專利名稱：治療奶牛隱性乳房炎的中藥透皮劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種治療奶牛隱性乳房炎的中藥透皮劑及其制備方法。
背景技術：
奶牛乳房炎(mastitis)是由病原微生物感染、機械性刺激或化學物理性損傷所致的奶牛乳房實質、間質炎癥的疾病，是奶牛常見且多發的一種疾病，其發病率高，危害性大， 是造成奶牛業損失最大的疾病之一。奶牛乳房炎根據有無臨床癥狀，可分為臨床型乳房炎 (Clinical Mastitis)和隱性乳房炎(Subclinical Mastitis)兩類。奶牛隱性乳房炎主要是由病原微生物感染引起，主要包括金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、大腸桿菌、乳房鏈球菌、肺炎克雷伯氏菌等。貴州省隱性型乳房炎感染率為58. 39%，乳區陽性率為 30. 99%(薦齋廣.奶牛隱性乳房炎的診斷方法與細菌學研究[D].貴陽貴州大學，2006\ 2008貴陽地區奶牛隱性乳房炎的感染率為40%(暴灣廣，田甜，王開功，周碧君，文明.貴陽市奶牛隱性乳房炎的調查與病原鑒定[J].貴州農業科學，2009，37(9):145-147.)。而隱性乳房炎往往因為不表現臨床癥狀而忽略治療轉而發展為臨床型乳房炎。目前，臨床上主要是應用抗生素治療奶牛乳房炎，如果使用抗生素治療隱性乳房炎，用藥期間和停藥5天內的牛奶不得銷售，這將影響其經濟效益。養殖戶往往擔心經濟效益或飼養管理不當沒有及時診治奶牛隱性乳房炎，進而轉為臨床型乳房炎，造成更大的損失。近年來，中草藥治療奶牛乳房炎越來越引起國內外學者的重視，高純一等、高純一，祁永鋒，丁營兵.公英散加味治療奶牛乳房炎[J].中國獸藥科學，2001，2(6) 101-103.)用“公英散”加味拌料治療奶牛乳房炎，有效率達92% ；張彬等淡彬，薛明，崔穎，羅永紅，周宗田，史彥斌，夏文江，張科仁.新獸藥消炎醒對乳牛乳房炎臨床治療試驗[J].中國獸醫科技，2000，30 (8) :28-29.)用消炎醒乳池灌注治療乳牛乳腺炎125例，治愈率達84%;許瑾等(/f遵，孫彥河，楊春波，裴樹森，孫少印.乳安注射液治療奶牛乳房炎的效果試驗[J].黑龍江畜牧獸醫，2004，(7):56.)采用乳安注射液(含綠原酸、黃芪多糖)治療奶牛乳房炎，治愈率為86. 7% (13/15)，有效率為100% (15/15)， 明顯優于青鏈霉素類藥物。以上中藥復方主要是散劑、湯劑、注射劑，其中散劑和湯劑用藥量大，由于其味道特別，有的動物很難灌服，而注射劑對動物刺激很大，對動物產生一定的應激，增加了其在臨床推廣的難度。而使用透皮給藥系統(Transdermal therapeutic system, TTS)目前在臨床治療奶牛乳房炎的報道較少，TTS是指藥物以一定的速率通過皮膚，經毛細血管吸收進入循環而產生藥效的控釋制劑。而用中藥透皮劑治療奶牛乳房炎既避免了肝臟首過效應， 又降低了胃腸道的毒副反應和機體的應激反應，使其在治療奶牛乳房炎上具有廣闊的應用前景
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種治療奶牛隱性乳房炎的中藥透皮劑及其制備方法，以克服現有技術存在的散劑、湯劑很難灌服，注射劑對動物刺激很大，臨床推廣難度大等不足。本發明采取以下技術方案本發明所述治療奶牛隱性乳房炎的中藥透皮劑為水包油(0/W)型乳膏劑，中藥復方組成為蒲公英、金銀花、瓜蔞、連翹、芙蓉花、黃芪、大黃、當歸； 其用量重量份配比為1 1 1 :0. 6 0. 5 0. 3 0. 3 :0. 2。本發明所述的治療奶牛隱性乳房炎的中藥透皮劑的制備方法，包括以下過程第一步為中藥液提取，即先取蒲公英、金銀花、瓜蔞、連翹、芙蓉花、黃芪、大黃、當歸，將所述的中藥原料用50%乙醇浸泡30 min，其中原料與乙醇的料液重量比1 :10 ；然后超聲15 min，回流提取2 h，多層紗布過濾(使用紗布的層數要從過濾效果考慮，一般為4-6層，甚至更多層數。下同)，藥渣再加50%乙醇，其中料液重量比1:8，回流提取1 h，多層紗布過濾，合并濾液，旋轉蒸發至無醇味，加入石油醚萃取，水相濃縮至2 g/mL，121 °C流通蒸汽滅菌15 min, 滅菌后獲得的中藥提取液4 ！保存備用；第二步為水包油型乳膏劑制取，透皮劑基質中油相組成及重量配比為硬脂酸12 g、單硬脂酸甘油酯3. 5 g、羊毛脂5 g、凡士林2 g、石蠟6 mL ；水相組成及重量配比三乙醇胺0. 3 ml、中藥提取液28. 5 ml，將上述所列量取的油相共置同一容器中，水浴80°C加熱；將水相放入另一容器中，水浴80°C加熱，然后在等溫條件下將兩相混合，攪拌10 min，加入促透劑5%氮酮(重量比)和10%丙二醇(重量比)，再于室溫條件下攪拌至冷凝，即得中藥透皮劑。本發明中涉及的瓜蔞、連翹、大黃為中藥飲片，由于體積較大或質地較硬，所以混合前先粉碎為粗粉，其用量為粉碎后的重量。本發明所述的治療奶牛隱性乳房炎的中藥透皮劑的使用方法如下經CMT檢測患有隱性乳房炎的奶牛每次擠乳后，先用熱毛巾擦拭乳房，然后每個患病乳區涂抹中藥透皮劑乳膏劑20 25 g，2次/ d，連續用藥5 d后，采取乳樣經CMT檢測，評價中藥治療效果， 治愈強陽性(+ + + )或陽性(+ + )轉為陰性(-)或可疑(士)；有效強陽性(+ + + )或陽性(+ + )轉為弱陽性(+ )；無效治療后無明顯效果。中藥復方的急性毒性試驗如下
中藥復方提取液濃縮至生藥含量為2 g/mL (若繼續濃縮，中藥無法進行灌胃給藥)。取體重20士2 g的健康昆明小白鼠M只，雌雄各半，隨機分成試驗組和對照組，每組12只。試驗組灌胃給中藥0.5 mL/只(相當于生藥1 g)，對照組口服給生理鹽水0.5 mL/只，給藥一次，常規飼養7 d。觀察小鼠的臨床表現和死亡情況，以死亡為主要觀察指標。如有一只死亡，則以剛不出現死亡組為準，此時的用藥量即為小鼠的耐藥量，然后按公式計算出耐受量倍數。以耐受用量口服100倍以上為安全，計算公式如下所示。試驗結果表明小鼠口服給藥量達55.6 g/kg體重，7天內未見小鼠死亡，臨床推薦用量為0.2 g/Kg，其耐藥倍數為278 倍，符合安全無毒的。耐藥畺=一I^i最大耐受量倍數=臨量
中藥透皮劑的安全性試驗如下 1 )、中藥透皮劑的刺激性試驗
6只，體重2. 5 3. 0 Kg,雌雄各半，給藥前M h將家兔背部兩側去毛，去毛面積約為體表面積的10%(家兔每側約為70 cm2)，去毛后應檢查去毛皮膚是否因去毛而受損傷，有損傷的皮膚不宜用于此項試驗。將一定量中藥透皮劑均勻涂于家兔右側區(一般膏劑為1 2 g)，左側涂賦形劑(最佳配方中不含中藥的其他試劑)做對照。4 6 h (可根據供試品的性狀、使用情況而定)后，除去殘留的供試品(用水或適宜的溶劑，但不應該改變試驗造成皮膚反應的實際情況或表皮的完整性)后1、12、24、48、72 h檢查供試品對家兔皮膚的刺激反應。對紅斑及焦痂、水腫分別進行評分，評分標準為每只動物如無紅斑、無水腫，評分為0， 輕微紅斑、輕微水腫(勉強可見)評分為1，輕度紅斑、輕微水腫(隆起輪廓清楚)，評分為2， 中度紅斑、中度水腫(隆起約1cm)，評分為3，重度紅斑至輕度焦痂形成、嚴重水腫(隆起超過lcm，并超出敷藥面積)，評分為4。計算出每個時間點的平均分值。取各時間點中最高平均分值，并進行刺激強度的評價。分值< 0. 5，為無刺激性、> 0. 5 ^ 2. 0，為輕度刺激性、> 2. 0 ^ 6. 0，為中度刺激性、> 6. 0，為重度刺激性。結果表明該中藥透皮劑各時間點刺激平均分值小于0. 5，對家兔完整皮膚未出現明顯紅斑和水腫反應。(2)、中藥透皮劑的過敏性試驗
取健康的新西蘭大耳白兔6只，體重2.5 3.0 Kg，雌雄各半，于給藥前M h將家兔背部兩側去毛。去毛面積約3X3 cm，去毛后應檢查去毛皮膚是否因去毛而受損傷，有損傷的皮膚不宜用于此項試驗。家兔右側涂1 g中藥透皮劑，左側涂賦形劑做陰性對照，蓋上一層硫酸紙，用無刺激性膠布固定，6 h后去除固定物。隔日致敏1次，共3次。于末次接觸14 d后，再次涂抹藥物1 g，6 h后去除固定物，立即觀察，并分別于1、12、24、48、72 h觀察皮膚過敏反應出現的紅斑及焦痂、水腫等情況。通過致敏率(％)對藥物致敏強度進行分級，致敏率為0 8，為I級即弱致敏物、致敏率為9 28，為II級即輕度致敏物、致敏率為四 64，為III級即中度致敏物、致敏率為65 80，為IV級即強度致敏物、致敏率為81 100，為 V級即極強度致敏物。結果表明中藥透皮劑各時間點的致敏率為0%，中藥透皮劑對家兔完整皮膚為弱致敏物。
權利要求
1.一種治療奶牛隱性乳房炎的中藥透皮劑，其特征在于所述透皮劑為水包油型乳膏齊U，中藥復方組成為蒲公英、金銀花、瓜蔞、連翹、芙蓉花、黃芪、大黃、當歸；其用量重量份配比為 1 1 1 0. 6 0. 5 0. 3 0. 3 0. 2。
2.一種如權利要求1所述的治療奶牛隱性乳房炎的中藥透皮劑的制備方法，其特征在于它包括以下過程第一步為中藥液提取，即先取蒲公英、金銀花、瓜蔞、連翹、芙蓉花、黃芪、大黃、當歸，將所述的中藥原料用50%乙醇浸泡30 min，其中原料與乙醇的料液重量比 1 10 ；然后超聲15 min，回流提取2 h，紗布過濾，藥渣再加50%乙醇，其中料液重量比1 :8， 回流提取1 h，紗布過濾，合并濾液，旋轉蒸發至無醇味，加入石油醚萃取，水相濃縮至2 g/ mL，121 °C流通蒸汽滅菌15 min，滅菌后獲得的中藥提取液4 °C保存備用；第二步為水包油型乳膏劑制取，透皮劑基質中油相組成及重量配比為硬脂酸12 g、單硬脂酸甘油酯3. 5 g、羊毛脂5 g、凡士林2 g、石蠟6 mL ；水相組成及重量配比三乙醇胺0.3 ml、中藥提取液 28.5 ml，將上述所列量取的油相共置同一容器中，水浴80°C加熱；將水相放入另一容器中， 水浴80°C加熱，然后在等溫條件下將兩相混合，攪拌10 min，加入促透劑重量比為5%氮酮和重量比為10%丙二醇，再于室溫條件下攪拌至冷凝，即得中藥透皮劑。
3.根據權利要求2所述的治療奶牛隱性乳房炎的中藥透皮劑的制備方法，其特征在于瓜蔞、連翹、大黃混合前先粉碎為2mm直徑最粗粉，其用量為粉碎后的重量。
4.一種如權利要求1所述的治療奶牛隱性乳房炎的中藥透皮劑的使用方法，其特征在于經CMT檢測患有隱性乳房炎的奶牛每次擠乳后，先用熱毛巾擦拭乳房，然后每個患病乳區涂抹中藥透皮劑乳膏劑20 25 g，2次/ d，連續用藥5 d后，采取乳樣經CMT檢測，評價中藥治療效果，治愈強陽性(+ + + )或陽性(+ + )轉為陰性(-)或可疑(士)；有效強陽性(+ + + )或陽性(+ + )轉為弱陽性(+ )；無效治療后無明顯效果。
全文摘要
本發明公開了一種治療奶牛隱性乳房炎的中藥透皮劑及其制備方法，所述透皮劑為水包油型乳膏劑，組成為蒲公英、金銀花、瓜蔞、連翹、芙蓉花、黃芪、大黃、當歸；用量重量比1110.60.50.30.30.2。制備方法包括以下過程第一步為中藥液提取，將所述的中藥原料浸泡，超聲，回流提取，過濾，濾液旋轉蒸發至無醇味，加入石油醚萃取，水相濃縮，蒸汽滅菌獲得中藥提取液保存備用；第二步為水包油型乳膏劑制取，硬脂酸12g、單硬脂酸甘油酯3.5g、羊毛脂5g、凡士林2g、石蠟6mL；三乙醇胺0.3ml、中藥提取液28.5ml，加熱，混合，攪拌，加入促透劑攪拌至冷凝，即得中藥透皮劑。
文檔編號A61P15/14GK102475749SQ20101055415
公開日2012年5月30日 申請日期2010年11月23日 優先權日2010年11月23日
發明者何炳坤, 易瓊, 朱偉, 王魯, 郭慶 申請人:貴州大學