含量圖譜見圖3 ；
結論利用疏水柱層析純化后，乙型抗原回收率在85%以上，宿主殘余DNA含量在 500pg左右。實施例4
將A/Vietnam/1194/2004 (H5N1) (NIBRG-14)毒種代次E4C3接種于經洗液沖洗 的Vero單層細胞，144代，37°C吸附1_4小時，棄吸附液，補加含胰酶1_6 μ g/ml的普 通培養基，33-35°C繼續培育，當病變達+++_++++時收獲細胞上清液，經4500轉離心、 0.45 μ m濾芯過濾、100-500kd膜包超濾濃縮，即為待純化的H5N1型流感病毒抗原。取柱層析膠PhenylSepharose6 Fast Flow (Low Sub)，按與水例為 4:1，充分攪拌 后裝填于層析柱中，柱體積為2000ml。用0.5MNa()H溶液，以一定流速沖洗層析柱，至液體流出為PH8-14.0為止， 保存2-24小時，用注射用水沖洗層析柱至中性為止，用10-40%硫酸銨，0.02MPB緩沖 液平衡層析柱1-4個體積，將疫苗加入一定濃度硫酸銨并最終含10-40%硫酸銨的濃度， 與平衡液硫酸銨濃度一致，上樣體積以流穿峰達到一定高度時結束，以含有10-40%硫酸 銨，0.02MPB緩沖液平衡層析柱1-4個體積，上樣后繼續用平衡液沖洗至基線，然后用 PB緩沖液洗脫收集疫苗抗原，經分子篩凝膠過濾后分別測定血凝素含量、內毒素、蛋白 質含量、血凝滴度、宿主殘余DNA含量等。血凝素含量測定采用單向免疫擴散試驗檢測血凝素含量
將抗原參考品和供試品分別加入到含有抗體參考品的1.5%瓊脂糖凝膠板上，孔徑為 3mm，每孔為ΙΟμ ，20-25°C放置至少18小時左右。用PBS浸泡1小時后，干燥、染 色、脫色。準確測量抗原參考品和供試品形成的沉淀環直徑，以抗原參考品形成的沉淀 環直徑對其相應抗原濃度作直線回歸，求得直線回歸方程，代入樣品的沉淀環直徑，即 可得到樣品的血凝素含量。宿主細胞殘余DNA測定采用地高辛標記檢測法，利用與標準參考DNA比較
確定殘余DNA含量。蛋白含量測定采用Lowrry法，進行測定。純化結果
H5N1抗原回收率88.2%
蛋白去除率92.0%
內毒素含量原倍合格宿主細胞殘余DNA含量 500pg/mlH5N1流感疫苗宿主細胞殘余DNA含量圖譜見圖4 ；結論利用疏水柱層析純化后，H5N1型抗原回收率在88%以上，宿主殘余DNA含 量在500pg左右。
實施例5將狂犬病病毒固定毒aG株接種于Vero單層細胞上，4-10天內收獲細胞上清液3次， 經4500轉離心、0.45μιη濾芯過濾、100-500kd膜包超濾濃縮，經分子篩凝膠過濾收集第 一峰即為待進一步純化的狂犬病病毒抗原。
取柱層析膠Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (Low Sub)，按與水例為 4:1，充分攪拌后裝填于層析柱中，柱體積為2000ml。
用0.5MNa()H溶液，以一定流速沖洗層析柱，至液體流出為PH8-14.0為止， 保存2-M小時，用注射用水沖洗層析柱至中性為止，用10-40%硫酸銨，0.02MPB緩沖 液平衡層析柱1-4個體積，將疫苗加入一定濃度硫酸銨并最終含10-40%硫酸銨的濃度， 與平衡液硫酸銨濃度一致，上樣體積以流穿峰達到一定高度時結束，以含有10-40%硫酸 銨，0.02MPB緩沖液平衡層析柱1-4個體積，上樣后繼續用平衡液沖洗至基線，然后用 PB緩沖液洗脫收集疫苗抗原，經分子篩凝膠過濾后分別測定血凝素含量、內毒素、蛋白 質含量、血凝滴度、宿主殘余DNA含量等。
宿主細胞殘余DNA測定采用地高辛標記檢測法，利用與標準參考DNA比較確定殘余DNA含量。
蛋白含量測定采用Lowrry法，進行測定。
純化結果狂犬病病毒NIH效價 5J6 蛋白去除率93.0%內毒素含量原倍合格宿主殘余DNA含量 小于500pg/ml 狂犬病疫苗宿主殘余DNA含量圖譜見圖5 ；結論利用疏水柱層析純化后，H5N1型抗原回收率在88%以上，宿主殘余DNA含 量在500pg以下。
實施例6將腎綜合癥出血熱II型病毒接種于Vero單層細胞上，收獲細胞上清液，經4500轉離 心、0.45μm濾芯過濾100-500kd膜包超濾濃縮，經分子篩凝膠過濾收集第一峰即為待進 一步純化的腎綜合癥出血熱病毒抗原。
取柱層析膠Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (Low Sub)，按與水例為 4:1，充分攪拌后裝填于層析柱中，柱體積為2000ml。
用0.5MNa()H溶液，以一定流速沖洗層析柱，至液體流出為PH8-14.0為止， 保存2-M小時，用注射用水沖洗層析柱至中性為止，用10-40%硫酸銨，0.02MPB緩沖 液平衡層析柱1-4個體積，將疫苗加入一定濃度硫酸銨并最終含10-40%硫酸銨的濃度， 與平衡液硫酸銨濃度一致，上樣體積以流穿峰達到一定高度時結束，以含有10-40%硫酸銨，0.02MPB緩沖液平衡層析柱1-4個體積，上樣后繼續用平衡液沖洗至基線，然后用 PB緩沖液洗脫收集疫苗抗原，經分子篩凝膠過濾后分別測定血凝素含量、內毒素、蛋白 質含量、血凝滴度、宿主細胞殘余DNA含量等。宿主細胞殘余DNA測定采用地高辛標記檢測法，利用與標準參考DNA比較
確定殘余DNA含量。
蛋白含量測定采用Lowrry法，進行測定。腎綜合癥出血熱病毒中和抗體檢測取樣品接種2kg左右的白色家兔4只，免疫 兩次，間隔7天，每只后肢肌肉注射1.0ml。第一次免疫后4周采血分離血清，用蝕斑減 少中和試驗檢測中和抗體，中和病毒為出血熱病毒II型病毒株，同時用血清參考品做對 照。內毒素檢測采用鱟試劑檢測法。純化結果
腎綜合癥出血熱病毒中和抗體滴度1:10
蛋白去除率95.0%
內毒素含量原倍合格
宿主殘余DNA含量小于500pg/ml
腎綜合癥出血熱疫苗宿主殘余DNA含量圖譜見圖6 ；
結論利用疏水柱層析純化后，腎綜合癥出血熱病毒中和抗體滴度1:10
，宿主殘余DNA含量在500pg以下。實施例7
將甲型肝炎減毒病毒株接種于MRC-5單層細胞上，收獲細胞凍融液，等量氯仿抽提 后，經4500轉離心、0.45 μ m濾芯過濾IOOkd膜包超濾濃縮，經分子篩凝膠過濾收集第一 峰即為待進一步純化的甲型肝炎病毒抗原。取柱層析膠Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (Low Sub)，按與水例為 4:1，充分攪
拌后裝填于層析柱中，柱體積為2000ml。用0.5MNa()H溶液，以一定流速沖洗層析柱，至液體流出為PH8-14.0為止， 保存2-24小時，用注射用水沖洗層析柱至中性為止，用10-40%硫酸銨，0.02MPB緩沖 液平衡層析柱1-4個體積，將疫苗加入一定濃度硫酸銨并最終含10-40%硫酸銨的濃度， 與平衡液硫酸銨濃度一致，上樣體積以流穿峰達到一定高度時結束，以含有10-40%硫酸 銨，0.02MPB緩沖液平衡層析柱1-4個體積，上樣后繼續用平衡液沖洗至基線，然后用 PB緩沖液洗脫收集疫苗抗原，經分子篩凝膠過濾后分別測定甲肝抗原含量、內毒素、蛋 白質含量、病毒感染性滴度等。蛋白含量測定采用Lowrry法進行測定。病毒感染性滴度LogCCID5Q/ml測定病毒按1 10倍遞增稀釋至10_6_10_8，分 別接種小方瓶的MRC-5單層細胞，每瓶lml，37°C吸附3小時，補加維持液PH7.6每瓶 10ml, 35°C培養4周，每周更換維持液，第四周凍融收獲，經酶聯免疫法進行抗原測定 后，按Reed-Muench法計算病毒滴度LogCCID 50/ml。純化結果
甲型肝炎病毒LogCCID5Q/ml 7.0蛋白去除率92.0%。
結論，通過此純化可以制備純化的甲型肝炎減毒活疫苗。
權利要求
1.一種病毒性疫苗大規模生產的純化方法，所述方法包括下面步驟1)采用細胞培養技術收獲的病毒抗原；2)取柱層析膠PhenylSepharose 6 Fast Flow (Low Sub)，按與水例為4:1，充分攪拌后裝填于層析柱中；3)用O.l-l.OMNaOH溶液，沖洗層析柱，至液體流出為PH8 14，保存1_24小時；4)用注射用水沖洗層析柱至中性為止；5)用10-40%硫酸銨，0.01-0.05MPB緩沖液平衡層析柱1-4個體積；6)將疫苗稀釋成含10-40%硫酸銨的濃度，與平衡液硫酸銨濃度一致，上樣；7)上樣后繼續用平衡液沖洗至基線；8)用PB緩沖液、注射用水或0.01-0.2MTris-HCL洗脫收集疫苗抗原；9)收集的洗脫峰樣品用凝膠層析或超濾除鹽，并進行相應指標測定。
2.根據權利1要求所述的病毒純化方法，其特征是1)所述病毒抗原為一種有包膜或無包膜病毒如甲1型流感病毒、甲3型流感病 毒、乙型流感病毒、H5N1禽流感病毒、腎綜合癥出血熱病毒、狂犬病病毒、甲型肝炎病
3.根據權利1要求所述的病毒純化方法，其特征是該方法可以獨立作為各種疫苗 的純化方法或與其它純化方法組合成各種疫苗的純化工藝。
全文摘要
本發明提供了病毒性疫苗大規模生產的純化方法，利用疏水層析方法去除宿主細胞DNA和雜蛋白。疏水柱層析采用低吸附疏水層析介質進行純化，主要是利用病毒在一定硫酸銨濃度下，充分暴露其疏水性，從而使其能夠結合在層析柱上，而部分雜蛋白由于疏水性弱，殘余宿主細胞DNA不具有疏水性，不能結合，所以流穿出來，這樣就可以達到去除雜蛋白及宿主細胞DNA目的，其中雜蛋白去除率在90%以上，宿主細胞殘余DNA含量達到500pg左右。本發明提供了一種創新性的病毒性疫苗純化方法，該方法純化效果好、重復性好、適宜于規模化疫苗制備。經疏水層析后宿主細胞殘余DNA在500pg/ml左右，再輔以離子交換等純化方法可以達到國家藥典標準。
文檔編號A61K39/29GK102018955SQ20101060553
公開日2011年4月20日 申請日期2010年12月27日 優先權日2010年12月27日
發明者于洪濤, 周慶玲, 岳振齊, 張瑩, 李光譜, 李淑蘭, 胡曉明, 董喚, 董鵬, 郭巖 申請人:吉林亞泰生物藥業股份有限公司