專利名稱：一種制備茶皂苷元的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品和醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種制備茶皂苷元的方法。
技術(shù)背景
茶皂苷是茶籽或油茶籽中一種主要的五環(huán)三萜化合物。日本人青山新次郎于1931 年首次從茶籽中分離獲得茶皂苷化合物結(jié)構(gòu)，它由皂苷元、糖體和有機(jī)酸三部分組成的。茶 皂苷具有抗菌、抗炎、抗氧化等多種生物活性。我國(guó)是油茶高產(chǎn)的國(guó)家，油茶籽中皂素的含 量占12%，具有較大的開發(fā)價(jià)值。
國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的油茶皂苷多以油茶籽為原料，將油茶籽脫脂后經(jīng)甲醇水或乙醇水提 取、干燥所得，其茶皂苷的含量只有50 70%。經(jīng)過技術(shù)改進(jìn)，茶皂苷可直接從茶籽餅 浸提液中用苯乙烯型共聚樹脂或大孔樹脂吸附分離(中國(guó)專利CN1148598、中國(guó)專利申請(qǐng) 200810011095. 1、中國(guó)專利申請(qǐng)200810220573. X)，或用大孔樹脂與茶皂苷的低濃度有機(jī)溶 劑提取液共回流提取(中國(guó)專利申請(qǐng)200710168737. 4)，或采用超聲波法提取茶皂苷(中國(guó) 專利CN170686;3)、或采用超濾膜法提取茶皂苷(中國(guó)專利申請(qǐng)2009100^997. 9)。但以上 方法所獲得的均為茶皂苷產(chǎn)品，還沒有對(duì)茶皂苷元進(jìn)行分離和制備的報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，提供一種可有效地分離純化茶皂 苷元，又便于工業(yè)化生產(chǎn)的制備茶皂苷元的方法。
本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
一種制備茶皂苷元的方法，包括下述步驟
(1)將茶皂苷水溶液過大孔樹脂，用溶劑洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中添加有機(jī)溶劑，使茶皂苷沉淀析出，收集沉淀物；
(3)向沉淀物中加入醇?jí)A液或醇酸液，回流提??；
(4)將提取液的PH值調(diào)節(jié)至酸性，靜置，收集沉淀；
(5)用有機(jī)溶劑溶解沉淀，并結(jié)晶和重結(jié)晶；
(6)將結(jié)晶物干燥，得到茶皂苷元。
步驟(1)中，所述茶皂苷是自茶葉、茶籽或油茶籽中提取的或自脫脂茶籽中提取 的茶皂苷水劑或固體干燥物。
步驟⑴中，所述大孔樹脂為弱極性或非極性大孔樹脂。
步驟(1)中，所述洗脫溶劑是體積分?jǐn)?shù)為50 70%的甲醇水溶液、乙醇水溶液或 丙酮水溶液。
步驟O)中，所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇或丙酮。
步驟(3)中，所述醇液是體積分?jǐn)?shù)為50 80%乙醇水溶液或甲醇水溶液，醇液加 入量為沉淀物的5 10倍質(zhì)量，提取溫度70 80°C，提取時(shí)間2 8小時(shí)。
步驟(3)中，所述醇?jí)A液中含有占醇?jí)A液質(zhì)量2 5%的氫氧化鈉或氫氧化鉀。
步驟(3)中，所述醇酸液中含有占醇酸液體積2 5%的鹽酸。
步驟中，所述提取液的pH值調(diào)節(jié)為2 5，采用鹽酸進(jìn)行調(diào)節(jié)。
步驟(5)中，所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙酮或乙醚。
采用上述方法制備得到的茶皂苷元，其純度可達(dá)90 98%。
上述方法制備得到的茶皂苷元可用于制備抗氧化、抗炎鎮(zhèn)痛的藥物制劑。
上述方法制備得到的茶皂苷元可與藥用輔料或藥學(xué)上可配伍的藥物制成抗氧化、 抗炎鎮(zhèn)痛的藥物制劑。
所述藥物制劑為外用、口服或注射用藥劑型的任何一種。
所述藥物制劑為含有茶皂苷元的單方或復(fù)方制劑。
茶皂苷元是茶皂苷分子結(jié)構(gòu)中基本結(jié)構(gòu)單元，是茶皂苷經(jīng)水解、分離制備后形成 的產(chǎn)品。茶皂苷元與原茶皂苷在活性上有較大的不同。茶皂苷元較茶皂苷性質(zhì)穩(wěn)定、脂溶 性增強(qiáng)。茶皂苷元的制備，有利于其衍生為新化合物。
本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果
(1)本發(fā)明以茶皂苷為原料，經(jīng)過大孔樹脂處理后，再進(jìn)行酸解或堿解處理，避免 了膠質(zhì)、蛋白等成分的干擾，得到的茶皂苷元純度高。
(2)本發(fā)明采用醇酸或醇?jí)A處理，可避免直接酸堿處理導(dǎo)致的茶皂苷元結(jié)構(gòu)的破 壞，維持了其結(jié)構(gòu)完整性。
(3)本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和，便于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
實(shí)施例1
(1) IKg的茶皂苷固體，加入50L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂 D101，然后用體積分?jǐn)?shù)50%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入乙醇，使沉淀析出，離心收集沉淀；
(3)加入沉淀物5倍質(zhì)量的體積分?jǐn)?shù)50 %乙醇水溶液，該乙醇水溶液含有2 %質(zhì)量 的氫氧化鈉，80°C回流提取3小時(shí)；
(4)向提取液中加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至5，靜置沉淀，離心收集沉淀；
(5)將沉淀用甲醇溶解，加入丙酮后結(jié)晶和重結(jié)晶；
(6)將結(jié)晶物真空干燥，制得153g的茶皂苷元。
產(chǎn)品經(jīng)HPLC法測(cè)定，測(cè)定條件色譜柱0DS 250mmX4. 6mm,柱溫25°C，流動(dòng)相 水乙腈=3 7。流速:lmL/min，進(jìn)樣體積10 μ L，檢測(cè)波長(zhǎng)209nm，運(yùn)行時(shí)間25min。以 相對(duì)峰面積百分率計(jì)算得茶皂苷元的純度為93%。
實(shí)施例2
(1) IKg的茶皂苷固體，加入50L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂 AB-8，然后用體積分?jǐn)?shù)70%甲醇水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入甲醇，使沉淀析出，離心收集沉淀；
(3)加入沉淀物8倍質(zhì)量的體積分?jǐn)?shù)80 %甲醇水溶液，該甲醇水溶液含有5 %質(zhì)量 的氫氧化鈉，70°C回流提取5小時(shí)；
(4)向提取液中加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至2，靜置沉淀，離心收集沉淀；
(5)將沉淀用甲醇溶解，加入乙醚后結(jié)晶和重結(jié)晶；
(6)將結(jié)晶物真空干燥，制得162g的茶皂苷元。
茶皂苷元的純度為96% (純度測(cè)定方法同實(shí)施例1)。
實(shí)施例3
(1) IKg的茶皂苷固體，加入50L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂X-5， 然后用體積分?jǐn)?shù)60%丙酮水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入丙酮，使沉淀析出，離心收集沉淀；
(3)加入沉淀物10倍質(zhì)量的體積分?jǐn)?shù)70%乙醇水溶液，該乙醇水溶液含有3%質(zhì) 量的氫氧化鉀，80°C回流提取8小時(shí)；
(4)向提取液中加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至3，靜置沉淀，離心收集沉淀；
(5)將沉淀用乙醇溶解，加入乙醚后結(jié)晶和重結(jié)晶；
(6)將結(jié)晶物真空干燥，制得147g的茶皂苷元。
茶皂苷元的純度為98% (純度測(cè)定方法同實(shí)施例1)。
實(shí)施例4
(1) IKg的茶皂苷固體，加入30L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂 D101，然后用體積分?jǐn)?shù)60%乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入乙醇，使沉淀析出，離心收集沉淀；
(3)加入沉淀物5倍質(zhì)量的體積分?jǐn)?shù)50 %甲醇水溶液，該甲醇水溶液含有2 %體積 的鹽酸，80°C回流提取2小時(shí)；
(4)靜置沉淀，離心收集沉淀；
(5)將沉淀用甲醇溶解，加入丙酮后結(jié)晶和重結(jié)晶；
(6)將結(jié)晶物真空干燥，制得178g的茶皂苷元。
茶皂苷元的純度為90% (純度測(cè)定方法同實(shí)施例1)。
實(shí)施例5
(1) IKg的茶皂苷固體，加入30L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂 AB-8，然后用體積分?jǐn)?shù)80%甲醇水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入甲醇，使沉淀析出，離心收集沉淀；
(3)加入沉淀物8倍質(zhì)量的體積分?jǐn)?shù)60 %甲醇水溶液，該甲醇水溶液含有5 %體積 的鹽酸，80°C回流提取3小時(shí)；
(4)靜置沉淀，離心收集沉淀；
(5)將沉淀用乙醇溶解，加入丙酮后結(jié)晶和重結(jié)晶；
(6)將結(jié)晶物真空干燥，制得165g的茶皂苷元。
茶皂苷元的純度為92% (純度測(cè)定方法同實(shí)施例1)。
實(shí)施例6
(1) IKg的茶皂苷固體，加入30L的水，輕攪拌使之溶解。將該溶液過大孔樹脂X_5， 然后用體積分?jǐn)?shù)50%丙酮水溶液洗脫，收集洗脫液；
(2)向洗脫液中加入丙酮，使沉淀析出，離心收集沉淀；
(3)加入沉淀物10倍質(zhì)量的體積分?jǐn)?shù)80%甲醇水溶液，該甲醇水溶液含有4%體積的鹽酸，70°C回流提取4小時(shí)；
(4)靜置沉淀，離心收集沉淀；
(5)將沉淀用甲醇溶解，加入乙醚后結(jié)晶和重結(jié)晶；
(6)將結(jié)晶物真空干燥，制得149g的茶皂苷元。
茶皂苷元的純度為97% (純度測(cè)定方法同實(shí)施例1)。
實(shí)施例7
稱取實(shí)施例1制得的茶皂苷元100g，加入藥用淀粉、糖粉和糊精按質(zhì)量比 7:2: 1組成的混合物300g，混合均勻，濕法制粒，用水調(diào)節(jié)，制得顆粒松散，便于壓片狀 態(tài)，過20目篩，晾干。加20g硬脂酸鎂，壓片，即得茶皂苷元的片劑。
實(shí)施例8
稱取實(shí)施例2制得的茶皂苷元100g，加入藥用微晶纖維素200g，混合均勻，濕法制 粒，用水調(diào)節(jié)，制得顆粒松散過20目篩，晾干。干燥后填充膠囊。即得茶皂苷元的膠囊劑。
實(shí)施例9
稱取實(shí)施例3制得的茶皂苷元100g，加入600g PEG6000，加熱至60°C熔化后混合 均勻，置于滴丸機(jī)內(nèi)，用液體石蠟致冷，滴丸。冷卻即得茶皂苷元的滴丸劑。
實(shí)施例10
稱取實(shí)施例5制得的茶皂苷元100g，加入200g甘露醇，用滅菌水溶解后，過 0. 3 μ m微孔濾膜，罐裝入安培瓶中，-50°C冷凍干燥M小時(shí)，即得茶皂苷元的凍干粉針注射 劑。
實(shí)施例11
茶皂苷元的抗氧化實(shí)驗(yàn)
方法稱取本發(fā)明方法制備的茶皂苷元10mg，用乙醇5mL溶解，加入50g食用 植物油，振蕩混合后，置于60士2°C恒溫水浴鍋內(nèi)，每隔一定時(shí)間取樣3g，用碘量法(GB/T 5538-1995《油脂過氧化值測(cè)定法》)測(cè)定其過氧化值POV (meq/kg)，并計(jì)算抑制率IE。以 茶皂苷為陽(yáng)性對(duì)照組，以不加樣的油脂為空白對(duì)照組。
結(jié)果24h后，空白對(duì)照組的POV為13. 65meq/kg,陽(yáng)性對(duì)照組為6. 13meq/kg,茶皂 苷元為4. 20meq/kg。陽(yáng)性對(duì)照組和茶皂苷元的抑制率分別為55. 09%和69. 23%。茶皂苷 元對(duì)油脂的抗氧化性優(yōu)于茶皂苷。
實(shí)施例12
茶皂苷元的抗炎性實(shí)驗(yàn)
方法取雄性小鼠(昆明種，購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心)50只，隨機(jī)分為5組， 每組10只。第1組給生理鹽水，灌胃，為陰性對(duì)照組；第2組給阿司匹林200mg/kg，灌胃， 為陽(yáng)性對(duì)照組；第3 5組分別實(shí)施例1 3制備的茶皂苷元200mg/kg，灌胃。每天1次， 3天后，于末次給藥Ih后，在每只動(dòng)物右耳前后兩面涂二甲苯0. 02ml致炎。各組致炎Ih 后，將動(dòng)物頸椎脫白致死，沿耳廓基線剪下兩耳，用7mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓 耳片，稱重。腫脹抑制率(％)經(jīng)方差分析作q檢驗(yàn)，比較給藥組和對(duì)照組的差異情況。計(jì) 算公式
腫脹度=右耳片重量-左耳片的重量
權(quán)利要求
1.一種制備茶皂苷元的方法，其特征在于包括下述步驟(1)將茶皂苷水溶液過大孔樹脂，用溶劑洗脫，收集洗脫液；(2)向洗脫液中添加有機(jī)溶劑，使茶皂苷沉淀析出，收集沉淀物；(3)向沉淀物中加入醇?jí)A液或醇酸液，回流提取；(4)將提取液的PH值調(diào)節(jié)至酸性，靜置，收集沉淀；(5)用有機(jī)溶劑溶解沉淀，并結(jié)晶和重結(jié)晶；(6)將結(jié)晶物干燥，得到茶皂苷元。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種制備茶皂苷元的方法，其特征在于所述茶皂苷是自茶葉、茶籽或油茶籽中提取的或自脫脂茶籽中提取的茶皂苷水劑或固 體干燥物；所述大孔樹脂為弱極性或非極性大孔樹脂；所述洗脫溶劑是體積分?jǐn)?shù)為50 70%的甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種制備茶皂苷元的方法，其特征在于步驟( 中，所述有機(jī) 溶劑為甲醇、乙醇或丙酮。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種制備茶皂苷元的方法，其特征在于所述醇液是體積分?jǐn)?shù)為50 80%乙醇水溶液或甲醇水溶液，醇液加入量為沉淀物的 5 10倍質(zhì)量，提取溫度70 80°C，提取時(shí)間2 8小時(shí)；所述醇?jí)A液中含有占醇?jí)A液質(zhì)量2 5%的氫氧化鈉或氫氧化鉀；所述醇酸液中含有占醇酸液體積2 5%的鹽酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種制備茶皂苷元的方法，其特征在于步驟(4)中，所述提取 液的PH值調(diào)節(jié)為2 5，采用鹽酸進(jìn)行調(diào)節(jié)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種制備茶皂苷元的方法，其特征在于步驟( 中，所述有機(jī) 溶劑為甲醇、乙醇、丙酮或乙醚。
7.權(quán)利要求1 6任一項(xiàng)所述制備方法制得的茶皂苷元。
8.權(quán)利要求7所述茶皂苷元的應(yīng)用，其特征在于所述茶皂苷元用于制備抗氧化、抗炎 鎮(zhèn)痛的藥物制劑。
9.權(quán)利要求7所述茶皂苷元的應(yīng)用，其特征在于所述茶皂苷元與藥用輔料或藥學(xué)上 可配伍的藥物制成抗氧化、抗炎鎮(zhèn)痛的藥物制劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述茶皂苷元的應(yīng)用，其特征在于所述藥物制劑為外用、口 服或注射用藥劑型的任何一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備茶皂苷元的方法。一種制備茶皂苷元的方法，包括下述步驟(1)將茶皂苷水溶液過大孔樹脂，用溶劑洗脫，收集洗脫液；(2)向洗脫液中添加有機(jī)溶劑，使茶皂苷沉淀析出，收集沉淀物；(3)向沉淀物中加入醇?jí)A液或醇酸液，回流提取；(4)將提取液的pH值調(diào)節(jié)至酸性，靜置，收集沉淀；(5)用有機(jī)溶劑溶解沉淀，并結(jié)晶和重結(jié)晶；(6)將結(jié)晶物干燥，得到茶皂苷元。本發(fā)明以茶皂苷為原料，經(jīng)過大孔樹脂處理后，再進(jìn)行酸解或堿解處理，避免了膠質(zhì)、蛋白等成分的干擾，得到的茶皂苷元純度高；另外，采用醇酸或醇?jí)A處理，可避免直接酸堿處理導(dǎo)致的茶皂苷元結(jié)構(gòu)的破壞，維持了其結(jié)構(gòu)完整性。
文檔編號(hào)A61P29/00GK102030804SQ20101051588
公開日2011年4月27日 申請(qǐng)日期2010年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月21日
發(fā)明者葉勇, 王延芳 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué)