專利名稱：Wr-2721腸溶微囊的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種腸溶微囊的制備方法，特別是WR-2721腸溶微囊的制備方法。
背景技術：
WR-2721是首個批準上市的細胞保護劑，臨床上主要用于減輕卵巢癌和非小細胞 肺癌化療和頭頸部癌放療時所引起的副作用[1’2]，但因給藥方式是靜脈給藥，口服吸收少[3’ 4]，影響了其進一步推廣應用。本發明擬通過制備WR-2721 口服腸溶生物降解微囊，從而改 善其口服利用度。
發明內容
本發明將WR-2721包裹在生物可降解高分子材料中，制備成WR-2721微囊，從體外 釋藥及30天存活率實驗證明可以延長藥物釋藥時間及明顯提高小鼠存活率。(1)將生物可降解高分子溶于有機溶劑中，配成濃度為2 4%的溶液，加入濃度 為0. 5 2%的表面活性劑，形成有機溶劑溶液油相0 ；(2)將WR-2721溶于去離子水中，制成20 100mg/ml的WR-2721水溶液，形成第 一水相W1 ；(3)將瓊脂溶于熱水中，制成0. 1 0. 5%的水溶液，形成第二水相W2 ；(4)將甘油溶于去離子水中，制成0. 4 溶液，形成第三水相W3 ；(5)將(2) (3) (4)溶液混合均勻，混合液慢慢滴加到(1)油相O中，在冰浴條件下 磁力攪拌，攪拌速度為500 SOOrpm，乳化形成油包水型乳化液w/o ；繼續攪拌Ih得均勻的 乳液；(6)將乳化液(5)用噴霧干燥技術，進風口溫度60 75°C，出口溫度60 80°C， 引風量80 95%進行噴霧干燥，得WR-2721微囊；所述的生物可降解高分子材料是丙烯酸樹脂II、III或者兩種的混合物；所述有機溶劑為無水乙醇或丙酮；所述表面活性劑是司盤-80或司盤-60 ；1.根據權利要求1所述WR-2721微囊的制備方法，其特征在于所述油包水型乳 化液w/o的體積比為W: O=I 25 1 5;2.根據權利要求1所述WR-2721微囊的制備方法，其特征在于所述微囊的粒徑 為大約在0. 7μπι 10 μ m之間。本發明具有以下優點1、發明了 WR-2721 口服腸溶微囊，改變以往靜脈注射，服用方便。2、有一定的緩釋作用，且制成微囊后穩定性有很大提高。3、制備時間短，且簡單易行。3、WR-2721 口服腸溶微囊可提高6tlCtl γ射線6Gy全身照射BALB/c小鼠的活存率， 這特點有助于將其開發成輻射防護藥物，用于預防和治療輻射損傷，改善患者生存質量。
圖1 WR-2721微囊的外觀及直徑測定圖2高分子材料熱力學鑒定3 WR-2721原料藥熱力學鑒定4微囊熱力學鑒定圖
圖5 WR-2721微囊的預防給藥對6tlCtl γ射線6Gy —次全身照射BALB/c小鼠活存率的 影響。
圖6 WR-2721微囊與WR-2721的藥時曲線圖
具體實施例方式實施例1 取丙烯酸樹脂EudragitL100-50 lg，溶于50ml無水乙醇中，形成油 相ο，在冰浴條件下磁力攪拌，攪拌速度為500 800rpm，向此油相緩慢加入W1W2W3混合水 溶液，使其乳化，繼續攪拌Ih得均勻的乳液；將乳化液用噴霧干燥技術，進風口溫度60 75°C，出口溫度60 80°C，引風量80 95%進行噴霧干燥，得WR-2721微囊；所得微囊的 包封率為20 %，微囊的粒徑為0. 7 μ m 10 μ m，24小時累積釋放70 80 %，體外釋藥達 60h。實施例2 制法同實施例1，其中有機溶劑無水乙醇改為丙酮；實施例3 取EudragitSlOO lg，溶于50ml無水乙醇中，形成油相o，在冰浴條件下 磁力攪拌，攪拌速度為500 800rpm，向此油相緩慢加入W1W2W3混合水溶液，使其乳化，繼續 攪拌Ih得均勻的乳液；將乳化液用噴霧干燥技術，進風口溫度60 75°C，出口溫度60 80°C，引風量80 95%進行噴霧干燥，得WR-2721微囊；所得微囊的包封率為19%，微囊的 粒徑為0. 9 μ m 10 μ m，24小時累積釋放75 80%，體外釋藥達65h。實施例4 取 EudragitRSlOO 和 EudragitRL 100 分子比例為 1 4，共 lg，溶于 50ml丙酮中，，形成油相ο，在冰浴條件下磁力攪拌，攪拌速度為500 800rpm，向此油相 緩慢加入W1W2W3混合水溶液，使其乳化，繼續攪拌Ih得均勻的乳液；將乳化液用噴霧干 燥技術，進風口溫度60 75°C，出口溫度60 80°C，引風量80 95%進行噴霧干燥，得 WR-2721微囊；所得微囊的包封率為20%，微囊的粒徑為0. 9 μ m 10 μ m，24小時累積釋放 70 80%，體外釋藥達72h。實施例5 :WR-2721微囊對kiCci γ射線6Gy —次全身照射BALB/c小鼠活存率的影響材料與方法1. BALB/c 小鼠飼養選用18 22g雄性BALB/c小鼠60只，由軍事醫學科學院動物實驗中心購買。小 鼠飼養環境溫度21 °C 士2°C，相對濕度50% 士 10%，12小時燈光12小時黑暗，預養1周。2. WR-2721微囊對6tlCtl γ射線6Gy —次全身照射BALB/c小鼠活存率的影響藥物制備精密稱取WR-2721原料藥10mg，加生理鹽水5ml，配置成2mg/ml溶液； WR-2721微囊粉末適量(含WR-2721約25mg、50mg、IOOmg)，分別加適量去離子水形成混懸 液備用。動物分組及處理BALB/c小鼠60只隨機分為六組，每組10只，模型組灌胃等體積生理鹽水，陽性藥WR-2721組按50mg/kg腹腔注射，WR-2721 口服組按50mg/kg灌胃給藥， WR-2721微囊低劑量組按25mg/kg劑量灌胃，WR-2721微囊中劑量組按50mg/kg劑量灌胃， WR-2721微囊高劑量組按100mg/kg劑量灌胃。陽性藥WR-2721組照射6tlCtl γ射線6Gy前 30min腹腔注射，其余各組均在照射前1小時灌胃給藥。30天活存狀況觀察=6tlCtl γ射線6Gy照射后BALB/c小鼠體重減輕，皮毛干枯，精神 萎靡，行動遲緩，團縮拱背，視力障礙。各給藥組，與模型組相比，小鼠的上述體征均有所改善。3. WR-2721微囊作用結果的處理與統計WR-2721微囊預防給藥對6tlCtl γ射線6Gy —次全身照射BALB/c小鼠活存率的影 響。結果用Origin Pro 7. 5進行統計分析。結果不同藥物不同劑量處理的6Gy照射的BALB/c小鼠30天活存率的結果見表1 圖5。11 -2721微囊預防性給藥能夠提高6°0^射線6Gy—次全身照射BALB/c小鼠的活存率。表1WR-2721微囊預防性給藥對6tlCtl γ射線6Gy照射的BALB/c小鼠活存率的影響
組別劑量平均存活天數存活率(mg/kg)(%)模型組017. 00±7· 720陽性藥(WR-2721腹腔注射)5030. 00 ±0100**WR -2721 (ffR-2721 口服)5023. 90±6. 6230WR-2721微囊小劑量組2525. 40±5. 7250WR-2721微囊中劑量組5028. 10±4. 7480林WR-2721微囊高劑量組10025. 60±6. 7660與模型組比較*，P< 0. 05 ；**，P < 0. 01。實施例6 掃描電鏡樣品制備及微囊形狀、直徑測定用導電銀膠或雙面導電膠將樣品粘貼于載物臺上，觀察面應向上，然后用真空噴 鍍儀進行離子濺射鍍膜3 5分鐘，上機鏡檢。常用的金屬有金、銅、鋁、金-鉬(6 4)等， 真空度10_6 KT5Torr (0. 13X 10_3 0. 13 X I(T2Pa)。在顯微鏡下觀察大部分微囊為球形 單囊，表面光滑、且囊形圓整、分散較好、不粘連、囊強度也較好。見圖1實施例7 微囊熱力學分析用差示掃描量熱法(DSC)，使用測熱器(TA2920)，取微囊、WR-2721原料藥、高分 子材料各約5mg，精密稱定，裝入鋁皿內，放到試樣支持器上，以5°C · miiT1升溫速率加熱到 250 °C，結果高分子囊材在140 150°C無熔融峰，WR-2721原料藥及微囊分別在143. 7。C 和146. 02°C有熔融峰，三者的熔融峰示于圖2，圖3，圖4。實施例8 測定生物利用度實驗取比格犬絕食12h，分別灌胃 WR-2721 與 WR-2721 微囊 lOOmg，在 0、15min、30min、 45min、lh、l. 5h、2. Oh,3. Oh,4. Oh,6. Oh,8. 0h、10h、12h 時間點從前后肢靜脈取血 lml，立刻加入冷高氯酸-EDTA (1M/2. 7mM)溶液1ml，輕輕搖動5次、沉淀蛋白，并在超速低溫離心機 12000rpm· HiirT1 (4°C )離心lOmin，吸取上清液用針頭式濾膜(O. 22 μ m)濾過，用高效液相 色譜法測定(或保存在_7(TC待測)。色譜條件[5]分離柱C18(Angilent 150mmX3. 9mm, 5ym)；流動相為乙腈-水(0. IM氯乙酸與5mM的辛烷磺酸鈉，用三乙胺調ρΗ至3.0) (15 85)，流速1.0ml ^mirT1;檢測器為電化學檢測器(Hg/Au電極)，氧化電位設定為 +0. 2V;注射量為20yL。兩組藥物的藥時曲線如圖6。可看出WR-2721微囊的AUC大于 WR-2721，達峰時間相差不大，但WR-2721微囊從45min 3h均保持較高的釋藥水平，提高 了生物利用度，并有緩釋作用。
權利要求
一種WR 2721腸溶微囊的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)將生物可降解高分子溶于有機溶劑中，配成濃度為2～4％的溶液，加入濃度為0.5～2％的表面活性劑，形成有機溶劑溶液油相O；(2)將WR 2721溶于去離子水中，制成30～50mg/ml的WR 2721水溶液，形成第一水相W1；(3)將瓊脂溶于熱水中，制成0.1～0.5％的水溶液，形成第二水相W2；(4)將甘油溶于去離子水中，制成0.4～1％溶液，形成第三水相W3；(5)將(2)(3)(4)溶液混合均勻，混合液慢慢滴加到(1)油相O中，在冰浴條件下磁力攪拌，攪拌速度為500～800rpm，乳化形成油包水型乳化液w/o；繼續攪拌1h得均勻的乳液；(6)將乳化液(5)用噴霧干燥技術，進風口溫度60～75℃，出口溫度60～80℃，引風量80～95％進行噴霧干燥，加料速度2～4ml·min 1，壓縮器流量400～600L·h 1，抽氣泵12～15Pa，得WR 2721微囊；所述的生物可降解高分子材料是丙烯酸樹脂II、III或者兩種的混合物；所述有機溶劑為無水乙醇或丙酮；所述表面活性劑是司盤 80，或司盤 60。
2.根據權利要求1所述WR-2721微囊的制備方法，其特征在于所述油包水型乳化液 w/o的體積比為W O = 1 25 1 5。
3.根據權利要求1所述WR-2721微囊的制備方法，其特征在于所述微囊的粒徑為 0. 7 μ m 10 μ m0
全文摘要
本發明涉及WR-2721腸溶微囊的制備工藝，使用高分子材料Eudrgit系列，使用適宜的有機溶劑溶解，并在表面活性劑作用下與藥物配制成乳濁液，使用干燥噴霧技術制得微囊；實驗證明熱力學鑒定結果說明微囊包裹藥物成功，且通過電子掃描顯微鏡觀察外觀呈圓球形、表面光滑直徑在0.7μm～10μm；預防輻射損傷實驗中在25-100mg/kg可提高60Coγ射線6Gy照射BALB/c小鼠的活存率，說明WR-2721腸溶微囊可用于預防輻射損傷。
文檔編號A61K31/661GK101991560SQ20101027599
公開日2011年3月30日 申請日期2010年9月9日 優先權日2010年9月9日
發明者任磊, 潘從澤, 王云飛, 王升啟, 阿古拉 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所