專利名稱：吉祥草皂苷元的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種從吉祥草中提取制備吉祥草皂苷元的方法。
背景技術(shù)：
吉祥草為百合科Liliaceae吉祥草屬Reinekea的單屬單種植物吉祥草 Reineckeacarnea(Andr. )Kunth，又稱觀音草、玉帶草、松壽草、小青膽、小葉萬年青、瑞草 等，分布在我國長江流域以南及西南地區(qū)，再貴州、湖南、云南、廣西、四川等苗族人口主要 聚居區(qū)，對苗藥觀音草的使用都較廣泛。吉祥草味苦、甜，性涼，具有清肺止咳，涼血止血，接 骨續(xù)筋，止痛散瘀，解毒利咽之功效；用于治療咳嗽、咯血、吐血、咽喉腫痛、目赤翳障、疳積、 臃腫瘡癤、黃疸、腎結(jié)石、膽結(jié)石、跌打損傷、扭傷、骨折、冷風濕等病。其主要含皂苷類、甾體 化合物、皂苷元等成分。至今為止，國內(nèi)外關(guān)于吉祥草化學(xué)成分、藥理作用及其提取工藝等 方面研究報道不多。馮玉文等從吉祥草原粉提取分離得到一留體化合物，并通過實驗證明其具有較強 的殺滅釘螺作用。張元等發(fā)現(xiàn)吉祥草總皂苷(TSRC)皮下注射治療組可以增加非胰島素依 賴性糖尿病模型大鼠肝糖原、肌糖原儲存量，從而提高外周組織對葡萄糖的利用，改善非胰 島素依賴性糖尿病模型大鼠的胰島素抵抗；其還發(fā)現(xiàn)吉祥草總皂苷不溶血，灌胃給藥能抑 制氨水引起的小鼠咳嗽，能促進小鼠氣管酚紅排泌，皮下注射給藥抗炎作用明顯。高莉等發(fā)表的文獻“復(fù)方吉祥草含片質(zhì)量標準研究”中，以鹽酸麻黃堿作為控制復(fù) 方吉祥草含片的質(zhì)量標準指標，不能反映君藥吉祥草的質(zhì)量。本發(fā)明通過公開一種吉祥草皂苷元的制備方法，為吉祥草及含其的成藥質(zhì)量標準 研究提供豐富資源，為進一步綜合利用吉祥草資源提供有利依據(jù)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在達到上述目的，提供一種吉祥草皂苷元的制備方法，本方法不僅可以 得到含量大于60%的吉祥草皂苷元，且提取效率高，工藝穩(wěn)定。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下吉祥草皂苷元的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)提取以吉祥草為原料，粉碎，用混合有機溶劑微波提取，合并提取液；(2)樹脂吸附將提取液濃縮至一定體積，通過大孔樹脂柱吸附3次，先以10-30% 乙醇洗脫，棄去洗液，再以50-95 %乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，得總皂苷提 取物；(3)酶解將總皂苷提取物調(diào)pH至3-5，加入纖維素酶、糖苷酶、淀粉酶等其中一種 或任意幾種組成的復(fù)合酶混合干粉，于35-60°C水浴反應(yīng)1-5小時，得水解液；(4)萃取用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，低溫減壓回收溶劑，干燥即得吉祥草皂 苷元。步驟(1)中混合有機溶劑為甲醇、乙醇、二氯甲烷中的兩種溶劑的混合溶液，用量為藥材量的3-8倍。步驟(2)中將提取液濃縮至原液體積1/7-1/15。步驟(2)中選擇的大孔樹脂為LS-303、NKA-9、AB-8、D101型。步驟(3)中酶加入量為皂苷提取物的2_10%0。本發(fā)明具有以下優(yōu)點本發(fā)明采用酶解方法，條件溫和，對苷元結(jié)構(gòu)不會構(gòu)成破壞。下面將結(jié)合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限 于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1 把吉祥草切碎，取1kg，加入4L 二氯甲烷-甲醇(1 1)混合溶液微波輔助提取 20分鐘，過濾，濾渣再加入3L 二氯甲烷-甲醇混合溶液微波提取15分鐘，合并濾液，濃縮至 約1000ml，將濃縮液用水分散，加入到NKA-9型大孔吸附樹脂柱上，先用蒸餾水洗脫3個柱 體積，棄去水液，改用3個柱體積20%乙醇洗脫，棄去20%乙醇洗脫部分，再改用70%乙醇 洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得到洗脫濃縮液，再上柱吸附洗 脫2次，濃縮得總皂苷提取物；將總皂苷提取物置于生物反應(yīng)器中，加入酸調(diào)PH至3. 0，加 入2g纖維素酶和糖苷酶組成的復(fù)合酶，于40°C水浴中反應(yīng)3小時，過濾，濾液用氯仿萃取， 合并氯仿萃取液，低溫減壓回收氯仿，干燥，得吉祥草皂苷元366mg，含量97%。實施例2 把吉祥草切碎，取lkg，加入5L 二氯甲烷-乙醇(1 1)混合溶液微波輔助提取 30分鐘，過濾，濾渣再加入3L 二氯甲烷-甲醇混合溶液微波提取10分鐘，合并濾液，濃縮至 約800ml，將濃縮液用水分散，加入到LS-303型大孔吸附樹脂柱上，先用蒸餾水洗脫4個柱 體積，棄去水液，改用2個柱體積30%乙醇洗脫，棄去30%乙醇洗脫部分，再改用60%乙醇 洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得到洗脫濃縮液，再上柱吸附洗 脫2次，濃縮得總皂苷提取物；將總皂苷提取物置于生物反應(yīng)器中，加入酸調(diào)PH至4. 0，加 入5g糖苷酶，于45°C水浴中反應(yīng)1小時，過濾，濾液用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，低溫減壓 回收氯仿，干燥，得吉祥草皂苷元340mg，含量98%。實施例3 把吉祥草切碎，取2kg，加入8L 二氯甲烷-甲醇(1 1)混合溶液微波輔助提取 25分鐘，過濾，濾渣再加入6L 二氯甲烷-甲醇混合溶液微波提取15分鐘，合并濾液，濃縮至 約1200ml，將濃縮液用水分散，加入到AB-8型大孔吸附樹脂柱上，先用蒸餾水洗脫3個柱 體積，棄去水液，改用3個柱體積20%乙醇洗脫，棄去20%乙醇洗脫部分，再改用75%乙醇 洗脫，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得到洗脫濃縮液，再上柱吸附洗 脫2次，濃縮得總皂苷提取物；將總皂苷提取物置于生物反應(yīng)器中，加入酸調(diào)PH至3. 5，加 入6g纖維素酶和淀粉酶組成的復(fù)合酶混合干粉，于50°C水浴中反應(yīng)4小時，過濾，濾液用氯 仿萃取，合并氯仿萃取液，低溫減壓回收氯仿，干燥，得吉祥草皂苷元710mg，含量98. 2%。實施例4 把吉祥草切碎，取2kg，加入IOL 二氯甲烷-乙醇(1 1)混合溶液微波輔助提取15分鐘，過濾，濾渣再加入7L 二氯甲烷-甲醇混合溶液微波提取10分鐘，合并濾液，濃縮至 約1500ml，將濃縮液用水分散，加入到D101型大孔吸附樹脂柱上，先用蒸餾水洗脫4個柱 體積，棄去水液，改用3個柱體積20%乙醇洗脫，棄去20%乙醇洗脫部分，再改用60%乙醇 洗脫，收集60 %乙醇洗脫液，減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得到洗脫濃縮液，再上柱吸附洗 脫2次，濃縮得總皂苷提取物；將總皂苷提取物置于生物反應(yīng)器中，加入酸調(diào)pH至5. 0，加 入7g纖維素酶和糖苷酶組成的復(fù)合酶混合干粉，于55°C水浴中反應(yīng)2小時，過濾，濾液用氯 仿萃取，合并氯仿萃取液，低溫減壓回收氯仿，干燥，得吉祥草皂苷元705mg，含量98. 0%。實施例5 把吉祥草切碎，取5kg，加入35L 二氯甲烷-乙醇(1 1)混合溶液微波輔助提取 40分鐘，過濾，濾渣再加入30L 二氯甲烷-甲醇混合溶液微波提取30分鐘，合并濾液，濃縮 至約6. 3L，將濃縮液用水分散，加入到AB-8型大孔吸附樹脂柱上，先用蒸餾水洗脫4個柱 體積，棄去水液，改用2個柱體積15%乙醇洗脫，棄去15%乙醇洗脫部分，再改用65%乙醇 洗脫，收集65 %乙醇洗脫液，減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得到洗脫濃縮液，再上柱吸附洗 脫2次，濃縮得總皂苷提取物；將總皂苷提取物置于生物反應(yīng)器中，加入酸調(diào)pH至3. 0，加 入17. 5g淀粉酶和糖苷酶組成的復(fù)合酶混合干粉，于50°C水浴中反應(yīng)3小時，過濾，濾液用 氯仿萃取，合并氯仿萃取液，低溫減壓回收氯仿，干燥，得吉祥草皂苷元1. 7g，含量98. 4%。實施例6 把吉祥草切碎，取7kg，加入56L 二氯甲烷-甲醇(1 1)混合溶液微波輔助提 取30分鐘，過濾，濾渣再加入35L 二氯甲烷-甲醇混合溶液微波提取10分鐘，合并濾液， 濃縮至約10L，將濃縮液用水分散，加入到AB-8型大孔吸附樹脂柱上，先用蒸餾水洗脫4個 柱體積，棄去水液，改用3個柱體積10%乙醇洗脫，棄去10%乙醇洗脫部分，再改用60%乙 醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得到洗脫濃縮液，再上柱吸附 洗脫2次，濃縮得總皂苷提取物；將總皂苷提取物置于生物反應(yīng)器中，加入酸調(diào)pH至3. 5， 加入28g纖維素酶和淀粉酶、糖苷酶組成的復(fù)合酶混合干粉，于45°C水浴中反應(yīng)4小時，過 濾，濾液用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，低溫減壓回收氯仿，干燥，得吉祥草皂苷元2. 6g，含 量 97. 6%0實施例7 把吉祥草切碎，取8. 5kg，加入68L 二氯甲烷-甲醇(1 1)混合溶液微波輔助提 取35分鐘，過濾，濾渣再加入36L 二氯甲烷-甲醇混合溶液微波提取15分鐘，合并濾液，濃 縮至約9L，將濃縮液用水分散，加入到D101型大孔吸附樹脂柱上，先用蒸餾水洗脫3個柱 體積，棄去水液，改用3個柱體積10%乙醇洗脫，棄去10%乙醇洗脫部分，再改用70%乙醇 洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得到洗脫濃縮液，再上柱吸附洗 脫2次，濃縮得總皂苷提取物；將總皂苷提取物置于生物反應(yīng)器中，加入酸調(diào)pH至3. 8，加 入34g糖苷酶的混合干粉，于50°C水浴中反應(yīng)4小時，過濾，濾液用氯仿萃取，合并氯仿萃取 液，低溫減壓回收氯仿，干燥，得吉祥草皂苷元3. 0g,含量99. 3%。實施例8 把吉祥草切碎，取10kg，加入90L 二氯甲烷-乙醇(1 1)混合溶液微波輔助提 取30分鐘，過濾，濾渣再加入40L 二氯甲烷-甲醇混合溶液微波提取15分鐘，合并濾液， 濃縮至約1200ml，將濃縮液用水分散，加入到LS303型大孔吸附樹脂柱上，先用蒸餾水洗
5脫3個柱體積，棄去水液，改用3個柱體積20%乙醇洗脫，棄去20%乙醇洗脫部分，再改用 75%乙醇洗脫，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮回收乙醇至無醇味，得到洗脫濃縮液，再上 柱吸附洗脫2次，濃縮得總皂苷提取物；將總皂苷提取物置于生物反應(yīng)器中，加入酸調(diào)PH 至4. 2，加入50g纖維素酶和淀粉酶組成的復(fù)合酶混合干粉，于45°C水浴中反應(yīng)5小時，過 濾，濾液用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，低溫減壓回收氯仿，干燥，得吉祥草皂苷元3. 9g，含 量 98. 5%。
權(quán)利要求
吉祥草皂苷元的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)提取以吉祥草為原料，粉碎，用混合有機溶劑微波提取，合并提取液；(2)樹脂吸附將提取液濃縮至一定體積，通過大孔樹脂柱吸附3次，先以10 30％乙醇洗脫，棄去洗液，再以50 95％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，得總皂苷提取物；(3)酶解將總皂苷提取物調(diào)pH至3 5，加入纖維素酶、糖苷酶、淀粉酶等其中一種或任意幾種組成的復(fù)合酶混合干粉，于35 60℃水浴反應(yīng)1 5小時，得水解液；(4)萃取用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，低溫減壓回收溶劑，干燥即得吉祥草皂苷元。
2.如權(quán)利要求1所述吉祥草皂苷元的制備方法，其特征在于，步驟(1)中混合有機溶劑 為甲醇、乙醇、二氯甲烷中的兩種溶劑的混合溶液，用量為藥材量的
3.如權(quán)利要求1所述吉祥草皂苷元的制備方法，其特征在于，步驟(2)中將提取液濃縮 至原液體積1/7-1/15。
4.如權(quán)利要求1所述吉祥草皂苷元的制備方法，其特征在于，步驟(2)中選擇的大孔樹 脂為 LS-303、NKA-9、AB-8、D101 型。
5.如權(quán)利要求1所述吉祥草皂苷元的制備方法，其特征在于，步驟(3)中酶加入量為皂 苷提取物的2-10%0。
全文摘要
本發(fā)明提供一種吉祥草皂苷元的制備方法，采用混合有機溶劑提取、樹脂吸附、酶解、萃取等步驟，其特征在于將洗脫液調(diào)pH至3-5，加入纖維素酶、糖苷酶、復(fù)合酶等其中一種或任意幾種酶混合干粉，于35-60℃反應(yīng)1-5小時，過濾，濾液用氯仿萃取，萃取物低溫減壓回收溶劑，干燥即得吉祥草皂苷元。本發(fā)明方法條件溫和，提供了較佳的酶解條件，在避免有效成分破壞的前提下提高了吉祥草皂苷元的得率。
文檔編號A61K36/896GK101979038SQ201010510910
公開日2011年2月23日 申請日期2010年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月19日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司