專利名稱：一種刺梨多糖的電離輻射防護新用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及中藥有效部位刺梨多糖在電離輻射防護中的應用，屬于醫藥技術領 域。
背景技術：
惡性腫瘤患者是一類接觸射線的特殊人群，目前放射線療法仍然是治療腫瘤的重 要手段，據報道，我國約有70%惡性腫瘤患者需要放射線治療。另外，現實環境中人們受到 電離輻射的機會非常多，如天然高輻射地區生活的居民、經常接觸射線的醫務工作者、宇航 人員受到的空間輻射、核電站核泄漏事故等。長期過量的電離輻射將導致機體產生一系列 損傷，包括氧化應激損傷、造血系統的功能異常、免疫功能障礙及細胞DNA鏈斷裂、基因突 變、染色體重組、細胞轉化和細胞死亡等。因此，研究電離輻射損傷防治手段，尋找行之有效 的防治藥物，已引起人們的普遍關注。對于電離輻射防護劑的研究始于20世紀早期，目前，國際上已經發現了許多對電 離輻射具有防治作用的化學藥物和生物制劑，主要藥物有巰基類、維生素類、氨基酸類和抗 氧化類。隨著研究的深入，人們發現其中的很多藥物對健康細胞的毒害也較大，并可能誘發 其他病變。人們期待開發出療效顯著、毒副作用小的抗電離輻射藥物，于是人們開始重視從 天然產物中尋找。愈來愈多的藥用植物已經被證實具有明顯的電離輻射防護作用，現在已 發現的天然藥物抗電離輻射成分主要有多糖類、黃酮類物質、多酚類、皂苷類、生物堿、肽類 化合物。刺梨(Rosa roxburghii Tratt.)，為薔薇科植物縹絲花或單瓣縹絲花的果實，始 載于《本草綱目遺拾》，產于中國，現代研究表明其含有刺梨多糖、刺梨黃酮、Ne、SOD等活 性成分。Janse van Rensburg報道刺梨提取物的氧化應激的保護作用表現在抗氧化能力 的提高，體內谷胱甘肽氧化還原狀態的改變(Master thesis of Research Repository North-ffestUniversity, South Africa, 2003)；楊江濤等報道刺梨多糖可以劑量依賴性地 提高衰老小鼠體內抗氧化能力[營養學報，2008，30 (4) 407-409]；路筱濤報道刺梨多糖能 夠顯著提高小鼠抗疲勞、耐缺氧、耐高溫及耐低溫的能力，提高小鼠的免疫能力[廣州中醫 藥大學學報，2002，19 (2) :141-142]。電離輻射使組織和細胞中產生大量活性氧(ROS)，通 過直接和間接作用損傷生物大分子(如DNA，蛋白質，脂類等)，引起細胞死亡和機體功能喪 失，刺梨多糖具有抗氧化作用，可以通過清除自由基發揮電離輻射防護作用。本發明提供了 刺梨多糖的電離輻射防護新用途，現有技術未見報道。
發明內容
本發明的目的在于提供刺梨多糖預防及治療電離輻射損傷的新用途。本發明通過細胞、動物水平對刺梨多糖的抗電離輻射活性進行反復驗證，實驗結 果表明刺梨多糖可以抑制6°c。Y射線照射導致的V79細胞活力喪失，并能提高6°C。γ射線 SGy 一次全身照射昆明種小鼠的活存率，從而完成了本發明。
本發明中所述刺梨多糖為從植物中提取的有效部位，經測定多糖純度大于90%。刺梨多糖可與藥學上可接受的載體按本領域已知方法制備成各種藥物組合物，如 片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑等各種固體、液體制劑等；或和其他中藥有效成分組合制成各 種不同的劑型，通過不同的給藥途徑用于預防及治療電離輻射損傷。本發明的優點1.發現了刺梨多糖新的醫療用途。2.刺梨多糖作為刺梨的有效部位，天然存在于植物果實中，來源廣，原料易得，制 備工藝簡單，得率高，成本低，藥用前景廣闊。3.本發明將成為高效低毒抗電離輻射藥物的有益補充。
圖1刺梨多糖對V79細胞的細胞毒性圖2不同濃度的刺梨多糖對6°C0 γ射線5Gy照射的V79細胞存活率的影響圖3刺梨多糖對6°C。γ射線5Gy照射的V79細胞凋亡率的影響圖4刺梨多糖對6°C。γ射線SGy照射的昆明小鼠30天存活率的影響
具體實施例方式下面結合實施案例對本發明作進一步的說明[實施例一]刺梨多糖對V79細胞的細胞毒性檢測細胞特征中國倉鼠肺成纖維細胞V79，貼壁生長，倍增時間12-14小時。1.培養條件細胞培養于DMEM培養液(含10% FBS, 100U/mL青霉素和100U/mL鏈霉素)，37°C、 5% CO2培養箱，2-3天更換培養液，推薦細胞培養密度l_2X105/mL。2.藥物準備將刺梨多糖用DMEM培養液溶解，超聲助溶，配置儲存濃度10mg/ml母液備用。3.毒性檢測取對數生長期V79細胞(1 X IO5個/mL)接種于96孔培養板，100 μ L/孔，每孔藥 物100 μ L，使藥物終濃度為2000、1000、500、100、50、25、12. 5μ g/mL(簡稱藥物組)，每濃 度6孔，另設空白對照組細胞懸液。于藥物作用48h后每孔中加入CCK-8溶液10 μ L，繼 續培養4h，于多功能酶標儀490nm處測定各孔吸光值。細胞存活率％ = A實驗組/A正常 組X 100%;同時在倒置顯微鏡下每日觀察細胞形態。結果，藥物組細胞形態與對照組細胞 形態沒有明顯的變化，數據用spss 16. O進行統計分析，與正常組相比#，P< 0.05。表明， 刺梨多糖在最高濃度lmg/mL以下無明顯細胞毒性。(見附圖1)[實施例二]刺梨多糖對6°C。γ射線導致的V79細胞活力喪失的保護作用1.不同濃度藥物對V79細胞的電離輻射防護作用取對數生長期V79細胞(1 X IO5個/mL)接種于96孔培養板，100 μ L/孔，每孔藥 物100 μ L，使藥物終濃度為400、200、100、50、25、12· 5μ g/mL，每濃度6孔，另設空白對照 組細胞懸液、輻照組細胞懸液。于藥物作用24h后5Gy輻照，照后24h于每孔中加入CCK-8 溶液10 μ L，繼續培養4h，于多功能酶標儀490nm處測定各孔吸光值。與輻照組相比··#，P< 0. 05 ；##, P < 0. 01。結果表明，刺梨多糖在12. 5-200 μ g/mL對6°C0 γ射線5Gy照射的 V79細胞活力喪失呈劑量依賴的保護作用，對V79細胞電離輻射防護的最優濃度為200 μ g/mL。(見附圖2)2. Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡取對數生長期V79細胞(IX IO6個/mL)接種于6孔培養板，根據實驗篩選的結果 采用200 μ g/mL的刺梨多糖處理細胞，于藥物作用24h后5Gy輻照，照后24h分別收集正 常組、輻照組和藥物組細胞，離心lOOOrpm，IOmin,棄上清，用預冷的PBS洗滌2次后懸浮在 200 μ L Binding Buffer 中，加入 IOyL Annexin V-FITC，輕輕搖勻，室溫避光反應 15min， 加入300 μ L Binding Buffei^PSyL PI，然后樣品用流式細胞儀進行分析。結果表明，正 常組、輻照組、藥物組的細胞凋亡率分別為5. 21%、38. 94%,8. 36%，刺梨多糖具有明顯降 低電離輻射引起的細胞凋亡率的作用。(左下限為正常細胞，右下限為凋亡早期，右上限為 凋亡中晚期，左上限為壞死區)。(見附圖3)[實施例三]刺梨多糖對6°C。Y射線SGy—次全身照射昆明種小鼠存活率的影響動物分組、給藥及照射將雄性昆明種小鼠適應環境后根據需要分為正常組、照射組、陽性藥組和藥物組， 每組10只。正常組和照射組灌胃給予蒸餾水，藥物組照前灌胃給予相應藥物，連續6天，陽 性藥組照前24h灌胃給予“523”一次，劑量5mg/kg，給藥后全身一次性照射，劑量為8Gy，照 后連續觀察30天。結果表明，刺梨多糖100mg/kg給予小鼠，30天存活率可達到90%，動物 實驗再次表明刺梨多糖的較強的電離輻射防護作用。(見表1，附圖4)表1刺梨多糖對6°C。γ射線SGy照射的昆明小鼠30天存活率和存活時間的影響
權利要求
刺梨多糖用于細胞及動物電離輻射防護的實驗。
2.根據權利要求1所述的刺梨多糖具有電離輻射防護的活性。
3.根據權利要求2所述的應用方面在于有效劑量的刺梨多糖可以和一種或多種符合 藥典規定的其它藥用成分及藥用賦形劑制成制劑，用于電離輻射的預防和治療。
4.根據權利要求3所述的藥物制劑，其包括含有 99%的刺梨多糖和99% 的藥用賦形劑及其它可組方的藥物制成口服制劑的劑型。
5.根據權利要求4所述的口服制劑包括片劑，丸劑，膠囊劑，軟膠囊劑，顆粒劑，混懸 劑，滴丸的任何一種。
6.根據權利要求5所述的制劑，活性成分為刺梨多糖。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，提供了一種刺梨多糖的電離輻射防護新用途。通過水提醇沉的方法，制備刺梨多糖，經過細胞及動物的電離輻射防護實驗，證明刺梨多糖在小于1000μg/mL濃度范圍內對V79細胞無毒性；在12.5-200μg/mL對60Coγ射線導致V79細胞活力喪失呈劑量依賴的抑制作用；預防性給予50、100mg/kg可劑量依賴的提高60Coγ射線8Gy照射昆明小鼠的活存率，說明刺梨多糖具有電離輻射防護的藥用活性。為開發新的口服途徑給藥的電離輻射防護藥物奠定了堅實的基礎。
文檔編號A61K31/715GK101983633SQ20101055031
公開日2011年3月9日 申請日期2010年11月19日 優先權日2010年11月19日
發明者張疆莉, 徐萍, 楊春廣, 閻璽慶, 馬素英 申請人:新鄉醫學院