專利名稱：一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法
技術領域：
本發明涉及一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，涉及藥理學、實驗動物學、病理學、腫瘤科學等。
背景技術：
癌癥(腫瘤)被定義為不受控制的細胞分裂以及組織侵襲(轉移)，發生的原因歸咎于多種基因突變包括癌基因和腫瘤抑制基因。大部分的人類腫瘤包含了能夠產生高度表型異質性的累積的基因以及分子的異常。相同類型的腫瘤可能來發展自完全不同的強調機制，因此癌癥被認為是個體化疾病。癌癥化療依然在很大程度上依靠著經驗主義。在使用單劑療法或者多劑療法治療各種類型的腫瘤時的反應率已經被很好地建立，并且形成了現在臨床上針對大多數患者的治療基礎。然而由于腫瘤的差異性，這項方法必定不是針對個體病人最行之有效的治療方案。過去的經驗證明，擁有相同腫瘤組織的病人個體對于相同的單一或組合治療藥劑沒有形成典型的反應。如何針對每個病人個體制定有效的治療方案，藥劑以及療程已成為現在研究的熱點。通過分析從病人那獲取的腫瘤樣本，大量的體外試驗被用來預測病人的腫瘤對藥物的敏感程度。例如，在瓊脂中病人源發性腫瘤細胞的構造被用于確定對病人有效的藥物。 此項化驗結果可能呈現偽陽性，因為在快速細胞分裂情況下次試驗可能呈現出藥敏性，但在體內應用時則不然。使用單一細胞懸浮液的測試可能過高估計了藥敏性。另一個憂慮是被選擇的實驗體事實上是病人腫瘤中癌細胞(和基質細胞)中異原體族群的代表。因為直覺告訴我們任何的腫瘤包含多種細胞族群，僅僅其中的小部分能夠經得起會替增殖，有理由相信體外藥敏性試驗只能對那些病人腫瘤細胞中藥敏性較強的細胞族群起到預測作用。 此外，體外試驗系統不能被作為抗腫瘤藥物的藥理學決定因素。盡管越來越多的證據表明對癌癥化療的反應可以通過分子簽名來預測，但是目前為止還沒有針對病人個體化學療法的起規范引導作用的生物標記。作為可選擇的方法，針對各種不同的治療方案，病人癌癥在活體內的藥敏性能夠通過使用從被切除癌癥樣本上的可移植的皮下腫瘤來評估。人類異種移植物模型可以從側面對幫助病人治療方案的區別化對待起到幫助作用。人類異種移植物與病人的腫瘤組織相似，并且保留了腫瘤細胞的多項性和微環境。通過許多已有的和預期的對白血病和實體瘤的研究我們發現，抗藥性和藥敏性能夠被人類異種移植物模型準確地推斷。作為研究的結果，關于給定的腫瘤病例對某種藥物的抗藥性的判定將會對治療計劃的設計以及決定起到十分重要的作用。通過對無效藥物的判定，病人能夠免于遭受標準化療的折磨以及化療所帶來的毒副作用。在眾多化療無效的腫瘤病例中，腫瘤科醫師可以在腫瘤負擔較少時對病人實施備選的或者實驗性療法，從而提高治愈的幾率。相對于一般的療法，個體化癌癥療法能夠針對病人準確地預測行之有效的治療辦法。
發明內容
本發明的目的在于提供了一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，不同于體外試驗被用來預測病人的腫瘤對藥物的敏感程度的方法。該方法研究的結果，對于給定的腫瘤病例對某種藥物的抗藥性的判定將會對治療計劃的設計以及決定起到十分重要的作用。通過對無效藥物的判定，病人能夠免于遭受標準化療的折磨以及化療所帶來的毒副作用。在眾多化療無效的腫瘤病例中，腫瘤科醫師可以在腫瘤負擔較少時對病人實施備選的或者實驗性療法，從而提高治愈的幾率。相對于一般的療法，個體化癌癥療法能夠針對病人準確地預測行之有效的治療辦法。本發明是這樣來實現的，其特征是實驗方法為在腫瘤病人完成手術切除后，將切除的腫瘤組織在手術后30分鐘內進行相應的處理與保存。然后選取6-10周齡的裸鼠進行全身麻醉，對麻醉后的裸鼠在其距離尾根部 IOmm處腹部用小型手術刀沿水平方向切一個5mm的小型切口，然后用剪刀前端在切口腹部上方撐開一個皮下空間。將處理好的腫瘤組織處理成一定均勻體積的切塊，切塊應可以完整放入裸鼠腹部皮下空間內。切口用組織粘合劑封好。裸鼠置于加熱至37°C的軟墊上或者加熱燈安全距離的位置來進行恢復。對裸鼠按正常操作規程飼養。待腫瘤長至平均直徑6mm、體積IOOmm3時，將有腫瘤的裸鼠隨機的分為不治療組 (不給藥組)和不同劑量給藥測試組。每個組包含2-3只裸鼠，每個相同組別需有至少3個或以上平行對照組。隨機分配組別的日期定為第0日。第0日同樣是開始用藥的時間。用藥試驗一般將在腫瘤皮下移植4-6周之后。需要實驗的抗腫瘤藥物將根據不同藥物的要求和腫瘤病理情況確定不同的給藥方法，這些不同的給藥方法包括口服、皮下注射、腹膜內用藥或靜脈注射用藥。一般地，裸鼠將被按體重10μ Ι/g體重的比例用藥。給藥頻率根據不同藥物的要求按照正常病人方式進行。每周兩次定期測量皮下腫瘤長度、寬度和深度，由此計算出當時的腫瘤體積。同時測量裸鼠體重、試驗階段死亡裸鼠時間和數量。對測試結果進行記錄。對所記錄數據進行分析，選取如腫瘤體積組別平均值、裸鼠體重變化曲線等，并由此判斷哪種藥物、哪個劑量對相應的腫瘤有顯著治療效果。試驗周期應為第0日后7-10周左右、或不同對照組的皮下腫瘤組織體積出現顯著變化時結束。本方法所涉及藥物可以是單一品種，亦可根據實際情況選擇組合方式進行，試驗方法相同。一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，其特征是所述的腫瘤組織為下述的一種淋巴癌(包括淋巴細胞瘤)、腸癌、肝癌、胃癌、盆腔癌(包托子宮癌、宮頸癌)、 肺癌(包括縱隔癌)、腦癌、神經癌、乳腺癌、食道癌、腎癌。一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，其特征是所述的裸鼠是指純合子nu/nu突變鼠，即先天性胸腺缺陷的突變小鼠，是由于第VII連鎖群(Linkage group)內裸體位點的等位基因發生純合而形成的突變小鼠品種。主要表現為無毛(但可看到一種細毛組織學證明有被毛濾泡)以及缺乏正常胸腺。唯一特性是胸腺缺陷表現型，不同于“無毛鼠”。一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，其特征是針對不同腫瘤藥物采用藥物所要求的給藥途徑，包括但不限于口服、皮下注射、腹膜內用藥或靜脈注射用藥。一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，其特征是所述的試驗結果確定指標包括但不限于裸鼠皮下腫瘤組織體積的組別平均值、裸鼠體重變化曲線。本發明的技術效果是不同于體外試驗被用來預測病人的腫瘤對藥物的敏感程度的方法。該方法研究的結果，對于給定的腫瘤病例對某種藥物的抗藥性的判定將會對治療計劃的設計以及決定起到十分重要的作用。通過對無效藥物的判定，病人能夠免于遭受標準化療的折磨以及化療所帶來的毒副作用。在眾多化療無效的腫瘤病例中，腫瘤科醫師可以在腫瘤負擔較少時對病人實施備選的或者實驗性療法，從而提高治愈的幾率。相對于一般的療法，個體化癌癥療法能夠針對病人準確地預測行之有效的治療辦法。
權利要求
1.一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，其特征是實驗方法為在腫瘤病人完成手術切除后，將切除的腫瘤組織在手術后30分鐘內進行相應的處理與保存。然后選取6-10周齡的裸鼠進行全身麻醉，對麻醉后的裸鼠在其距離尾根部IOmm 處腹部用小型手術刀沿水平方向切一個5mm的小型切口，然后用剪刀前端在切口腹部上方撐開一個皮下空間。將處理好的腫瘤組織處理成一定均勻體積的切塊，切塊應可以完整放入裸鼠腹部皮下空間內。切口用組織粘合劑封好。裸鼠置于加熱至37°C的軟墊上或者加熱燈安全距離的位置來進行恢復。對裸鼠按正常操作規程飼養。待腫瘤長至平均直徑6mm、體積IOOmm3時，將有腫瘤的裸鼠隨機的分為不治療組(不給藥組)和不同劑量給藥測試組。每個組包含2-3只裸鼠，每個相同組別需有至少3個或以上平行對照組。隨機分配組別的日期定為第0日。第0日同樣是開始用藥的時間。用藥試驗一般將在腫瘤皮下移植4-6周之后。需要實驗的抗腫瘤藥物將根據不同藥物的要求和腫瘤病理情況確定不同的給藥方法， 這些不同的給藥方法包括口服、皮下注射、腹膜內用藥或靜脈注射用藥。一般地，裸鼠將被按體重10μ Ι/g體重的比例用藥。給藥頻率根據不同藥物的要求按照正常病人方式進行。每周兩次定期測量皮下腫瘤長度、寬度和深度，由此計算出當時的腫瘤體積。同時測量裸鼠體重、試驗階段死亡裸鼠時間和數量。對測試結果進行記錄。對所記錄數據進行分析，選取如腫瘤體積組別平均值、裸鼠體重變化曲線等，并由此判斷哪種藥物、哪個劑量對相應的腫瘤有顯著治療效果。試驗周期應為第0日后7-10周左右、或不同對照組的皮下腫瘤組織體積出現顯著變化時結束。本方法所涉及藥物可以是單一品種，亦可根據實際情況選擇組合方式進行，試驗方法相同。
2.根據權利要求1所述的一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，其特征是所述的腫瘤組織為下述的一種淋巴癌(包括淋巴細胞瘤)、腸癌、肝癌、胃癌、盆腔癌 (包托子宮癌、宮頸癌)、肺癌(包括縱隔癌)、腦癌、神經癌、乳腺癌、食道癌、腎癌。
3.根據權利要求1所述的一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，其特征是所述的裸鼠是指純合子nu/nu突變鼠，即先天性胸腺缺陷的突變小鼠，是由于第VII連鎖群(Linkage group)內裸體位點的等位基因發生純合而形成的突變小鼠品種。主要表現為無毛(但可看到一種細毛組織學證明有被毛濾泡)以及缺乏正常胸腺。唯一特性是胸腺缺陷表現型，不同于“無毛鼠”。
4.根據權利要求1所述的一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，其特征是針對不同腫瘤藥物采用藥物所要求的給藥途徑，包括但不限于口服、皮下注射、腹膜內用藥或靜脈注射用藥。
5.根據權利要求1所述的一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，其特征是所述的試驗結果確定指標包括但不限于裸鼠皮下腫瘤組織體積的組別平均值、裸鼠體重變化曲線。
全文摘要
一種利用裸鼠為腫瘤病人科學用藥提供參考的方法，其特征是實驗方法為將切除的病人腫瘤組織經處理后皮下埋植在全身麻醉后的裸鼠腹部，切口用組織粘合劑封好。待腫瘤長至平均直徑6mm、體積100mm3時，將有腫瘤的裸鼠隨機的分為不治療組(不給藥組)和不同劑量給藥測試組。此時為第0日，為開始用藥的時間。確定抗腫瘤藥物的不同給藥方法。給藥頻率和劑量根據不同藥物的要求按照正常病人折算后進行。每周兩次定期測量皮下腫瘤長度、寬度和深度，計算出當時的腫瘤體積。同時測量裸鼠體重、試驗階段死亡裸鼠時間和數量。對所記錄數據進行分析，并由此判斷哪種藥物、哪個劑量對相應的腫瘤有顯著治療效果。
文檔編號A61K49/00GK102380105SQ20101026764
公開日2012年3月21日 申請日期2010年8月31日 優先權日2010年8月31日
發明者唐志佼, 康玲玲, 徐剛, 李雁, 趙暉, 閆平 申請人:武漢大學資產經營投資管理有限責任公司, 武漢美克安波科技有限公司