專利名稱：生地黃水提物在制備治療由于體內雌性激素分泌不足而引起的婦女更年期綜合癥藥物中 ...的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥，特別是一種生地黃水提物在制備治療由于體內雌性激素分泌不 足而引起的婦女更年期綜合癥藥物中的應用。
背景技術：
生地黃為玄參科植物地黃(Rehmannia glutinosa Libosch.)的新鮮或干燥塊莖。 秋季采挖，除去蘆頭、須根及泥沙，將其緩緩烘焙至約八成干，即為生地黃。歷代名家對其均 有論述和研究，認為其性甘、寒，歸心、腎、肝經，清熱涼血、養陰生津。主治熱病舌絳煩渴、陰 虛內熱、骨蒸勞熱、內熱消渴、吐血、衄血、血崩、月經不調、胎動不安、陰傷便秘等。現代藥理 及臨床研究表明 生地黃能促進凝血、升高外周白細胞；能強心、利尿、升高血壓；能保護肝 臟，降低血糖；有增強免疫功能、抗輻射損傷和腎上腺皮質激素樣作用。但尚未有生地黃關 于植物雌激素活性方面的研究報道。
發明內容
針對上述情況，本發明之目的就是提供一種生地黃水提物在制備治療由于體內雌 性激素分泌不足而引起的婦女更年期綜合癥藥物中的應用，可有效解決制備治療由于體內 雌性激素分泌不足而引起的婦女更年期綜合癥的用藥問題。本發明解決的技術方案是，將生地黃每次加入其10倍重量的水，煎煮兩次，每次2 小時，合并兩次水煎液，減壓、濃縮、干燥，得生地黃浸膏狀水提物，有效用于制備治療由于 體內雌性激素分泌不足而引起的婦女更年期綜合癥的藥物。本發明水提物制備方法簡單，穩定可靠，經多次(10次以上)制備，均取得了相同 或相近似的結果，方便，成本低，其水提物有效用于制備治療由于體內雌性激素分泌不足而 引起的婦女更年期綜合癥藥物，開辟了生地黃藥用新用途，臨床意義巨大。
具體實施例方式以下結合實施例和有關試驗資料對本發明的具體實施方式
作詳細說明。首先選取秋天采挖的新鮮或干燥玄參科植物地黃(Rehmannia glutinosa Libosch.)塊莖，除去蘆頭、須根及泥沙，將其緩緩烘焙至約八成干，即為生地黃，然后選取 生地黃100g，每次加入水IOOOg (或1000ml)，煎煮2次，每次2小時，合并2次水煎液，減 壓、濃縮、干燥，得生地黃浸膏狀水提物71. 90g ；水提物有效用于制備治療由于體內雌性激 素分泌不足而引起的婦女更年期綜合癥藥物，并經動物試驗得到了充分證明，其有關試驗 資料如下通過MCF-7細胞增殖實驗(E-SCREEN)，證明生地黃能夠促進MCF-7細胞增殖，說明 其在體外具有雌激素樣作用。通過小鼠子宮增重實驗，驗證生地黃能夠增加性未成熟小鼠的子宮系數，說明其在體內具有雌激素樣作用 通過實驗證明了本發明的水提物在制備雌性激素藥物的新用途。具體的實驗材料與方法是1.藥物的制備玄參科植物地黃(Rehmannia glutinosa Libosch.)的新鮮或干燥塊莖。秋季采 挖，除去蘆頭、須根及泥沙，將其緩緩烘焙至約八成干，即為生地黃。生地黃IOOg以10倍量的水煎煮2次，每次2h，水煎液減壓干燥濃縮干燥得到生地 黃水提物71.90g(浸膏狀)。2.實驗動物與細胞株昆明種小鼠，雌性，出生21天(剛斷乳)。體重9 12g，購于河南省實驗動物中 心。人乳腺癌細胞(MCF-7)由中國軍事醫學科學院生物工程研究所提供。3.主要試劑RPMI1640 培養基、小牛血清(Newborn Calf Serum, NCS)購自 GibcoInvitrogen 公 司；無酚紅 RPMI1640 培養基、17 β -雌二醇(17 β -estrogen, E2)、活性炭(Charcoal)均購 自Sigma公司；葡聚糖T-70(DeXtran-70)購自上海化學試劑公司；己烯雌酚片(合肥久聯 制藥)。4.所用主要儀器電子讀數分析天平(日本Shimadzu公司)；普通手術器械；二氧化碳培養箱(日 本SANYO公司)；倒置顯微鏡(日本Olympus) ；KDC-160HR高速低溫冷凍離心機(科大創新 股份有限公司)；酶標儀(BI0-RAD 680)。5.實驗方法(1)小鼠子宮增重實驗將小鼠按體重均衡和隨機的原則分組。給藥持續7天。空白對照組每日蒸餾水 0. 2ml. log-1灌胃；陽性對照組每日己烯雌酚懸濁液(0. 035mg .kg—1 .cf1)灌胃；生地黃各給 藥組按臨床用藥的20倍量X提取率計算，配成相應濃度的混懸液，每日按0. 02ml/10g灌 胃灌胃。最后一次給藥24h后，脫頸處死小鼠，立即摘取子宮稱重，計算子宮系數(子宮濕 重·(體重Γ^ΙΟΟ^)。實驗平行重復三次。結果與空白組相比，計算P值考察有無統計 學意義。(2)MCF_7細胞增殖實驗MCF-7細胞經無酚紅1640培養2周后，選取對數生長期細胞，PBS洗兩次，用 0. 25%胰蛋白酶消化后，加入無血清1640吹打均勻，以2X IO3個/孔的濃度接種于96孔 板內，每孔培養總體積為200μ 1。培養24小時待細胞貼壁后，換為含藥培養液繼續培養。 37°C>5% CO2培養3天后，每孔加入MTT溶液(5mg/ml) 20 μ 1，37°C繼續培養4小時，小心吸 凈培養液，每孔加入150 μ 1DMS0,震蕩5 10分鐘，使結晶物完全溶解。以DMSO調零，用 酶標儀在490nm下測定各孔吸光度值(A)，計算平均A值和增殖率(Proliferation Rate, RP)。實驗平行重復三次。RP =(實驗組A值/空白組A值)-1X100%6.統計處理實驗數據以 ±s表示，SPSS13. 0進行單因素方差分析(One-Way AN0VA)統計處理。實驗結果 一、采用人乳腺癌MCF-7細胞增殖實驗結合動物實驗，對生地黃水提物進行雌激 素活性篩選的實驗1.生地黃水提物對MCF-7細胞的增殖的影響實驗結果結果顯示，生地黃在0. 001 0. Img -πιΓ1時對MCF-7細胞與空白組比均有極顯著 的促增殖作用(P <0.01)，且呈劑量依賴性。見表1。說明在體外實驗中，生地黃在低濃度 時表現為雌激素樣作用。表1 生地黃對MCF-7細胞增殖的影響( 土s,n=9)
權利要求
一種生地黃水提物在制備治療由于體內雌性激素分泌不足而引起的婦女更年期綜合癥藥物中的應用，所說的水提物為每次加入生地黃10倍重量的水，煎煮兩次，每次2小時，合并兩次水煎液，減壓、濃縮、干燥，得生地黃浸膏狀水提物。
全文摘要
本發明涉及生地黃水提物在制備治療由于體內雌性激素分泌不足而引起的婦女更年期綜合癥藥物中的應用，可有效解決制備治療由于體內雌性激素分泌不足而引起的婦女更年期綜合癥的用藥問題，其解決的技術方案是，將生地黃每次加入其10倍重量的水，煎煮兩次，每次2小時，合并兩次水煎液，減壓、濃縮、干燥，得生地黃浸膏狀水提物，有效用于制備治療由于體內雌性激素分泌不足而引起的婦女更年期綜合癥的藥物，本發明水提物制備方法簡單，穩定可靠，經多次制備，均取得了相同或相近似的結果，方便，成本低，其水提物有效用于制備治療由于體內雌性激素分泌不足而引起的婦女更年期綜合癥藥物，開辟了生地黃藥用新用途，臨床意義巨大。
文檔編號A61K36/804GK101966254SQ20101029899
公開日2011年2月9日 申請日期2010年10月8日 優先權日2010年10月8日
發明者馮衛生, 李冬梅, 王小蘭, 蔣云, 鄭曉珂 申請人:河南中醫學院