一種五味子總木脂素和總皂苷的快速制備方法

專利名稱：一種五味子總木脂素和總皂苷的快速制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種總木脂素和總皂苷的快速制備方法，根據該制備 方法所得的提取物，其五味子總木脂素和總皂苷的含量大于50%，用于防治失眠，提高免疫 力。
背景技術：
五味子的主要活性成分為木脂素類化合物和三萜化合物，早期的研究表明五味子 具有保肝、抗衰老等作用(湯臣康.五味子的化學和藥理研究的新進展[J].西北藥學雜志， 1994，9(6):278-觀2)，最近研究報道五味子的粗提物有抗腫瘤作用(劉耕陶.腫瘤抗藥性研 究新進展[J].醫學研究雜志，2008，37 (3))，禹潔等在提取分離五味子總木脂素的基礎上， 對純化后的總木脂素的體外抗腫瘤活性進行了研究，發現五味子總木脂素對乳腺癌及肝癌 細胞表現出極強的抑制作用，50μ g . ml/1的抑制率已高于50%，其中MCF-7的抑制率有較 明顯的劑量效應依賴關系，HepG2的劑量效應依賴關系不太明顯，而對食管癌的抑制作用稍 弱。(禹潔，劉培勛，龍偉等.五味子總木脂素的分離純化與體外抗腫瘤活性的研究[J].中 國藥師，2009，12 (12))；五味子三萜類化合物的生物活性主要有抗HIV，對腫瘤細胞的抑制作用，從S. Iancifolia.的莖葉中分離得到結構新穎的雙降三萜化合物顯示有微弱的抗HIV活性 (R. T. L, S. H. Li, Q. S. Zhao, Ζ. W. Lin, H. D. Sun, Y. Lu, C. Wang and Q. T. Zheng, Tetrahedron Lett. , 2003，44，3531.)；從 khinensis 中分離得到降三萜 Schintrilactone A 具有很強的活性，其 EC5tl 為 17. 9yg . mL_1 , Schintrilactone B 的 EC5。為 36. 2yg . mL “ 1 ,MicrandilactoneB 表現出很弱的抗 HIV-1 活性，EC50 > 50 μ g . mL “ 1 (Huang SX, Yang J, Huang H, et al. Structural Characterization of Schint rilactone, a New Class of Nortriterpenoids from Schisandra chinensis Org Lett , 2007，9 (21): 4175 4178) ；Pre_schisanartanin 具有很強的活性，EC5tl 為 13. 81 μ g .mL “ 1 (Huang SX, Li RT, Liu J P, et al Isolation and Characterization of Biogenetically Related Highly Oxygenated Nort riterpenoids from Schisandra chinensis Org Lett, 2007，9 (11) :2079 2082 )；從SfflicrafliAa 藤蓮中分離得到 的降三萜Micrandilactone C也顯示出較強的抗HIV - 1活性，EC5tl值為7. 71 μ g . mL “ 1 (Si > 29.54) (Li RT, Han QB ，Zheng YT, et al Structure and anti - HIV activity of micrandilactones B and C, new nortriterpenoids possessing a unique skeleton from Schisandra micrantha Chem Commun (Camb), 2005, 23:2936 2938)； 隊 Srubri f- Iora 藤莖中分得的 Rubrif lodilactone B 顯示出抗 HlV - 1 活性，EC5tl 為 9.75yg . mL “ ^選擇性系數(Si)為 12.39(Xiao WL, Yang LM, Gong NB, et al Rubriflordilactones A and B, Two Novel Bisnortriterpenoids from Schisandra rubrifIora and Their Biological Activities Org Lett, 2006, 8(5): 991 ~ 994)； Rubriflorin A, Rubriflorin B, Rubriflorin C 表現出完全不同的抗 HIV 活性。(XiaoWL, Li XL, Wang RR, et al Triterpenoids from Schisandra rubriflora J Nat Prod, 2007 , 70 (6) :1056 1059)；從父 sp henanthera 中分離得到的 Sphenalactone A， Sphenalactone B, Sphenalactone C, Sphenalactone D 具有較i看白勺抗 HIV—1 舌性，EC50^ 別為 89. 1,74. 1,52. 5,35. 5μ g . mL “1 (Xiao WL ,Yang LM, Li Μ, et al Sphenalactones A-D, a new class of highly oxygenated trinortriterpenoids from Schisandra sphenanthera Tetrahedron Lett, 2007, 48 (31): 5543 ~ 5546), Sphenadilactone C, 其 EC5tl 為 29.5yg . mL-1，選擇參數(CC5。/ EC5tl )為 6· 68 (Xiao WL, Huang SX, Wang RR, et al Nortriterpenoids and lignans from Schisandra sphenanthera Phytochemistry. 2008, 69(16):沘62 2866)；從父中得到的化合物Iancifodilactone H, lancifoic acid A，表現出具有一定潛在的抗HIV活性，EC50分別 % 16. 6, 16. 2 μ g . mL “ 1 (Xiao WL, Tian RR, Pu J X, et al Triterpenoids from Schisandralancifolia with Anti-HIV-I Activity J Nat Prod, 2006， 69(2): 277 279)；從中分離得至Ij的 Sphenalactone A , Sphenalactone B (Xiao WL, Yang LM, Li Μ, et al. Sphenalactones A-D, a new class of highly oxygenated trinortriterpenoids from Schisandra sphenanthera. Tetrahedron Lett, 2007, 48 (31): 5543 5546)，Sphenadilactone C (Xiao WL, Huang SX, Wang RR, et al. Nortriterpenoids and lignans from Schisandra sphenanthera. Phytochemistry, 2008，69(16):沘62 沘66)，對Hela、！feph毒株沒有明顯的抑制活性，IC5tl均大于 IOOyg · mL-1·在丨中分離得至Ij的 KadlongilactoneA , Kadlongilactone B對人體腫瘤細胞K562，Bel-7402和A549具有很強的抑制活性，IC50分別低于0.1，0. 1 ，禾口 1. Oyg . mL_1( Xiao WL, Li RT, Li SH, et al. Lancifodilactone F: A Novel Nortriterpenoids Possessing a Unique Skeleton from Schisandra lancifolia and It's Anti-HIV Activity. Org Lett, 2005，7 (7): 1263 1266)，但Kadcoccilactones A J 并沒有表現出抑制活性(IC5tl > 5yg . mL"1 ) (Gao ΧΜ, Pu JX, Huang SX, et al. Kadcoccilactones A-J, Triterpenoids from Kadsura coccinea. J Nat Prod, 2008，71 (7): 1182 1188)。從Λ heterocl ite藤莖中分離得到新的三萜內酯 heteroclitalactones A - F、schisanlactone B、E 對人類月中瘤細胞 Bel - 7402 ,BGC -823 ,MCF - 7 和 HL - 60 顯示中等細胞毒性(Wang W, Liu J, Han J, et al. New triterpenoids from Kadsuraheteroclita and their cytotoxic activity. Planta Med, 2006， 72 (5): 450 457)。
五味子果實、藤莖及五味子果柄是木蘭科五味子屬植物北五味子i/ra chinensis (Turcz. ) Baill.的果實、干燥藤莖及果柄，五味子果漿為五味子果實除掉種子 后的鮮果漿。
本研究小組已從五味子藤莖和果柄中分離到了和五味子果實中相同的木脂素，如 五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素和gomisin N等(中藥材 2009年7月第32卷第7期和中草藥2009年11月第40卷第11期)。
常見的有關五味子木脂素的提取方法如下溶劑提取浸提常用水、乙醇、丙酮、石油醚、氯仿及苯等作為提取溶劑，浸提耗時，費溶劑、工藝繁瑣，易存在溶劑殘留。
回流提取與索氏提取提取溫度高，時間長，由于提取過程中常伴隨分解、醇解、 水解、沉淀等反應的發生，對光、熱不穩定的物質易被破壞，難以穩定產品質量。
超聲波提取超聲波作為一種新型提取技術，因其具有強烈振動和空化效應，可以加速有效成分的 溶出，提取溫度不高，克服了傳統有機溶劑提取中有效成分因高溫劣變的可能，使得物質 活性不易被破壞，提取時間短，產率高，操作簡單，已在天然產物提取方面得到了廣泛的應用。
孟廣森采用超聲波提取養肝膠囊中的五味子醇甲，以甲醇為溶劑，料液比1: 40， 超聲功率250W，超聲20 min作為提取條件，結果表明此方法線形良好，平均加樣回收率為 96. 9%ο
微波萃取微波萃取或稱微波輔助萃取，是一種具有良好發展前景的萃取分離方法。其選擇性 好、萃取時間短、溶劑用量少、污染低，并且回收率高，已在環境分析、食品、化工、農業等領 域受到了極為廣泛的重視。
黃惠華等利用微波萃取五味子果實中的五味子醇甲，考察了萃取溶劑的優化，選 擇水和乙醇作為萃取溶劑。探討了萃取時間、萃取功率、料液比對五味子醇甲提取率的影 響，結果表明微波350W，5、min,液固比12 1最好，明顯優于傳統索氏提取，結合HPLC 測定了五味子醇甲含量。
超臨界CO2提取超臨界(X)2萃取以其無需溶劑、對環境無污染的“綠色”提取優勢，不僅在五味子活性成 分提取中站穩了一席之地，而且一直是分離技術中一個最活躍的領域。超臨界CO2臨界溫 度低，提取原料中的有效成分能被有效保存而不被破壞，特別適合用來提取對熱敏感、易 氧化分解的成分。另外，超臨界CO2萃取能力強，產率高。現已廣泛應用于食品工程、化 學工程、生物工程、環境保護等領域。楊蘇蓓利用超臨界CO2萃取技術，以華中五味子為研 究材料，五味子甲素、乙素、酯甲和醇甲為研究目標。通過對萃取壓力、溫度、CO2流量為三 因素正交設計，得出的最佳工藝為21 MPei，37°C，C02流量5 L/min。
鑒于以上提取方法有提取時間長，有效成分提取不完全，提取溫度高，有效成分易 被破壞，成本高等缺點，本實驗采用新型的閃式提取器進行提取，以提高提取效率，降低實 驗成本。
閃式提取技術是一種利用閃式提取器對于植物軟、硬材料快速提取的新型提取技 術。由于完成一次提取一般在1-3分鐘左右，比傳統方法更快速、簡便，故被稱之為閃式提 取。其原理是依靠機械剪切力和超動分子滲濾技術，在室溫及溶劑存在下數秒鐘內將植物 的根、莖、葉、花、果實等物料破碎至細微顆粒，并使有效成分迅速達到組織內外平衡，通過 過濾達到提取的目的。閃式提取技術能夠避免植物有效成分受熱破壞，具有溶劑用量小，提 取時間短，效率高等特點，是一種新興的中藥現代化提取關鍵技術。
目前，隨著人們保健意識的增強，國內外對于五味子的需求量越來越大，遼寧產五 味子藤莖資源豐富，在人工種植過程中每年有大量的藤莖被修剪下來，而果柄也被當成廢 棄物扔掉。如應用本發明專利技術——閃式提取技術對五味子果漿、藤莖和果柄中的功效成分進行純化并加以充分的研究和利用，將擴大五味子的藥食兩用資源，也具有重要的社會意義ο發明內容
本發明的目的是針對五味子果實資源緊缺，提供五味子果漿、藤莖和果柄提取物 的制備方法，作為五味子資源的補充，替代五味子果實提取物入藥或功能食品。
本發明是通過如下技術方案完成的I 一種五味子總木脂素和總皂苷的快速制備方法，是以木蘭科植物五味子AAimz^ra chinensis Bill的果實、果漿、果柄及藤莖為原料，經破碎加入倍量各種溶劑后，在低溫或 室溫下進行組織破碎、快速高效提取，應用閃式提取器提取，提取1分鐘-10分鐘內完成，提 取1-5次；加入溶劑量為藥材重量的1-15倍，提取溫度為20-60°C，提取時“調速旋鈕”旋轉 到“4-5”即提取時電壓為100-150V。
所用的溶劑可以是水、甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、 石油醚、正己烷等及它們的任意比例的混合溶劑。
組織破碎應為10-40目，加入的溶劑量為藥材的1-10倍。
所述的低溫或室溫指溫度為20-50°C (室溫)。
所述的快速高效提取指10分鐘內完成多次提取，即通常在提取1分鐘-3分鐘內 完成，提取2-3次；有效成分含量提高10-50%。
所用的提取器為河南金鼐公司生產的各類型號的快速提取裝置——閃式提取器。
其具體步驟如下(1)將五味子果實、果漿、藤莖和果柄干燥、粉碎，用10-95%的甲醇、乙醇、異丙醇或正 丁醇的一種進行閃式提取，提取液經減壓濃縮后用有機溶劑萃取，萃取液濃縮后得到的提 取物，其五味子總木脂素的含量均大于50% ；(2)將五味子果實、果漿、藤莖和果柄干燥、粉碎，用10-95%的甲醇、乙醇、異丙醇或正 丁醇的一種進行閃式提取，提取液經減壓濃縮后，采用大孔樹脂富集，用水、30%-70%的乙 醇、90%乙醇洗脫，分別收集70%和90%乙醇洗脫液，濃縮后得到的提取物，其五味子總皂苷 的含量均大于50%。
(3)將五味子果實、果漿、藤莖和果柄干燥、粉碎，分別用石油醚和正丁醇進行閃式 提取，提取液減壓濃縮得提取物，石油醚提取部分其五味子總木脂素的含量均大于50% ；正 丁醇提取部分其五味子總皂苷的含量均大于50%。
所述的有機溶劑為極性小于正丁醇的醚、醇、酯、酮；洗脫方式為單一或混合溶劑 的梯度洗脫。
所述的大孔吸附樹脂為苯乙烯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯、丙烯酸或氧化氮類大 孔樹脂中的一種或幾種。
依據以上工藝制備而得的提取物可以和藥學上可以接受的載體混合，制成各種臨 床可用的劑型。
本發明的有益效果本發明針對替代五味子果實提取物入藥或功能食品，充分利用五味子資源，緩解五味 子果實供不應求的狀況。
具體實施方式
下面的實施例可進一步說明本發明，但不以任何方式限制本發明。
實施例1 北五味子果實100g，粉碎，12倍量85%乙醇，閃式連續提取3次，2min/次，合并提取液， 抽濾，減壓濃縮至無醇味，用大孔樹脂柱富集，分別用水、70%乙醇洗脫、90%乙醇洗脫，分別 收集和減壓回收乙醇。加入適量水后90%乙醇洗脫部分用石油醚萃取，除去溶劑后得到含 量大于50%的五味子總木脂素；70%乙醇洗脫部分用正丁醇萃取，減壓除去溶劑后得到含量 大于50%的五味子總皂苷。
實施例2 北五味子藤莖100g，粉碎，12倍量85%乙醇，閃式連續提取3次，2min/次，合并提取液， 抽濾，減壓濃縮至無醇味，用大孔樹脂柱富集，分別用水、70%乙醇洗脫、90%乙醇洗脫，分別 收集和減壓回收乙醇。加入適量水后90%乙醇洗脫部分用石油醚萃取，除去溶劑后得到含 量大于50%的五味子總木脂素；70%乙醇洗脫部分用正丁醇萃取，減壓除去溶劑后得到含量 大于50%的五味子總皂苷。
實施例3:北五味子果柄100g，粉碎，12倍量85%乙醇，閃式連續提取3次，2min/次，合并提取液， 抽濾，減壓濃縮至無醇味，用大孔樹脂柱富集，分別用水、70%乙醇洗脫、90%乙醇洗脫，分別 收集和減壓回收乙醇。加入適量水后90%乙醇洗脫部分用石油醚萃取，除去溶劑后得到含 量大于50%的五味子總木脂素；70%乙醇洗脫部分用正丁醇萃取，減壓除去溶劑后得到含量 大于50%的五味子總皂苷。
實施例4 北五味子果漿100g，粉碎，12倍量85%乙醇，閃式連續提取3次，2min/次，合并提取液， 抽濾，減壓濃縮至無醇味，用大孔樹脂柱富集，分別用水、70%乙醇洗脫、90%乙醇洗脫，分別 收集和減壓回收乙醇。加入適量水后90%乙醇洗脫部分用石油醚萃取，除去溶劑后得到含 量大于50%的五味子總木脂素；70%乙醇洗脫部分用正丁醇萃取，減壓除去溶劑后得到含量 大于50%的五味子總皂苷。
實施例5 北五味子果實100g，粉碎，12倍量甲醇，閃式連續提取3次，2min/次，合并提取液，濾 過，除去溶劑后依次用二氯甲烷和正丁醇萃取3次。除去二氯甲烷后得到含量大于50%的五 味子總木脂素；正丁醇層萃取部分經減壓除去溶劑，在通過樹脂純化后得到含量大于50% 的五味子總皂苷。
實施例6 北五味子藤莖100g，粉碎，12倍量甲醇，閃式連續提取3次，2min/次，合并提取液，濾 過，除去溶劑后依次用二氯甲烷和正丁醇萃取3次。除去二氯甲烷后得到含量大于50%的 五味子總木脂素；正丁醇層萃取部分經減壓除去溶劑，在通過樹脂純化、70%乙醇洗脫后后 得到含量大于50%的五味子總皂苷。
實施例7 北五味子果柄100g，粉碎，12倍量甲醇，閃式連續提取3次，2min/次，合并提取液，濾過，除去溶劑后依次用二氯甲烷和正丁醇萃取3次。除去二氯甲烷后得到含量大于50%的 五味子總木脂素；正丁醇層萃取部分經減壓除去溶劑，在通過樹脂純化、70%乙醇洗脫后得 到含量大于50%的五味子總皂苷。
實施例8 北五味子果漿100g，粉碎，12倍量甲醇，閃式連續提取3次，2min/次，合并提取液，濾 過，除去溶劑后依次用二氯甲烷和正丁醇萃取3次。除去二氯甲烷后得到含量大于50%的 五味子總木脂素；正丁醇層萃取部分經減壓除去溶劑，在通過樹脂純化、70%乙醇洗脫后得 到含量大于50%的五味子總皂苷。
權利要求
1.一種五味子總木脂素和總皂苷的快速制備方法，是以木蘭科植物五味子AAiMZ7iZra chinensis Bill的果實、果漿、果柄及藤莖為原料，經破碎加入倍量各種溶劑后，在低溫或 室溫下進行組織破碎、快速高效提取，其特征在于，應用閃式提取器提取，提取1分鐘-10分 鐘內完成，提取1-5次；加入溶劑量為藥材重量的1-15倍，提取溫度為20-60°C，提取時“調 速旋鈕”旋轉到“4-5”即提取時電壓為100-150V。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所用的溶劑可以是水、甲醇、乙醇、丙 酮、正丁醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、石油醚、正己烷等及它們的任意比例的混合溶 劑。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，組織破碎應為10-40目。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，加入的溶劑量為藥材的1-10倍。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的低溫或室溫指溫度為20-50°C(室溫)。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的快速高效提取指10分鐘內完 成多次提取，即通常在提取1分鐘-3分鐘內完成，提取2-3次；有效成分含量提高10-50%。
7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，(1)將五味子果實、果漿、藤莖和果柄干燥、粉碎，用10-95%的甲醇、乙醇、異丙醇或正 丁醇的一種進行閃式提取，提取液經減壓濃縮后用有機溶劑萃取，萃取液濃縮后得到的提 取物，其五味子總木脂素和總皂苷的含量大于50% ；或(2)將五味子果實、果漿、藤莖和果柄干燥、粉碎，用10-95%的甲醇、乙醇、異丙醇 或正丁醇的一種進行閃式提取，提取液經減壓濃縮后，采用大孔樹脂富集，用水洗脫后用 30%-90%的乙醇洗脫，濃縮后得到的提取物，其五味子總皂苷的含量大于50%。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于所述的有機溶劑為極性小于正丁醇 的醚、醇、酯、酮；洗脫方式為單一或混合溶劑的梯度洗脫。
9.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于所述的大孔吸附樹脂為苯乙烯、丙烯 酸酯或甲基丙烯酸酯、丙烯酸或氧化氮類大孔樹脂中的一種或幾種。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，公開了一種五味子總木脂素和總皂苷的快速制備方法。該制備方法以中藥五味子果實(果漿)，五味子藤莖和果柄為原料，粉碎后加入倍量水和有機溶劑后在低溫(室溫)下和10分鐘內進行多次閃式提取，經有機溶劑萃取后得到含量大于50%的五味子總木脂素；經樹脂純化后制成含量大于50%的五味子總皂苷。本發明具有以下優點(1)有效成分含量高，且不被破壞；(2)提取的時間短，效率高；(3)能耗相對較低；(4)操作簡便，易于推廣使用。
文檔編號A61K135/00GK102028754SQ201010550340
公開日2011年4月27日 申請日期2010年11月19日 優先權日2010年11月19日
發明者劉延澤, 唐云, 曹家慶, 李巍, 趙余慶 申請人:沈陽藥科大學