專利名稱：一種胰島素過敏原檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測試劑盒，尤其是涉及一種胰島素過敏原檢測試劑盒。
技術背景
隨著經濟的發展、生活方式的改變，糖尿病已經成為全球的公共衛生問題，而胰島 素是糖尿病治療必不可少的藥物。由于動物胰島素與人胰島素氨基酸組成的差異，使其具 有抗原性，導致臨床中糖尿病人對胰島素過敏的現象屢有發生。基因重組人胰島素及人胰 島素類似物的問世，過敏反應明顯減少。但是，隨著近年來基因重組人胰島素及類似物的廣 泛應用，過敏反應并不少見。對于糖尿病患者胰島素過敏的治療，目前，國內沒有統一的方 法，只是調整胰島素種類、劑型，應用抗組胺藥物、糖皮質激素、皮試脫敏治療。
能夠第一時間診斷胰島素過敏，同時明確過敏原對于胰島素過敏的治療非常重 要，它能指導醫生進行正確、及時的判斷并給予相應的治療，從而避免對病情的延誤，同時 減少病人的痛苦和經濟負擔。
目前，對于胰島素過敏患者過敏原的檢測國內外尚無統一標準和檢測方法，一般 僅通過不斷更換胰島素劑型來判斷過敏成分，如此既耗時又增加費用，同時不利于血糖控 制，增加病人身心痛苦及經濟負擔，個別病人甚至危及生命。發明內容
本發明主要是解決現有技術所存在的問題即對于胰島素過敏患者過敏原的檢測 國內外尚無統一標準和檢測方法，一般僅通過不斷更換胰島素劑型來推測過敏成分，如此 既耗時又增加費用，同時不利于血糖控制，增加病人身心痛苦及經濟負擔；本發明提供了一 種可以非常迅速的進行胰島素過敏原檢測的方法，操作簡單，結果迅速、準確，費用低，非常 適合于臨床推廣應用，為臨床和科研工作提供了一種非常有價值的檢測手段的一種胰島素 過敏原檢測試劑盒。
本發明的上述技術問題主要是通過下述技術方案得以解決的
—種胰島素過敏原檢測試劑盒，其特征在于，包括以下成分
重組人胰島素1. 0ml，濃度為5U/ml ；
門冬胰島素1. 0ml，濃度為5U/ml ；
賴脯胰島素1. 0ml，濃度為5U/ml ；
甘精胰島素1. 0ml，濃度為5U/ml ；
豬胰島素1. 0ml，濃度為5U/ml ；
精蛋S 1.0ml,濃度為 350ug/ml ；
間甲酚1. 0ml，濃度為 3mg/ml ；
氯化鋅1. 0ml，濃度為 50ug/ml ；
對羥基苯甲酸脂1. 0ml，濃度為lmg/ml ；
苯酸1. 0ml，濃度為 2mg/ml ；
低精蛋白1. 0ml，濃度為2. 4mg/ml
磷酸組胺溶液1. Oml，濃度為0. lmg/ml ；
生理鹽水1. 0ml，濃度為0. 9% ；
所述的磷酸組胺溶液為陽性對照液；所述的0. 9%生理鹽水為陰性對照液。
因此，本發明具有如下優點可以非常迅速的進行胰島素過敏原的檢測，操作簡 單，結果直接、準確，成本低，特別適合于臨床推廣應用，為臨床和科研工作提供了一種非常 有價值的檢測方法。
具體實施方式
下面通過實施例，并結合附圖
，對本發明的技術方案作進一步具體的說明。
實施例
本發明的胰島素過敏原檢測試劑盒的制備方法包括如下步驟
(1)按照上述濃度要求配制重組人胰島素、門冬胰島素、賴脯胰島素、甘精胰島素 及豬胰島素稀釋液，
(2)按照上述濃度要求配制精蛋白、間甲酚、氯化鋅、對羥基苯甲酸脂、苯酸、低精 蛋白稀釋液，
(3)按照上述濃度要求配制磷酸組胺稀釋液，
(4)取重組人胰島素、門冬胰島素、賴脯胰島素、甘精胰島素、豬胰島素、精蛋白、間 甲酚、氯化鋅、對羥基苯甲酸脂、苯酸、低精蛋白及磷酸組胺溶液1.0ml，0. 9%生理鹽水Iml 作為一個檢測試劑盒。
胰島素過敏原檢測試劑盒，包括以下成分
重組人胰島素1. 0ml，濃度為5U/ml ；
門冬胰島素1. 0ml，濃度為5U/ml ；
賴脯胰島素1. 0ml，濃度為5U/ml ；
甘精胰島素1. 0ml，濃度為5U/ml ；
豬胰島素1. 0ml，濃度為5U/ml ；
精蛋白1. Oml，濃度為 350ug/ml ；
間甲酚1. 0ml，濃度為;3mg/ml ；
氯化鋅1. Oml，濃度為 50ug/ml ；
對羥基苯甲酸脂1. 0ml，濃度為lmg/ml ；
苯酸1. Oml，濃度為 ang/ml ；
低精蛋白1. 0ml，濃度為2. 4mg/ml
磷酸組胺溶液1. Oml，濃度為0. lmg/ml ；
0. 9% 生理鹽水 1. Oml ；
其中磷酸組胺溶液為陽性對照液；0. 9%生理鹽水為陰性對照液。
在本實施例中，本發明的胰島素過敏原檢測試劑盒，其組成包括重組人胰島素、 門冬胰島素、賴脯胰島素、甘精胰島素和豬胰島素，以及精蛋白，間甲酚，氯化鋅，對羥基苯 甲酸脂，苯酸，低精蛋白。磷酸組胺和0.9%生理鹽水分別作為陽性和陰性對照液。其中，重 組人胰島素、門冬胰島素、賴脯胰島素、甘精胰島素和豬胰島素均為1.0ml，濃度5U/ml ；精蛋白，間甲酚，氯化鋅，對羥基苯甲酸脂，苯酸，低精蛋白均為1.0ml，濃度分別為350ug/ml， 3mg/ml，50ug/ml，lmg/ml, 2mg/ml, 2. 4mg/ml ；組胺溶液 1. 0ml，濃度為 0. lmg/ml，0. 9%生理 鹽水Iml。
在本實施例中，上述配置步驟中(1)的具體操作如下
配制重組人胰島素(5U/ml)、門冬胰島素(5U/ml)、賴脯胰島素(5U/ml)、甘精胰 島素(5U/ml)、豬胰島素(5U/ml)。胰島素原液門冬胰島素采用丹麥諾和諾德公司-諾 和銳，規格300U/3ml、賴脯胰島素采用美國禮來公司-優泌樂，規格300U/3ml、甘精胰島素 采用賽諾菲安萬特公司-來得時，規格300U/3ml ；重組人胰島素采用諾和諾德公司，規格 300U/3ml ；豬胰島素即普通胰島素(上海生化制藥廠)，規格400U/10ml，瓶裝。具體步驟如 下
分別取500U (即5ml，普通胰島素為12. 5ml)上述胰島素原液放入IOOml的容量瓶 中，加入注射用水(蒸餾水或去離子蒸餾水)稀釋至100ml，既得到濃度為5U/ml的稀釋液 (皮試液)。
在本實施例中，上述配置步驟中O)的具體操作如下
配制精蛋白(350ug/ml)，間甲酚(3mg/ml)，氯化鋅(50ug/ml)，對羥基苯甲酸脂 (lmg/ml)，苯酸(2mg/ml)，低精蛋白(2. %ig/ml)，磷酸組胺(0. lmg/ml)溶液。具體步驟如 下
A.準確稱量35mg精蛋白，加入注射用水溶于20ml燒杯中，將燒杯中的溶液倒入 IOOml的容量瓶中，用注射用水洗滌燒杯2-3次并將洗滌液倒入容量瓶中，加入注射用水定 容至100ml，既得所需精蛋白溶液(350ug/ml)；
B.準確稱量300mg間甲酚，加入注射用水溶于20ml燒杯中，將燒杯中的溶液倒入 IOOml的容量瓶中，用注射用水洗滌燒杯2-3次并將洗滌液倒入容量瓶中，加入注射用水定 容至100ml，既得所需間甲酚溶液(3mg/ml)；
C.準確稱量5mg氯化鋅，加入注射用水溶于20ml燒杯中，將燒杯中的溶液倒入 IOOml的容量瓶中，用注射用水洗滌燒杯2-3次并將洗滌液倒入容量瓶中，加入注射用水定 容至100ml，既得所需氯化鋅溶液(50ug/ml)；
D.準確稱量IOOmg對羥基苯甲酸脂，加入注射用水溶于20ml燒杯中，將燒杯中的 溶液倒入IOOml的容量瓶中，用注射用水洗滌燒杯2-3次并將洗滌液倒入容量瓶中，加入注 射用水定容至100ml，既得所需羥基苯甲酸脂溶液(lmg/ml)；
E.準確稱量200mg苯酸，加入注射用水溶于20ml燒杯中，將燒杯中的溶液倒入 IOOml的容量瓶中，用注射用水洗滌燒杯2-3次并將洗滌液倒入容量瓶中，加入注射用水定 容至100ml，既得所需苯酸溶液Omg/ml)；
F.準確稱量MOmg低精蛋白，加入注射用水溶于20ml燒杯中，將燒杯中的溶液倒 入IOOml的容量瓶中，用注射用水洗滌燒杯2-3次并將洗滌液倒入容量瓶中，加入注射用水 定容至100ml，既得所需低精蛋白溶液(2.%ig/ml)；
G.準確稱量IOmg組胺基質，加入注射用水溶于20ml燒杯中，將燒杯中的溶液倒入 IOOml的容量瓶中，用注射用水洗滌燒杯2-3次并將洗滌液倒入容量瓶中，加入注射用水定 容至100ml，既得所需磷酸組胺溶液(0. lmg/ml)。
本實施例中，檢測試劑盒總共有13種小瓶裝液體(11種皮試液和2種對照液)，具體如下
皮試液包括
a、門冬胰島素，5U/ml，l 瓶(Iml)
b、賴脯胰島素，5U/ml，l 瓶(Iml)
C、甘精胰島素，5U/ml，l 瓶(Iml)
d、重組人胰島素，5U/ml，1瓶(Iml)
e、豬胰島素，5U/ml，l 瓶(Iml)
f、精蛋白，350ug/ml，l 瓶(Iml)
g、間甲酚，3mg/ml，l 瓶(Iml)
h、氯化鋅，50ug/ml，1 瓶(Iml)
i、對羥基苯甲酸脂，lmg/ml，1瓶(Iml)
j、苯酸，2mg/ml，l 瓶(Iml)
k、低精蛋白，2.%ig/ml，l 瓶(Iml)
對照液包括
a、磷酸組胺，0. lmg/ml，1 瓶(Iml)
b、0. 9%生理鹽水，1 瓶(Iml)
本發明的試劑盒使用方法，具體步驟如下
(1)皮試方法及結果觀察(皮內試驗)A. —般選擇前臂進行皮試，用75%酒精消 毒皮試處皮膚。B.抽取皮試液0.05ml，皮內注射成一皮丘。C. 15-20分鐘后，如局部出現紅 腫、紅暈或伴有小水泡、皮下硬結者為陽性。對可疑陽性者，應在另一前臂用組胺和生理鹽 水做對照試驗。
(2)注意事項a.極少數患者可在皮膚試驗時發生過敏性休克，常于注射后數秒至 5分鐘內開始。應做好搶救準備，如止血帶、腎上腺素、氫化可的松、多巴胺、氧氣、氣管切開 包等，皮試前選擇大靜脈留置靜脈通道，如迅速發生胰島素過敏時，可快速給予抗過敏藥物 及搶救藥物。b.試劑盒應在常溫冰箱中保存。
本發明胰島素過敏原檢測試劑盒，可以非常迅速的進行胰島素過敏原的檢測，操 作方便，結果準確，成本低，適合于臨床推廣應用，為臨床和科研工作提供了一種非常有價 值的檢測手段。
本發明的試劑盒檢測種類基本涵蓋目前市售胰島素種類及添加劑成分。
本發明試劑盒檢測試劑濃度均為檢測標準濃度，可達到檢測最佳效果。
本發明的試劑盒包括陰性和陽性對照液，對于準確判斷過敏原具有非常可靠的參 考價值。
本文中所描述的具體實施例僅僅是對本發明精神作舉例說明。本發明所屬技術領 域的技術人員可以對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補充或采用類似的方式替 代，但并不會偏離本發明的精神或者超越所附權利要求書所定義的范圍。
權利要求
1.一種胰島素過敏原檢測試劑盒，其特征在于，包括以下成分 重組人胰島素0. 5ml，濃度為5U/ml ；重組人胰島素類似物0. 5ml，濃度為5U/ml ； 豬胰島素0. 5ml，濃度為5U/ml ； 胰島素添加劑0. 5ml 3ml，濃度50ug/ml 3mg/ml ； 對照液 Iml 2ml，濃度 0. 01mg/ml 0. 9mg/ml ；
2.根據權利要求1所述的胰島素過敏原檢測試劑盒，其特征在于，所述的重組人胰島 素(諾和靈R)0. 5ml，濃度為5U/ml。
3.根據權利要求1所述的胰島素過敏原檢測試劑盒，其特征在于，所述的重組人胰島 素類似物為門冬胰島素、賴脯胰島素、甘精胰島素，其中門冬胰島素0. &nl，濃度為5U/ml ； 賴脯胰島素0. &nl，濃度為5U/ml ； 甘精胰島素0. &nl，濃度為5U/ml。
4.根據權利要求1所述的胰島素過敏原檢測試劑盒，其特征在于，豬胰島素0.&iil，濃 度為5U/ml ；
5.根據權利要求1所述的胰島素過敏原檢測試劑盒，其特征在于，人胰島素添加劑包 括精蛋白、間甲酚、鋅、對羥基苯甲酸脂、苯酸、低精蛋白；其中，精蛋白0. 5ml，濃度為350ug/ml ； 間甲酚0. 5ml濃度為:3mg/ml ； 鋅 0. 5ml 濃度為 50ug/ml ； 對羥基苯甲酸脂0. 5ml濃度為lmg/ml ； 苯酸0. 5ml濃度為2mg/ml。
6.根據權利要求1所述的胰島素過敏原檢測試劑盒，其特征在于，所述的對照液包括 組胺溶液1ml，濃度為0. lmg/ml或0. Olmg/ml ；生理鹽水Iml ；濃度為0.9% ；所述的組胺為陽性對照液；所述的生理鹽水溶液為陰性對照液。
全文摘要
本發明涉及一種檢測試劑盒，尤其是涉及一種胰島素過敏原檢測試劑盒。本發明的胰島素過敏原檢測試劑盒，其組成包括重組人胰島素及人胰島素類似物(門冬胰島素、賴脯胰島素、甘精胰島素)和豬胰島素，以及各種胰島素添加劑，包括精蛋白、間甲酚、鋅、對羥基苯甲酸脂、苯酸、低精蛋白。組胺和鹽溶液分別作為陽性和陰性對照液。因此，本發明具有如下優點可以非常迅速的進行胰島素過敏原的檢測，操作簡單，結果準確，成本低，適合于臨床推廣應用，為臨床和科研工作提供了一種非常有價值的實用檢測方法。
文檔編號A61K49/00GK102038962SQ201010530279
公開日2011年5月4日 申請日期2010年10月29日 優先權日2010年10月29日
發明者楊寶峰, 閆爽 申請人:哈爾濱醫科大學